精品解析：江苏省淮安中学2025～2026学年度第二学期高二年级期中调研测试试卷 生物

江苏省淮安中学2025~2026学年度第二学期 高二年级期中调研测试试卷 生物 本试卷满分100分，考试时间75分钟。 一.单项选择题：共15题，每题2分，共30分。每题只有一个选项最符合题意一、单项选择题：共15题，每题2分，共30分。每题只有一个选项最符合题意。 1. 生活中我们经常会接触到传统发酵食品，如果酒、果醋、泡菜等。下列关于传统发酵食品制作的叙述错误的是（　　） A. 制作泡菜的菌种来源于植物体表面天然的乳酸菌 B. 泡菜腌制时间过短或食盐用量不足，会导致亚硝酸盐含量升高 C. 酿制米醋时表面的一层白色菌膜主要是由酵母菌组成 D. 在米酒和米醋制作的过程中，发酵液pH均有下降的趋势 2. 防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，下列关于微生物的基本培养技术的叙述，正确的是（　　） A. 实验过程中对操作者的衣着和手都需要进行消毒处理 B. 倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C. 微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质 D. 制备的培养基一般要进行高压蒸汽灭菌，接种工具须经消毒处理 3. 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 图中所用培养基不需要添加氮源，但需要将pH调制成中性或弱碱性 B. ④过程采用的是稀释涂布平板法，该方法用于计数时往往结果偏大 C. 若④的平板上菌落平均数为72个，则每克土壤中含有的固氮菌约7.2×105个 D. 平板划线法既可以用来分离菌种，也可以用于计数 4. 发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域都得到了广泛的应用，下列关于发酵工程的叙述正确的是（　　） A. 葡萄糖转化为乙醇所需的酶既存在于细胞质基质，也存在于线粒体 B. 啤酒酿造流程中适当增加溶解氧可缩短发酵时间 C. 啤酒酿造流程中焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并进行灭菌 D. 发酵工程的中心环节是分离、提纯产物来获得微生物细胞本身或其代谢产物 5. 下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是（　　） A. 组织培养过程中也可无明显愈伤组织形成，直接形成胚状体等结构 B. 用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异 C. 培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并阻止瓶内外的气体交换 D. 组培苗锻炼时采用蛭石作为栽培基质的原因是蛭石带菌量低且营养丰富 6. 下图是利用甲、乙两种植物的各自优势，通过植物细胞工程技术培育高产、耐盐的杂种植株的实验流程图。下列叙述错误的是（　　） A. 获得的杂种植株不一定能够表现亲本的优良性状 B. 与杂种细胞形成有关的细胞器包括高尔基体 C. b 之前的诱导过程除PEG之外还可以使用灭活的病毒 D. b 之后得到的愈伤组织细胞是具有细胞壁的薄壁细胞， 7. 为保护濒危珍稀植物云南红豆杉，并高效提取其抗癌物质紫杉醇，研究人员利用植物细胞工程进行快速繁殖与细胞悬浮培养，相关流程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 利用植物组织培养技术获得紫杉醇，实现了细胞产物的工厂化生产 B. 原生质体虽无细胞壁但仍保持细胞的全能性 C. 外植体选择云南红豆杉的幼嫩茎段，是因为该部位细胞的分化程度低和分裂能力强 D. 组培苗移植之前，需要用流水清洗掉根部的培养基 8. 下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（　　） A. 细胞培养需要在含95%CO2和5%空气的混合气体的CO2培养箱中进行 B. 将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞 C. 培养过程须定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞造成危害 D. 动物细胞的传代培养过程中，常用生理盐水稀释细胞悬液 9. 下列关于单克隆抗体制备和应用的叙述，错误的是（　　） A. 用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，但不能冻存 B. HAT选择培养基上获得的杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产 C. 用单克隆抗体诊断肿瘤等疾病时可以用荧光标记法或同位素标记法 D. 需要使用动物细胞培养技术 10. 下图为经过体外受精和胚胎分割、移植培育优质奶牛的过程。下列叙述错误的是（　　） A. 体外受精过程中会发生雌雄原核核膜消失现象 B. 分割时要将①均等分割 C. 胚胎分割可看作动物无性繁殖或克隆方法之一 D. 胚胎分割技术提高了移植胚胎的成活率 11. 下表是几种限制酶的识别序列及切割位点（Y=C或T，R=A或G）。下列相关叙述正确的是（　　） 限制酶 HindⅡ AluI BamHI Sau3AI 识别序列及切割位点 5'-GTY↓RAC-3' 5'-AG↓CT-3' 5'-G↓GATCC-3' 5'-↓GATC-3' A. 限制酶识别序列越短，越适宜 B. 限制酶主要是从原核生物中分离纯化得到的 C. 一种限制酶只能识别一种核苷酸序列，并在特定位点切割 D. BamHI和Sau3AI切割形成的片段进行重组后，BamHI和Sau3AI均不能识别并切割 12. 下列关于基因工程基本工具的叙述，正确的是（　　） A. 限制酶切割DNA分子一次可断开2个磷酸二酯键，产生1个游离的磷酸基团 B. 限制酶能特异性地识别4个、8个核苷酸序列 C. 用做分子运输车的质粒常有特殊的抗生素合成基因，便于重组DNA分子的筛选 D. DNA连接酶能连接双链DNA片段互补的黏性末端或平末端，从而恢复被限制酶切开的氢键 13. 将外源基因导入受体细胞的过程中需要使用载体，下列有关载体的叙述错误的是（　　） A. 载体应对宿主细胞无伤害，以免影响宿主细胞的正常生命活动 B. 载体应具有一个至多个限制酶切割位点，以便于目的基因的插入 C. 基因工程中被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上改造的 D. 噬菌体常作为动物基因工程的载体 14. 利用PCR获取和扩增目的基因是基因工程中常用的技术手段。下列有关PCR的叙述，错误的是（　　） A. 两种引物的碱基序列不能互补，且都从引物的3′端开始延伸子链 B. 引物中A+T的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性就越高 C. 若PCR扩增仪中复性的温度设定为60℃，可能得不到子代DNA D. DNA片段的PCR扩增实验中反应缓冲溶液中的Mg2+能够激活TaqDNA聚合酶 15. 下列与“DNA的粗提取与鉴定”和“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验有关的叙述，错误的是（　　） A. 鉴定DNA时，应将丝状物直接加到二苯胺试剂中进行沸水浴 B. 新鲜的洋葱、菠菜、猪肝等均可作为DNA粗提取的实验材料 C. DNA分子在电场作用下在凝胶中向着与它所带电荷相反的电极移动 D. 待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时需停止电泳并取出凝胶置于紫外灯下观察和照相 二、多项选择题：本部分包括4题，每题3分，共计12分。每题有不止一个选项符合题意。每题全选对者得3分，选对但不全的得1分，错选或不答的得0分。 16. 柿子具有较高的营养价值和药用价值，采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的柿子醋，提高了柿子的经济价值。柿子醋的酿造工艺流程如图所示。 下列关于柿子醋酿造过程的叙述，正确的是（　　） A. 酒精发酵和醋酸发酵都要在无氧条件下进行 B. 为防止杂菌污染，柿子醋制作时温度应控制在30℃以下 C. 用不同品种和成熟度的柿子酿造的柿子醋风味不同 D. 醋酸发酵阶段中产生的气泡量少于酒精发酵阶段 17. 嵌合体在免疫学上的含义是指一个机体身上有两种或两种以上染色体组成不同的细胞系同时存在，彼此能够耐受，不产生排斥反应，相互间处于嵌合状态。如图是科研人员利用白鼠和黑鼠的早期胚胎培育黑白嵌合体小鼠的流程，下列叙述正确的是（　　） A. 使用免疫抑制剂以避免代孕牛对植入胚胎的排斥反应 B. 过程③将囊胚植入代孕母鼠前需对母鼠进行同期发情处理 C. 早期囊胚中的内细胞团细胞可进一步发育形成胎膜和胎盘 D. 培育嵌合体与克隆动物的生物学原理不同，操作方法也有差别 18. 一种双链DNA分子被三种不同的限制酶切割，切割产物通过电泳分离，用大小已知的DNA片段的电泳结果作为分子量标记（图左边一列）。关于该双链DNA，下列叙述正确的是（　　） A. 由限制酶NotⅠ切割产生的片段可知该DNA分子呈链状结构，长度大小为10kb B. 该双链DNA分子含有一个NotⅠ和两个EcoRⅠ切割位点 C. 根据条带分布情况可知加样孔在图示的上方 D. 在凝胶溶液凝固前加入核酸染料以便对DNA进行染色 19. 下图表示某基因表达载体中的潮霉素抗性基因和psy基因，有关叙述正确的是（ ） A. 潮霉素抗性基因可以作为标记基因用于筛选 B. 启动子的转录产物为mRNA的起始密码子 C. 转录过程RNA聚合酶沿3'→5'方向读取模板链的碱基序列 D. 潮霉素抗性基因和psy基因以同一条链为模板进行转录 三、非选择题：本部分包括5题，共计58分。除标注外，每空1分 20. 近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C18H2OFN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌药物，但遇到高温就会失效。某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株，筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题： （1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_____，及时对培养基进行分装，并进行高压蒸汽灭菌。上图整个操作过程中不需要的工具是_____（a.酒精灯 b.培养皿 c.显微镜）。 （2）步骤I中OFL降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、OFL和水，其中可作为碳源的有_____。步骤III使用的接种工具的灭菌方法是_____，该步骤操作过程中往往需要配置牛肉膏蛋白胨培养基接种等量菌液，作用是_____。 （3）下列关于该实验过程中相关操作的叙述错误的有_____。 A. 采集到的污泥悬浊液接种培养，OFL用量应随转接次数增加而逐渐减少以富集目标菌种 B. Ⅲ过程中通过连续划线将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落 C. 图中培养基在所有成分都融化后装至锥形瓶进行高压蒸汽灭菌 D. 微生物接种后，应在培养皿皿底做标记后倒置培养 （4）在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选_____时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是124、132、116，故推测A中细菌的数量约为1.24×109个/mL，则过程Ⅱ中的总稀释次数为_____次。 （5）研究者进一步分离纯化获得两种菌株，为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株_____进行后续相关研究，理由是_____。 21. 不对称体细胞杂交是指利用射线破坏供体细胞的染色质，与未经射线照射的受体细胞融合，所得融合细胞含受体全部遗传物质及供体部分遗传物质。研究人员尝试运用不对称体细胞杂交将红豆杉（2n=24）与柴胡（2n=12）进行了融合，培育能产生紫杉醇的柴胡，过程如下图1。请回答下列问题： （1）为获得红豆杉和柴胡的原生质体，可将流水冲洗后的外植体用酒精消毒_____（填“30s”或“30min”），然后立即用_____冲洗，随后再用次氯酸钠溶液处理适宜时间，再次冲洗后将外植体接种于MS培养基上形成愈伤组织，在渗透压与细胞液渗透压相比较_____的培养液中酶解去壁获得原生质体。 （2）已知X射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位、染色体消除等，使细胞不再持续分裂；碘乙酰胺处理使细胞质中的某些酶失活，抑制细胞分裂。对红豆杉和柴胡原生质体进行的A、B 处理分别为_____。 （3）过程③经化学试剂诱导融合后，只有异源融合的原生质体可持续分裂形成再生细胞团，原因是杂种细胞由于融合后在_____和_____（填细胞结构）的功能上实现了互补，使细胞恢复正常。 （4）过程④中，所用培养基需含有激素类物质X和Y，当X与Y的浓度比例大于1时，诱导未分化细胞群分化出芽，则X属于_____类似物。 （5）观察再生植株细胞中的染色体，发现数目_____（从“小于等于”“等于”“小于”中选填）36条，说明初步获得了不对称杂种植株。 （6）研究人员以红豆杉幼苗茎形成层为外植体进行相关研究，得到如图2所示实验结果。下列相关叙述正确的有_____。 A. 愈伤组织细胞和胚状体细胞都已经出现了脱分化 B. 暗处理时间对脱分化率的影响小于对再分化率的影响 C. 暗处理时间的延长不利于红豆杉胚状体的形成 D. 红豆杉幼苗茎形成层诱导形成胚状体的最适暗处理时间是1周 22. 双特异性抗体（BsAb）是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，双特异性抗体在自然状态下并不存在，可以通过重组DNA或细胞融合技术人工制备实现。长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图1是科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图示。回答下列问题。 （1）图1中①步骤注射癌胚抗原对小鼠进行免疫，目的是从该小鼠的_____中获得能产生抗癌胚抗原抗体的B淋巴细胞。过程②动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理_____（填“相同”或“不相同”）。过程③所用的HAT培养基上，_____的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 （2）过程④中将杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个，通过培养让其增殖，然后利用_____的原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞的特点是_____。 （3）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是_____。 （4）利用小鼠制备的抗体是鼠源抗体，鼠源抗体具有外源性，会被人体免疫系统当作抗原而清除（称为人抗鼠抗体反应即HAMA反应）。抗体结构如图3所示，引起HAMA 反应的主要是“C区”，通过制备人鼠嵌合抗体可以解决HAMA反应。现利用重组DNA技术可以制备人鼠嵌合抗体，制备人鼠嵌合抗体基因时，应先将人抗体的_____区基因与鼠抗体的_____区基因进行拼接；然后再将拼接好的人鼠嵌合抗体基因与适宜的载体结合，构建表达载体。将表达载体利用_____技术导入哺乳动物细胞，表达出嵌合抗体。 23. 2018年3月，世界上最后一头雄性北方白犀牛死亡，该物种仅剩下两头雌性，在此之前，研究人员设法保存了北方白犀牛的精子。多个研究团队试图通过多种技术手段繁育该物种。请回答下列问题。 （一）一个研究团队试图培育试管北方白犀牛，其主要流程如下图1。 （1）①过程需要对雌性北方白犀牛注射_____，目的是使其超数排卵。取自雌性北方白犀牛体内的卵母细胞需要培养至_____（时期）才能与获能的精子受精，当观察到透明带与卵细胞膜之间出现_____是卵子受精的重要标志。 （2）研究团队将体外受精得到的受精卵体外培养至_____阶段的早期胚胎移植至南方白犀牛的子宫中孕育，母体子宫对胚胎的免疫耐受性_____（“高”或“低”）是胚胎移植的生理学基础。 （二）另一个团队试图培育克隆北方白犀牛，其主要流程如下图2。 （3）②过程需显微操作去除卵细胞的_____，与北方白犀牛的体细胞融合后形成的重构胚需经过物理或化学激活，使其完成_____进程，该技术培育的克隆动物性别是_____。 （4）该技术获得的克隆动物与供体北方白犀牛表型不完全相同的原因可能有_____。 （5）上述两种技术手段属于有性繁殖的是图_____，为获得更多北方白犀牛可在胚胎移植前对胚胎进行_____。 24. 植物内生菌是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌，普遍存在于高等植物中。 （1）放线菌也是一种常见的内生菌，能抑制病原菌的生长。研究者利用两种不同类型的放线菌获得新型工程菌，过程如图： 收集上述两种菌丝体，加入_____（填“纤维素酶”或“溶菌酶”）处理，分离原生质体，将两种原生质体悬液等量混合，加入适量促融剂处理一段时间。终止反应并洗涤后，取一定量混合液接种于物理状态为_____的培养基中培养，根据菌落特征，选出性状稳定的融合菌株。 （2）某真菌的W基因可编码一种可高效降解纤维素的酶，已知图中W基因的乙链为转录的模板链。为使放线菌产生该酶，以图中质粒为载体，进行转基因。 限制酶 BamHI EcoRI MfeI KpnI HindⅢ 识别序列和切割位点（5-3’） G↓GATCC G↓AATTC C↓AATTG GGTAC↓C A↓AGCTT ①表中EcoR I识别切割对应序列后形成的黏性末端为_____（方向5'→3'），与_____限制酶识别切割后形成的末端相同。应使用限制酶_____切割图中质粒，使用限制酶_____切割图中含W基因的DNA片段，以获得能正确表达W基因的重组质粒。 ②与质粒中启动子结合的酶是_____。启动子通常具有物种特异性，在质粒中插入W基因，其上游启动子应选择_____启动子（填生物类型）。 ③W基因转录的模板链是_____。利用PCR技术对W基因进行扩增时子链延伸的方向是_____。 ④研究人员利用W基因的mRNA进行逆转录得到了cDNA，已知mRNA的序列为5-UGAACGCUA…（中间序列）…GUCGACUCG-3'。利用PCR技术对cDNA进行扩增，为便于将扩增后的基因和载体连接构建重组质粒，PCR扩增时所需引物的前12个碱基序列为_____（方向5'→3'）。 A.GAATTCACTTGC B.GAATTCTGAACG C.AAGCTTGCTCAG D.AAGCTTCGAGTC 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 江苏省淮安中学2025~2026学年度第二学期 高二年级期中调研测试试卷 生物 本试卷满分100分，考试时间75分钟。 一.单项选择题：共15题，每题2分，共30分。每题只有一个选项最符合题意一、单项选择题：共15题，每题2分，共30分。每题只有一个选项最符合题意。 1. 生活中我们经常会接触到传统发酵食品，如果酒、果醋、泡菜等。下列关于传统发酵食品制作的叙述错误的是（　　） A. 制作泡菜的菌种来源于植物体表面天然的乳酸菌 B. 泡菜腌制时间过短或食盐用量不足，会导致亚硝酸盐含量升高 C. 酿制米醋时表面的一层白色菌膜主要是由酵母菌组成 D. 在米酒和米醋制作的过程中，发酵液pH均有下降的趋势 【答案】C 【解析】 【详解】A、传统泡菜制作属于自然发酵，未人工接种菌种，所需的乳酸菌来源于蔬菜表面天然存在的菌株，A正确； B、泡菜腌制过程中，腌制时间过短、食盐用量不足、发酵温度过高，都会造成杂菌大量繁殖，进而导致亚硝酸盐含量升高，B正确； C、酿制米醋的原理是醋酸菌的有氧发酵，醋酸菌为好氧菌，会在发酵液表层大量繁殖形成白色菌膜，因此该菌膜主要组成为醋酸菌，不是酵母菌，C错误； D、米酒制作时，酵母菌呼吸作用产生的CO₂溶于发酵液形成碳酸，使发酵液pH下降；米醋制作时，醋酸菌发酵产生醋酸，也会使发酵液pH下降，因此二者发酵液pH均呈下降趋势，D正确。 2. 防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，下列关于微生物的基本培养技术的叙述，正确的是（　　） A. 实验过程中对操作者的衣着和手都需要进行消毒处理 B. 倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C. 微生物的培养基中都必须加入碳源、氮源、无机盐、水及特殊营养物质 D. 制备的培养基一般要进行高压蒸汽灭菌，接种工具须经消毒处理 【答案】A 【解析】 【详解】A、微生物培养的无菌操作要求中，需对操作者的衣着和手进行消毒处理（如用酒精擦拭双手），避免携带杂菌污染培养基，A正确； B、倒平板时若将培养皿盖完全放到一边，会使空气中的杂菌落入培养基造成污染，正确操作是仅将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙倾倒培养基，B错误； C、培养基的成分需根据培养的微生物类型调整，并非所有培养基都需加入全部五类物质：如自养微生物可利用空气中的CO₂作为碳源，培养基无需额外添加碳源；固氮微生物可利用空气中的氮气作为氮源，无需额外添加氮源，C错误； D、制备的培养基需高压蒸汽灭菌，而接种工具需要进行灭菌处理（如接种环灼烧灭菌），消毒仅能杀死部分微生物，无法杀死芽孢和孢子，不能满足接种工具的无菌要求，D错误。 3. 自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图所示。下列叙述正确的是（　　） A. 图中所用培养基不需要添加氮源，但需要将pH调制成中性或弱碱性 B. ④过程采用的是稀释涂布平板法，该方法用于计数时往往结果偏大 C. 若④的平板上菌落平均数为72个，则每克土壤中含有的固氮菌约7.2×105个 D. 平板划线法既可以用来分离菌种，也可以用于计数 【答案】A 【解析】 【详解】A、自生固氮菌能独立固定空气中的氮气，所以图中所用培养基不需要添加氮源；培养细菌时通常需要将培养基的pH调为中性或弱碱性，固氮菌属于细菌，因此pH调至中性或弱碱性，A正确； B、④过程采用的是稀释涂布平板法，该方法用于计数时，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以往往结果偏小，B错误； C、④的平板上菌落平均数为72个，由图可知，稀释倍数为104，取样体积为0.1mL，则每克土壤中含有的固氮菌约为72÷0.1×104=7.2×106个，C错误； D、平板划线法可以用来分离菌种，但不能用于计数，D错误。 4. 发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域都得到了广泛的应用，下列关于发酵工程的叙述正确的是（　　） A. 葡萄糖转化为乙醇所需的酶既存在于细胞质基质，也存在于线粒体 B. 啤酒酿造流程中适当增加溶解氧可缩短发酵时间 C. 啤酒酿造流程中焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并进行灭菌 D. 发酵工程的中心环节是分离、提纯产物来获得微生物细胞本身或其代谢产物 【答案】B 【解析】 【详解】A、葡萄糖转化为乙醇属于无氧呼吸过程，无氧呼吸的全部反应都发生在细胞质基质中，相关酶仅存在于细胞质基质，线粒体是有氧呼吸第二、三阶段的场所，不存在无氧呼吸相关的酶，A错误； B、酵母菌在有氧条件下大量繁殖，增加菌体数量；无氧阶段：酵母菌无氧呼吸产生酒精。适当增加溶解氧，能让酵母菌快速增殖，缩短发酵前的菌体准备时间，从而整体缩短发酵周期，B正确； C、大麦焙烤的主要目的是杀死大麦种子的胚，防止发芽继续进行，使淀粉酶钝化前充分发挥作用，并产生啤酒特有的风味和色泽；高温可以杀灭部分杂菌，但不是灭菌（灭菌需要严格的无菌处理，焙烤无法达到灭菌标准），C错误； D、发酵工程的中心环节是发酵罐内的发酵过程，分离、提纯产物是发酵结束后的下游处理步骤，不是中心环节，D错误。 5. 下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是（　　） A. 组织培养过程中也可无明显愈伤组织形成，直接形成胚状体等结构 B. 用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异 C. 培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并阻止瓶内外的气体交换 D. 组培苗锻炼时采用蛭石作为栽培基质的原因是蛭石带菌量低且营养丰富 【答案】A 【解析】 【详解】A、植物组织培养存在两条分化途径，既可以经脱分化形成愈伤组织再分化为植株，也可无明显愈伤组织形成，直接由外植体诱导形成胚状体等结构进而发育为植株，A正确； B、体细胞离体培养过程中细胞进行有丝分裂，分裂过程中可能发生基因突变、染色体变异，因此用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗可能出现变异，B错误； C、培养瓶所用的专用封口膜具有透气性，可在防止外界杂菌侵入的同时保障瓶内外的气体交换，满足培养材料的有氧呼吸需求，并非阻止气体交换，C错误； D、组培苗锻炼时采用蛭石作为栽培基质是因为蛭石透气性、保水性好且带菌量低，蛭石属于无机矿物，本身不含丰富营养，D错误。 6. 下图是利用甲、乙两种植物的各自优势，通过植物细胞工程技术培育高产、耐盐的杂种植株的实验流程图。下列叙述错误的是（　　） A. 获得的杂种植株不一定能够表现亲本的优良性状 B. 与杂种细胞形成有关的细胞器包括高尔基体 C. b 之前的诱导过程除PEG之外还可以使用灭活的病毒 D. b 之后得到的愈伤组织细胞是具有细胞壁的薄壁细胞， 【答案】C 【解析】 【详解】A、植物体细胞杂交得到的杂种植株，遗传物质来自两个亲本，但基因的表达会受到调控，存在基因沉默、染色体丢失等情况，因此不一定能同时表现出高产、耐盐的优良性状，A正确； B、原生质体融合后，需要再生细胞壁才能形成完整的杂种细胞，而植物细胞壁的形成与高尔基体直接相关，B正确； C、灭活的病毒是动物细胞融合的诱导方法，植物原生质体融合的诱导方法只有 PEG（聚乙二醇）、电融合、离心等，不能使用灭活的病毒，C错误； D、b是融合的原生质体，之后会再生细胞壁，脱分化形成愈伤组织；愈伤组织的特点就是高度液泡化、无定形状态的薄壁细胞，具有细胞壁，D正确。 7. 为保护濒危珍稀植物云南红豆杉，并高效提取其抗癌物质紫杉醇，研究人员利用植物细胞工程进行快速繁殖与细胞悬浮培养，相关流程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 利用植物组织培养技术获得紫杉醇，实现了细胞产物的工厂化生产 B. 原生质体虽无细胞壁但仍保持细胞的全能性 C. 外植体选择云南红豆杉的幼嫩茎段，是因为该部位细胞的分化程度低和分裂能力强 D. 组培苗移植之前，需要用流水清洗掉根部的培养基 【答案】A 【解析】 【详解】A、植物细胞培养生产紫杉醇，属于细胞产物的工厂化生产，A错误； B、原生质体无细胞壁，但仍含有该物种全套遗传物质，具备全能性，B正确； C、植物幼嫩茎段细胞的分化程度低，分裂能力强，更容易脱分化形成愈伤组织，C正确； D、组培苗移栽前，清洗根部培养基是为了防止微生物滋生烂根，但不能用流水直接冲洗，流水易损伤幼嫩根系，应小心无菌水冲洗，D正确。 8. 下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（　　） A. 细胞培养需要在含95%CO2和5%空气的混合气体的CO2培养箱中进行 B. 将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞 C. 培养过程须定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞造成危害 D. 动物细胞的传代培养过程中，常用生理盐水稀释细胞悬液 【答案】C 【解析】 【详解】A、动物细胞培养的气体环境为95%空气（满足细胞有氧呼吸需求）和5%CO₂（维持培养液pH稳定），A错误； B、B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合诱导融合后，会产生B细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、B细胞-骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞三类融合细胞，需经过筛选才能得到杂交瘤细胞，B错误； C、动物细胞培养过程中，细胞代谢会产生有害代谢产物，积累后会对细胞造成毒害，因此须定期更换培养液，既清除代谢废物，也补充细胞所需的营养物质，C正确； D、动物细胞传代培养时，需用胰蛋白酶处理贴壁细胞，再用新鲜的细胞培养液稀释制成细胞悬液分瓶培养，生理盐水无法为细胞提供营养，不能用来稀释细胞悬液，D错误。 9. 下列关于单克隆抗体制备和应用的叙述，错误的是（　　） A. 用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，但不能冻存 B. HAT选择培养基上获得的杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产 C. 用单克隆抗体诊断肿瘤等疾病时可以用荧光标记法或同位素标记法 D. 需要使用动物细胞培养技术 【答案】A 【解析】 【详解】A、杂交瘤细胞具备无限增殖的特性，既可以进行传代培养，也可以冷冻保存，待需要时复苏即可使用，A错误； B、HAT选择培养基上筛选得到的杂交瘤细胞仅能保证是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的杂种细胞，不同杂交瘤细胞分泌的抗体种类不同，还需进行克隆化培养和抗体检测，筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞后才能用于生产，B正确； C、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，作为诊断试剂时，可通过荧光标记、同位素标记等方法，和对应抗原特异性结合实现肿瘤等疾病的诊断，C正确； D、单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞的体外培养，以及后续杂交瘤细胞的扩大培养都需要使用动物细胞培养技术，D正确。 故选A。 10. 下图为经过体外受精和胚胎分割、移植培育优质奶牛的过程。下列叙述错误的是（　　） A. 体外受精过程中会发生雌雄原核核膜消失现象 B. 分割时要将①均等分割 C. 胚胎分割可看作动物无性繁殖或克隆方法之一 D. 胚胎分割技术提高了移植胚胎的成活率 【答案】D 【解析】 【详解】A、体外受精过程中，精子和卵子受精时，会发生雌雄原核的融合，在此过程中核膜会消失，A正确； B、胚胎分割时，注意将①内细胞团均等分割，否则会影响胚胎的发育和功能，B正确； C、胚胎分割时由于这些个体来自同一个受精卵，遗传物质完全相同，可看作动物无性繁殖或克隆方法之一，C正确； D、胚胎分割技术不能提高移植胚胎的成活率，但可增加胚胎的数量，D错误。 11. 下表是几种限制酶的识别序列及切割位点（Y=C或T，R=A或G）。下列相关叙述正确的是（　　） 限制酶 HindⅡ AluI BamHI Sau3AI 识别序列及切割位点 5'-GTY↓RAC-3' 5'-AG↓CT-3' 5'-G↓GATCC-3' 5'-↓GATC-3' A. 限制酶识别序列越短，越适宜 B. 限制酶主要是从原核生物中分离纯化得到的 C. 一种限制酶只能识别一种核苷酸序列，并在特定位点切割 D. BamHI和Sau3AI切割形成的片段进行重组后，BamHI和Sau3AI均不能识别并切割 【答案】B 【解析】 【详解】A、限制酶识别序列越短，在DNA分子中出现的概率越高，越容易将目的基因、载体切割成过多碎片，不利于基因工程操作，A错误； B、限制酶主要是从原核生物中分离纯化得到的，原核生物可通过限制酶切割外源DNA，保护自身遗传物质稳定，B正确； C、由题干中HindⅡ的识别序列可知，Y为C/T、R为A/G，说明该限制酶可识别多种核苷酸序列，因此一种限制酶并非只能识别一种核苷酸序列，C错误； D、BamHI和Sau3AI切割后产生的黏性末端相同，重组后的序列中仍存在GATC序列，Sau3AI可以识别并切割该序列，并非两种酶均不能识别，D错误。 12. 下列关于基因工程基本工具的叙述，正确的是（　　） A. 限制酶切割DNA分子一次可断开2个磷酸二酯键，产生1个游离的磷酸基团 B. 限制酶能特异性地识别4个、8个核苷酸序列 C. 用做分子运输车的质粒常有特殊的抗生素合成基因，便于重组DNA分子的筛选 D. DNA连接酶能连接双链DNA片段互补的黏性末端或平末端，从而恢复被限制酶切开的氢键 【答案】B 【解析】 【详解】A、限制酶切割双链DNA分子时，两条链各断裂1个磷酸二酯键，共断开2个磷酸二酯键，会产生2个游离的磷酸基团，并非1个，A错误； B、限制酶具有特异性，可识别特定的回文序列，常见的识别序列长度包括4个、8个核苷酸，B正确； C、质粒作为运载体需携带标记基因（如抗生素抗性基因），而非“抗生素合成基因”，C错误； D、DNA连接酶的作用是连接磷酸二酯键，而非恢复氢键。氢键的恢复依赖碱基互补配对，D错误。 13. 将外源基因导入受体细胞的过程中需要使用载体，下列有关载体的叙述错误的是（　　） A. 载体应对宿主细胞无伤害，以免影响宿主细胞的正常生命活动 B. 载体应具有一个至多个限制酶切割位点，以便于目的基因的插入 C. 基因工程中被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上改造的 D. 噬菌体常作为动物基因工程的载体 【答案】D 【解析】 【详解】A、载体进入宿主细胞后不能影响宿主细胞的正常生命活动，因此应对宿主细胞无伤害，否则目的基因无法在存活的宿主细胞内复制、表达，A正确； B、载体具有一个至多个限制酶切割位点，才能使用同种限制酶切割载体和目的基因，产生互补的末端，便于目的基因插入载体，B正确； C、天然质粒通常不具备载体需要的全部条件（如合适的标记基因、足够的酶切位点等），因此基因工程中使用的质粒都是在天然质粒的基础上经过人工改造得到的，C正确； D、噬菌体是专门寄生在细菌体内的病毒，无法侵染动物细胞，因此不能作为动物基因工程的载体，动物基因工程常用动物病毒作为载体，D错误。 14. 利用PCR获取和扩增目的基因是基因工程中常用的技术手段。下列有关PCR的叙述，错误的是（　　） A. 两种引物的碱基序列不能互补，且都从引物的3′端开始延伸子链 B. 引物中A+T的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性就越高 C. 若PCR扩增仪中复性的温度设定为60℃，可能得不到子代DNA D. DNA片段的PCR扩增实验中反应缓冲溶液中的Mg2+能够激活TaqDNA聚合酶 【答案】B 【解析】 【详解】A、若两种引物碱基序列互补，会形成引物二聚体，无法正常结合模板DNA；DNA聚合酶只能从引物的3′端开始催化子链延伸，A正确； B、碱基A与T之间通过2个氢键连接，G与C之间通过3个氢键连接，因此引物中G+C含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性越高，A+T含量越高则结合稳定性越低，B错误； C、复性温度需要根据引物的长度、碱基组成等合理设置，若60℃的复性温度过高，引物无法与模板DNA结合，后续延伸过程无法进行，就可能得不到子代DNA，C正确； D、TaqDNA聚合酶的活性需要Mg²⁺作为激活因子，反应缓冲液中的Mg²⁺能够激活TaqDNA聚合酶，保证扩增反应正常进行，D正确。 故选B。 15. 下列与“DNA的粗提取与鉴定”和“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验有关的叙述，错误的是（　　） A. 鉴定DNA时，应将丝状物直接加到二苯胺试剂中进行沸水浴 B. 新鲜的洋葱、菠菜、猪肝等均可作为DNA粗提取的实验材料 C. DNA分子在电场作用下在凝胶中向着与它所带电荷相反的电极移动 D. 待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时需停止电泳并取出凝胶置于紫外灯下观察和照相 【答案】A 【解析】 【详解】A、鉴定DNA时，需先将粗提取的丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺试剂进行沸水浴，直接将丝状物加到二苯胺试剂中会导致DNA无法充分溶解，显色效果差，A错误； B、新鲜洋葱、菠菜、猪肝的细胞中都含有大量核DNA，均可作为DNA粗提取的实验材料，B正确； C、DNA分子的磷酸基团带负电，在电场作用下会向与其所带电荷相反的正极移动，这是电泳分离DNA的原理，C正确； D、电泳过程中指示剂迁移速率快于DNA片段，待指示剂前沿接近凝胶边缘时停止电泳，凝胶中的核酸染料可结合DNA，在紫外灯下可观察到荧光条带，D正确。 二、多项选择题：本部分包括4题，每题3分，共计12分。每题有不止一个选项符合题意。每题全选对者得3分，选对但不全的得1分，错选或不答的得0分。 16. 柿子具有较高的营养价值和药用价值，采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的柿子醋，提高了柿子的经济价值。柿子醋的酿造工艺流程如图所示。 下列关于柿子醋酿造过程的叙述，正确的是（　　） A. 酒精发酵和醋酸发酵都要在无氧条件下进行 B. 为防止杂菌污染，柿子醋制作时温度应控制在30℃以下 C. 用不同品种和成熟度的柿子酿造的柿子醋风味不同 D. 醋酸发酵阶段中产生的气泡量少于酒精发酵阶段 【答案】CD 【解析】 【详解】A、酒精发酵利用的是酵母菌的无氧呼吸，醋酸发酵的菌种是醋酸菌，醋酸菌是好氧菌，醋酸发酵在有氧条件下进行，A错误； B、醋酸菌的最适生长温度是30~35℃，柿子醋制作时温度应控制在30~35℃，B错误； C、用不同品种和成熟度的柿子酿造的柿子醋风味不同，因为不同品种和成熟度的柿子中含有的成分有所不同，C正确； D、酒精发酵阶段会产生二氧化碳，而以酒精为原料进行醋酸发酵不会产生气体，D正确。 17. 嵌合体在免疫学上的含义是指一个机体身上有两种或两种以上染色体组成不同的细胞系同时存在，彼此能够耐受，不产生排斥反应，相互间处于嵌合状态。如图是科研人员利用白鼠和黑鼠的早期胚胎培育黑白嵌合体小鼠的流程，下列叙述正确的是（　　） A. 使用免疫抑制剂以避免代孕牛对植入胚胎的排斥反应 B. 过程③将囊胚植入代孕母鼠前需对母鼠进行同期发情处理 C. 早期囊胚中的内细胞团细胞可进一步发育形成胎膜和胎盘 D. 培育嵌合体与克隆动物的生物学原理不同，操作方法也有差别 【答案】BD 【解析】 【详解】A、胚胎移植过程中不需要使用免疫抑制剂，因为代孕牛对植入胚胎不会发生排斥反应，A错误； B、过程③表示将囊胚植入代孕母鼠，胚胎移植能否成功，与供体和受体的生理状态有关，对受体母鼠进行同期发情处理，可以提高胚胎的成活率，B正确； C、早期囊胚中的内细胞团细胞将来发育成胎儿的各种组织，滋养层细胞可进一步发育形成胎膜和胎盘，C错误； D、培育嵌合体的生物学原理是早期胚胎细胞的全能性，克隆动物的生物学原理是动物细胞核具有全能性，两者的原理不相同，操作方法有差别，D正确。 18. 一种双链DNA分子被三种不同的限制酶切割，切割产物通过电泳分离，用大小已知的DNA片段的电泳结果作为分子量标记（图左边一列）。关于该双链DNA，下列叙述正确的是（　　） A. 由限制酶NotⅠ切割产生的片段可知该DNA分子呈链状结构，长度大小为10kb B. 该双链DNA分子含有一个NotⅠ和两个EcoRⅠ切割位点 C. 根据条带分布情况可知加样孔在图示的上方 D. 在凝胶溶液凝固前加入核酸染料以便对DNA进行染色 【答案】BCD 【解析】 【详解】A、单用EcoRⅠ处理和利用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切时产生的结果不同，说明DNA含有NotⅠ酶切位点，因为用NotⅠ处理只产生了一个10kb的条带，所以该分子必须是环状的，且长度一定是10kb，A错误； B、用NotⅠ处理只产生了一个10kb的条带，说明该环状DNA上含有一个NotⅠ切割位点，单用EcoRⅠ处理后产生了4kb和6kb两条带，说明该环状DNA上含有2个EcoRⅠ切割位点，B正确； C、DNA 带负电，电泳时向正极移动，片段越小跑得越远（越靠下）。图中大片段（如 8kb）在上方，小片段（1 kb）在下方，说明上方是加样端（负极），下方是正极，DNA 从上方往下移动，小片段跑得更远，C正确； D、核酸染料能嵌入DNA分子中，在凝胶溶液凝固前加入核酸染料以便对DNA进行染色，D正确。 19. 下图表示某基因表达载体中的潮霉素抗性基因和psy基因，有关叙述正确的是（ ） A. 潮霉素抗性基因可以作为标记基因用于筛选 B. 启动子的转录产物为mRNA的起始密码子 C. 转录过程RNA聚合酶沿3'→5'方向读取模板链的碱基序列 D. 潮霉素抗性基因和psy基因以同一条链为模板进行转录 【答案】AC 【解析】 【分析】转录是以DNA的一条链为模板合成RNA的过程，该过程主要在细胞核中进行，需要RNA聚合酶参与。 【详解】A、潮霉素抗性基因可以作为标记基因用于筛选，筛选出含有目的基因的受体细胞，A正确； B、启动子是RNA聚合酶识别并结合的位点，使转录开始，启动子不对应mRNA的起始密码子，B错误； C、转录过程RNA聚合酶沿3'→5'方向读取模板链的碱基序列，而子链的延伸方向为5'→3'，C正确； D、根据图中潮霉素抗性基因和psy基因的启动子和终止子的位置可知，潮霉素抗性基因转录方向向左，psy基因转录方向向右，二者以不同的子链为模板进行转录，D错误。 故选AC。 三、非选择题：本部分包括5题，共计58分。除标注外，每空1分 20. 近年来，水环境中发现的不同程度的抗生素残留，不仅威胁水生生物的生存，还会损害微生物的生态平衡。氧氟沙星（OFL）（C18H2OFN3O4）是一种人工合成的广谱抗菌药物，但遇到高温就会失效。某实验小组成功地从废水环境样品中分离得到能降解OFL的菌株，筛选分离的操作过程如图所示。回答下列问题： （1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_____，及时对培养基进行分装，并进行高压蒸汽灭菌。上图整个操作过程中不需要的工具是_____（a.酒精灯 b.培养皿 c.显微镜）。 （2）步骤I中OFL降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、OFL和水，其中可作为碳源的有_____。步骤III使用的接种工具的灭菌方法是_____，该步骤操作过程中往往需要配置牛肉膏蛋白胨培养基接种等量菌液，作用是_____。 （3）下列关于该实验过程中相关操作的叙述错误的有_____。 A. 采集到的污泥悬浊液接种培养，OFL用量应随转接次数增加而逐渐减少以富集目标菌种 B. Ⅲ过程中通过连续划线将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落 C. 图中培养基在所有成分都融化后装至锥形瓶进行高压蒸汽灭菌 D. 微生物接种后，应在培养皿皿底做标记后倒置培养 （4）在过程Ⅲ中，可以每隔24h统计一次菌落的数目，选_____时的记录作为结果，三个培养基中长出的菌落数量分别是124、132、116，故推测A中细菌的数量约为1.24×109个/mL，则过程Ⅱ中的总稀释次数为_____次。 （5）研究者进一步分离纯化获得两种菌株，为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株_____进行后续相关研究，理由是_____。 【答案】（1） ①. pH ②. c （2） ①. 蛋白胨、OFL ②. 灼烧灭菌 ③. 对照（检验该选择培养基是否具有选择作用） （3）ABC （4） ①. 菌落数目稳定 ②. 6 （5） ①. B ②. 该菌株增殖速度快；降解OFL能力强 【解析】 【小问1详解】 配制培养基的标准流程为：称量→溶解→定容→调节pH→分装→高压蒸汽灭菌，pH是微生物生长的关键环境条件，需在灭菌前调整至适宜范围。该操作是微生物的分离、稀释、涂布培养与计数，全程在无菌操作台/酒精灯旁完成，培养皿用于倒平板、涂布培养，显微镜（c）在该流程中无需使用，菌落计数可直接肉眼统计平板菌落数。 【小问2详解】 蛋白胨是天然有机氮源，同时含大量有机物；OFL含碳元素，且是该筛选培养基的目标碳源，用于富集降解OFL的菌株。因此，蛋白胨、OFL可作为碳源。步骤III是涂布分离/涂布计数，使用的接种工具是涂布器，其灭菌方法为灼烧灭菌，将涂布器浸在70%酒精中，后在酒精灯火焰上灼烧灭菌，冷却后使用。设置牛肉膏蛋白胨培养基接种等量菌液的对照：若选择培养基上的菌落数远少于牛肉膏蛋白胨培养基，说明选择培养基成功筛选出了目标菌株，起到了选择作用；同时可检验培养基是否被杂菌污染。因此，作用是作为对照，判断选择培养基是否起到了选择作用。 【小问3详解】 A、富集培养能降解OFL的目标菌种时，OFL用量应随转接次数增加而逐渐增加，这样可以逐步淘汰不能耐受、降解OFL的杂菌，提高目标菌种的比例，A错误； B、Ⅲ过程中是通过稀释涂布平板法将菌液均匀涂布在培养基上，不是连续划线，连续划线是平板划线法的操作，B错误； C、富集培养基应先在烧杯中配置好后，再装至锥形瓶进行高压蒸汽灭菌，C错误； D、微生物接种后，应在培养皿皿底做标记后倒放培养，防止冷凝水倒流污染培养基，D正确。 【小问4详解】 在过程Ⅲ中，每隔24h统计一次菌落的数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样数据更准确。已知三个培养基中长出的菌落数量分别是124、132、116，平均值为(124 +132+116)/3 = 124，推测A中细菌的数量为1.24×109个/mL，根据公式C/V×M（C是平均菌落数，V是涂布平板时所用的稀释液的体积，M是稀释倍数），这里C =124，V=0.1mL，1.24×109=124/0.1×M，解得M = 106，过程Ⅱ中的总稀释次数为6次。 【小问5详解】 据图得知，左侧纵轴：细胞密度，数值越高代表菌株生长越好、生物量越大；右侧纵轴：OFL剩余比例，数值越低代表菌株降解OFL的能力越强；菌株B的细胞密度曲线远高于菌株A，且OFL剩余比例远低于菌株A。因此，应选择菌株B进行后续相关研究，理由是该菌株增殖速度快；降解OFL能力强。 21. 不对称体细胞杂交是指利用射线破坏供体细胞的染色质，与未经射线照射的受体细胞融合，所得融合细胞含受体全部遗传物质及供体部分遗传物质。研究人员尝试运用不对称体细胞杂交将红豆杉（2n=24）与柴胡（2n=12）进行了融合，培育能产生紫杉醇的柴胡，过程如下图1。请回答下列问题： （1）为获得红豆杉和柴胡的原生质体，可将流水冲洗后的外植体用酒精消毒_____（填“30s”或“30min”），然后立即用_____冲洗，随后再用次氯酸钠溶液处理适宜时间，再次冲洗后将外植体接种于MS培养基上形成愈伤组织，在渗透压与细胞液渗透压相比较_____的培养液中酶解去壁获得原生质体。 （2）已知X射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位、染色体消除等，使细胞不再持续分裂；碘乙酰胺处理使细胞质中的某些酶失活，抑制细胞分裂。对红豆杉和柴胡原生质体进行的A、B 处理分别为_____。 （3）过程③经化学试剂诱导融合后，只有异源融合的原生质体可持续分裂形成再生细胞团，原因是杂种细胞由于融合后在_____和_____（填细胞结构）的功能上实现了互补，使细胞恢复正常。 （4）过程④中，所用培养基需含有激素类物质X和Y，当X与Y的浓度比例大于1时，诱导未分化细胞群分化出芽，则X属于_____类似物。 （5）观察再生植株细胞中的染色体，发现数目_____（从“小于等于”“等于”“小于”中选填）36条，说明初步获得了不对称杂种植株。 （6）研究人员以红豆杉幼苗茎形成层为外植体进行相关研究，得到如图2所示实验结果。下列相关叙述正确的有_____。 A. 愈伤组织细胞和胚状体细胞都已经出现了脱分化 B. 暗处理时间对脱分化率的影响小于对再分化率的影响 C. 暗处理时间的延长不利于红豆杉胚状体的形成 D. 红豆杉幼苗茎形成层诱导形成胚状体的最适暗处理时间是1周 【答案】（1） ①. 30s ②. 无菌水 ③. 等渗（或相同或略高） （2）X射线、碘乙酰胺（顺序不可颠倒） （3） ①. 细胞核 ②. 细胞质（顺序可颠倒） （4）细胞分裂素 （5）小于 （6）BC 【解析】 【小问1详解】 植物组织培养应注意无菌操作，故操作之前需要用无菌水和次氯酸钠对外植体进行消毒，之后诱导脱分化形成愈伤组织。所以为获得红豆杉和柴胡的原生质体，可将流水冲洗后的外植体用酒精消毒30s，然后立即用无菌水冲洗，随后再用次氯酸钠溶液处理30min，再次冲洗后将外植体接种于MS培养基上诱导脱分化过程，形成愈伤组织，在渗透压与细胞液渗透压相同或略高的培养液中酶解去壁获得原生质体，避免渗透压过低对原生质体造成影响。 【小问2详解】 X 射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位、染色体消除等，使细胞不再持续分裂，碘乙酰胺处理使细胞质中的某些酶失活，抑制细胞分裂，单独处理后的红豆杉和柴胡细胞都不能分裂，要培育能产生紫杉醇的柴胡，红豆杉是供体需要X射线照射，柴胡是受体需要碘乙酰胺处理。 【小问3详解】 X 射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位、染色体消除等，使细胞不再持续分裂，碘乙酰胺处理使细胞质中的某些酶失活，抑制细胞分裂，单独处理后的红豆杉和柴胡细胞都不能分裂，杂种细胞由于融合后在细胞核和细胞质的功能上实现了互补，使细胞恢复正常分裂，因此只有异源融合的原生质体可持续分裂形成再生细胞团。 【小问4详解】 在植物组织培养中，生长素/细胞分裂素比例高时有利于根的分化，比例低时有利于芽的分化，比例适中促进愈伤组织的形成，因此植物激素X的名称是细胞分裂素。 【小问5详解】 不对称体细胞杂交是指利用射线破坏供体细胞的染色质，与未经射线照射的受体细胞融合，所得融合细胞含受体全部遗传物质及供体部分遗传物质。据小题（2）中已知X射线处理能随机破坏染色体结构，使其发生断裂、易位、染色体消除等，所以再生植株细胞中的染色体数目在显微镜下观察应该是小于36条。 【小问6详解】 A、愈伤组织细胞出现了脱分化，胚状体细胞已经出现了再分化，A错误； B、据图分析可知，愈伤组织诱导率随暗处理时间变化不大，说明暗处理时间对脱分化率的影响小于对再分化率的影响，B正确； C、据图中柱形图分析可知，随着暗处理时间的延长，胚状体诱导率逐渐降低，不利于红豆杉胚状体的形成，C正确； D、暗处理时间2周时，红豆杉幼苗茎形成层诱导形成胚状体的数量最多，但不一定是最适时间，最适时间还需要设置更长的暗处理时间进行实验验证，D错误。 22. 双特异性抗体（BsAb）是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合，双特异性抗体在自然状态下并不存在，可以通过重组DNA或细胞融合技术人工制备实现。长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图1是科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图示。回答下列问题。 （1）图1中①步骤注射癌胚抗原对小鼠进行免疫，目的是从该小鼠的_____中获得能产生抗癌胚抗原抗体的B淋巴细胞。过程②动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理_____（填“相同”或“不相同”）。过程③所用的HAT培养基上，_____的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 （2）过程④中将杂交瘤细胞进行多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过1个，通过培养让其增殖，然后利用_____的原理检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞的特点是_____。 （3）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是_____。 （4）利用小鼠制备的抗体是鼠源抗体，鼠源抗体具有外源性，会被人体免疫系统当作抗原而清除（称为人抗鼠抗体反应即HAMA反应）。抗体结构如图3所示，引起HAMA 反应的主要是“C区”，通过制备人鼠嵌合抗体可以解决HAMA反应。现利用重组DNA技术可以制备人鼠嵌合抗体，制备人鼠嵌合抗体基因时，应先将人抗体的_____区基因与鼠抗体的_____区基因进行拼接；然后再将拼接好的人鼠嵌合抗体基因与适宜的载体结合，构建表达载体。将表达载体利用_____技术导入哺乳动物细胞，表达出嵌合抗体。 【答案】（1） ①. 脾脏（脾） ②. 相同 ③. 未融合的亲本细胞和同种融合的细胞 （2） ①. 抗原和抗体特异性结合 ②. 既能迅速大量增殖，又能产生特异性（抗癌胚抗原）抗体 （3）双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞 （4） ①. 恒定（C） ②. 可变（V） ③. 显微注射 【解析】 【小问1详解】 免疫后的B淋巴细胞主要分布在脾脏中，脾脏是B细胞成熟和增殖的主要场所，是制备杂交瘤细胞时B细胞的主要来源。因此①步骤注射癌胚抗原免疫小鼠，目的是从该小鼠的 脾脏中获得能产生抗癌胚抗原抗体的 B 淋巴细胞。动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，都是细胞膜的流动性，通过物理、化学或生物方法诱导细胞膜融合，实现细胞 / 原生质体的融合。过程③所用 HAT 培养基上，未融合的亲本细胞和同种融合的细胞（或骨髓瘤细胞自身融合的细胞、B 淋巴细胞自身融合的细胞）都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 【小问2详解】 筛选能分泌所需抗体的杂交瘤细胞，通常采用ELISA 法（酶联免疫吸附试验），利用抗原与抗体的特异性结合反应，检测上清液中是否存在目标抗体。杂交瘤细胞的特点是既能迅速大量繁殖（无限增殖），又能产生所需的特异性抗体。 【小问3详解】 直接使用长春碱会无差别杀伤分裂旺盛的细胞（包括正常细胞），副作用大；与双特异性抗体结合后，双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞，实现靶向治疗，减少了对正常组织的损伤。 【小问4详解】 HAMA 反应主要由鼠源抗体的恒定区（C 区）引起，可变区（V 区）是识别抗原的关键区域。制备人鼠嵌合抗体时，保留鼠抗体的可变区（V 区，保证抗原结合特异性），替换为人类的恒定区（C 区，降低免疫原性，避免 HAMA 反应）。将重组表达载体导入哺乳动物细胞（如 CHO 细胞），常用的方法是显微注射技术，也可采用脂质体转染、电穿孔等方法，但显微注射是动物细胞中最常用的方法之一。 23. 2018年3月，世界上最后一头雄性北方白犀牛死亡，该物种仅剩下两头雌性，在此之前，研究人员设法保存了北方白犀牛的精子。多个研究团队试图通过多种技术手段繁育该物种。请回答下列问题。 （一）一个研究团队试图培育试管北方白犀牛，其主要流程如下图1。 （1）①过程需要对雌性北方白犀牛注射_____，目的是使其超数排卵。取自雌性北方白犀牛体内的卵母细胞需要培养至_____（时期）才能与获能的精子受精，当观察到透明带与卵细胞膜之间出现_____是卵子受精的重要标志。 （2）研究团队将体外受精得到的受精卵体外培养至_____阶段的早期胚胎移植至南方白犀牛的子宫中孕育，母体子宫对胚胎的免疫耐受性_____（“高”或“低”）是胚胎移植的生理学基础。 （二）另一个团队试图培育克隆北方白犀牛，其主要流程如下图2。 （3）②过程需显微操作去除卵细胞的_____，与北方白犀牛的体细胞融合后形成的重构胚需经过物理或化学激活，使其完成_____进程，该技术培育的克隆动物性别是_____。 （4）该技术获得的克隆动物与供体北方白犀牛表型不完全相同的原因可能有_____。 （5）上述两种技术手段属于有性繁殖的是图_____，为获得更多北方白犀牛可在胚胎移植前对胚胎进行_____。 【答案】（1） ①. 促性腺激素 ②. MⅡ（减数分裂Ⅱ中期或减数第二次分裂中期） ③. 两个极体（一个第一极体、一个第二极体） （2） ①. 桑椹胚或囊胚 ②. 高 （3） ①. 纺锤体-染色体复合物 ②. 细胞分裂和发育（细胞分裂和分化） ③. 雌性 （4）克隆动物的部分（细胞质）遗传物质来自提供去核卵母细胞的个体；克隆动物个体发育过程中可能发生基因突变等变异；供核细胞的基因可能发生表观遗传修饰（如DNA甲基化、组蛋白乙酰化），改变基因表达模式；克隆动物发育过程受环境因素影响等合理即可 （5） ①. 1 ②. 分割 【解析】 【小问1详解】 ①过程为了获得更多的卵母细胞，应该给雌性个体注射促性腺激素，使其超数排卵。取自雌性北方白犀牛体内的卵母细胞需要培养至MⅡ（减数分裂Ⅱ中期或减数第二次分裂中期）才能与获能的精子受精。当观察到透明带与卵细胞膜之间出现两个极体（一个第一极体、一个第二极体）是卵子受精的重要标志。 【小问2详解】 体外受精得到的受精卵，需要在体外培养至桑椹胚或囊胚阶段，才能进行胚胎移植；此时胚胎分化程度低，移植成功率高。 母体子宫对移入的外来胚胎具有较高的免疫耐受性，不会对其产生免疫排斥反应，这是胚胎移植能够成功的重要生理学基础。 【小问3详解】 体细胞核移植中，卵母细胞作为受体细胞，需要先通过显微操作去除其纺锤体-染色体复合物，避免受体卵母细胞的核基因干扰，只保留细胞质环境。体细胞核移植形成的重构胚，需要电刺激、钙离子载体等物理或化学方法激活，模拟受精后的激活信号，启动细胞分裂和发育进程。 克隆动物的核基因全部来自供体细胞（北方白犀牛的体细胞，已知该物种仅存雌性个体，因此供体细胞为雌性），性别由核基因决定，因此克隆动物为雌性。 【小问4详解】 该技术获得的克隆动物与供体北方白犀牛表型不完全相同的原因可能有克隆动物的部分（细胞质）遗传物质来自提供去核卵母细胞的个体；克隆动物个体发育过程中可能发生基因突变等变异；供核细胞的基因可能发生表观遗传修饰（如DNA甲基化、组蛋白乙酰化），改变基因表达模式；克隆动物发育过程受环境因素影响等。 【小问5详解】 图1的试管动物技术经过了体外受精（精子和卵子结合形成受精卵），属于有性生殖；图2的克隆技术是体细胞核移植，属于无性生殖。 胚胎分割技术可以将一枚早期胚胎（桑椹胚或囊胚）分割成多份，移植后获得多个遗传物质相同的后代，实现 “一胎多产”，快速扩大种群数量。因此为获得更多北方白犀牛可在胚胎移植前对胚胎进行胚胎分割。 24. 植物内生菌是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌，普遍存在于高等植物中。 （1）放线菌也是一种常见的内生菌，能抑制病原菌的生长。研究者利用两种不同类型的放线菌获得新型工程菌，过程如图： 收集上述两种菌丝体，加入_____（填“纤维素酶”或“溶菌酶”）处理，分离原生质体，将两种原生质体悬液等量混合，加入适量促融剂处理一段时间。终止反应并洗涤后，取一定量混合液接种于物理状态为_____的培养基中培养，根据菌落特征，选出性状稳定的融合菌株。 （2）某真菌的W基因可编码一种可高效降解纤维素的酶，已知图中W基因的乙链为转录的模板链。为使放线菌产生该酶，以图中质粒为载体，进行转基因。 限制酶 BamHI EcoRI MfeI KpnI HindⅢ 识别序列和切割位点（5-3’） G↓GATCC G↓AATTC C↓AATTG GGTAC↓C A↓AGCTT ①表中EcoR I识别切割对应序列后形成的黏性末端为_____（方向5'→3'），与_____限制酶识别切割后形成的末端相同。应使用限制酶_____切割图中质粒，使用限制酶_____切割图中含W基因的DNA片段，以获得能正确表达W基因的重组质粒。 ②与质粒中启动子结合的酶是_____。启动子通常具有物种特异性，在质粒中插入W基因，其上游启动子应选择_____启动子（填生物类型）。 ③W基因转录的模板链是_____。利用PCR技术对W基因进行扩增时子链延伸的方向是_____。 ④研究人员利用W基因的mRNA进行逆转录得到了cDNA，已知mRNA的序列为5-UGAACGCUA…（中间序列）…GUCGACUCG-3'。利用PCR技术对cDNA进行扩增，为便于将扩增后的基因和载体连接构建重组质粒，PCR扩增时所需引物的前12个碱基序列为_____（方向5'→3'）。 A.GAATTCACTTGC B.GAATTCTGAACG C.AAGCTTGCTCAG D.AAGCTTCGAGTC 【答案】（1） ①. 溶菌酶 ②. 固体 （2） ①. AATT— ②. MfeI ③. MfeI、HindⅢ ④. EcoRI、HindⅢ ⑤. RNA聚合酶 ⑥. 放线菌 ⑦. 乙链 ⑧. 5'→3' ⑨. BD 【解析】 【小问1详解】 放线菌的细胞壁主要成分为肽聚糖，能被溶菌酶水解。因此，收集上述两种菌丝体，需要加入“溶菌酶”处理，分离原生质体，将两种原生质体悬液等量混合，加入适量促融剂处理一段时间。终止反应并洗涤后，取一定量混合液接种于物理状态为固体的培养基中培养，进而可以根据菌落特征，选出性状稳定的融合菌株，因为只有在固体培养基上才能获得菌落。 【小问2详解】 ①表中EcoR I识别切割对应序列后形成的黏性末端为5'AATT—3'，与MfeI限制酶识别切割后形成的末端相同，二者为同尾酶。图中W基因的乙链为转录的模板链（转录的方向向右）。构建重组质粒时启动子应在W基因左侧，终止子应在W基因右侧，W基因右侧只能用HindⅢ切割，W基因左侧有BamHI、KpnI、EcoRI三种酶切位点，结合质粒情况及切割位点识别序列，应使用限制酶MfeI、HindⅢ切割图中质粒（因为EcoRI在质粒中有两个酶切位点），使用限制酶EcoRI、HindⅢ切割图中含W基因的DNA片段，以获得能正确表达W基因的重组质粒，双酶切的优势还在于保证目的基因的正确连接，防止目的基因和质粒发生自连。 ②启动子启动基因的转录，与质粒中启动子结合的酶是RNA聚合酶；“启动子通常具有物种特异性，为了使放线菌产生高效降解纤维素的酶，应选择放线菌的质粒，在质粒中插入W基因，其上游启动子应选择放线菌启动子。 ③启动子在W基因的左侧，转录方向是从左向右，mRNA链的合成方向为5'→3'，与乙链从左向右3'→5'互补，故W基因转录的模板链是乙链。利用PCR技术扩增目的基因的原理是DNA(双链)复制，子链延伸的方向为5'→3'。 ④已知mRNA的序列为5'-UGAACGCUA…(中间序列)…GUCGACUCG-3'，逆转录得到cDNA序列为5'-CGAGTCGAC…（中间序列）…TAGCGTTCA-3'，利用PCR技术对cDNA进行扩增，PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因两条链的3'端通过碱基互补配对结合，并加入EcoRI、HindⅢ识别序列，在W基因左侧加入EcoRI序列也可，故PCR扩增时所需引物的前12个碱基序列5'-GAATTCTGAACG-3'，5'-AAGCTTCGAGTC-3'，即BD正确。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $