法氏囊病卵黄抗体检测技术实训目的，掌握琼扩试验的操作技术，会利用琼扩试验的方法，定量测定基于传染性法氏囊病的卵黄抗体效价。仪器材料，琼扩板、打孔器、微量移液器及吸头、96孔微量血凝板、针头、酒精灯、湿盒、恒温箱、IBD标准琼扩抗原、IBD标准阳性血清待测、卵黄液、生理盐水等。操作过程，一、稀释卵黄液，一、调节微量移液器至50微升，并安装吸头。2、加生理盐水。取生理盐水，用微量移液器滴加到96孔血凝板上，每孔五十微升，由第一孔加至12孔。3、稀释卵黄液，更换吸头，取被检卵黄液。用微量移液器吸五十微升，加入96孔微量血凝板的第一孔，吹打三次，混匀后吸取50微升加入第二孔，再吹打三次，吸取50微升加入第三孔，依次被比稀释至十二孔。2、琼扩板打孔一、打孔取穷阔板，用打孔器在琼脂板上打两组七孔梅花孔。2、挑孔，用针头挑出里面的琼脂块，避免伤及孔壁。挑出的琼脂块放入。平皿中。3、封底点燃酒精灯。手持筇括板，在酒精灯外焰中通过3到4次，使孔底微微受热融化，封闭孔底。熄灭酒精灯。4、标记，用记号笔在穷括板底面标记阳性对照孔。3加样一加标准抗原微量移液器更换吸头，吸取传染性法氏囊病毒标准抗原。加入两组梅花孔的中央孔，加液时要仔细，加液量以满而不溢为原则。2、加卵黄液、微量移液器，更换吸头。吸取96孔微量血凝板上已稀释好的卵黄液，加发到群扩板的周边孔内。注意一、先加低浓度孔，再加高浓度孔，即先加十一孔，再加十孔，依次至。第一孔。2、每加完一孔。应将吸头中的液体在血凝板上排干净。3、加液量以满而不溢为原则。3加标准阳性血清取传染性法氏囊。标准阳性血清。加入琼扩版的阳性对照孔。4、静置琼。扩版，加盖。静置5到10分钟。同时准备湿盒，取一带盖的搪瓷盘，盘底铺上纱布，加入适量的水。将琼扩版倒置。放于诗盒中。五反应，将湿盒放入37度温箱，逐日观察72小时判定结果。6、结果分析，先观察阳性对照孔与中央孔之间有无白色的沉淀线，在对照孔出现白色沉淀线的前提下，观察检测孔与中央抗原孔产生白色沉淀线的最高稀释度，即是该卵黄抗体的效价，用n log 2表示此卵黄抗体的效价为5 log 2。注意事项，一、打孔，打孔时要小心，不要伤及孔壁。2、每孔的加液量为满而不溢。3加样的顺序，一定按低浓度到高浓度的顺序操作。4、每日注意观察湿盒中是否有水，防止干燥。