《畜禽疫病防治》微量血凝抑制试验（课件）-山东省畜牧养殖类专业技能考试

微量血凝抑制试验 一、实验目的 1.掌握微量血凝抑制试验的原理和方法步骤。 2.掌握微量血凝抑制试验的结果判定。 Ag、Ab不对应 RBC 抗体 红细胞凝集（HA现象） RBC v v v v v RBC RBC RBC RBC RBC RBC RBC RBC v 血凝性病毒 血凝素纤突 v v v v Ag、Ab对应 RBC 红细胞不凝集（HI现象） RBC v v RBC RBC 二、实验原理 如有能凝集红细胞的病毒，其凝集性可被相应的抗体所抑制，这种抑制还有特异性。 二、实验原理 故病毒的血凝抑制试验 可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体。 也可用已知血清来鉴定未知病毒。 96孔V型血凝板 5-50ul微量移液器 微量移液器架 5-50ul微量移液器吸头 三、实验器材 三、实验器材 微型振荡器 废物缸、废液缸 PBS 1%鸡红细胞悬液 鸡新城疫病毒标准阳性抗原 新城疫病毒标准阳性血清、阴性血清 四、方法步骤 1.在96孔V形血凝板第1孔～第11孔各加入25uL PBS,第12孔加入50ul PBS。 四、方法步骤 2.吸取25uL血清加入第1孔，充分混匀后移出25uL至第2孔，依次类推，倍比稀释至第10孔，并从第10孔弃除25uL。 四、方法步骤 3.第1～第11孔各加入25uL4 HAU 抗原，振荡15S，使液体混合均匀，室温至少静置20min，或2℃-8℃至少60min。 四、方法步骤 4.在第1孔-第12孔各加入25uL1％的鸡红细胞悬液(将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。 四、方法步骤 5.振荡混匀，室温静置20min-40min或2℃-8℃静置40min-60min进行结果判定。 四、方法步骤 6.第11孔为抗原对照，第12孔为PBS对照，每次测定还应设已知效价的标准阳性血清和阴性血清作对照。 抗原对照 PBS对照 标准阳性血清对照 阴性血清作对照 五、结果判定 1、判定时机 室温静置20min-40min或2℃-8℃静置40min-60min，当对照孔（第12孔）红细胞呈显著纽扣状时判定结果。 五、结果判定 2、判定方法 将反应板倾斜，从背侧观察加样孔底部的红细胞是否呈泪痕状流淌。 完全不凝集 不完全凝集 完全凝集 A B C 五、结果判定 2、判定方法 以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀释倍数为该血清的血凝抑制（HI）抗体效价。如下图血清的血凝抑制（HI）抗体效价为7log2。 五、结果判定 只有当阴性血清对照HI抗体效价≤2log2，阳性血清对照HI抗体效价与标定效价相差≤1个滴度，PBS对照孔无自凝现象，试验结果有效。 HI效价≤3log2，判为HI试验阴性；HI效价≥4log2，判为HI试验阳性。 2、判定方法 五、结果判定 EV录屏3.9.7软件录制 Lavf56.38.102 本视频由湖南一唯信息科技开发的EV录屏软件录制，www.ieway.cn EV录屏3.9.7软件录制 Lavf56.38.102 本视频由湖南一唯信息科技开发的EV录屏软件录制，www.ieway.cn EV录屏3.9.7软件录制 Lavf56.38.102 本视频由湖南一唯信息科技开发的EV录屏软件录制，www.ieway.cn EV录屏3.9.7软件录制 Lavf56.38.102 本视频由湖南一唯信息科技开发的EV录屏软件录制，www.ieway.cn $