备至少提前30分钟从冰箱中取出试剂盒，使试剂平衡至室温。提前配置一倍PBST，取480毫升蒸馏水，20毫升25倍PBST浓缩液混匀，配成一倍pbs T。操作步骤，稀释血清96孔酶标板检测10份样品布局如图所示，没裱板上1到10列为待检血清，最终血清稀释度为一比102 41列为阳性血清，最终血清稀释度为一比。4096. A12孔B12孔为阴性对照血清，最终血清稀释度为1比8，E12孔到H12孔为病毒抗原对照孔。A一到A十孔，每孔加入75微升PBST。第1到10列，其余孔加入50微升PBST。第十一列每孔加入50微升PVST。A12B12孔加入50微升PBST。A一加入待拣血清，二十五。微升。吹打混匀3到5次，吸出五十微升。加入B一孔，吹打混匀3到5次，一次到H一孔。吹打混匀3到5次后，吸出五十微升。去掉。第2到10列加入待检血清同样被比稀释至最后一孔。A11孔加入阳性对照五十微升做同样倍比，稀释至最后一孔。A12孔加入阴性对照，血清五十微升被比稀释至B12孔。抗原稀释，本试剂盒的抗原需要1比30稀释，一个美标版配6毫升即可。加病毒抗原待检，血清阴性阳性，对照血清的每一吸出孔内加工作浓度的病毒抗原五十微升每孔。E12到H12孔病毒抗原对照孔，仅加入每孔100微升的工作浓度的病毒抗原。封板。震荡。37度温浴30分钟。用一倍PBST连续洗板3到5次拍干。每孔加入五十微升口蹄疫O型酶标抗体工作液。封板。37度温浴30分钟。用一倍PPST连续洗板3到5次拍干。将TM bdo a溶液和B溶液以一比一的比例混匀。每孔加入混匀后的底物溶液五十微升。值37度，显色15分钟。显色反应结束后，每孔加终止液50微升，终止反应。