精品解析：河北省承德市2025-2026学年高二下学期4月阶段检测生物试题

绝密★启用前 生物 本试卷共8页，满分100分，考试用时75分钟。 注意事项： 1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 一、单项选择题：本题共13小题，每小题2分，共26分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 关于传统发酵，下列说法正确的是（　　） A. 发酵就是生物产生酒精或乳酸等代谢产物的过程 B. 传统发酵的菌种可来自原料或前一次发酵物中的微生物 C. 微生物有氧呼吸的产物不可以作为发酵产物 D. 传统发酵技术制作的食品不含杂菌，品质优良 【答案】B 【解析】 【详解】A、发酵是指人们利用微生物，在适宜条件下将原料通过微生物代谢转化为人类所需产物的过程，既包括无氧呼吸产酒精、乳酸的过程，也包括醋酸发酵、谷氨酸发酵等有氧发酵过程A错误； B、传统发酵技术通常不人工接种纯种微生物，菌种可来自原料表面附着的天然微生物，也可来自前一次发酵物中保留的菌种（如做馒头的老面、泡菜的老坛水），B正确； C、微生物有氧呼吸的产物可作为发酵产物，比如醋酸菌有氧呼吸产生的醋酸、谷氨酸棒状杆菌有氧发酵产生的谷氨酸都是常见发酵产物，C错误； D、传统发酵技术无严格灭菌流程，制作的食品中含有杂菌，只是发酵的优势菌种在环境中占主导，抑制了杂菌大量繁殖，并非不含杂菌，D错误。 2. 东北流行的低度甜型山葡萄酒的生产过程如下图所示，下列有关说法错误的是（　　） 原料挑选、清洗、除梗→调糖→接种酵母→主发酵→分离压榨→后发酵→澄清过滤→灌装 A. 挑选的山葡萄先清洗后除梗是为了减少杂菌污染 B. “调糖”步骤中加入的葡萄糖越多越有利于发酵 C. 发酵罐中应留一部分空间，防止发酵液溢出 D. 低度甜型山葡萄酒的发酵时间不宜过长，否则影响口感 【答案】B 【解析】 【详解】A、挑选山葡萄时先清洗再除梗，可避免除梗导致葡萄破损后，清洗过程中杂菌侵入葡萄内部、造成汁液污染，能减少杂菌污染，A正确； B、调糖时加入的葡萄糖并非越多越好，若葡萄糖浓度过高，会使外界溶液渗透压远大于酵母菌细胞液渗透压，酵母菌渗透失水，代谢受抑制甚至死亡，反而不利于发酵，B错误； C、发酵罐留部分空间，既可为初期酵母菌有氧呼吸大量繁殖提供氧气，也可容纳发酵过程中二氧化碳产生导致的发酵液膨胀，避免发酵液溢出，C正确； D、低度甜型山葡萄酒要求酒精度低、甜度高，若发酵时间过长，酵母菌会将更多糖类分解为酒精，导致甜度下降、酒精度升高，还可能产生过多副产物影响口感，因此发酵时间不宜过长，D正确。 3. 如图为对酵母菌进行纯培养的实验结果，下列说法错误的是（　　） A. 配制好的培养基应先灭菌，然后在酒精灯火焰附近倒平板 B. 制备的培养基在接种前后都处于倒置状态，但目的不同 C. 接种环需灼烧5次，第2次灼烧的目的是防止杂菌污染 D. 若得到的单菌落颜色、性状不一致，可能出现了杂菌污染 【答案】C 【解析】 【详解】A、培养基配制完成后，必须先通过高压蒸汽灭菌杀灭所有微生物（包括芽孢和孢子），否则会导致杂菌污染。 倒平板操作要在酒精灯火焰附近进行，利用火焰周围的无菌区，防止空气中的杂菌落入培养基，A正确； B、接种前倒置：培养基灭菌后冷却凝固时倒置，主要是防止培养皿盖上的冷凝水滴落到培养基表面，造成污染或菌落蔓延。 接种后倒置：培养过程中倒置，除了防止冷凝水污染外，还能减少培养基中水分的蒸发，保持培养基的湿度，利于菌落生长，B正确； C、平板划线法中，接种环的灼烧次数和目的如下： 第 1 次（划线前）：灼烧接种环，杀灭接种环上的所有杂菌，避免污染培养基。 第 2 次（每次划线后，除最后一次）：灼烧接种环，杀死上一次划线结束后残留在接种环上的菌种，避免下一次划线时，菌种浓度过高，无法形成单菌落。 最后一次划线后：灼烧接种环，杀灭残留的菌种，避免其污染环境或感染操作者，C错误； D、纯培养的酵母菌菌落，形态、颜色、大小等特征应基本一致。 如果出现形态、颜色、性状不同的菌落，说明培养基中混入了其他微生物，即发生了杂菌污染，D正确。 4. 野生甜瓜具有极强的抗旱能力，这与其线粒体内的Nad基因密切相关，而栽培黄瓜的抗旱能力极弱。下图表示制备抗旱黄瓜的过程，下列说法错误的是（　　） A. 过程①用纤维素酶和果胶酶处理可解除细胞壁对细胞间杂交的阻碍 B. 用α射线处理的主要目的是诱发a原生质体发生基因突变或染色体变异 C. 过程②可用离心法或高Ca2+—高pH融合法进行诱导 D. 融合后的抗旱黄瓜获得了野生甜瓜的细胞质基因 【答案】B 【解析】 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，过程①为去除细胞壁获得原生质体，使用纤维素酶和果胶酶处理可去除细胞壁，解除细胞壁对原生质体融合的阻碍，A正确； B、本题中α射线处理野生甜瓜原生质体的主要目的是使野生甜瓜的细胞核失活，仅保留其含抗旱基因（Nad基因）的细胞质，并非诱发原生质体发生基因突变或染色体变异，B错误； C、诱导原生质体融合可采用物理法（如离心法），也可采用化学法（如PEG法、高Ca2+—高pH融合法），C正确； D、Nad基因位于野生甜瓜的线粒体（细胞质）中，融合后抗旱黄瓜保留了野生甜瓜的细胞质，因此获得了野生甜瓜的细胞质基因，最终抗旱黄瓜的染色体组仍为栽培黄瓜的NN，符合题图结果，D正确。 5. 青蒿素是一种在黄花蒿叶片表面的腺毛细胞（高度分化的细胞）中合成的小分子有机物，具有抗虫、抗逆等作用。青蒿素可通过下图中三条途径生产，下列有关说法正确的是（　　） A. 青蒿素属于次生代谢物，是黄花蒿基本生命活动所必需的物质 B. 途径二需要在液体培养基中培养愈伤组织，从愈伤组织中提取青蒿素 C. 途径三需要用Ca2+处理酵母菌，使其能吸收周围环境中的DNA D. 途径三与途径一相比，优点是生产周期短且不受地域和季节限制 【答案】D 【解析】 【详解】A、青蒿素是一种在黄花蒿叶片表面的腺毛细胞中合成的小分子有机物，属于次生代谢物，不是黄花蒿基本生命活动所必需的物质，A错误； B、途径二是植物组织培养生产青蒿素，需要在固体培养基中培养愈伤组织，然后从愈伤组织中提取青蒿素，并非液体培养基，B错误； C、Ca2+处理诱导细胞吸收外源DNA的方法适用于原核生物（如大肠杆菌），酵母菌是真核微生物，该方法不适用于酵母菌，C错误； D、途径三利用转基因酵母菌生产青蒿素，与途径一（从黄花蒿的腺毛细胞中提取）相比，优点是生产周期短且不受地域和季节限制，D正确。 6. 某课题组取猪输卵管组织后对其上皮细胞进行培养，如图为上皮细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，下列相关叙述错误的是（　　） A. 通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理输卵管组织使细胞分散 B. AB段细胞增殖减缓的原因可能是贴壁生长时发生接触抑制 C. OA段和BC段细胞在快速增殖，期间不需要定期更换培养液 D. B点之后为传代培养，D点后细胞中遗传物质可能会发生改变 【答案】C 【解析】 【详解】A、在动物细胞培养过程中，通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，使其分散成单个细胞，所以用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理输卵管组织可使细胞分散，A正确； B、当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，即会发生接触抑制现象，AB段细胞增殖减缓，原因可能是贴壁生长时发生接触抑制，B正确； C、OA段和BC段细胞在快速增殖，但是在培养过程中需要定期更换培养液，目的是清除代谢废物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，所以期间需要定期更换培养液，C错误； D、B点之后细胞增殖减缓甚至停止，此时需要进行传代培养；D点后细胞可能发生癌变，细胞癌变过程中遗传物质可能会发生改变，D正确。 7. 抗体—药物偶联物（ADC）对肿瘤细胞的选择性杀伤机理如下图所示，下列有关说法错误的是（　　） A. 图中a是单克隆抗体，a能识别并结合肿瘤抗原 B. b是对癌细胞有杀伤作用的药物，本身无特异性 C. 溶酶体将ADC裂解向细胞质基质释放出抗体和药物 D. 药物的作用可能是激活凋亡基因，促进癌细胞凋亡 【答案】C 【解析】 【详解】A、抗体-药物偶联物中，a是单克隆抗体，功能是特异性识别并结合肿瘤细胞表面的抗原，A正确； B、b是能杀伤癌细胞的药物，特异性是抗体提供的，药物本身不具备识别肿瘤的特异性，B正确； C、ADC被癌细胞胞吞后，囊泡与溶酶体融合，溶酶体中的水解酶会将抗体（本质为蛋白质）水解降解，仅释放药物到细胞质基质中，并不会向细胞质基质释放完整抗体，C错误； D、杀伤癌细胞的常见机理是诱导癌细胞凋亡，药物可以激活癌细胞的凋亡基因，促进癌细胞凋亡，D正确。 8. 下列关于哺乳动物早期胚胎发育及其应用的叙述，正确的是（　　） A. 卵裂发生在透明带内，产生的细胞体积逐渐变小 B. 桑葚胚的内细胞团将来发育成胎儿的各种组织 C. 孵化是透明带破裂、桑葚胚从透明带中伸展出来的过程 D. 桑葚胚均等分割并移植获得多个后代的过程属于有性生殖 【答案】A 【解析】 【详解】A、卵裂是受精卵在透明带内进行的有丝分裂过程，该时期细胞数目不断增多，但胚胎总体积基本不变甚至略有缩小，因此产生的子细胞体积逐渐变小，A正确； B、内细胞团是囊胚阶段才分化出的结构，桑葚胚阶段细胞尚未发生分化，不存在内细胞团，B错误； C、孵化是囊胚发育到一定阶段后，透明带破裂，囊胚从透明带中伸展出来的过程，该过程发生在囊胚期而非桑葚胚期，C错误； D、桑葚胚均等分割移植获得多个后代的过程，没有经过两性生殖细胞的结合，属于无性生殖，D错误。 9. 基因工程中通常会用到限制酶、DNA连接酶等。下列有关说法错误的是（　　） A. 限制酶最可能是从原核生物中分离纯化出来的 B. 限制酶能识别DNA序列，而DNA连接酶不能 C. 限制酶和DNA连接酶均作用于磷酸二酯键 D. 天然质粒不能直接用作载体，必须添加抗性基因 【答案】D 【解析】 【详解】A、限制酶主要从原核生物中分离纯化得到，原核生物的限制酶可切割入侵的外源DNA，抵御噬菌体等的侵染，A正确； B、限制酶具有特异性，能识别特定的DNA核苷酸序列并在特定位点切割；DNA连接酶仅负责连接两个DNA片段末端的磷酸二酯键，不需要识别特定DNA序列，B正确； C、限制酶切割磷酸二酯键以断开DNA链，DNA连接酶催化形成磷酸二酯键以拼接DNA片段，二者的作用位点都是磷酸二酯键，C正确； D、天然质粒不符合载体的要求，需经过人工改造才能使用，改造时需要加入标记基因便于筛选，但标记基因不一定是抗性基因，还可以是荧光蛋白基因、营养缺陷型标记等，并非必须添加抗性基因，D错误。 10. 关于“DNA粗提取与鉴定”实验，下列有关叙述错误的是（　　） A. 用洋葱做实验材料时，经过充分研磨后才进行过滤或离心 B. 用鸡血和洋葱作为实验材料，提取DNA的方法可能不同 C. 含DNA的上清液中加入预冷的酒精并离心后，DNA会出现在沉淀物中 D. 将提取的DNA溶解后加入二苯胺试剂，沸水加热后蓝色越深说明DNA纯度越高 【答案】D 【解析】 【详解】A、洋葱为植物细胞，具有细胞壁，充分研磨可破坏细胞结构，使DNA充分释放，便于后续过滤或离心操作收集含DNA的上清液，A正确； B、鸡血是动物细胞，可直接通过吸水涨破释放DNA；洋葱是植物细胞，需通过研磨、添加洗涤剂、食盐等方式破坏细胞结构释放DNA，二者提取DNA的方法存在差异，B正确； C、DNA不溶于预冷的酒精，而细胞中的多数蛋白质等杂质可溶于酒精，因此向上清液中加入预冷酒精并离心后，DNA会析出聚集在沉淀物中，C正确； D、二苯胺试剂沸水浴条件下与DNA反应呈现蓝色，蓝色深浅与DNA的含量正相关，与纯度无直接关系，若DNA含量高即使纯度较低，也会呈现较深的蓝色，D错误。 11. 现在常利用PCR获取和扩增DNA片段上的基因，某DNA片段上部分基因如下图所示（n基因的CG含量高于M基因），下列有关说法错误的是（　　） A. 扩增M基因和n基因时，每次循环的步骤是完全相同的 B. 由该DNA片段分别扩增n基因和M基因时，变性温度不同 C. 预扩增n基因，微量离心管中加入的引物是引物2和引物3 D. 第二次循环产物中才会出现两条链等长的M基因 【答案】D 【解析】 【详解】A、PCR技术的每次循环，核心步骤固定为变性→复性→延伸三步，无论扩增的是M基因还是n基因，循环的操作流程（步骤）完全一致；仅不同基因的扩增参数（如变性温度、退火温度）存在差异，不影响步骤的一致性，A正确； B、DNA的变性温度与CG含量正相关：CG碱基对之间有3个氢键，AT碱基对只有2个，CG含量越高，DNA双链稳定性越强，解链所需的温度越高。题干明确n基因的CG含量高于M基因，因此二者的变性温度不同，B正确； C、PCR扩增时需要引物和单链DNA结合，引物是子链延伸的基础。DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，故两个引物应结合到母链的3'端，上边的脱氧核苷酸单链右侧是3'-OH端，下边的脱氧核苷酸单链左侧是3'端，因此加入的引物是引物2和引物3，C正确； D、PCR扩增中，两条链等长的目的基因双链，在第三次循环才会首次出现：1. 第一次循环：模板DNA变性后引物结合延伸，产物均为“一端是引物、另一端是模板末端”的长链，长度大于目的基因； 2. 第二次循环：产物中仅出现与目的基因长度一致的单链，无两条链等长的目的基因双链； 3. 第三次循环：等长的目的基因单链作为模板，引物结合延伸后，才会首次出现两条链均为目的基因长度的双链DNA，D错误。 12. 科学家在乳腺生物反应器的基础上研究了膀胱生物反应器，可以从转基因动物尿液中获取干扰素等基因工程药物，下列有关说法错误的是（　　） A. 白细胞产生的干扰素可用于治疗病毒感染性疾病 B. 用膀胱生物反应器和乳腺生物反应器生产干扰素使用的启动子相同 C. 用膀胱生物反应器和乳腺生物反应器生产干扰素的受体细胞都是受精卵 D. 与膀胱生物反应器相比，乳腺生物反应器受到受体性别和年龄限制 【答案】B 【解析】 【详解】A、干扰素是免疫活性物质，可抑制病毒的增殖，因此可用于治疗病毒感染性疾病，A正确； B、启动子是RNA聚合酶识别结合的位点，具有组织特异性，乳腺生物反应器使用乳腺蛋白基因的启动子，驱动目的基因仅在乳腺细胞中表达，膀胱生物反应器使用膀胱上皮特异性表达基因的启动子，驱动目的基因仅在膀胱上皮细胞表达，二者使用的启动子不同，B错误； C、培育转基因动物时，由于动物受精卵的全能性最高，可发育为完整个体，因此两类生物反应器构建时的受体细胞都是受精卵，C正确； D、乳腺生物反应器仅能在雌性动物进入泌乳期后从乳汁中提取产物，受性别和年龄的限制；膀胱生物反应器只要动物能产生尿液就可获取产物，不受性别和年龄限制，D正确。 13. “筛选”是生物技术与工程中常用的技术手段，下列有关说法正确的是（　　） A. 用含酚红的培养基筛选出能分解纤维素的菌株 B. 用不含维生素的培养基中可以筛选出乳酸杆菌 C. 通常需要利用选择培养基筛选出杂种细胞或杂交细胞 D. 应利用抗体来筛选B细胞与骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞 【答案】C 【解析】 【详解】A、分解纤维素的菌株用刚果红染色法筛选，酚红培养基是用于筛选分解尿素的细菌的鉴别培养基，A错误； B、乳酸杆菌自身无法合成维生素，生长需要外源提供维生素作为生长因子，在不含维生素的培养基中无法存活，不能用该培养基筛选乳酸杆菌，B错误； C、细胞融合过程中会产生未融合细胞、同种细胞融合产物、异种细胞融合产物，需要利用选择培养基筛选出所需的杂种细胞或杂交细胞，C正确； D、B细胞和骨髓瘤细胞融合后，首先通过选择培养基筛选出杂交瘤细胞，抗体是用于后续筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞的试剂，不能用于筛选杂交瘤细胞本身，D错误。 二、多项选择题：本题共6小题，每小题3分，共18分。在每小题给出的四个选项中，有两个或两个以上选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 14. 嗜热脂肪杆菌芽孢耐热性极强，常作高压蒸汽灭菌的指示菌。使用时将其芽孢菌片放入待灭菌物品中，灭菌后接种至含酸碱指示剂的培养液，芽孢萌发后会降低pH，使指示剂由紫变黄，下列说法错误的是（　　） A. 高压蒸汽灭菌能杀死芽孢，而煮沸和灼烧不能杀死芽孢 B. 培养该芽孢时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性 C. 待灭菌的物品在100℃、121 KPa条件下维持30 min可达到灭菌目的 D. 未灭菌的对照组指示剂变黄而实验组呈紫色，说明达到灭菌效果 【答案】AC 【解析】 【详解】A、高压蒸汽灭菌（121℃、100kPa）是实验室杀灭芽孢的标准方法，能有效杀死包括芽孢在内的所有微生物。 煮沸法（100℃）在短时间内无法杀灭芽孢，需要煮沸 1~2 小时或间歇灭菌才能达到效果；但灼烧灭菌（如酒精灯火焰）温度极高，可瞬间杀死芽孢，A错误； B、大多数细菌（包括芽孢萌发后的细菌）的适宜 pH 为中性或弱碱性（pH 7.0~7.5），嗜热脂肪杆菌也不例外。 若培养基过酸或过碱，会抑制细菌的生长繁殖，影响芽孢的萌发和后续的指示剂变色反应，B正确； C、高压蒸汽灭菌的标准条件是：121℃、100 kPa（约 1 个标准大气压）、维持 15~30 分钟，C错误； D、对照组（未灭菌）的芽孢存活，萌发后产酸使指示剂变黄，说明培养基和实验过程无杂菌污染，实验体系正常。 实验组（灭菌后）指示剂呈紫色，说明芽孢已被杀死，未萌发产酸，证明灭菌合格，D正确。 15. 植物无糖组织培养技术是利用CO2代替蔗糖，在开放培养环境下，向培养基中加入广谱抑菌剂的培养技术。其流程如下图所示，下列说法正确的是（　　） 外植体处理→接种于无糖培养基→CO2+光照+恒温培养→生根→炼苗→移栽→成苗 A. 传统植物组织培养时，培养基添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B. 由于培养基中加入广谱抑菌剂，外植体不需要进行消毒处理 C. 外植体中应含叶绿体，培养过程中需要适宜的温度和光照等条件 D. 培养基用CO2作为碳源，在一定程度上减少了杂菌污染 【答案】ACD 【解析】 【详解】A、传统植物组织培养中，外植体光合能力较弱，无法自主合成充足的有机物，培养基中添加蔗糖，既可以为外植体提供碳源营养，同时还能调节培养基的渗透压，维持外植体细胞的正常形态，A正确； B、广谱抑菌剂仅能抑制杂菌生长，无法完全杀灭外植体携带的微生物，外植体仍然需要经过消毒处理才能接种，B错误； C、无糖组织培养依靠CO2作为碳源，依赖外植体自身光合作用合成有机物，因此外植体需要含有叶绿体才能完成光合自养；培养过程中酶活性、光合作用都需要适宜的温度、光照条件，C正确； D、传统组培中的蔗糖会成为杂菌的营养来源，容易引发杂菌污染；该技术以CO2作为碳源，大部分杂菌无法利用CO2合成有机物满足自身生长，因此可以在一定程度上减少杂菌污染，D正确。 16. 某研究团队利用人类多能干细胞（hPSC，存在于内细胞团）诱导生成人类肾脏类器官（hPSC-肾脏类器官），将这些hPSC-肾脏类器官灌注到离体猪肾脏后移植回同一只猪体内，在移植24小时和48小时后，移植的猪肾脏继续正常运作，没有出现损伤或毒性的迹象。下列有关说法错误的是（　　） A. 利用hPSC诱导为肾脏类器官，体现了细胞的全能性 B. 培养hPSC时，需提供适量CO2以维持细胞正常呼吸 C. hPSC具有组织特异性，能够分化形成肾脏类器官 D. 该方法显著降低了机体对移植肾脏的免疫排斥反应 【答案】ABC 【解析】 【详解】A、细胞全能性的定义：细胞经分裂分化后，仍具有产生完整有机体或分化为其他各类细胞的潜能和特性。hPSC（人类多能干细胞）只是诱导分化形成肾脏类器官，该过程没有体现细胞的全能性，A错误； B、动物细胞培养时，气体环境为95%空气+5%CO2：其中O2的作用是维持细胞正常呼吸，CO2的作用是维持培养液的pH，B错误； C、hPSC属于多能干细胞，不具有组织特异性，可经过定向诱导分化形成特定的肾脏类器官，C错误； D、该方法利用自体相容的干细胞诱导类器官，移植回原个体，可显著降低机体对移植器官的免疫排斥反应，D正确。 17. 我国科学家运用动物细胞工程和基因编辑技术成功培育出具有“两个母亲”的孤雌小鼠和具有“两个父亲”的孤雄小鼠，实验流程如图1和图2所示；另一种培育孤雌小鼠的实验流程如图3所示，下列说法正确的是（　　） A. 图1中相当于植物组织培养中脱分化过程的是① B. 图1和图3中孤雌小鼠的性别为雌性，图2中孤雄小鼠的性别为雄性 C. 图1～图3中涉及的生物工程相关技术都有动物细胞培养和胚胎移植 D. 图2中对乙进行胚胎分割处理，最后可得到多只孤雄小鼠 【答案】ACD 【解析】 【详解】A、植物组织培养的脱分化，本质是让高度分化的体细胞恢复分裂分化能力，回到未分化的愈伤组织状态。 图1中①过程，是将高度分化、无分裂能力的卵细胞，经激活、培养、转化，形成具有多能性、可无限分裂分化的孤雌胚胎干细胞（phESC），该过程相当于植物组织培养中脱分化过程，A正确； B、小鼠为XY型性别决定，雌性性染色体为XX，雄性为XY。 孤雌小鼠的核遗传物质全部来自雌性，性染色体只能为X，因此必为XX雌性。孤雄小鼠的核遗传物质全部来自雄性精子，精子的性染色体为X或Y，两个精子的核融合后，性染色体组成可能为XX（雌性）、XY（雄性）、YY（胚胎致死），因此孤雄小鼠的性别不一定为雄性，也可能是XX雌性，B错误； C、动物细胞培养：图1的卵细胞、胚胎干细胞培养，图2的精子、胚胎干细胞培养，图3的卵母细胞体外培养，均必须依赖动物细胞培养技术；胚胎移植：哺乳动物早期胚胎无法在体外直接发育为完整个体，必须移植到代孕母体子宫内才能完成发育。图1的④、图2的⑧、图3的代孕母鼠步骤，均用到了胚胎移植技术。 因此三个流程均涉及动物细胞培养和胚胎移植，C正确； D、桑葚胚或囊胚期的早期胚胎细胞具有全能性，将内细胞团均等分割后，每一份胚胎都可发育为完整个体，获得多只遗传物质完全相同的后代。 图2中的乙为囊胚，符合胚胎分割的适宜时期，规范操作后可得到多只孤雄小鼠，D正确。 18. 为鉴定转基因细菌中是否含有正确插入目的基因（700 bp）的重组质粒，某小组设计引物进行PCR扩增并进行电泳鉴定。图1中甲～丙为3种引物在正确重组质粒中的相应位置，图2为不同成员独立进行PCR扩增并进行电泳的结果，下列叙述正确的是（　　） A. 图2是凝胶在紫光灯下观察的结果，凝胶的加样孔在A端 B. 样1是用引物甲和乙PCR后的电泳结果，表明目的基因反向插入质粒 C. 用引物乙和丙PCR后电泳可得到样2，不能证明目的基因的插入方向 D. 样3和样4的结果均不能证明目的基因已经正确插入质粒 【答案】BD 【解析】 【详解】A、图2是凝胶在紫外灯下观察的结果，分子量越小的DNA迁移速度越快，因此加样孔在A端，A错误； B、样1分子量大小为900bp，为700+200bp，表明目的基因反向插入质粒，否则扩增不出条带，B正确； C、用引物乙和丙PCR后电泳可得到样2，为700+100=800bp，表明目的基因正向插入，C错误； D、样品3为700bp，只能表明目的基因已插入；样品4为700+200+100=1000bp，为甲、丙引物扩增出来的产物，也只能表明含有目的基因，无法获知目的基因是否正确插入，D正确。 三、非选择题：本题共5题，共59分。 19. 解钾菌是一类可分解土壤中硅铝酸盐等矿物的微生物，广泛分布于各类土壤，使土壤矿物中的难溶性钾转化为可被植物吸收的可溶性钾。下图是研究人员从土壤中分离解钾菌并计数的过程，下表是某科研团队所用的部分培养基的配方。已知钾长石粉不溶于水、不溶于琼脂，均匀分散在固体培养基中，使平板呈不透明状态。请回答下列问题： 成分 用量 磷酸氢二钠 2.0 g 硫酸镁 0.2 g 氯化铁 0.05 g 蔗糖 5.0 g 碳酸钙 0.1 g 钾长石粉 1.0 g 蒸馏水 1 L （1）科研人员从烟草根系周围环境土壤中筛选解钾菌的原因是_____。 （2）已知每个试管中稀释倍数均为10倍，图中每个试管中应该加入_____无菌水，甲培养基中加入_____后可作为图中对解钾菌进行分离和计数所用的平板。 （3）应选用稀释倍数为_____倍的平板上的菌落进行计数，原因是_____，可计算出1 g土样中含有的解钾菌数量为_____个。实际值往往比计算结果偏_____，原因是_____。 （4）若需获得大量难溶性钾转化率高的解钾菌，应选择平板上_____的菌落进行扩大培养。 【答案】（1）烟草根际土壤中解钾菌的数量更多，容易筛选得到目的菌 （2） ①. 4.5mL ②. 琼脂 （3） ①. 104 ②. 该稀释度下平板上的菌落数在30～300之间，计数结果准确 ③. 1.8×107 ④. 大 ⑤. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上只形成一个菌落 （4）透明圈直径与菌落直径比值大 【解析】 【小问1详解】 烟草生长需要吸收钾元素，根系周围的土壤中，能够分解难溶性钾、为烟草提供可溶性钾的解钾菌会更适应这种环境，数量相对更多，从这里筛选更容易获得目标菌株。 【小问2详解】 每个试管中稀释倍数为10倍，要实现10倍稀释，根据“最终体积/稀释倍数=初始体积”，最终试管液体体积是5mL，所以需要加入的无菌水是5mL - 0.5mL = 4.5mL，这样加入0.5mL上一级的菌液后，就能完成10倍稀释。图中用于分离和计数的是固体平板培养基，表格里的培养基成分没有凝固剂，而制作固体培养基需要加入琼脂作为凝固剂，所以加入琼脂后才能制成所需平板。 【小问3详解】 选择稀释倍数为104 倍的平板，因为观察图中的菌落数，10⁴稀释倍数对应的平板菌落数分别是168、175、197，都在30-300这个计数准确的范围内。 微生物计数时，平板上菌落数在30-300之间时，统计结果的误差最小，计数最准确。计算1g土样中的解钾菌数量，先计算三个平板的平均菌落数：(168+175+197)÷3=180个，1g土样对应的菌液经过了105倍的稀释，涂布体积为0.1mL，所以1g土样中的菌数是180× 104 ÷0.1= 1.8 × 107个。 实际值比计算结果偏大，因为当多个解钾菌细胞连在一起的时候，在平板上只会形成一个菌落，我们计数的时候会把它当成一个菌落统计，这样统计出来的菌落数比实际的活菌数少，所以实际的菌量比计算结果大。 【小问4详解】 钾长石粉不溶于水和琼脂，让平板呈不透明状态，解钾菌能分解钾长石产生可溶性钾，菌落周围的钾长石被分解后会形成透明圈。透明圈直径与菌落直径比值越大，说明这个菌落的解钾菌分解钾长石的能力越强，也就是难溶性钾转化率越高，所以要选择透明圈直径与菌落直径比值大的菌落进行扩大培养。 20. 山东农业大学的一项研究揭示了原表皮细胞（在成体植物的叶、茎等器官发育过程中，原表皮细胞由顶端分生组织持续分裂产生，是器官表皮的初始细胞）在不同调控机制下的不同发育情况。调控机制及发育状况如下图所示，请回答下列问题： 注：LEC2为植物胚胎发育关键转录因子；SPCH为是调控气孔发育和细胞重编程的关键转录因子；TAA1和YUCs表达产生的酶协同催化内源生长素合成；ARFs为生长素响应因子。 （1）原表皮细胞在植物组织培养过程中通常被称为_____，其属于_____（填“已分化”或“未分化”）的细胞。 （2）由图可知，LEC2和SPCH结合后______能（填“促进”或“抑制”）生长素的合成，进而对拟分生组织母细胞进行重编程。该重编程相当于植物组织培养中的_____过程。 （3）体细胞胚是与合子胚（受精卵胚）形态结构相似的胚状结构，由原表皮细胞产生体细胞胚的现象说明原表皮细胞具有_____。人工种子和传统种子相比，具有的优点有_____（至少答出两点）。 （4）由体细胞胚产生试管苗的培养基中需要加入的两种关键植物激素是_____，若需促进胚状体生根，这两种植物激素的用量关系是_____。 （5）人工种皮应该具备一定封闭性和良好的透气性，原因是_____（答出两点）。 【答案】（1） ①. 外植体 ②. 已分化 （2） ①. 促进 ②. 脱分化 （3） ①. 全能性 ②. 保持亲本优良性状、生产周期短、便于运输和贮藏、不受季节气候限制、可大量快速繁殖（写出两点即可） （4） ①. 生长素和细胞分裂素 ②. 生长素用量与细胞分裂素用量的比值高（生长素>细胞分裂素） （5）提供氧气，保证胚状体进行有氧呼吸;防止水分过度蒸发，有利于种子存活；一定封闭性可减少营养物质流失、防止微生物污染（写出两点即可） 【解析】 【小问1详解】 植物组织培养中，离体的植物细胞、组织或器官统称为外植体，因此原表皮细胞在植物组织培养中被称为外植体。原表皮细胞是植物器官表皮的初始细胞，已经分化出特定的结构和功能，属于已分化的细胞。 【小问2详解】 TAA1和YUCs表达产生的酶协同催化内源生长素合成，图中LEC2和SPCH结合后会启动TAA1/YUCs的表达，因此促进生长素的合成，进而完成重编程。植物组织培养中，脱分化是指已分化的细胞恢复分裂能力、回到未分化状态的过程，因此该重编程相当于脱分化过程。 【小问3详解】 原表皮细胞能发育成完整的体细胞胚，说明原表皮细胞具有全能性。人工种子可完全保持优良品种的遗传特性，不会发生性状分离；生产不受季节、气候、地域的限制，可大规模工厂化生产；可解决某些作物繁殖困难、发芽率低的问题；可在人工胚乳中添加营养、农药、植物激素等，提升幼苗抗逆性。综上所述，人工种子和传统种子相比，具有的优点有保持亲本优良性状、生产周期短、便于运输和贮藏、不受季节气候限制、可大量快速繁殖。 【小问4详解】 植物组织培养中调控脱分化、再分化的两种关键植物激素是生长素和细胞分裂素。生长素比例高时促进根的分化，细胞分裂素比例高时促进芽的分化。因此促进胚状体生根时，生长素用量高于细胞分裂素用量。也就是说，生长素用量与细胞分裂素用量的比值高（生长素>细胞分裂素）。 【小问5详解】 人工种皮需具备一定封闭性可以防止内部水分散失，同时避免外界微生物污染，保护胚状体；良好透气性能保证胚状体细胞进行有氧呼吸，为其萌发和生长提供充足的能量；同时封闭性可维持人工胚乳的营养成分不流失，透气性避免胚状体因缺氧进行无氧呼吸产生酒精，造成毒害。故原因是提供氧气，保证胚状体进行有氧呼吸;防止水分过度蒸发，有利于种子存活；一定封闭性可减少营养物质流失、防止微生物污染。 21. 荷斯坦高产奶牛原产于荷兰北部及德国北部，经长期选育成为全球广泛养殖的高产乳用牛品种。科学家利用进口的优质荷斯坦高产奶牛冻精、良种荷斯坦高产奶牛和健康黄牛（主要用于耕作、肉用等），通过胚胎工程技术研究生产荷斯坦高产奶牛的途径如下图所示，请回答下列问题： （1）在获得牛1的过程中，首先需对供体1注射_____进行超数排卵处理，同时对解冻的精液离心后进行_____处理，再将两者在体外合适的环境下共同培养一段时间后，完成受精作用。 （2）通常采用_____法对图中的_____（填“细胞A”或“细胞B”）进行去核处理，也可以采用_____（至少答出一种方法）对其进行去核处理。去除的“核”实际上是_____。 （3）获得牛1与牛2的培育过程中均用到的工程技术有_____（答出两个）。牛1和牛2中，遗传多样性更高的是______，理由是_____。 【答案】（1） ①. 促性腺激素 ②. 获能 （2） ①. 显微操作 ②. 细胞B ③. 梯度离心、紫外线短时间照射、化学物质处理 ④. 纺锤体—染色体复合物 （3） ①. 动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植技术 ②. 牛1 ③. 生产牛1的过程属于有性生殖，集合了双亲的遗传物质 【解析】 【小问1详解】 供体1提供卵细胞，可对其进行超数排卵处理，注射促性腺激素可达到此目的；解冻的精液离心后进行获能处理，即获得受精的能力。 【小问2详解】 细胞A为核供体，细胞B为去核卵母细胞，可用显微操作对细胞B进行去核处理；另外，梯度离心、紫外线短时间照射、化学物质处理，也可达到去核的目的。去除的实际是卵母细胞中纺锤体—染色体的复合物。 【小问3详解】 获得牛1为体外受精，获得牛2为核移植，两者的培育过程中均用到的工程技术有动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植技术；生产牛2的过程为无性生殖，生产牛1的过程属于有性生殖，有性生殖集合了双亲的遗传物质，遗传多样性更高。 22. 双特异性单克隆抗体是指可同时与癌细胞和药物结合的特异性抗体。下图是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术（免疫的B细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱（一种抗癌药物）的双特异性单克隆抗体的部分过程。请回答下列问题： （1）图中“融合”常用的方法有_____（至少答出两个），图中①过程会淘汰甲中_____（填细胞类型），得到乙。 （2）过程②是通过多次_____对乙进行筛选，丙的特点是_____。与传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是_____。 （3）图中方框内需要经过______次筛选，才能获取能产生双特异性单克隆杂交—杂交瘤细胞。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞会因为_____（至少答出两点）等因素而分裂受阻，需进行传代培养。 （4）制备双特异性单克隆抗体的过程中用到的生物技术有_____（答出两点）。 （5）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是_____。 【答案】（1） ①. PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法（写出其中两个） ②. 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 （2） ①. 克隆化培养和抗体检测 ②. 既能无限增殖又能产生特异性抗体 ③. 准确识别抗原细微差异，与特定抗原发生特异性识别，并可大量制备（特异性强、灵敏度高、可大量制备） （3） ①. 2 ②. 细胞密度过大、有害代谢物的积累和培养液中营养物质缺乏 （4）动物细胞培养、动物细胞融合 （5）双特异性单克隆抗体能携带长春碱与癌细胞特异性结合，不会对健康细胞造成伤害 【解析】 【小问1详解】 动物细胞融合常用的诱导方法为PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法；过程①是第一次筛选，目的是淘汰融合后甲中未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞，保留B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞（乙）。 【小问2详解】 获得杂交瘤细胞后，需要通过多次克隆化培养和抗体阳性筛选（过程②），得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞丙，丙的特点是：既能无限增殖，又能产生特异性抗体。和传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是准确识别抗原细微差异，与特定抗原发生特异性识别，并可大量制备（特异性强、灵敏度高、可大量制备）。 【小问3详解】 方框中是杂交瘤细胞和新的B淋巴细胞融合后的筛选步骤，需要先筛选得到杂交—杂交瘤细胞，再筛选能产生双特异性抗体的杂交—杂交瘤细胞，共需要2次筛选；体外原代培养时，细胞密度过大、有害代谢物的积累和培养液中营养物质缺乏，都会使细胞分裂受阻，需要传代培养。 【小问4详解】 该制备过程核心用到的生物技术是动物细胞融合技术和动物细胞培养技术。 【小问5详解】 双特异性单克隆抗体能携带长春碱与癌细胞特异性结合，不会对健康细胞造成伤害，实现抗癌药物的定向运输，减少了长春碱对正常细胞的杀伤，因此副作用比直接给药更小。 23. 某科研团队以优化后的甜菜红素基因（RUBY，其表达产物使细胞中积累红色的甜菜红素）作为报告基因与Bt基因形成融合基因Bt-RUBY后，构建了一种可视化筛选转基因表达载体，提高了抗虫棉遗传转化效率。图1为融合基因的构建过程，图2为某Ti质粒的结构和部分限制酶的识别序列，请回答下列问题： 限制酶 识别序列 Sac Ⅰ 5′-GAGCT↓C-3′ BamH Ⅰ 5′-G↓GATCC-3′ Kpn Ⅰ 5′-GGTAC↓C-3′ Xma Ⅰ 5′-G↓CCGGG-3′ Sal Ⅰ 5′-G↓AGCTC-3′ EcoR Ⅴ 5′-GAT↓ATC-3′ （1）从引物角度分析，利用RUBY与Bt构建融合基因Bt-RUBY的前提条件是_____。 （2）基因表达载体上启动子的作用是_____。T-DNA的作用是_____。 （3）为了能使Bt-RUBY与Ti质粒正确连接应该分别在引物_____的5′端添加限制酶_____的识别序列。 （4）通常利用_____法将Bt-RUBY导入棉花细胞中，过程中需要多次进行筛选或鉴定：先用含_____的培养基筛选出阳性菌落，然后利用筛选出的细菌与棉花的愈伤组织混合，再利用_____（填“卡那霉素”、“潮霉素”或“卡那霉素和潮霉素”）进行辅助筛选，或选择_____的愈伤组织直接进行分化培养，后者显著提高了筛选效率。 【答案】（1）引物2和引物3存在部分互补配对序列 （2） ①. RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA ②. 可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞的染色体DNA上 （3） ①. 引物1和引物4（引物4和引物1） ②. XmaⅠ和KpnⅠ（KpnⅠ和XmaⅠ） （4） ①. 农杆菌转化 ②. 卡那霉素 ③. 潮霉素 ④. 呈现甜菜红素红色（或变红） 【解析】 【小问1详解】 图 1 中，Bt 基因用引物 1/2 进行 PCR1 扩增，RUBY 基因用引物 3/4 进行 PCR2 扩增，之后通过 PCR3 拼接成融合基因。要让两段 PCR 产物（Bt 和 RUBY）在后续 PCR 中拼接，需要中间的引物 2 和引物 3 存在互补配对的重叠序列。这样，PCR1 的产物和 PCR2 的产物可以通过引物 2 和 3 的互补序列 “搭桥”，在 PCR3 中完成拼接，形成 Bt-RUBY 融合基因。 【小问2详解】 启动子是基因表达调控的关键元件，只有 RNA 聚合酶结合到启动子上，才能启动下游基因的转录，合成 mRNA，进而翻译出蛋白质。Ti 质粒是农杆菌转化法的核心载体，其 T-DNA（可转移 DNA）的天然特性就是能从农杆菌中转移出来，并整合到植物细胞的染色体 DNA 上，因此常被用来携带目的基因进入植物受体细胞并稳定遗传。 【小问3详解】 观察图1和图2，要让融合基因Bt-RUBY插入Ti质粒的启动子和终止子之间，需要保证两端的限制酶切割位点和质粒对应位置匹配，所以需要在引物1和引物4（或者引物4和引物1）的5'端添加酶切位点，EcoR Ⅴ多个酶切位点不能选，BamH Ⅰ和Sac Ⅰ破坏目的基因不能选。根据基因的转录方向和Ti质粒上启动子和终止子位置，则在引物1和引物4分别需要加入限制酶是XmaⅠ和KpnⅠ，选择这两种酶可以保证融合基因和质粒的正确连接，并且不会破坏目的基因和质粒上的关键序列。 【小问4详解】 棉花是双子叶植物，农杆菌转化法是最常用的转基因方法（农杆菌天然能感染双子叶植物，通过 Ti 质粒的 T-DNA 转移目的基因）。第一步筛选：先将构建好的质粒导入农杆菌，农杆菌的质粒上带有卡那霉素抗性基因（图 2 左侧的卡那霉素抗性基因），因此用含卡那霉素的培养基筛选，只有成功导入质粒的农杆菌才能存活（阳性菌落）。第二步筛选：农杆菌与棉花愈伤组织共培养后，要筛选出被转化的愈伤组织。此时农杆菌已完成 T-DNA 转移，需要抑制农杆菌的生长，因此用潮霉素（棉花细胞对潮霉素不敏感，而农杆菌对潮霉素敏感，可杀死农杆菌；同时 T-DNA 区域带有潮霉素抗性基因？结合题目，此处是辅助筛选，抑制农杆菌）。题目中说明 RUBY 基因表达会使细胞积累甜菜红素，呈现红色。因此可以直接观察愈伤组织，选择变红（呈现甜菜红素红色）的愈伤组织直接分化培养，不需要额外的抗性筛选，大大提高效率。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 绝密★启用前 生物 本试卷共8页，满分100分，考试用时75分钟。 注意事项： 1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2．回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 一、单项选择题：本题共13小题，每小题2分，共26分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。 1. 关于传统发酵，下列说法正确的是（　　） A. 发酵就是生物产生酒精或乳酸等代谢产物的过程 B. 传统发酵的菌种可来自原料或前一次发酵物中的微生物 C. 微生物有氧呼吸的产物不可以作为发酵产物 D. 传统发酵技术制作的食品不含杂菌，品质优良 2. 东北流行的低度甜型山葡萄酒的生产过程如下图所示，下列有关说法错误的是（　　） 原料挑选、清洗、除梗→调糖→接种酵母→主发酵→分离压榨→后发酵→澄清过滤→灌装 A. 挑选的山葡萄先清洗后除梗是为了减少杂菌污染 B. “调糖”步骤中加入的葡萄糖越多越有利于发酵 C. 发酵罐中应留一部分空间，防止发酵液溢出 D. 低度甜型山葡萄酒的发酵时间不宜过长，否则影响口感 3. 如图为对酵母菌进行纯培养的实验结果，下列说法错误的是（　　） A. 配制好的培养基应先灭菌，然后在酒精灯火焰附近倒平板 B. 制备的培养基在接种前后都处于倒置状态，但目的不同 C. 接种环需灼烧5次，第2次灼烧的目的是防止杂菌污染 D. 若得到的单菌落颜色、性状不一致，可能出现了杂菌污染 4. 野生甜瓜具有极强的抗旱能力，这与其线粒体内的Nad基因密切相关，而栽培黄瓜的抗旱能力极弱。下图表示制备抗旱黄瓜的过程，下列说法错误的是（　　） A. 过程①用纤维素酶和果胶酶处理可解除细胞壁对细胞间杂交的阻碍 B. 用α射线处理的主要目的是诱发a原生质体发生基因突变或染色体变异 C. 过程②可用离心法或高Ca2+—高pH融合法进行诱导 D. 融合后的抗旱黄瓜获得了野生甜瓜的细胞质基因 5. 青蒿素是一种在黄花蒿叶片表面的腺毛细胞（高度分化的细胞）中合成的小分子有机物，具有抗虫、抗逆等作用。青蒿素可通过下图中三条途径生产，下列有关说法正确的是（　　） A. 青蒿素属于次生代谢物，是黄花蒿基本生命活动所必需的物质 B. 途径二需要在液体培养基中培养愈伤组织，从愈伤组织中提取青蒿素 C. 途径三需要用Ca2+处理酵母菌，使其能吸收周围环境中的DNA D. 途径三与途径一相比，优点是生产周期短且不受地域和季节限制 6. 某课题组取猪输卵管组织后对其上皮细胞进行培养，如图为上皮细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线，下列相关叙述错误的是（　　） A. 通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理输卵管组织使细胞分散 B. AB段细胞增殖减缓的原因可能是贴壁生长时发生接触抑制 C. OA段和BC段细胞在快速增殖，期间不需要定期更换培养液 D. B点之后为传代培养，D点后细胞中遗传物质可能会发生改变 7. 抗体—药物偶联物（ADC）对肿瘤细胞的选择性杀伤机理如下图所示，下列有关说法错误的是（　　） A. 图中a是单克隆抗体，a能识别并结合肿瘤抗原 B. b是对癌细胞有杀伤作用的药物，本身无特异性 C. 溶酶体将ADC裂解向细胞质基质释放出抗体和药物 D. 药物的作用可能是激活凋亡基因，促进癌细胞凋亡 8. 下列关于哺乳动物早期胚胎发育及其应用的叙述，正确的是（　　） A. 卵裂发生在透明带内，产生的细胞体积逐渐变小 B. 桑葚胚的内细胞团将来发育成胎儿的各种组织 C. 孵化是透明带破裂、桑葚胚从透明带中伸展出来的过程 D. 桑葚胚均等分割并移植获得多个后代的过程属于有性生殖 9. 基因工程中通常会用到限制酶、DNA连接酶等。下列有关说法错误的是（　　） A. 限制酶最可能是从原核生物中分离纯化出来的 B. 限制酶能识别DNA序列，而DNA连接酶不能 C. 限制酶和DNA连接酶均作用于磷酸二酯键 D. 天然质粒不能直接用作载体，必须添加抗性基因 10. 关于“DNA粗提取与鉴定”实验，下列有关叙述错误的是（　　） A. 用洋葱做实验材料时，经过充分研磨后才进行过滤或离心 B. 用鸡血和洋葱作为实验材料，提取DNA的方法可能不同 C. 含DNA的上清液中加入预冷的酒精并离心后，DNA会出现在沉淀物中 D. 将提取的DNA溶解后加入二苯胺试剂，沸水加热后蓝色越深说明DNA纯度越高 11. 现在常利用PCR获取和扩增DNA片段上的基因，某DNA片段上部分基因如下图所示（n基因的CG含量高于M基因），下列有关说法错误的是（　　） A. 扩增M基因和n基因时，每次循环的步骤是完全相同的 B. 由该DNA片段分别扩增n基因和M基因时，变性温度不同 C. 预扩增n基因，微量离心管中加入的引物是引物2和引物3 D. 第二次循环产物中才会出现两条链等长的M基因 12. 科学家在乳腺生物反应器的基础上研究了膀胱生物反应器，可以从转基因动物尿液中获取干扰素等基因工程药物，下列有关说法错误的是（　　） A. 白细胞产生的干扰素可用于治疗病毒感染性疾病 B. 用膀胱生物反应器和乳腺生物反应器生产干扰素使用的启动子相同 C. 用膀胱生物反应器和乳腺生物反应器生产干扰素的受体细胞都是受精卵 D. 与膀胱生物反应器相比，乳腺生物反应器受到受体性别和年龄限制 13. “筛选”是生物技术与工程中常用的技术手段，下列有关说法正确的是（　　） A. 用含酚红的培养基筛选出能分解纤维素的菌株 B. 用不含维生素的培养基中可以筛选出乳酸杆菌 C. 通常需要利用选择培养基筛选出杂种细胞或杂交细胞 D. 应利用抗体来筛选B细胞与骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞 二、多项选择题：本题共6小题，每小题3分，共18分。在每小题给出的四个选项中，有两个或两个以上选项符合题目要求，全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 14. 嗜热脂肪杆菌芽孢耐热性极强，常作高压蒸汽灭菌的指示菌。使用时将其芽孢菌片放入待灭菌物品中，灭菌后接种至含酸碱指示剂的培养液，芽孢萌发后会降低pH，使指示剂由紫变黄，下列说法错误的是（　　） A. 高压蒸汽灭菌能杀死芽孢，而煮沸和灼烧不能杀死芽孢 B. 培养该芽孢时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性 C. 待灭菌的物品在100℃、121 KPa条件下维持30 min可达到灭菌目的 D. 未灭菌的对照组指示剂变黄而实验组呈紫色，说明达到灭菌效果 15. 植物无糖组织培养技术是利用CO2代替蔗糖，在开放培养环境下，向培养基中加入广谱抑菌剂的培养技术。其流程如下图所示，下列说法正确的是（　　） 外植体处理→接种于无糖培养基→CO2+光照+恒温培养→生根→炼苗→移栽→成苗 A. 传统植物组织培养时，培养基添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B. 由于培养基中加入广谱抑菌剂，外植体不需要进行消毒处理 C. 外植体中应含叶绿体，培养过程中需要适宜的温度和光照等条件 D. 培养基用CO2作为碳源，在一定程度上减少了杂菌污染 16. 某研究团队利用人类多能干细胞（hPSC，存在于内细胞团）诱导生成人类肾脏类器官（hPSC-肾脏类器官），将这些hPSC-肾脏类器官灌注到离体猪肾脏后移植回同一只猪体内，在移植24小时和48小时后，移植的猪肾脏继续正常运作，没有出现损伤或毒性的迹象。下列有关说法错误的是（　　） A. 利用hPSC诱导为肾脏类器官，体现了细胞的全能性 B. 培养hPSC时，需提供适量CO2以维持细胞正常呼吸 C. hPSC具有组织特异性，能够分化形成肾脏类器官 D. 该方法显著降低了机体对移植肾脏的免疫排斥反应 17. 我国科学家运用动物细胞工程和基因编辑技术成功培育出具有“两个母亲”的孤雌小鼠和具有“两个父亲”的孤雄小鼠，实验流程如图1和图2所示；另一种培育孤雌小鼠的实验流程如图3所示，下列说法正确的是（　　） A. 图1中相当于植物组织培养中脱分化过程的是① B. 图1和图3中孤雌小鼠的性别为雌性，图2中孤雄小鼠的性别为雄性 C. 图1～图3中涉及的生物工程相关技术都有动物细胞培养和胚胎移植 D. 图2中对乙进行胚胎分割处理，最后可得到多只孤雄小鼠 18. 为鉴定转基因细菌中是否含有正确插入目的基因（700 bp）的重组质粒，某小组设计引物进行PCR扩增并进行电泳鉴定。图1中甲～丙为3种引物在正确重组质粒中的相应位置，图2为不同成员独立进行PCR扩增并进行电泳的结果，下列叙述正确的是（　　） A. 图2是凝胶在紫光灯下观察的结果，凝胶的加样孔在A端 B. 样1是用引物甲和乙PCR后的电泳结果，表明目的基因反向插入质粒 C. 用引物乙和丙PCR后电泳可得到样2，不能证明目的基因的插入方向 D. 样3和样4的结果均不能证明目的基因已经正确插入质粒 三、非选择题：本题共5题，共59分。 19. 解钾菌是一类可分解土壤中硅铝酸盐等矿物的微生物，广泛分布于各类土壤，使土壤矿物中的难溶性钾转化为可被植物吸收的可溶性钾。下图是研究人员从土壤中分离解钾菌并计数的过程，下表是某科研团队所用的部分培养基的配方。已知钾长石粉不溶于水、不溶于琼脂，均匀分散在固体培养基中，使平板呈不透明状态。请回答下列问题： 成分 用量 磷酸氢二钠 2.0 g 硫酸镁 0.2 g 氯化铁 0.05 g 蔗糖 5.0 g 碳酸钙 0.1 g 钾长石粉 1.0 g 蒸馏水 1 L （1）科研人员从烟草根系周围环境土壤中筛选解钾菌的原因是_____。 （2）已知每个试管中稀释倍数均为10倍，图中每个试管中应该加入_____无菌水，甲培养基中加入_____后可作为图中对解钾菌进行分离和计数所用的平板。 （3）应选用稀释倍数为_____倍的平板上的菌落进行计数，原因是_____，可计算出1 g土样中含有的解钾菌数量为_____个。实际值往往比计算结果偏_____，原因是_____。 （4）若需获得大量难溶性钾转化率高的解钾菌，应选择平板上_____的菌落进行扩大培养。 20. 山东农业大学的一项研究揭示了原表皮细胞（在成体植物的叶、茎等器官发育过程中，原表皮细胞由顶端分生组织持续分裂产生，是器官表皮的初始细胞）在不同调控机制下的不同发育情况。调控机制及发育状况如下图所示，请回答下列问题： 注：LEC2为植物胚胎发育关键转录因子；SPCH为是调控气孔发育和细胞重编程的关键转录因子；TAA1和YUCs表达产生的酶协同催化内源生长素合成；ARFs为生长素响应因子。 （1）原表皮细胞在植物组织培养过程中通常被称为_____，其属于_____（填“已分化”或“未分化”）的细胞。 （2）由图可知，LEC2和SPCH结合后______能（填“促进”或“抑制”）生长素的合成，进而对拟分生组织母细胞进行重编程。该重编程相当于植物组织培养中的_____过程。 （3）体细胞胚是与合子胚（受精卵胚）形态结构相似的胚状结构，由原表皮细胞产生体细胞胚的现象说明原表皮细胞具有_____。人工种子和传统种子相比，具有的优点有_____（至少答出两点）。 （4）由体细胞胚产生试管苗的培养基中需要加入的两种关键植物激素是_____，若需促进胚状体生根，这两种植物激素的用量关系是_____。 （5）人工种皮应该具备一定封闭性和良好的透气性，原因是_____（答出两点）。 21. 荷斯坦高产奶牛原产于荷兰北部及德国北部，经长期选育成为全球广泛养殖的高产乳用牛品种。科学家利用进口的优质荷斯坦高产奶牛冻精、良种荷斯坦高产奶牛和健康黄牛（主要用于耕作、肉用等），通过胚胎工程技术研究生产荷斯坦高产奶牛的途径如下图所示，请回答下列问题： （1）在获得牛1的过程中，首先需对供体1注射_____进行超数排卵处理，同时对解冻的精液离心后进行_____处理，再将两者在体外合适的环境下共同培养一段时间后，完成受精作用。 （2）通常采用_____法对图中的_____（填“细胞A”或“细胞B”）进行去核处理，也可以采用_____（至少答出一种方法）对其进行去核处理。去除的“核”实际上是_____。 （3）获得牛1与牛2的培育过程中均用到的工程技术有_____（答出两个）。牛1和牛2中，遗传多样性更高的是______，理由是_____。 22. 双特异性单克隆抗体是指可同时与癌细胞和药物结合的特异性抗体。下图是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术（免疫的B细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱（一种抗癌药物）的双特异性单克隆抗体的部分过程。请回答下列问题： （1）图中“融合”常用的方法有_____（至少答出两个），图中①过程会淘汰甲中_____（填细胞类型），得到乙。 （2）过程②是通过多次_____对乙进行筛选，丙的特点是_____。与传统血清抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是_____。 （3）图中方框内需要经过______次筛选，才能获取能产生双特异性单克隆杂交—杂交瘤细胞。体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞会因为_____（至少答出两点）等因素而分裂受阻，需进行传代培养。 （4）制备双特异性单克隆抗体的过程中用到的生物技术有_____（答出两点）。 （5）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是_____。 23. 某科研团队以优化后的甜菜红素基因（RUBY，其表达产物使细胞中积累红色的甜菜红素）作为报告基因与Bt基因形成融合基因Bt-RUBY后，构建了一种可视化筛选转基因表达载体，提高了抗虫棉遗传转化效率。图1为融合基因的构建过程，图2为某Ti质粒的结构和部分限制酶的识别序列，请回答下列问题： 限制酶 识别序列 Sac Ⅰ 5′-GAGCT↓C-3′ BamH Ⅰ 5′-G↓GATCC-3′ Kpn Ⅰ 5′-GGTAC↓C-3′ Xma Ⅰ 5′-G↓CCGGG-3′ Sal Ⅰ 5′-G↓AGCTC-3′ EcoR Ⅴ 5′-GAT↓ATC-3′ （1）从引物角度分析，利用RUBY与Bt构建融合基因Bt-RUBY的前提条件是_____。 （2）基因表达载体上启动子的作用是_____。T-DNA的作用是_____。 （3）为了能使Bt-RUBY与Ti质粒正确连接应该分别在引物_____的5′端添加限制酶_____的识别序列。 （4）通常利用_____法将Bt-RUBY导入棉花细胞中，过程中需要多次进行筛选或鉴定：先用含_____的培养基筛选出阳性菌落，然后利用筛选出的细菌与棉花的愈伤组织混合，再利用_____（填“卡那霉素”、“潮霉素”或“卡那霉素和潮霉素”）进行辅助筛选，或选择_____的愈伤组织直接进行分化培养，后者显著提高了筛选效率。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $