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复实验是一种快速检测实验,用于检测病毒、细菌或其他物质的抗原或抗体。这种方法可检测出许多感染禽类、猪、偶蹄类动物的感染源。该实验用到的器材有没标版、血清稀释版封口膜试剂盒、一液液气温箱酶标仪所需的试剂有样品血清阴性阳性对照血清血清稀释液样品浓缩洗涤液酶标二抗酶底物终止液、口蹄疫O型抗体液相阻断伊莱萨第一部包贝伊莱萨板将抗体兔抗血清包被在伊莱萨板中。在伊莱萨板上每孔加50微升工作浓度的O型口蹄疫病毒兔抗血清捕获抗体。震荡封板,温室过夜,捕获抗体吸附在伊莱萨板孔壁上,其中的牛血清白蛋白封闭非特异性结合。第二步抗原抗体反应,待检血清做几个稀释度和已知抗原在血清稀释板中反应,在血清稀释板上用五十微升每孔量血清稀释液稀释待检血清,阳性对照血清,阴性对照血清。1到10列为倍比稀释的待检血清,十一列为贝比稀释的阳性血清。对照组十二列,A12和B12为贝比稀释的阴性血清对照,E12至H12为病毒抗原对照。每孔加入五十微升,用稀释液稀释到使用浓度的O型口蹄疫病毒抗原。病毒抗原对照孔加100微升震荡混匀封板,四摄氏度过夜。加入病毒抗原后,血清的稀释度变为从1比8开始的两倍,稀释抗原与相应的抗体相遇,形成了抗原抗体复合物,若血清浓度高时,抗原抗体形成复合物后抗体剩余。随着血清稀释抗体浓度越来越低,抗原开始剩余,即抗原未被血清抗体阻断。第三步,洗板,用工作浓度的洗涤液洗伊莱莎板。重复3到5次在吸水纸上甩干。第四步,将抗原抗体混合物移至伊莱萨板上将抗原抗体混合物从血清稀释板上按次序转移至伊莱萨板上的相对应孔,每桶50微升封板,37摄氏度温浴1小时,加入血清抗体,剩余的抗原抗体复合物的孔,复合物悬浮在孔中,加入抗原,剩余的抗原抗体复合物的孔,抗原被伊莱萨板上的抗体捕或。第五步,洗板同上洗涤伊莱萨版。重复3到5次甩干。第六步,加一抗豚鼠抗血清,每孔加五十微升工作浓度的口蹄疫病毒,豚鼠抗血清。风板37摄氏度温浴1小时,纯属抗血清中抗体与被捕获的抗原结合,被滞留在空中。第七步,洗板,同上洗涤伊莱萨板。重复3到5次甩干。第八步,酶标二,抗兔、抗豚鼠血清酶标记物每孔加五十微升工作浓度。酶标二,抗兔、抗豚鼠血清酶标记物。风板37摄氏度。温浴1小时。第九部洗版洗涤伊莱萨版。重复3到5次甩干。第十步,加底物溶液及终止液,每孔加五十微升底物溶液。风板37摄氏度,避光温浴15分钟。预热酶标仪,每孔再加50微升终止液终止反应。立即按说明书要求的波长下读取光吸收值。第11步,结果判定,参照使用说明书判定结果。
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