山东省实验中学2025-2026学年第二学期期中高二生物试题

山东省实验中学2025~2026学年第二学期期中 高二生物试题2026.05 说明：本试卷满分100分，分为选择题和非选择题两部分，选择题为第1题至第30题， 非选择题为第31题至第33题。试题答案请用2B铅笔或0.5mm签字笔填涂到答题卡规定位 置上，书写在试题上的答案无效。考试时间90分钟。 第1卷（共70分） 一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。在每小题给出的四个选项中，只有一 项是符合题目要求的。 1.某同学对“果酒和果醋的制作”实验的改进如图所示，下列说法错误的是 苹果梨选择清洗一破碎一酶解→调配一 X溶液 酒精发酵醋酸发酵+调配→澄清过滤 苹果梨汁函 果酒 果醋 装置1 装置2 A.将苹果梨进行酶解能充分释放梨汁和糖分，使后续发酵更容易 B.为缩短制作时间，可分别人工接种酵母菌和醋酸菌 C.装置1的甲不仅可阻止外界空气进入，还便于排出果醋发酵产生的气体 D.装置2的乙可维持瓶中气压相对稳定，并可检测是否产生CO2 2.在家庭制作泡菜过程中，充分利用各种微生物生存条件和代谢特点达到积累乳酸菌、抑制 其他微生物生长的目的。下列关于发酵过程的叙述，正确的是 A.为了避免杂菌污染，泡菜坛需严格灭菌处理，盐水需煮沸冷却待用 B.晾干的新鲜蔬菜可以装满泡菜坛，因为乳酸菌无氧呼吸仅产生乳酸，没有气体生成 C.乳酸菌产生的乳酸既可以抑制其他微生物生长繁殖，也会抑制自身生长繁殖 D,因亚硝酸盐会随着发酵时间的延长越积越多，为了自身健康，应尽量少食用泡菜 3,从海水样本中分离粘质沙雷氏菌时，所用的海生菌肉汤培养基的成分如表所示。下列叙述 错误的是 蛋白胨5.00gL1 MgCl2 5.90 gL NaHCO30.16 g-L 酵母提取物1.00gL1 Na2SO43.24 g.L KBr0.08g-L 柠檬酸铁0.10gL CaCk 1.80 gL SrCk34.00gL NaCI 19.45 gL KC10.55gL1 HB022.00gL1 生物试画第1页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫猫ApP A.蛋白胨只为粘质沙雷氏菌提供碳源和氮源，该菌生长还孺要多种微量元素 B.若从牛肉膏、疏酸铵、硝酸钾中筛选优质氮源，每次应只添加其中一种 C.该培养基应在灭菌前调节pH,其不能用于分离粘质沙雷氏菌获得单菌落 D、该培养基添加了NaCL,具有抑制某些馓生物生长的作用，属于选择培养基 4.在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。相关叙述正确的是 A.巴氏消毒法可以杀死牛奶中绝大多数的微生物，并且不会破坏牛奶中的蛋白质 B.消毒是用强烈的理化方法杀死物体内外的所有微生物 C.配制好培养基后，先高压蒸汽灭菌，后定容 D.采用紫外线照射消毒前，适量喷洒石炭酸，可强化消毒效果 5.检验水样中大肠杆菌数目是否符合生活饮用水卫生标准，常用滤膜法测定，其操作流程如 图。大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝EMB)培养基的指示剂反应，菌落呈黑色。下列对 实验操作的分析，错误的是 滤膜上 无菌 无崩 滤下缀子 的菌落 三水样 培养 24小时y 培养基 培养后 的平板 A.测定前，滤杯、滤瓶均可用干热灭菌法进行灭菌处理 B.配制好的培养基一般倒置，防止冷凝水滴至培养基造成污染 C.配制EMB培养基培养大肠杆菌时，需将pH调至中性或弱碱性 D.EMB培养基属于选择培养基，只有大肠杆菌能正常生长并形成黑色菌落 6.马铃薯种植过程中很容易受到棒形杆菌的侵染导致维管束环状腐烂。棒形杆菌主要在种薯 上传播，也可在土壤中存活。如图所示，利用特定的选择培养基可以从土壤中筛选出棒形 杆菌，下列说法错误的是 1g 0.5mL 0.5mL0.5mL 0.1ml 土 圈选拆培养苏 99mL 4.5mL 4.5mL 4.5mL 无曹水无图水无菌水无曹水 ①②D A.图甲中培养后的棒形杆菌菌落平均数为120个，则每克土壤约含棒形杆菌1.2×103个 B.平板划线法结果如图乙所示，则接种时接种环总共灼烧6次 C.稀释涂布平板法和平板划线法都能用于土壤中棒形杆菌的分离和计数 D.需增设未接种的选择培养基及接种后的完全培养基作对照 生物试题第2页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫描ApP 7、当某单一营养缺陷型菌株所需的营养大类确定后，就要确定其生长所需的特殊营养物质。 首先对特殊营养物质进行编组，如表是对15种特殊营养物质进行的编组，编组完成后， 将沾有组合特殊营养物质的滤纸片放在涂有试验菌甲、乙、丙的培养基上，培养并观察其 生长情况，三种试验菌的生长谱如图所示。据图分析，下列叙述错误的是 组别 组合特殊昔养物质 A 2 3 4 5 B 2 6 7 8 9 ④ ⑧ ④ ⑧ © c 3 7 10 11 12 ® ® ® D 4 8 11 13 14 甲 U 丙 E 5 9 12 14 15 A.实验中所用的培养基应为不含特殊营养物质的基本培养基 B.试验菌甲、乙自身分别不能合成特殊营养物质13、2 C.若单缺的特殊营养物质为10、11中的一种，则在培养基上均会出现两个生长圈 D,试验菌丙的生长谱结果可能是由于所加营养物质浓度过高，产生了抑菌圈 8.下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是 A.用自然生长的茎进行组培须用适宜浓度的酒精和次氯酸钠的混合液消毒 B,培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并阻止瓶内外的气体交换 C.、组培苗锻炼时采用蛭石作为栽培基质的原因是蛭石带菌量低且营养丰富 D.不带叶片的菊花幼茎切段可以通过植物组织培养形成完整的菊花植株 9.通过植物细胞工程技术获得次生代谢物，可以满足化妆品市场对原料高质量及植物资源可 持续性发展的要求。下列叙述错误的是 A.培养基中含有营养物质，诱导愈伤组织时不需要光照 B.培养基中的糖类被植物细胞吸收后既能为细胞提供能量，也可用于多种有机物的合成 C.次生代谢物是生物代谢产生的、其生长和生存所必需的小分子有机化合物 D.脱分化与再分化过程均与细胞中基因的选择性表达有关 10.某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。 下列叙述错误的是 ③制造细 二一二2液， 分装 ①吸除培 ②吸除消 养液，加 化液，加 消化液 培养液 A,①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离B.②加培养液的目的是促进细胞增殖 C.③分装时需调整到合适的细胞密度 D.整个过程需要在无菌、无毒条件下进行 生物试题第3页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫猫ApP 11,研究表明，髓系细胞触发受体2(T℉EM2)是一种免疫抑削受体，在肿痛免疫逃逸中发挥 重要作用。因此，TREM2抗体药物有望提高肿瘤免疫疗法的疗效。如图为TREM2单克 隆抗体的制备流程图，下列说法正确的是 个免疫小鼠日 ① ⑤ 特定培养 专一抗 基筛选 体检测 ③ ④ ⑤ A.步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗体的杂交瘤细胞 B.经步骤②诱导后融合的细胞均既能分泌TREM2抗体又可无限增殖 C.步骤③和④的培养孔中均含有TREM2蛋白，依据的原理都是抗原一抗体杂交 D.步骤⑥和植物组织培养均需使用CO2培养箱进行大规模培养 12.科研人员将诺如病毒NV)作为抗原注射给小鼠，通过制备NV单克隆抗体1和2，应用 于胶体金检测试纸进行抗原鉴定（如图）。检测原理采用双抗体夹心法：将待测样液加到样 品孔处，结合垫处含有过量胶体金（可与蛋白质结合，大量聚集时出现肉眼可见的红色）标 记的游离金标抗体1，可以结合样液中的抗原，T上固定有抗体2，抗体1和抗体2与NV 表面同一抗原的不同部位发生特异性结合而呈红色，多余的抗体1继续向左流，C上固定 有抗体1的抗体，二者结合使胶体金大量聚集也呈红色。下列叙述错误的是 吸水垫质控线检测线结合垫样品孔 T A.将V作为抗原注射给小鼠，可获得多种产生特定抗体的B淋巴细胞 B.利用单克隆抗体技术制备的抗体1和抗体2不能直接对患者进行注射治疗 C.若仅C处呈红色，说明检测结果为阴性，则可初步判断待测液中不含NV D.若C、T处均呈红色，说明检测结果为阳性，该过程发生2次特异性结合 13.基于慢病毒感染和胚胎基因编辑构建非人灵长类脑疾病动物模型时，常出现操作困难、 编辑基因脱靶等问题。若对非人灵长类动物的体细胞进行基因编辑并获得阳性克隆的细胞， 再利用体细胞核移植技术构建动物疾病模型则具有优势。下列说法错误的是 A.该实验需将经基因编辑的单个体细胞注入去核的MⅡ期卵母细胞中 B.用电刺激、C*载体等方法可激活重构胚，促进其分裂、发育 C.进行胚胎移植前，要对供体和受体进行免疫检查，以防发生免疫排斥 D.重构胚必须移植到同种、生理状态相同的雌性个体子宫中才能发育成个体 生物试题第4页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫描ApP 14.用氨苄青霉素抗性基因(Amp)、四环素抗性基因(Te)作为标记基因构建的质粒如图所示。 用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质 粒)，并转化到受体菌中。下列叙述错误的是 Hind IlI A,若用HimdⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 Pou I Sph I Sca -Sal I B.若用Pvl酶切，在含Te(四环素)培养基中的菌落，不一定 质粒 含有目的基因 C.若用ShI酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D.若用SphI酶切，携带目的基因的受体菌在含Tt（四环素)的培养基中能形成菌落 15,大肠杆菌pUC118质粒是基因工程中常用的一种载体，具有氨苄青霉素抗性基因，该质 粒中某限制酶的唯一切点位于lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被 破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。下列叙述正确的是 一目的基因 氨苄青 lacZ基因 试管3 霉素抗 (扩大培 性基因 养重组 试管1试管2选择培养基 细菌) A.试管1中应加入限制酶和DNA连接酶 B.试管2中将重组质粒导入大肠杆菌，需用Ca*处理大肠杆菌 C.能在氨苄青霉素培养基中存在的菌落均呈现白色 D.试管3应选择蓝色菌落内的大肠杆菌进行扩大培养 16.某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端含 相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制 酶的切割位点如图所示。下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是 5'-GAATTC-3' 5-GGATCC-3' 酶3酶2 酶1 3'-CTTAAG-5 3'-CCTAGG-5' 酶1 酶2 抗生素 5-CCCGGG-3 5'-AGATCT-3 抗性基因 3'-GGGCCC-5 3'-TCTAGA一5 酶3 酶4 A.质粒和目的基因都用酶3切割，用E.c0 li DNA连接酶连接 B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA连接酶连接 C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA连接酶连接 D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA连接酶连接 17.最早的双脱氧测序法是PCR反应体系中，分别再加入少量的一种双脱氧腺苷三磷酸 (ddATP、.ddCTP、ddGTP或ddTTP),子链延伸时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补 配对原则，以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP,延伸终止；若配对的为脱氧 生物试團第5页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫猫ApP 核苷三磷酸（dATP),继续延伸：PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者 及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述错误的是 +ddATP +ddCTP +ddGTP+ddTTP +ddATP +ddCTP +ddGTP +ddTTP A G A C G 入 电泳 三 对照 患者 A.上述PCR反应体系中只需加入一种引物 B.电泳时产物的片段越大，迁移速率越慢 C.5'一TAGTGTCCATC-3'为患者的一段序列 D.患者该段序列中发生改变的碱基对是G一C突变为A一T 18.下列关于DNA粗提取与鉴定实验的叙述，错误的是 A.整个提取过程中可以不使用离心机 B.如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低 C.加入与滤液体积相等的、体积分数为95%的冷却的酒精，可分离DNA D.DNA在0.14mo/L NaCl溶液中溶解度较高，可纯化DNA粗提物 19.为培育能表达SGF14a-GFP融合蛋白的转基因拟南芥，研究人员所构建的重组质粒部 分结构如图。下列说法错误的是 启动子 SGF14a基因 GP基因 终止子 a链3' b链5’ 3 R 注：GFP基因为绿色荧光蛋白基因，凡、B、R、R表示引物 A.终止子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的下游 B.为确定GFP基因是否定向插入，可选用引物F1和R2进行PCR鉴定 C.引物F1与a链部分序列相同，引物R2与b链部分序列相同 D.可通过转基因拟南芥细胞能否发出绿色荧光来判断融合基因是否成功表达 20.大引物PCR定点突变常用于研究蛋白质结构改变导 诱变引物 致的功能变化。单核苷酸的定点诱变需要通过PCR获 PCR-1 本引物甲 得，其过程如图所示。下列有关分析错误的是 A,PCR每一次循环都包括变性、复性和延伸三步 PCR产物用作大引物 引物乙· B.诱变引物与模板链并不是严格的碱基互补配对 C.PCR-经过一次循环即可获得大引物模板 PCR-I D,PCR-Π选用大引物和引物乙以获得定点诱变的基 因片段 生物试画第6页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫描ApP 二、选择题：本题共10小题，每小题3分，共30分。每小题有一个或多个选项符合题目要 求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 21.老五甑（蒸馏酒用的锅）酿造法主要特点是混蒸混烧、续渣配料、多轮次发酵蒸酒。将发 酵后的四甑酒醅分层出窖，按一定比例加入新粮，分成五甑后依次蒸酒。蒸酒后一甑糟丢 弃，另四甑料重新放回窖池发酵。糟酷配料时需润料、拌匀并堆积；蒸酒出甑后的粮糟需 加水、摊凉、撒曲：粮糟入窖后需踩窖，以压紧发酵材料并封窖：窖泥是己酸菌、甲烷菌、 丁酸菌的载体，主要位于窖池底部和四壁，是生产浓香型白酒的基础。下列叙述正确的是 A、该工艺可以提高酒粮的利用率和出酒率，增加呈香物质在酒醅中的积累 B.窖泥的作用主要是提供酿酒微生物和以淀粉酶、蛋白酶为主的各种糖化酶类 C.摊凉可防止酵母等微生物死亡，踩窖可抑制好氧菌繁殖 D. 可采用抽样检测法对窖池底部和四壁的窖泥微生物进行计数 22.呻酒主要是以麦芽、水、啤酒花为原料，经酵母菌发酵而来，具体生产流程如图所示。 下列叙述正确的是 加啤酒花 接种 冷却 发芽→焙烤→碾磨→糖化蒸煮 过滤 发酵 消毒→终止 主发酵 后发酵 A. 啤酒发酵过程中，主发酵阶段完成酵母菌的繁殖，后发酵阶段完成代谢物的生成 B.“精酿”啤酒发酵时间长，没有进行过滤和消毒处理，因此保质期较短 C.蒸煮阶段产生风味组分，终止酶的进一步作用，并对糖浆灭菌 D,为防止接种时酵母菌被杀死，应在麦汁冷却后再加入酵母菌进行发酵 23.某研究小组从黄色短杆菌（能合成L亮氨酸）中筛选L亮氨酸缺陷型（不能合成L-亮氨酸） 突变菌株，培养皿A和培养皿B的培养基中含有L亮氨酸，培养皿C的培养基中不含有 L亮氨酸，实验流程如图所示。下列相关叙述正确的是 灭菌后的金丝绒 振荡培养后诱变处理 ②接种 ①接种 培养皿B 培养 菌液培养皿A 培养皿A 培养皿C A.①的操作过程是用灼烧后冷却的涂布器蘸取菌液在培养皿A表面涂布接种 B,②接种时，要使培养皿B和培养皿C的菌种接种位置相同，便于将来比较培养皿B 和培养皿C中菌落差异 C.培养皿A、B、C中的培养基都要使用固体培养基的原因是便于观察菌落特征和分离 目的菌株 生物试题第7页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫描ApP D.研究人员应该从培养皿C中选取目的菌落，选取目的菌落位置的依据是培养皿C中 有菌落，而在培养皿B中的对应位置没有菌落 24.多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体，为了获得植物次生代谢产物， 先用某植物外植体(2)获得愈伤组织，然后在培养液中悬浮增养，再经秋水仙素处理，产 生染色体加倍的细胞。下列叙述错误的是 A、培养液中添加的蔗糖具有提供能源和调节渗透压的作用 B、需要用胰蛋白酶将愈伤组织分散成单个细胞进行悬浮培养 C.诱导加倍处理后，可以观察到染色体数为8的细胞 D.细胞干重在培养12d后会下降，原因可能是营养物质减少、有害代谢产物积累 25、在单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞（即瘤细胞和B淋巴细胞的融合细胞）的筛选 是必不可少的步骤。筛选杂交瘤细胞所用的HAT培养基成分和细胞增殖时所需的核苷酸 的两条形成途径(D途径，S途径)如下表所示。己知融合所用的瘤细胞是经毒性培养基 选出的中间合成途径缺失株，即只有起始合成途径，B淋巴细胞有两条核苷酸合成途径。 若仅考虑细胞的两两融合，下列说法错误的是 HAT培养基成 水，糖类、无机盐、次黄嘌呤、氨基喋呤（叶酸拮抗剂），胸腺嘧啶脱氧 分 核苷等 起始合成途径 由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，叶酸作为重要的辅酶参与这一 (D途径) 过程 中间合成途径 利用次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶 (S建径) (TK)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸 A.HAT培养基中瘤细胞可利用氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 B.杂交瘤细胞能被筛选的原因为既具备增殖能力，又可进行S途径 C.筛选出来的杂交瘤细胞分泌的均为同一种特异性抗体 D.在放入HAT培养基之前的融合细胞的培养液中，有D途径的细胞有3种 26.我国中科院研究人员把猴子的胚胎干细胞注射到猪的胚胎中，产下2只“猪一猴嵌合体” 幼崽，过程如图。下列说法错误的是 GFP基因→●食蟹猴细胞 A.将GFP基因导入食蟹猴细胞的目的是 食蟹猴 食蟹猴 细胞 。》胚胎 便于追踪猴细胞在猪一猴嵌合体中的位置 卵母细胞、 慰合 B,可通过电融合法促进转GFP基因的食蟹 带有部分 猪卵 受 猴细胞与去核的食蟹猴卵母细胞融合 母细胞 作用 →猴细胞的 幼崽 猪胚胎 養胚猪一儉嵌 C.处于MII期的猪卵母细胞与获得能量的 合体胚胎 精子共同培养在培养液中完成受精作用 注：GFP基因为绿色荧光蛋白基因。 D.利用猪一猴嵌合体龔胚的滋养层细胞进行性别鉴定后培养到原肠胚再进行胚胎移植 生物试题第8页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫猫ApP 27.关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是 A,琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B.凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C.PC℉实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理 D,琼脂糖凝胶中的DNA分子染色后可在紫光灯下被检测出来 28.利用农杆菌转化法可以将目的基因导入受体细胞。农杆菌Tⅵ质粒是一种天然存在的植物 遗传转化系统。下列关于Ti质粒的叙述正确的是 A、当农杆菌感染植物时，菌体进入受体细胞后留在细胞质内 B.TDNA进入受体细胞后可利用植物体内的酶进行转录和翻译 C.将目的基因与T质粒整合的过程称为转化 D.Ti质粒上的T-DNA区段可整合到受体细胞的染色体上 29.中国农业科学院棉花研究所棉花分子遗传改良创新团队成功将甜菜红素在棉花纤维中富 集，创制出纤维呈粉红色的棉花，如图是利用基因工程培育粉红色棉花的示意图，下列有关 该研究的说法错误的是 构建表 转入 导入 达载体 农杆菌「 @可 培养 再生成 Ti 重组 含重组Ti质粒 植株零 质粒 Ti质粒 的农杆菌 植物细 植株 ① ② ③ ④ ⑤ A.通过基因工程创制出彩色纤维棉可有效减少化学染料使用量 B.过程①→②完成需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶的参与 C.在⑤的植株中检测到甜菜红素合成相关的基因，就代表粉红色棉花培育成功 D.过程④→⑤依据了植物体细胞全能性的原理 30.下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，错误的是 A.DNA连接酶具有特异性，只能连接同一种限制性内切核酸酶切割形成的黏性末端 B.启动子是一段特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，是转录的起始位点 C.蛋白质工程需构建基因表达载体，改造后的蛋白质的性状可遗传给后代 D.将抗虫基因整合到某植物的线粒体DNA中，可通过花粉传播，从而引起基因污染 生物试题第9页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫猫ApP 第Ⅱ卷（非选择题，共30分） 三、非选择题（本题共3小题，共30分） 31.(10分)泡菜传统自然发酵方式的发酵周期相对较长，生产效率低。研究人员欲从泡菜 中分离筛选出高产酸乳酸菌，为泡菜工厂化生产提供依据。请分析并回答下列问题： (I)配制CaCO,一MRS培养基。成分：蛋白陈、牛肉膏、酵母粉、磷酸氢二钾、葡萄糖、琼 脂粉、碳酸钙等。 ①根据物理性质分类，该培养基属于 培养基，为乳酸菌种提供氮源的成分是 ②培养过程中，乳酸菌产生乳酸溶解碳酸钙，形成溶钙圈，便于 (2)高产酸乳酸菌的培养与分离。其部分实验目的与具体操作如下所示，请完成下表。 实验目的 简要操作过程 在无菌条件下取样品中泡菜汁1mL,加入① 进行10倍梯度稀释， 梯度稀释 依次得到105、106、107的稀释液 取上述稀释液1mL分别加入无菌培养皿中，然后将CaCO-MRS培养基浇 接种培养 注混匀冷凝后，将培养皿② ,并连续培养48h 分离纯化 挑取③ 进行平板划线培养 长期保存 将菌种加入30%的甘油中在一20℃保存 (3)高产酸乳酸菌的鉴定。提取筛选乳酸菌的DNA,通常采用16SDNA(编码rRNA对应的 DNA序列)的通用引物进行PCR扩增并测序鉴定。以16SDNA作为细菌分类依据的原因是 不同菌属的16SDNA具有 (④高产酸乳酸菌发酵效果检测。研究人员研究了两种高产酸乳酸菌（乳酸菌A507和A50b9) 在发酵泡菜过程中pH的变化，结果如图所示。据图分析，该研究实验的自变量是 可以看出，接种两种乳酸菌效果相近，其相近之处表现为 pH 7.0 6.5 士0%接种量 65 6.0 6.0 太0%接种量 5.5 +2%接种量 5.5 +2%接种量 5.0 4%接种量 5.0 4.5 4.5 →4%接种量 4.0 ·6%接种量 4.0 。6%接种量 3.5 3.5 3.0 3.0 3691215时间/d 3691215时间1d 乳酸菌A50b9 乳酸菌A50f7 生物武愿第10页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫猫ApP 32、(10分)百合具有观赏、食用和药用等多种价值，科研人员对其进行了多种有种技术研 究。回答下列问题： (1)体细胞杂交育种。进行不同种百合体细胞杂交前，先用 去除细胞壁获得原生 质体，使原生质体融合，得到杂种细胞后，继续培养，常用 (填植物激素名称)诱导 愈伤组织形成和分化，获得完整的杂种植株。 (2)单倍体育种。常用 的方法来获得单倍体植株，最简使的鉴定百合单倍体植株 的方法是 GUS酶活性/(pmol·L-, min-1·g蛋白) 复制起点 口对照母尖孢镳刀菌 70外▣ 厚垣 ■交链格孢 SmaI 镰刀菌 抗性基因 60 50 启动子L 基因L 终止子到 Ti质粒 40 启动子 30 Xba I BamH I Sma I Sac I gusHind]Π 20 10i HindIⅢ 终业子 Xba I Sac I Sma I BamH I P1 P2 P3 图a 图b 图c (3)基因工程育种。研究人员从野生百合中获得一个抵抗尖孢镰刀菌侵染的基因L,该基因及 其上游的启动子pL和下游的终止子结构如图a。图b是一种Ti质粒的结构示意图，其中基 因gs编码GUS酶，GUS酶活性可反映启动子活性。 ①研究病原微生物对L的启动子pL活性的影响。从图a所示结构中获取pL,首先选用 酶切，将其与相同限制酶酶切的T质粒连接，再导入烟草。随机选取3组转基 因成功的烟草P1、P2和P3)进行病原微生物胁迫，结果如图c。由此可知：三种病原微生物 都能诱导pL的活性增强，其中的诱导作用最强。 ②现发现栽培种百合B中也有L,但其上游的启动子与野生百合不同，且抗病性弱。若要提 高该百合中L的表达量，培育具有高抗病原微生物能力的百合新品种，简要写出实验思路： 生物试圆第11页共12页 CS扫描全能王 3亿人都在用的扫猫ApP 33.(10分)研究发现，实体肿瘤内部通常是缺氧的环境，蓖麻毒素蛋白 (RTA) )可作用于核糖 体，使蛋白合成受阻，从而引起细胞死亡。 T AT是一种短肽，可转导蛋白进入细胞，含有氧 依赖性降解区域ODD(多肽) 的融合蛋白可以适应低氧条件稳定存在， 但在常氧条件下会被蛋 白酶降解。科研人员以RTA作为抑制肿瘤细胞增殖的活性分子， 利用 TAT 的作用将融合蛋 白转运进入肿瘤细胞， 并利用ODD的作用减轻RTA对正常细胞的毒性， 分别构建了含TAT RTA(66 0bp)和 TAT-RTA-ODD(870bp) 融合基因的表达载体，并成功得到相关融合蛋白。 (1) 可采用PCR的方法获取融合基因 TAT-RTA， 需要根据TAT和RT基因设计引物， 引物的 作用是 。 已知RTA基因和欲得到的 TAT-RTA 融合基因的结构如图1所示， TAT基因编码链序列 5'- ATGAGCTACGGCCGTAAAAGAGACGCCAACGTAGA-3； 为顺利构建表达载体，需要在引物1的5端加入限制酶的酶切位点，引物2的5端 加入限制酶的酶切位点，利用T AT 和RTA核酸序列设计引物时， 要求在RTA蛋白 的前端引入 TAT 短肽，请根据要求写出引物1 (写出引物5'端的12个碱基 即可)。 引物2 TCT TTCCGAAACAGTACC …… ccCCGAGCAGCCAGTTC 启动子 子 RTA基因部分序列 终止子 引物 I 注：DNA编码链为转录 BamHI X boI 时所用模板健的互补链。 DNA编码链 BamHI5'GGATCC-3' 启动子 T TAT RTA 终止子 一 XboI5'-CTCGAG-3' 图1 (2) 载体的部分结构如图2所示， His标签由连续的6个组氨酸构成， 可用于对重组融合蛋白 进行分离纯化，将 PCR 得到的 TAT 一RTA融合基因和载体双酶切后， 再用酶连接。 但是在研究时，发现融合蛋白中没有 His 标签蛋白，据图分析原因是 。 限制酶1识别序列限制酶2识别序列 DNA编 His 码链 $$5 ^ { ' } - \left($$ -(GG ATCC) -CTCGAGACACCACCACCACCACC ACT GA GA-3' 氨基酸…G …Gly Ser-…-Leu Glu Thr Pro Pro Pro Pro Pro Leu Arg. 序列 注：Gly甘氨酸 Ser丝氨酸 Pro脯氨酸Arg精氨酸 Leu亮氨酸 Glu谷氨酸 Thr苏氨酸 图2 生物试题第12页共12页 S扫描全能王 3亿人都在用的扫描App