第74卷 畜禽疫病防治-细菌染色鉴定-浙江省单独招生考试《农艺类考纲百套卷》（原卷版+解析版）

浙江省高校招生职技能考试 农艺类 编写说明：浙江省职教高考农艺类考纲百套卷，严格依据浙江省高校招生职业技能考试大纲（农艺类理论知识）编写。分为三大部分。第一部分为公共模块，《植物识别与应用》《植物生产与环境》两门课程考点训练卷，第二部分为选考模块，《植物保护》《畜禽疫病防治》两门课程考点训练卷，第三部分为各门课程的配套综合训练卷。本专辑共104份试卷。 本试卷是第74卷为应知考点训练卷，按《畜禽疫病防治》中"细菌染色鉴定"范围和要求编写。具体内容为：掌握常见特殊染色法（荚膜染色、芽孢染色、抗酸染色）的原理和步骤；熟悉革兰氏染色四步法及G+与G-细菌的区分原理；掌握细菌分离培养的常用方法；熟悉细菌性病例临床样本采集、保存与送检的注意事项。 浙江省《农艺类考纲百套卷》 第74卷 《畜禽疫病防治》 细菌染色鉴定考点训练卷 考试时间60分钟 满分100分 一、单选题（共12小题，每题4分，共24分） 1.细菌的革兰氏染色法中，初染使用的染液是（） A.番红　B.结晶紫　C.碘液　D.95%乙醇 【答案】B 【解析】革兰氏染色第一步为初染，使用结晶紫染液对细菌进行着色，染色约1分钟后水洗。碘液为媒染剂，番红为复染剂，乙醇为脱色剂。 2.革兰氏染色中，媒染步骤使用的试剂是（） A.结晶紫　B.碘液　C.95%乙醇　D.番红 【答案】B 【解析】革兰氏染色的第二步为媒染，使用碘液（碘-碘化钾溶液）处理，其作用是与结晶紫形成稳定的结晶紫-碘复合物，增强着色效果。 3.革兰氏染色中，脱色步骤使用的试剂是（） A.结晶紫　B.碘液　C.95%乙醇　D.番红染液 【答案】C 【解析】革兰氏染色的第三步为脱色，使用95%乙醇或95%丙酮对涂片进行脱色处理。脱色的目的是洗去结晶紫-碘复合物，是区分G+菌和G-菌的关键步骤。 4.经革兰氏染色后，革兰氏阳性菌（G+）呈（） A.红色　B.蓝紫色　C.绿色　D.黄色 【答案】B 【解析】革兰氏阳性菌因细胞壁肽聚糖层厚，乙醇脱水后形成致密网状结构，结晶紫-碘复合物被保留在细胞壁中，经脱色后仍为蓝紫色，故又称G+蓝紫。 5.经革兰氏染色后，革兰氏阴性菌（G-）呈（） A.蓝紫色　B.绿色　C.红色　D.黄色 【答案】C 【解析】革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层薄，且外覆含脂多糖（LPS）的外膜，乙醇脱色时脂多糖层被溶解，结晶紫-碘复合物被洗脱，再经番红（沙黄）复染呈红色，故又称G-红。 6.细菌的特殊染色方法中，芽孢染色常用的染料是（） A.孔雀绿和番红　B.结晶紫和碘液　C.美蓝和草酸铵　D.刚果红和印度墨水 【答案】A 【解析】芽孢染色一般采用复染法，常用孔雀绿（主染）和番红（复染）。孔雀绿染料能够穿透芽孢壁进入芽孢内部，将芽孢染成绿色；芽孢囊细胞和营养细胞则被番红染成红色，从而区分芽孢与营养细胞。 7.荚膜染色时，最常用的染色方法是（） A.革兰氏染色法　B.墨汁负染法　C.抗酸染色法　D.瑞氏染色法 【答案】B 【解析】荚膜是细菌细胞壁外的一层黏液性物质，荚膜染色常用墨汁负染法（背景黑、荚膜透明不着色）或单染色法。荚膜在负染背景下呈透明光圈样结构，易于观察。 8.抗酸染色法主要用于检测下列哪类微生物？（） A.大多数细菌　B.分支杆菌和诺卡菌　C.病毒　D.真菌 【答案】B 【解析】抗酸染色法主要用于结核分支杆菌、麻风分支杆菌和诺卡菌等抗酸菌的鉴定。抗酸菌细胞壁含分枝菌酸，能抵抗酸和乙醇的脱色，故名抗酸染色。病毒和真菌不能用此方法。 9.细菌样本进行分离培养时，接种环灭菌常用的方法是（） A.煮沸消毒　B.灼烧灭菌　C.紫外线照射　D.高压蒸汽灭菌 【答案】B 【解析】细菌分离培养中，接种环（针）的灭菌常用灼烧法（酒精灯火焰灼烧），简便快捷，能快速彻底灭菌。煮沸消毒灭菌不彻底，紫外线照射主要用于空间消毒，高压蒸汽灭菌适用于培养基和器械的灭菌。 10.分离培养细菌时，接种方法不包括下列哪项？（） A.平板划线法　B.倾注平板法　C.穿刺接种法　D.结晶紫染色法 【答案】D 【解析】细菌分离培养的常用接种方法包括平板划线法（分离单个菌落）、倾注平板法（计菌落数）和穿刺接种法（观察生化反应）。结晶紫染色法是染色方法，不是接种培养方法。 11.细菌样本送检时，病料如不能立即送检，正确的保存方式是（） A.常温保存 B.加防腐剂常温保存 C.冷藏（4℃）或冷冻（-20℃）保存 D.阳光直射保存 【答案】C 【解析】细菌样本采集后应尽快送检。如不能立即送检，应冷藏（4℃）或冷冻（-20℃）保存，以抑制杂菌繁殖、保持细菌活力。常温下细菌易死亡或杂菌过度增殖；阳光直射会加速细菌死亡；防腐剂会影响细菌活性，干扰检测。 12.细菌性疾病临床样本采集时，以下哪项操作是正确的？（） A.在消毒后的皮肤上直接切开创面采集　　B.用灭菌棉拭子采集病变部位 C.采集样本后无需标记直接送检　　D.不同部位的样本可以混装在同一容器 【答案】B 【解析】细菌样本采集的正确方法是用灭菌棉拭子、注射器或手术刀采集病变部位标本，确保无菌操作避免污染。消毒后切开创面会带入消毒剂干扰检测；样本必须标记清楚；不同样本应分开包装避免交叉污染。 二、多选题（共6小题，每题3分，共18分） 13.关于革兰氏染色原理的描述，下列正确的是哪些？（） A.G+菌细胞壁肽聚糖层厚（30-40层） B.乙醇脱色使G+菌形成网状结构保留结晶紫 C.G-菌因含LPS外膜导致脱色后被番红复染为红色 D.G+菌和G-菌的染色结果不受菌龄影响 【答案】ABC 【解析】G+菌肽聚糖厚，乙醇脱水形成网状结构保留结晶紫-碘复合物；G-菌外膜含LPS，乙醇脱色后复合物洗脱，番红复染为红色。染色结果受菌龄影响，老龄菌G-倾向增强，可能影响判读。 14.关于细菌特殊染色方法，下列描述正确的是哪些？（） A.芽孢染色主染用孔雀绿，复染用番红 B.荚膜染色常用墨汁负染法 C.抗酸染色中，分枝菌因含分枝菌酸而耐酸脱色 D.细菌运动性鉴定常用芽孢染色法 【答案】ABC 【解析】芽孢染色孔雀绿主染（染芽孢）番红复染（染营养细胞）；荚膜墨汁负染使背景黑荚膜透明；抗酸染色因分枝菌酸耐酸醇脱色。细菌运动性鉴定常用悬滴法或半固体穿刺法，不是芽孢染色。 15.关于细菌分离培养的操作要点，下列正确的是哪些？（） A.接种环灭菌应在酒精灯火焰外焰充分灼烧 B.划线接种应在火焰旁进行 C.培养平板应倒置培养 D.所有细菌均可在37℃条件下培养 【答案】ABC 【解析】接种环充分灼烧灭菌确保无菌；划线在火焰旁操作减少空气污染；平板倒置培养防止冷凝水污染并利于菌落生长；细菌培养温度因种类而异，37℃适用于大多数致病菌，但不是所有细菌（如嗜冷菌、嗜热菌）。 16.细菌样本采集和送检的正确原则包括哪些？（） A.无菌操作采集标本　　B.病料采集后应立即冷藏送检 C.不同病料应分开包装并标记　　D.样本采集越大量越好以便检测 【答案】ABC 【解析】无菌操作避免污染是基本原则；冷藏或冷冻送检保持细菌活性；分开包装防止交叉污染并便于结果判读。样本量适度即可，过量标本不仅浪费，还可能因杂菌过多干扰分离效果。 17.关于细菌性疾病诊断的实验室检查方法，下列正确的是哪些？（） A.直接涂片镜检可快速初步判断细菌种类 B.分离培养是确诊细菌感染的金标准 C.生化鉴定可根据细菌代谢产物区分菌种 D.药敏试验可以指导临床抗生素的选择 【答案】ABCD 【解析】直接涂片染色镜检可初步判断形态和染色特性；分离培养获得纯培养是确诊金标准；生化鉴定利用不同菌种代谢差异（糖发酵、酶活性等）进一步鉴定菌种；药敏试验（K-B纸片法等）可测定细菌对抗菌药物的敏感性，指导临床用药。 18.关于细菌对环境的抵抗力和消毒灭菌方法的描述，下列正确的是哪些？（） A.芽孢对高温和干燥具有极强抵抗力 B.嗜热菌可在超过60℃的环境中生长 C.高压蒸汽灭菌（121℃）可以彻底灭菌包括芽孢 D.75%乙醇可用于皮肤和器械的表面消毒 【答案】ABCD 【解析】芽孢对高温、干燥、辐射有极强抵抗力；嗜热菌最适生长温度45-60℃以上；高压蒸汽灭菌121℃、15-20min可杀死包括芽孢在内的所有微生物；75%乙醇能使菌体蛋白质变性凝固，常用于皮肤和器械消毒。 三、填空题（共4小题，每题2分，共8分） 19.革兰氏染色的四个基本步骤依次是：初染（结晶紫）→_______（碘液）→脱色（95%乙醇）→复染（_______）。 【答案】媒染；番红（沙黄） 【解析】革兰氏染色四步：初染（结晶紫）、媒染（碘液，固定结晶紫）、脱色（乙醇，脱去阴性菌颜色）、复染（番红/沙黄，使阴性菌显红色）。 20.芽孢是某些_______性细菌在不良环境下形成的休眠体，对_______等恶劣环境具有极强的抵抗力。 【答案】革兰阳；高温、干燥 【解析】芽孢由革兰氏阳性菌（芽孢杆菌属、梭菌属等）形成，条件不良时细胞质浓缩脱水成为芽孢休眠体，对高温、干燥、辐射、化学消毒剂均有极强抵抗力，是最难杀灭的微生物形态之一。 21.细菌分离培养常用_______法分离获得单个菌落，该方法通过在固体培养基表面反复划线，使_______逐渐减少，最终长出单个菌落。 【答案】平板划线；细菌 【解析】平板划线法通过在固体培养基表面连续划线，将细菌在平板上逐步稀释分散，随划线次数增加细菌数量减少，最终在平板上长出单个菌落，便于分离纯培养和菌种鉴定。 22.细菌性疾病样本送检时，样本应_______保存（最佳为4℃冷藏），不同来源的病料应_______包装并附上采样日期和_______资料。 【答案】冷藏或冷冻；分开；流行病学 【解析】冷藏或冷冻保存保持细菌活力，防止杂菌过度增殖；不同样本分开包装避免交叉污染；采样日期和流行病学资料（动物种类、临床症状、死亡情况等）有助于实验室综合分析诊断。 四、判断题（共10小题，每题2分，共20分） 23.革兰氏染色的初染和复染都使用同一种染液。（ ） 【答案】× 【解析】革兰氏染色的初染使用结晶紫（使细菌染上蓝紫色），复染使用番红（沙黄，仅使脱色后的G-菌染成红色），两种染液不同，作用也不同。 24.革兰氏阳性菌对青霉素等抗生素的敏感性通常高于革兰氏阴性菌。（ ） 【答案】√ 【解析】青霉素通过抑制细胞壁肽聚糖合成发挥杀菌作用。G+菌肽聚糖层厚（约30-40层），青霉素作用靶点多，敏感性高；G-菌肽聚糖薄（1-3层）且外覆外膜，青霉素难以穿透，敏感性低。 25.芽孢染色时，芽孢会染成红色，营养细胞染成绿色。（ ） 【答案】× 【解析】芽孢染色的颜色取决于具体染色方法。常用孔雀绿-番红复染法中，芽孢被孔雀绿染成绿色（主染），营养细胞被番红染成红色（复染），两者颜色与题干相反。 26.细菌样本采集后如不能立即送检，可以加入适量生理盐水在常温下保存。（ ） 【答案】× 【解析】细菌样本采集后应尽快送检，如不能立即送检应冷藏（4℃）或冷冻（-20℃）保存。常温下细菌易死亡，杂菌可能过度增殖，影响检测结果。加入生理盐水在常温下保存同样会导致细菌活性下降。 27.墨汁负染法常用于观察细菌的荚膜结构。（ ） 【答案】√ 【解析】荚膜富含水分且对染料亲和力低，墨汁负染法用黑色墨汁作背景，荚膜不着色呈透明光圈样，与黑色背景形成明显对比，可清晰观察荚膜的形态和大小。 28.高压蒸汽灭菌（121℃、15-20分钟）可以完全杀死包括芽孢在内的所有微生物。（ ） 【答案】√ 【解析】高压蒸汽灭菌（121℃、103.4kPa、15-20分钟）是目前最可靠的湿热灭菌方法，高温和蒸汽的穿透作用可彻底杀死包括细菌芽孢在内的所有微生物及繁殖体，适用于培养基、手术器械、敷料等的灭菌。 29.革兰氏阴性菌外膜中的脂多糖（LPS）具有内毒素活性，是G-菌重要的致病物质。（ ） 【答案】√ 【解析】革兰氏阴性菌外膜中的脂多糖（LPS）由O-多糖侧链、核心多糖和类脂A组成，其中类脂A是内毒素的主要成分，可引起机体发热、休克、弥漫性血管内凝血（DIC）等严重病理反应，是G-菌致病性的重要物质基础。 30.细菌分离培养时，培养平板应正置培养，以利于观察菌落形态。（ ） 【答案】× 【解析】细菌分离培养时，培养平板应倒置培养（盖在下方、皿底在上），目的是防止培养过程中产生的冷凝水滴落到培养基表面污染菌落或造成菌落蔓延，便于计数和观察。 31.药敏试验（K-B法）中，抑菌圈直径越大，说明细菌对该药物越敏感。（ ） 【答案】√ 【解析】K-B纸片扩散法中，将含有定量抗菌药物的纸片贴在接种了待测细菌的培养基表面，药物从纸片向周围扩散形成浓度梯度，细菌在药物作用下生长受抑形成透明抑菌圈。抑菌圈直径越大，说明药物扩散范围越广，细菌对该药越敏感。 32.抗酸染色阳性菌一定是对人体致病的细菌。（ ） 【答案】× 【解析】抗酸染色阳性（呈红色）说明细菌细胞壁含分枝菌酸，主要包括结核分支杆菌（人型/牛型结核菌）、麻风分支杆菌等致病菌，但并非所有抗酸菌都致病，如耻垢分枝杆菌是非致病的环境抗酸菌，需结合临床症状和进一步鉴定综合判断。 五、简答题（共4小题，每题5分，共20分） 33.简述细菌革兰氏染色的基本步骤，并说明G+菌与G-菌染色结果差异的原理。 【答案】基本步骤：①初染，将固定好的细菌涂片滴加结晶紫染液，染色1分钟后用流水水洗；②媒染，滴加碘液（碘-碘化钾溶液）染色1分钟，水洗，作用是与结晶紫形成稳定的复合物；③脱色，用95%乙醇或丙酮滴加脱色约20-30秒，至流出液无明显紫色为止，水洗；④复染，滴加番红（沙黄）染液复染30秒，水洗，晾干后镜检。染色结果：G+菌呈蓝紫色，G-菌呈红色。原理差异：G+菌细胞壁肽聚糖层厚（约30-40层），高度交联，乙醇脱水后形成致密网状结构，结晶紫-碘复合物被牢牢保留，呈蓝紫色；G-菌肽聚糖层薄（1-3层），且外覆含脂多糖（LPS）的外膜，乙醇脱色时脂多糖被溶解，结晶紫-碘复合物被洗脱，经番红复染呈红色。 【解析】从染色四步骤（结晶紫→碘液→乙醇→番红）和原理（肽聚糖层厚度差异+LPS外膜影响脱色）回答，两者结合说明原理差异。 34.简述细菌性疾病临床样本的采集、保存与送检注意事项。 【答案】注意事项包括：①采集时机，应在病程高峰期或濒死期采集，此时病原菌含量最高；②采集部位，根据疾病类型选择相应部位，如败血症采血液、肺炎采肺组织、肠炎采粪便或肠内容物；③无菌操作，使用灭菌器械（棉拭子、注射器、手术刀等）采集，避免污染；④样本保存，采集后如不能立即送检，应冷藏（4℃）保存或冷冻（-20℃）保存，脑、脊髓等敏感样本必须冷冻运输；⑤包装要求，不同病料分开包装，标记清楚，并附采样日期、动物种类、品种、日龄、临床症状、死亡情况等流行病学资料；⑥生物安全，疑似传染病样本应按生物安全规范操作，防止病原扩散。 【解析】从时机/部位/无菌/保存/包装/生物安全六方面系统回答，突出规范性要求。 35.简述细菌分离培养的常用方法（平板划线法、倾注平板法）及其主要应用。 【答案】常用方法及主要应用：①平板划线法，是最常用的分离方法，将细菌用接种环在固体培养基表面连续划线，通过不断稀释使细菌分散成单个菌落，进而获得纯培养。具体操作：先密集划线区，再以燎烧冷却后的接种环轻触第一区划线，向外延伸划第二、第三、第四区域，各区域间有部分重叠。此法简便易行，适用于所有需分离纯培养的场景；②倾注平板法，将定量菌液加入无菌培养皿中，再倒入适量熔化并冷却至45℃左右的固体培养基，混匀后凝固培养。菌落分布在培养基内部和表面，可用于饮用水、食品等样本的细菌计数（CFU/ml）；③穿刺接种法，用接种针将细菌穿刺接种于半固体培养基中，观察细菌是否产气、是否沿穿刺线生长等，用于细菌运动性鉴定和某些生化反应检测。 【解析】从平板划线法（获得纯培养）、倾注平板法（菌落计数）和穿刺接种法（运动性/生化检测）三个方法及其具体应用场景回答。 36.简述芽孢染色法和荚膜染色法的原理及主要步骤。 【答案】芽孢染色法原理及步骤：采用复染法，利用芽孢壁对染料通透性低的特点，用强碱性染料孔雀绿加热染色，使孔雀绿渗入并牢固染着于芽孢壁内部，将芽孢染成绿色；营养细胞因细胞壁薄易着色且通透性好，再以番红复染成红色，从而在显微镜下区分芽孢与营养细胞。主要步骤：涂片干燥固定→滴加5%孔雀绿染液，加热（至冒蒸汽但不沸腾）5分钟→水洗→番红复染30秒→水洗晾干镜检。 荚膜染色法原理及步骤：荚膜富含多糖或蛋白质，对染料亲和力低，常用墨汁负染法染色。墨汁（印度墨水）涂于载玻片上，制成均匀薄层，将细菌样本点于墨汁层上并轻轻推开，盖上盖玻片，镜检时背景为黑色，菌体呈深色，荚膜因不着色而呈透明光圈环绕在菌体周围，清晰可见。也可采用Hiss法（硫酸铜法）将荚膜染成淡蓝色，菌体染成深蓝色进行观察。 【解析】芽孢染色答孔雀绿加热主染+番红复染（绿/红区分），荚膜染色答墨汁负染法（黑背景透明光圈）并提及Hiss法，两种方法原理不同但均可实现观察目的。 六、案例分析题（共10分） 37.某鸡场发生疫情，病鸡表现为精神沉郁、食欲减退、呼吸困难，部分病鸡死亡。剖检可见肝、脾肿大，表面有灰白色坏死点。兽医采集病死鸡的肝脏和脾脏进行实验室诊断。请分析：（1）应进行哪些细菌学检查？简述其方法。（2）如需进行革兰氏染色，请说明染色步骤及G+菌与G-菌的鉴别要点。（3）如何根据分离培养和生化试验结果鉴定细菌种类？ 【答案】(1)细菌学检查：①直接涂片镜检，取肝脏、脾脏病料制成涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察细菌形态、大小、排列和染色特性，初步判断菌型；②分离培养，将病料无菌划线接种于普通琼脂平板和血琼脂平板，37℃培养18-24小时，观察菌落形态、大小、颜色、溶血特性等；③纯培养，对疑似菌落进行纯培养获得纯种；④生化鉴定，对纯培养物进行系列生化试验，如糖发酵试验、VP试验、靛基质试验、触酶试验等，鉴定菌种；⑤药敏试验，用K-B纸片扩散法测定分离菌对抗菌药物的敏感性，为临床用药提供依据。 (2)革兰氏染色步骤：初染（结晶紫1分钟）→媒染（碘液1分钟）→脱色（95%乙醇约20-30秒）→复染（番红30秒），水洗后晾干镜检。G+菌与G-菌鉴别：染色后G+菌呈蓝紫色，G-菌呈红色。原理：G+菌肽聚糖层厚，乙醇脱水形成致密网状结构，结晶紫-碘复合物被保留；G-菌肽聚糖薄且外覆含LPS外膜，乙醇脱色时复合物被洗脱，番红复染呈红色。 (3)细菌鉴定：根据分离培养菌落特征（大小/颜色/溶血）和Gram染色结果初步分类，再通过生化试验系列鉴定。如肠道致病菌：沙门菌可发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，不发酵乳糖，靛基质阴性，H2S阳性；大肠杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖均产酸产气，靛基质阳性，H2S阴性；金黄色葡萄球菌为G+菌，触酶阳性，能发酵甘露醇，在血平板上呈β溶血。根据各项指标综合判断菌种。 【解析】本题综合考查细菌学诊断方法（涂片镜检/分离培养/生化鉴定/药敏试验）、革兰氏染色技术（步骤及G+/G-差异原理）和细菌鉴定思路（培养特性+染色+生化试验系统鉴定）。题干要求综合应用三项技能，培养临床诊断思维。 第 页 学科网（北京）股份有限公司 $浙江省高校招生职技能考试 农艺类 编写说明：浙江省职教高考农艺类考纲百套卷，严格依据浙江省高校招生职业技能考试大纲（农艺类理论知识）编写。分为三大部分。第一部分为公共模块，《植物识别与应用》《植物生产与环境》两门课程考点训练卷，第二部分为选考模块，《植物保护》《畜禽疫病防治》两门课程考点训练卷，第三部分为各门课程的配套综合训练卷。本专辑共104份试卷。 本试卷是第74卷为应知考点训练卷，按《畜禽疫病防治》中"细菌染色鉴定"范围和要求编写。具体内容为：掌握常见特殊染色法（荚膜染色、芽孢染色、抗酸染色）的原理和步骤；熟悉革兰氏染色四步法及G+与G-细菌的区分原理；掌握细菌分离培养的常用方法；熟悉细菌性病例临床样本采集、保存与送检的注意事项。 浙江省《农艺类考纲百套卷》 第74卷 《畜禽疫病防治》 细菌染色鉴定考点训练卷 考试时间60分钟 满分100分 一、单选题（共12小题，每题4分，共24分） 1.细菌的革兰氏染色法中，初染使用的染液是（） A.番红　B.结晶紫　C.碘液　D.95%乙醇 2.革兰氏染色中，媒染步骤使用的试剂是（） A.结晶紫　B.碘液　C.95%乙醇　D.番红 3.革兰氏染色中，脱色步骤使用的试剂是（） A.结晶紫　B.碘液　C.95%乙醇　D.番红染液 4.经革兰氏染色后，革兰氏阳性菌（G+）呈（） A.红色　B.蓝紫色　C.绿色　D.黄色 5.经革兰氏染色后，革兰氏阴性菌（G-）呈（） A.蓝紫色　B.绿色　C.红色　D.黄色 6.细菌的特殊染色方法中，芽孢染色常用的染料是（） A.孔雀绿和番红　B.结晶紫和碘液　C.美蓝和草酸铵　D.刚果红和印度墨水 7.荚膜染色时，最常用的染色方法是（） A.革兰氏染色法　B.墨汁负染法　C.抗酸染色法　D.瑞氏染色法 8.抗酸染色法主要用于检测下列哪类微生物？（） A.大多数细菌　B.分支杆菌和诺卡菌　C.病毒　D.真菌 9.细菌样本进行分离培养时，接种环灭菌常用的方法是（） A.煮沸消毒　B.灼烧灭菌　C.紫外线照射　D.高压蒸汽灭菌 10.分离培养细菌时，接种方法不包括下列哪项？（） A.平板划线法　B.倾注平板法　C.穿刺接种法　D.结晶紫染色法 11.细菌样本送检时，病料如不能立即送检，正确的保存方式是（） A.常温保存 B.加防腐剂常温保存 C.冷藏（4℃）或冷冻（-20℃）保存 D.阳光直射保存 12.细菌性疾病临床样本采集时，以下哪项操作是正确的？（） A.在消毒后的皮肤上直接切开创面采集　　B.用灭菌棉拭子采集病变部位 C.采集样本后无需标记直接送检　　D.不同部位的样本可以混装在同一容器 二、多选题（共6小题，每题3分，共18分） 13.关于革兰氏染色原理的描述，下列正确的是哪些？（） A.G+菌细胞壁肽聚糖层厚（30-40层） B.乙醇脱色使G+菌形成网状结构保留结晶紫 C.G-菌因含LPS外膜导致脱色后被番红复染为红色 D.G+菌和G-菌的染色结果不受菌龄影响 14.关于细菌特殊染色方法，下列描述正确的是哪些？（） A.芽孢染色主染用孔雀绿，复染用番红 B.荚膜染色常用墨汁负染法 C.抗酸染色中，分枝菌因含分枝菌酸而耐酸脱色 D.细菌运动性鉴定常用芽孢染色法 15.关于细菌分离培养的操作要点，下列正确的是哪些？（） A.接种环灭菌应在酒精灯火焰外焰充分灼烧 B.划线接种应在火焰旁进行 C.培养平板应倒置培养 D.所有细菌均可在37℃条件下培养 16.细菌样本采集和送检的正确原则包括哪些？（） A.无菌操作采集标本　　B.病料采集后应立即冷藏送检 C.不同病料应分开包装并标记　　D.样本采集越大量越好以便检测 17.关于细菌性疾病诊断的实验室检查方法，下列正确的是哪些？（） A.直接涂片镜检可快速初步判断细菌种类 B.分离培养是确诊细菌感染的金标准 C.生化鉴定可根据细菌代谢产物区分菌种 D.药敏试验可以指导临床抗生素的选择 18.关于细菌对环境的抵抗力和消毒灭菌方法的描述，下列正确的是哪些？（） A.芽孢对高温和干燥具有极强抵抗力 B.嗜热菌可在超过60℃的环境中生长 C.高压蒸汽灭菌（121℃）可以彻底灭菌包括芽孢 D.75%乙醇可用于皮肤和器械的表面消毒 三、填空题（共4小题，每题2分，共8分） 19.革兰氏染色的四个基本步骤依次是：初染（结晶紫）→_______（碘液）→脱色（95%乙醇）→复染（_______）。 20.芽孢是某些_______性细菌在不良环境下形成的休眠体，对_______等恶劣环境具有极强的抵抗力。 21.细菌分离培养常用_______法分离获得单个菌落，该方法通过在固体培养基表面反复划线，使_______逐渐减少，最终长出单个菌落。 22.细菌性疾病样本送检时，样本应_______保存（最佳为4℃冷藏），不同来源的病料应_______包装并附上采样日期和_______资料。 四、判断题（共10小题，每题2分，共20分） 23.革兰氏染色的初染和复染都使用同一种染液。（ ） 24.革兰氏阳性菌对青霉素等抗生素的敏感性通常高于革兰氏阴性菌。（ ） 25.芽孢染色时，芽孢会染成红色，营养细胞染成绿色。（ ） 26.细菌样本采集后如不能立即送检，可以加入适量生理盐水在常温下保存。（ ） 27.墨汁负染法常用于观察细菌的荚膜结构。（ ） 28.高压蒸汽灭菌（121℃、15-20分钟）可以完全杀死包括芽孢在内的所有微生物。（ ） 29.革兰氏阴性菌外膜中的脂多糖（LPS）具有内毒素活性，是G-菌重要的致病物质。（ ） 30.细菌分离培养时，培养平板应正置培养，以利于观察菌落形态。（ ） 31.药敏试验（K-B法）中，抑菌圈直径越大，说明细菌对该药物越敏感。（ ） 32.抗酸染色阳性菌一定是对人体致病的细菌。（ ） 五、简答题（共4小题，每题5分，共20分） 33.简述细菌革兰氏染色的基本步骤，并说明G+菌与G-菌染色结果差异的原理。 34.简述细菌性疾病临床样本的采集、保存与送检注意事项。 35.简述细菌分离培养的常用方法（平板划线法、倾注平板法）及其主要应用。 36.简述芽孢染色法和荚膜染色法的原理及主要步骤。 六、案例分析题（共10分） 37.某鸡场发生疫情，病鸡表现为精神沉郁、食欲减退、呼吸困难，部分病鸡死亡。剖检可见肝、脾肿大，表面有灰白色坏死点。兽医采集病死鸡的肝脏和脾脏进行实验室诊断。请分析：（1）应进行哪些细菌学检查？简述其方法。（2）如需进行革兰氏染色，请说明染色步骤及G+菌与G-菌的鉴别要点。（3）如何根据分离培养和生化试验结果鉴定细菌种类？ 第 页 学科网（北京）股份有限公司 $