湖北高二生物下学期期末测试2025-2026学年人教版选择性必修三全册

**基本信息** 聚焦2025年转基因玉米产业化、CRISPR/Cas9基因编辑疗法等科技前沿，通过基础判断与综合应用，考查生物技术操作规范及工程实践中的科学思维与社会责任。 **题型特征** |题型|题量/分值|知识覆盖|命题特色| |----|-----------|----------|----------| |单项选择题|18/36|涵盖微生物培养（题1）、基因工程工具酶（题3）、细胞工程（题4）等基础知识点|以技术操作规范判断为主，考查生命观念与科学思维| |非选择题|4/64|综合基因工程（题19）、发酵工程（题20）、细胞工程（题21）等，涉及工程流程与调控机制|以转基因玉米、CAR-T疗法等为情境，设置基础填空与机制分析题，体现探究实践与态度责任|

Sheet1 双向细目表 题号 考查知识点 题型 分值 难度系数 1 发酵工程 - 微生物培养与无菌技术操作规范 单项选择题 2 0.85 2 细胞工程 - 植物组织培养与植物体细胞杂交原理 单项选择题 2 0.82 3 基因工程 - 工具酶（限制酶、DNA 连接酶）的作用原理 单项选择题 2 0.8 4 细胞工程 - 动物细胞培养的操作规范与核心原理 单项选择题 2 0.78 5 生物技术的安全性与伦理问题 - 我国相关法律法规与伦理准则 单项选择题 2 0.8 6 生物技术的安全性与伦理问题 - 生物安全相关规范 单项选择题 2 0.75 7 发酵工程 - 发酵工程的基本环节与操作规范 单项选择题 2 0.7 8 基因工程 - PCR 技术的原理与操作规范 单项选择题 2 0.68 9 细胞工程 - 单克隆抗体制备的流程与核心原理 单项选择题 2 0.65 10 生物技术的安全性与伦理问题 - 转基因生物的安全性分析 单项选择题 2 0.65 11 细胞工程 - 植物体细胞杂交技术的进阶应用 单项选择题 2 0.6 12 细胞工程 - 体细胞核移植技术的原理与操作规范 单项选择题 2 0.6 13 基因工程 - 蛋白质工程的原理与基本流程 单项选择题 2 0.62 14 基因工程 + 发酵工程 - 工程菌构建与发酵生产的综合应用 单项选择题 2 0.62 15 基因工程 + 细胞工程 - 基因编辑技术与动物细胞培养的综合应用 单项选择题 2 0.6 16 基因工程 - 基因工程在环境修复中的应用 单项选择题 2 0.58 17 细胞工程 + 基因工程 - 微流控技术在生物技术中的应用 单项选择题 2 0.55 18 细胞工程 + 发酵工程 - 动物细胞培养与发酵工程的综合应用 单项选择题 2 0.55 19 基因工程 + 植物细胞工程 - 转基因植物培育流程、遗传规律分析、分子机制探究 非选择题 16 0.6 20 基因工程 + 发酵工程 - 工程菌构建、发酵过程调控、产物分离提纯的综合应用 非选择题 16 0.55 21 基因工程 + 细胞工程 - CAR-T 疗法原理、动物细胞培养、靶向治疗机制分析 非选择题 16 0.52 22 全册综合（基因工程 + 细胞工程 + 胚胎工程 + 生物安全）- 基因编辑、核移植、胚胎工程、产业化安全评价 非选择题 16 0.5 合计 - - 100 全卷平均 0.62 $ 湖北省高二生物下学期阶段测试卷 一、单项选择题：本题共18小题，每小题2分，共36分。 1. 下列关于微生物培养与无菌技术的操作，符合规范的是（ ） A. 培养基在高压蒸汽下灭菌15-30min，可杀灭所有微生物的芽孢和孢子 B. 倒平板时，需将培养皿盖完全打开，避免培养基溅到皿盖上造成污染 C. 接种环在每次划线前后，仅需在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 D. 为保证无菌环境，超净工作台在使用前后，仅需用紫外线照射消毒即可 2. 植物组织培养是植物细胞工程的核心技术之一，下列相关叙述正确的是（ ） A. 菊花茎段组织培养过程中，必须全程避光培养才能诱导愈伤组织形成 B. 植物体细胞杂交过程中，用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，体现了酶的专一性 C. 愈伤组织是一团高度分化、具有旺盛分裂能力的薄壁细胞 D. 植物组织培养只能用于快速繁殖优良品种，不能用于作物脱毒 3. 基因工程的操作离不开工具酶的作用，下列关于限制酶和DNA连接酶的叙述，正确的是（ ） A. 限制酶只能识别并切割6个核苷酸组成的回文序列 B. E・coli DNA连接酶既能连接黏性末端，也能高效连接平末端 C. 限制酶切割DNA分子后，均可产生黏性末端 D. DNA连接酶可恢复DNA分子中相邻脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键 4. 动物细胞培养是动物细胞工程的基础，下列相关叙述正确的是（ ） A. 动物细胞培养所需的气体环境为95%的氧气和5%的CO₂ B. 为防止杂菌污染，需在培养基中加入大量的抗生素 C. 贴壁生长的动物细胞，在培养瓶中会出现接触抑制的现象 D. 原代培养的细胞传至10代左右，均可无限传代形成细胞系 5. 下列关于生物技术安全性与伦理问题的叙述，符合我国相关法律法规和伦理准则的是（ ） A. 为提高人类素质，可对健康人类胚胎进行基因编辑以增强智力 B. 我国禁止生殖性克隆人，不反对治疗性克隆的相关研究 C. 转基因作物的种植会造成基因污染，我国禁止所有转基因作物的产业化种植 D. 为防控传染病，可研发并使用针对人类的生物武器 6. 下列关于生物安全的相关叙述，错误的是（ ） A. 我国出台了《生物安全法》，为保障国家生物安全提供了法律依据 B. 外来物种入侵会破坏当地的生物多样性，威胁生态安全 C. 实验室中高致病性病原微生物的操作，需在符合等级要求的生物安全实验室中进行 D. 生物武器仅由致病菌组成，传染性强，危害极大 7. 发酵工程已广泛应用于食品、医药、工业等多个领域，下列关于发酵工程基本环节的叙述，错误的是（ ） A. 选育性状优良的菌种是发酵工程的前提，可通过诱变育种、基因工程育种等方式获得 B. 培养基的配制需满足菌种的营养需求，且发酵培养基与菌种扩大培养的培养基成分完全一致 C. 发酵过程中需实时监测温度、pH、溶解氧、罐压等参数，保证发酵的正常进行 D. 发酵产品的分离提纯，可根据产品的性质选择过滤、沉淀、萃取、蒸馏等方法 8. PCR技术是基因工程中扩增目的基因的核心技术，下列相关叙述正确的是（ ） A. PCR反应体系中需加入解旋酶，以解开DNA的双螺旋结构 B. 引物的长度和碱基序列决定了PCR扩增的特异性，需与模板DNA的两端序列互补配对 C. PCR 的延伸阶段，温度需控制在90℃以上，以保证 Taq 酶的活性 D. PCR 扩增的目的基因数量呈线性增长，30 个循环后可获得大量目的基因 9. 单克隆抗体在疾病诊断、治疗等领域有广泛应用，下列关于单克隆抗体制备的叙述，正确的是（ ） A. 需先将特定抗原注射到小鼠体内，获得能产生抗体的 T 淋巴细胞 B. 可用 PEG 融合法、电融合法等诱导 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合 C. 融合后的杂交瘤细胞，均可直接用于单克隆抗体的大规模生产 D. 单克隆抗体制备过程中，仅需进行一次筛选即可获得所需杂交瘤细胞 10. 2025年我国进一步扩大转基因抗虫耐除草剂玉米的产业化种植范围，下列相关叙述正确的是（ ） A. 转基因玉米的抗虫基因来自苏云金芽孢杆菌，其表达的 Bt 毒蛋白对所有生物均有毒性 B. 种植转基因抗虫玉米，可完全不使用农药，避免对环境造成污染 C. 转基因玉米的花粉可能将抗虫基因传播到近缘杂草中，造成基因污染 D. 转基因玉米的种植违反了生物多样性保护的原则，我国应全面禁止 11. 科研人员通过植物体细胞杂交技术，将耐盐碱的碱蓬与高产的普通小麦进行体细胞杂交，培育出耐盐碱高产小麦新品种。下列相关叙述错误的是（ ） A. 需先制备碱蓬和小麦的原生质体，再通过物理或化学方法诱导原生质体融合 B. 原生质体融合完成的标志是形成新的细胞壁，该过程与高尔基体密切相关 C. 融合后的杂种细胞，需通过植物组织培养技术才能发育为完整的植株 D. 该技术获得的新品种，染色体数目与普通小麦一致，可正常减数分裂产生可育配子 12. 体细胞核移植技术在良种家畜繁育、濒危动物保护、疾病模型构建等领域有重要应用，下列相关叙述正确的是（ ） A. 体细胞核移植过程中，需将体细胞的细胞核注入去核的受精卵中 B. 重构胚需激活后才能完成细胞分裂和发育进程 C. 体细胞核移植获得的克隆动物，遗传物质完全来自供核体细胞 D. 目前，体细胞核移植技术的成功率极高，已广泛应用于各个领域 13. 随着人工智能技术的发展，AI辅助蛋白质设计已成为蛋白质工程的重要手段，可快速设计出具有特定功能的全新蛋白质。下列关于蛋白质工程的叙述，正确的是（ ） A. 蛋白质工程直接对蛋白质分子进行改造，获得符合需求的蛋白质 B. 蛋白质工程的基本流程为：预期蛋白质功能→设计预期蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列 C. 蛋白质工程只能改造现有蛋白质，不能合成自然界中不存在的全新蛋白质 D. 蛋白质工程改造后的蛋白质，无法通过基因工程在工程菌中大规模生产 14. （原创）聚羟基脂肪酸酯（PHA）是一种由微生物合成的可完全生物降解的高分子材料，是解决白色污染的重要方向。科研人员通过基因工程将PHA合成相关基因导入大肠杆菌，构建工程菌后通过发酵工程大规模生产PHA。下列相关叙述错误的是（ ） A. 构建工程菌时，需将PHA合成基因与大肠杆菌的启动子等调控元件重组，保证目的基因正常表达 B. 发酵过程中需通过调控培养基的碳氮比、溶解氧等参数，提高工程菌的PHA合成效率 C. 发酵工程必须严格控制无菌环境，杂菌污染会导致发酵底物被消耗、产物纯度下降，甚至发酵失败 D. 工程菌发酵生产PHA的过程中无需严格控制无菌环境，因为大肠杆菌可抑制杂菌生长 15. （原创）2025年，我国自主研发的CRISPR/Cas9基因编辑疗法治疗输血依赖型β地中海贫血有重要进展，该疗法通过分离患者的造血干细胞，在体外编辑致病基因后，将编辑后的造血干细胞回输到患者体内，实现功能性治愈。下列相关叙述正确的是（ ） A. 该疗法中，造血干细胞的分离、体外培养及基因编辑，需严格遵循细胞培养与基因工程的技术规范 B. CRISPR/Cas9系统中的Cas9蛋白是一种DNA连接酶，可修复致病基因 C. 编辑后的造血干细胞回输患者体内后，可通过减数分裂增殖分化为红细胞 D. 该疗法属于生殖细胞基因编辑，可将编辑后的性状遗传给后代 16. （原创）土壤重金属污染是我国农业生态治理的重要难题，科研人员通过基因工程将重金属富集相关基因导入假单胞菌，构建出能高效富集镉、铅等重金属的工程菌，用于污染土壤的修复。下列相关叙述正确的是（ ） A. 构建工程菌时，常用感受态细胞法将重组表达载体导入假单胞菌 B. 该工程菌只能富集土壤中的重金属，不能降解重金属，因此无法修复土壤污染 C. 该工程菌的应用，仅涉及基因工程技术，与发酵工程无关 D. 为提高修复效率，可将工程菌直接投放到自然环境中，无需进行风险评估 17. （原创）微流控芯片技术是一种在微米级通道中操控流体的新型技术，可实现单细胞的精准捕获、基因测序、抗体筛选等操作，已广泛应用于细胞工程与基因工程领域。下列相关叙述错误的是（ ） A. 利用该芯片可实现单个杂交瘤细胞的精准分选，大幅提高单克隆抗体制备的筛选效率 B. 该芯片的单细胞测序技术，可精准分析单个细胞的基因表达情况，为肿瘤细胞的基因编辑提供依据 C. 细胞分选与培养过程对环境要求严格，无菌操作是保证细胞活性与实验成功的关键 D. 微流控芯片的操作对技术要求极低，普通实验室无需专业设备即可完成分选与培养操作 18. （原创）人造肉技术是未来食品产业的重要发展方向，其中细胞培养肉技术通过动物细胞工程获取肌肉细胞，结合发酵工程实现大规模培养生产；而植物基人造肉则通过发酵工程改造微生物，合成植物蛋白与血红素，模拟肉类的口感与营养。下列叙述错误的是（ ） A. 细胞培养肉技术中，动物细胞的大规模培养需依赖生物反应器，严格控制培养条件 B. 植物基人造肉的生产过程中，可通过基因工程改造酵母菌，使其合成动物血红素，提升产品口感 C. 动物细胞大规模培养需添加血清，血清中含有细胞生长所需的多种未知营养因子 D. 细胞培养肉的生产过程中，动物细胞的大规模培养无需添加血清，也无需控制无菌环境 二、非选择题：本题共4小题，共64分。 19. 2025年我国转基因抗虫耐除草剂玉米品种产业化种植面积突破1亿亩，该品种通过基因工程导入Bt抗虫基因与EPSPS耐除草剂基因，可有效防控玉米螟等鳞翅目害虫，同时耐受草甘膦除草剂，大幅减少农药使用，提升玉米产量与种植效率。回答下列问题： （1）基因工程操作的核心步骤是______；构建重组表达载体时，使用____________目的基因和载体，可避免载体和目的基因反向连接，保证目的基因正确插入。 （2）将重组载体导入玉米愈伤组织常用______法；愈伤组织可通过______切割技术发育为完整植株，该技术的原理是植物细胞的全能性。 （3）T₀代阳性植株自交，若T₁代抗虫植株∶不抗虫植株=3∶1，说明Bt基因整合到______上，且抗虫性状为显性；若分离比为1∶1，排除配子致死与染色体变异，原因是T₀代植株为嵌合体。 （4）田间部分转基因玉米抗虫效果下降，排除害虫抗药性与目的基因丢失，检测发现Bt基因mRNA水平显著低于正常植株。从分子水平分析，该现象的发生机制是________________________；可通过____________技术检测该机制对基因转录的影响。 20. 在“双碳”目标背景下，利用合成生物学技术生产可降解塑料聚羟基脂肪酸酯（PHA）已成为全球研发热点。PHA可被微生物完全降解为CO₂和水，替代传统石油基塑料，大幅降低碳排放。科研团队通过基因工程将含铜菌（该属细菌代谢多样性丰富，在环境修复与生物制造领域应用潜力显著。其多种菌株可高效降解苯酚、吲哚、2,4-D等有机污染物，用于废水处理和土壤修复。代表性菌株如Cupriavidus necator H16，能利用二氧化碳或有机废物合成聚羟基丁酸酯（PHB）等可降解塑料，是重要的细胞工厂）的PHA合成操纵子（组成型启动子是 24 小时常开的「长明灯开关」，诱导型启动子是只有特定信号触发才会开的「感应式开关」，二者都是控制基因是否启动表达的“开关”，核心差异在「是否需要触发条件、是否持续工作」）导入大肠杆菌，构建高产工程菌，再通过发酵工程实现PHA的规模化生产。回答下列问题： （1）构建重组质粒时，需将 PHA 合成操纵子与大肠杆菌 lac 乳糖诱导型启动子连接。组成型启动子的核心特点是____________，诱导型启动子的应用优势为____________。 （2）发酵培养中，出现发酵液溶氧持续下降、菌体增殖停滞、PHA合成量偏低的现象，其核心原理是__________；除提高通气量外，提升溶氧的措施还有________________。 （3）PHA为大肠杆菌胞内产物，发酵结束后可通过__________法分离菌体与发酵液；萃取法提纯PHA，利用的是PHA与杂质在有机溶剂中____________的差异。 （4）碳源充足、氮源限制时，菌体增殖减慢但PHA合成量显著提升，从微生物代谢角度分析其原理是____________；规模化生产中可采取的碳氮比调控策略为____________。 21. 嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法是近年来肿瘤免疫治疗的重大突破，2025年我国科研团队研发的靶向Claudin18.2的CAR-T疗法在晚期胃癌实体瘤治疗中取得重大进展，总缓解率超70%。该疗法的核心流程是：从患者外周血中分离T淋巴细胞，在体外通过基因工程技术将编码CAR的基因导入T细胞，使其表达CAR，获得CAR-T细胞；经扩增培养后，回输到患者体内，CAR-T细胞可特异性识别并杀伤肿瘤细胞。回答下列问题： （1）构建CAR基因重组表达载体时，需使用的工具酶为限制酶和______；选用T细胞特异性启动子驱动CAR基因表达，其核心作用是_______________。 （2）体外扩增CAR-T细胞时，培养箱中5%CO₂的作用是______；定期更换培养基，除补充营养外，还可______，保证细胞正常增殖。 （3）CAR-T细胞特异性杀伤肿瘤细胞，依赖于CAR蛋白与肿瘤细胞表面抗原的特异性识别，这体现了细胞膜的______功能；与传统化疗相比，CAR-T疗法的核心优势是______。 （4）为降低CAR-T疗法的脱靶风险，科研人员在CAR结构中引入肿瘤微环境特异性激活元件，该设计的作用原理是____________；从细胞工程角度，还可通过____________技术筛选高特异性的CAR-T细胞单克隆，进一步提升治疗安全性。 22.（原创） 2025 年中国农业科学院团队发布最新科研成果：针对奶牛乳腺炎（我国奶牛养殖产业中导致经济损失最严重的疾病，常规抗生素治疗易引发药物残留与耐药性问题），团队利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，将牛乳铁蛋白抗菌肽基因LFcinB精准导入荷斯坦高产奶牛的成纤维细胞基因组中，再通过体细胞核移植、胚胎工程等技术，成功培育出乳腺特异性表达LFcinB抗菌肽、兼具高产性能与抗乳腺炎特性的良种奶牛。回答下列问题： （1）将LFcinB基因定点整合到β-酪蛋白，可利用该基因的____________，实现LFcinB在乳腺细胞中特异性表达；与随机插入相比，定点整合可避免____________，提升育种安全性与性状稳定性。 （2）体细胞核移植时，选用MⅡ中期卵母细胞作为核受体，原因是____________；重构胚培养至囊胚阶段时，需取______细胞进行基因与性别鉴定，避免损伤胚胎本体。 （3）部分克隆奶牛基因组中已整合完整LFcinB基因，测序无突变，但乳腺中未检测到该基因的mRNA。从表观遗传角度分析，该现象的发生机制是_______________；该调控方式的特点是_______________（答出 1 点即可）。 （4）该基因编辑奶牛产业化推广前，需通过国家农业转基因生物安全评价，其中食品安全性评价需重点检测____________；从生态安全角度，产业化养殖需采取的核心防控措施是_______________，避免基因扩散影响生物多样性。 ( 第 1 页 共 7 页 ) 学科网（北京）股份有限公司 $ 湖北省高二生物下学期阶段测试卷参考答案与解析 一、单项选择题（共18小题，每小题2分，共36分） 客观题标准答案与解析 题号 标准答案 核心考点 详细解析 1 A 微生物培养与无菌技术 【正确选项】A：高压蒸汽灭菌（121℃、100kPa条件下15-30min）可杀灭包括芽孢、孢子在内的所有微生物，表述规范正确。 【错误选项】B：倒平板时需将培养皿盖打开一条缝隙，完全打开会造成杂菌污染；C：接种环灼烧灭菌需在酒精灯外焰（温度最高）进行，内焰无法达到灭菌效果；D：超净工作台使用前后，除紫外线照射外，还需用70%酒精擦拭台面，仅紫外线照射无法达到无菌要求。 2 B 植物组织培养与植物体细胞杂交 【正确选项】B：植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，用纤维素酶和果胶酶专一性去除细胞壁，体现了酶的专一性，表述正确。 【错误选项】A：菊花茎段组织培养中，愈伤组织诱导阶段需避光，再分化阶段需要光照，并非全程避光；C：愈伤组织是一团高度液泡化、无定形、未分化的薄壁细胞，并非高度分化；D：植物组织培养可通过茎尖分生组织培养获得脱毒苗，并非只能用于快速繁殖。 3 D 基因工程的工具酶 【正确选项】D：DNA连接酶的作用是恢复DNA分子中相邻脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，表述正确。 【错误选项】A：限制酶可识别4、6、8个核苷酸组成的回文序列，并非只能识别6个核苷酸的序列；B：E・coliDNA连接酶只能连接黏性末端，T4DNA连接酶可高效连接平末端；C：限制酶切割DNA后，可产生黏性末端或平末端，并非只能产生黏性末端。 4 C 动物细胞培养 【正确选项】C：贴壁生长的动物细胞，在培养瓶中增殖至相互接触时，会停止分裂，出现接触抑制现象，表述正确。 【错误选项】A：动物细胞培养的气体环境为95%空气（提供氧气）+5%CO₂，并非95%氧气；B：为防止杂菌污染，需在培养基中加入适量抗生素，大量添加会损伤动物细胞；D：原代培养的细胞传至10代左右，大部分会衰老死亡，只有少数发生突变的细胞才能无限传代形成细胞系。 5 B 生物技术的安全性与伦理问题 【正确选项】B：我国明确禁止生殖性克隆人，不反对治疗性克隆的相关研究，符合我国法律法规与伦理准则。 【错误选项】A：我国禁止对健康人类胚胎进行非治疗性的基因编辑；C：我国已批准部分转基因作物（如抗虫耐除草剂玉米）的产业化种植，并非全面禁止；D：我国明确禁止研发、生产和使用生物武器。 6 D 生物安全相关规范 【正确选项】D（本题选错误项）：生物武器包括致病菌、病毒、生化毒剂，以及经过基因重组的致病菌等，并非仅由致病菌组成，表述错误。 【其他选项】A、B、C均符合我国《生物安全法》相关规定，表述正确。 7 B 发酵工程的基本环节 【正确选项】B（本题选错误项）：菌种扩大培养的培养基以促进菌体增殖为目标，发酵生产的培养基以促进产物合成为目标，二者碳氮比、营养成分差异显著，并非完全一致，表述错误。 【其他选项】A、C、D均符合发酵工程的技术规范，表述正确。 8 B PCR技术的原理与操作 【正确选项】B：引物的碱基序列需与模板DNA的两端序列互补配对，引物的长度和序列决定了PCR扩增的特异性，表述正确。 【错误选项】A：PCR技术通过90℃以上的高温使DNA双链解旋，不需要加入解旋酶；C：PCR的延伸阶段，温度需控制在72℃左右，保证Taq酶的最佳活性；D：PCR扩增的目的基因数量呈指数增长，并非线性增长。 9 B 单克隆抗体制备 【正确选项】B：诱导动物细胞融合的常用方法包括PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法，表述正确。 【错误选项】A：将特定抗原注射到小鼠体内，获得的是能产生抗体的B淋巴细胞，并非T淋巴细胞；C：融合后的杂交瘤细胞需经过两次筛选，只有能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，才能用于单克隆抗体的大规模生产；D：单克隆抗体制备过程中，需进行两次筛选，第一次筛选杂交瘤细胞，第二次筛选能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞。 10 C 转基因生物的安全性 【正确选项】C：转基因玉米的花粉可通过风媒传播，将抗虫基因传递给近缘杂草，造成基因污染，表述正确。 【错误选项】A：Bt毒蛋白仅对鳞翅目害虫的肠道细胞有毒性，对哺乳动物、人类等其他生物无毒；B：种植转基因抗虫玉米可大幅减少农药使用，并非完全不使用农药；D：我国批准的转基因作物产业化种植，经过了严格的安全评价，符合生物多样性保护的要求，并非全面禁止。 11 D 植物体细胞杂交技术 【正确选项】D（本题选错误项）：植物体细胞杂交获得的新品种，染色体数目为两个亲本染色体数目之和，与普通小麦染色体数目不一致，减数分裂时易发生联会紊乱，表述错误。 【其他选项】A、B、C均符合植物体细胞杂交的技术规范，表述正确。 12 B 体细胞核移植技术 【正确选项】B：重构胚需经过物理或化学方法激活后，才能完成细胞分裂和发育进程，表述正确。 【错误选项】A：体细胞核移植过程中，需将体细胞的细胞核注入去核的MⅡ中期卵母细胞中，并非去核的受精卵；C：克隆动物的细胞核遗传物质来自供核体细胞，细胞质遗传物质来自卵母细胞，并非完全来自供核体细胞；D：目前体细胞核移植技术的成功率极低，并未广泛应用于各个领域。 13 B 蛋白质工程的原理与流程 【正确选项】B：蛋白质工程的基本流程为：预期蛋白质功能→设计预期蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列，表述正确。 【错误选项】A：蛋白质工程通过改造基因来间接改造蛋白质，并非直接对蛋白质分子进行改造； C：蛋白质工程可合成自然界中不存在的全新蛋白质； D：蛋白质工程改造后的基因，可通过基因工程在工程菌中大规模生产对应的蛋白质。 14 D 基因工程与发酵工程的综合应用 【正确选项】D（本题选错误项）：发酵工程必须严格控制无菌环境，杂菌污染会导致发酵底物被消耗、产物纯度下降，甚至发酵失败，大肠杆菌无广谱抑菌作用，无法抑制杂菌生长，表述错误。 【其他选项】A、B、C均符合基因工程与发酵工程的技术规范，表述正确。 15 A 基因编辑技术与动物细胞培养 【正确选项】A：造血干细胞的分离、体外培养及基因编辑，需严格遵循动物细胞培养与基因工程的无菌操作、技术规范，表述正确。 【错误选项】B：CRISPR/Cas9系统中的Cas9蛋白是限制性核酸内切酶，可精准切割DNA双链，并非DNA连接酶；C：编辑后的造血干细胞回输患者体内后，通过有丝分裂增殖分化为红细胞，不进行减数分裂；D：该疗法编辑的是体细胞（造血干细胞），不属于生殖细胞基因编辑，无法将编辑后的性状遗传给后代。 16 A 基因工程在环境修复中的应用 【正确选项】A：将重组表达载体导入细菌等原核生物，常用感受态细胞法，表述正确。 【错误选项】B：工程菌富集土壤中的重金属后，通过回收菌体可去除土壤中的重金属，实现土壤污染修复；C：工程菌的大规模生产与田间应用，需结合发酵工程技术实现菌体的规模化培养；D：工程菌投放到自然环境前，必须进行严格的生物安全风险评估，不可直接投放。 17 D 微流控技术在生物技术中的应用 【正确选项】D（本题选错误项）：微流控芯片的单细胞分选与培养操作，需要专业的仪器设备与技术培训，普通实验室无专业设备无法完成，表述错误。 【其他选项】A、B、C均符合微流控技术的应用原理与操作规范，表述正确。 18 D 细胞工程与发酵工程的综合应用 【正确选项】D（本题选错误项）：动物细胞的大规模培养必须严格控制无菌环境，否则会发生杂菌污染导致细胞死亡；血清中含有细胞生长所需的多种未知营养因子，常规大规模培养必须添加血清，表述错误。 【其他选项】A、B、C均符合动物细胞培养与发酵工程的技术规范，表述正确。 二、非选择题（共4小题，共64分） 19.（16分） （1）【标准答案】 第一空：基因表达载体的构建（重组表达载体的构建）；第二空：两种识别序列不同的限制酶（双酶切）切割 【评分细则】 第一空：满分2分。答“基因表达载体的构建”“重组质粒的构建”得2分；答“构建重组载体”得1分；表述不完整、错误不得分。 第二空：满分2分。答“两种不同的限制酶”“双酶切”得2分；只答“限制酶”得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：基因表达载体的构建；两种识别序列不同的限制酶双酶切 部分得分答案：构建重组质粒；限制酶（得1+1=2分） 不得分答案：获取目的基因；DNA连接酶（0分） （2）【标准答案】 第一空：农杆菌转化；第二空：植物组织培养 【评分细则】 第一空：满分2分。答“农杆菌转化法”得2分；表述不完整不得分。 第二空：满分2分。答“植物组织培养”得2分；答“植物细胞培养”得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：农杆菌转化；植物组织培养 部分得分答案：农杆菌；植物细胞培养（得1+1=2分） 不得分答案：显微注射；动物细胞培养（0分） （3）【标准答案】 第一空：玉米细胞一对同源染色体的其中一条上；第二空：仅部分生殖细胞中整合了Bt抗虫基因 【评分细则】 第一空：满分2分。答出“整合到同源染色体的一条上”“Bt基因整合到一条染色体上”得2分；表述不完整得1分；表述错误不得分。 第二空：满分3分。答出“仅部分生殖细胞含有Bt基因”“生殖细胞中仅一半携带Bt基因”得3分；答“嵌合体导致配子类型比例异常”得2分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分：玉米一对同源染色体的其中一条染色体上；仅部分生殖细胞中整合了Bt抗虫基因 部分得分答案：染色体上；配子中只有一半有Bt基因（得1+2=3分） 不得分答案：细胞质中；植株发生了基因突变（0分） （4）【标准答案】 第一空：Bt基因的启动子区域发生DNA甲基化修饰，抑制了基因的转录过程；第二空：RT-PCR（反转录PCR） 【评分细则】 第一空：满分3分。答出“DNA甲基化抑制基因转录”“组蛋白修饰导致基因沉默”得3分；仅答“基因转录受抑制”得1分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答“RT-PCR”“反转录PCR”得2分；答“PCR技术”得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：Bt基因启动子发生DNA甲基化，抑制了基因的转录；RT-PCR技术 部分得分答案：基因转录被抑制；PCR技术（得1+1=2分） 不得分答案：基因发生了突变；抗原-抗体杂交（0分） 20.（16分） （1）【标准答案】 第一空：可在宿主细胞中持续、不受调控地启动下游基因的转录（无需诱导即可持续启动基因表达）；第二空：可人为调控目的基因的表达时机，避免菌体增殖期的代谢负担，提升PHA合成效率与工程菌遗传稳定性 【评分细则】 第一空：满分1分。答出“持续启动基因转录”“无需诱导持续表达”得1分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答出“调控表达时机”“减少菌体代谢负担”任意1点得1分，答全2点得2分；表述不完整酌情给分。 【分等级答题示例】 满分答案：无需诱导即可持续启动下游基因的转录；可人为控制目的基因的表达时间，在菌体增殖期不表达以减少代谢负担，发酵期诱导表达提高PHA产量 部分得分答案：持续表达基因；可以提高目的基因的表达量（得1+1=2分） 不得分答案：只能在诱导后表达；可以让目的基因在大肠杆菌中表达（0分） （2）【标准答案】 第一空：菌体增殖过快，发酵液溶氧消耗速率远超补充速率，菌体有氧呼吸受抑制，增殖与产物合成受阻；第二空：提高搅拌转速、适当降低发酵温度、补充新鲜培养基稀释菌体密度（答出任意1点即可） 【评分细则】 第一空：满分2分。答出“溶氧不足导致有氧呼吸受抑制”得2分；仅答“菌体增殖过快导致营养不足”得1分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答出任意1项合理措施得2分；答“增加培养基营养”得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：菌体增殖过快，溶氧消耗过快，有氧呼吸受抑制，菌体增殖和PHA合成受阻；提高发酵罐的搅拌转速 部分得分答案：溶氧不足，菌体代谢异常；降低发酵温度（得1+2=3分） 不得分答案：杂菌污染导致菌体死亡；添加更多的碳源（0分） （3）【标准答案】 第一空：离心（或过滤）；第二空：溶解度 【评分细则】 第一空：满分1分。答“离心”或“过滤”得1分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答“溶解度”得2分；答“密度”“沸点”等错误表述不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：离心；溶解度 部分得分答案：过滤；溶解性（得1+1=2分） 不得分答案：萃取；分子大小（0分） （4）【标准答案】 第一空：氮源限制时，菌体增殖相关代谢受抑制，细胞内的碳源代谢流更多流向PHA合成的储能代谢途径；第二空：发酵前期使用高氮培养基促进菌体快速增殖，达到目标菌体密度后，更换为低氮高碳培养基诱导PHA高效合成 【评分细则】 第一空：满分3分。答出“氮源限制抑制增殖代谢”“碳源流向PHA合成”2点得3分；答出1点得1-2分；表述错误不得分。 第二空：满分3分。答出“分阶段调控碳氮比”“前期高氮促增殖，后期低氮促合成”得3分；仅答“控制培养基碳氮比”得1分；表述不完整酌情给分。 【分等级答题示例】 满分答案：氮源不足时，菌体无法大量增殖，碳源主要用于合成PHA储存起来；发酵前期用高氮培养基让菌体大量繁殖，后期换低氮高碳培养基诱导PHA大量合成 部分得分答案：氮源少菌体增殖慢，更多碳源用于合成PHA；控制培养基的碳氮比（得2+1=3分） 不得分答案：氮源限制导致菌体死亡，PHA释放到培养基中；一直使用高碳低氮培养基（0分） 21.（16分） （1）【标准答案】 第一空：DNA连接酶；第二空：使CAR基因仅在T细胞中特异性表达，避免在其他正常组织细胞中表达，降低非特异性杀伤风险，提升治疗安全性 【评分细则】 第一空：满分1分。答“DNA连接酶”“T4DNA连接酶”得1分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答出“T细胞特异性表达”“降低脱靶风险”任意1点得1分，答全2点得2分；表述不完整酌情给分。 【分等级答题示例】 满分答案：DNA连接酶；使CAR基因只在T细胞中表达，避免在其他细胞中表达引发脱靶效应，提高治疗的安全性 部分得分答案：DNA连接酶；提高CAR基因的表达量（得1+1=2分） 不得分答案：限制酶；让CAR基因在所有细胞中表达（0分） （2）【标准答案】 第一空：维持培养液的pH稳定；第二空：清除细胞代谢产生的有毒有害废物，避免代谢废物积累损伤细胞 【评分细则】 第一空：满分1分。答“维持培养液pH稳定”得1分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答出“清除代谢废物”“避免细胞损伤”得2分；仅答“防止细胞密度过大”得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：维持培养液的pH稳定；清除细胞代谢产生的有毒物质，防止其积累对细胞造成伤害 部分得分答案：提供氧气；给细胞补充营养（得0+0=0分） 不得分答案：为细胞提供碳源；促进细胞分裂（0分） （3）【标准答案】 第一空：进行细胞间的信息交流；第二空：特异性强，仅杀伤靶抗原阳性的肿瘤细胞，对正常组织损伤小，副作用远低于化疗；可在体内持续增殖，发挥长效抗肿瘤作用，对化疗耐药肿瘤仍有杀伤效果（答出任意1点即可） 【评分细则】 第一空：满分2分。答“进行细胞间的信息交流”“细胞识别”得2分；答“控制物质进出细胞”等错误表述不得分。 第二空：满分2分。答出任意1点优势得2分；仅答“治疗效果好”得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：进行细胞间的信息交流；特异性强，只杀伤肿瘤细胞，对正常细胞损伤小，副作用比化疗小 部分得分答案：细胞识别；可以杀死肿瘤细胞（得2+1=3分） 不得分答案：细胞膜的流动性；治疗成本更低（0分） （4）【标准答案】 第一空：使CAR蛋白仅在肿瘤微环境中被激活并发挥杀伤功能，在正常组织中处于失活状态，避免对正常细胞的非特异性杀伤，降低脱靶风险；第二空：有限稀释法（单克隆化培养、流式细胞术分选，答出任意1项即可） 【评分细则】 第一空：满分3分。答出“仅在肿瘤微环境中激活”“降低脱靶效应”2点得3分；答出1点得1-2分；表述错误不得分。 第二空：满分3分。答出“单克隆化培养”“有限稀释法”“流式细胞术分选”任意1项得3分；仅答“动物细胞融合”得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：让CAR蛋白只在肿瘤微环境中被激活，在正常组织中不激活，避免杀伤正常细胞，降低脱靶风险；有限稀释法进行单克隆化培养筛选 部分得分答案：可以提高CAR-T细胞的靶向性；细胞融合技术（得1+1=2分） 不得分答案：让CAR蛋白在所有组织中都激活；PCR技术（0分） 22.（16分） （1）【标准答案】 第一空：乳腺特异性启动子；第二空：随机插入导致宿主正常基因被破坏、基因沉默或异位表达等问题 【评分细则】 第一空：满分1分。答“乳腺特异性启动子”得1分；仅答“启动子”得0分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答出“破坏正常基因”“基因沉默”任意1点得1分，答全2点得2分；表述不完整酌情给分。 【分等级答题示例】 满分答案：乳腺特异性启动子；避免随机插入破坏奶牛的正常基因，或导致目的基因沉默无法表达 部分得分答案：启动子；避免基因突变（得0+1=1分） 不得分答案：终止子；让目的基因表达量更高（0分） （2）【标准答案】 第一空：MⅡ中期卵母细胞的细胞质中含有促进体细胞核重编程、恢复细胞全能性的因子，且细胞体积大，易操作；第二空：滋养层 【评分细则】 第一空：满分2分。答出“含有核重编程、恢复细胞全能性的因子”得2分；仅答“细胞体积大、易操作”得1分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答“滋养层细胞”得2分；答“内细胞团”得0分。 【分等级答题示例】 满分答案：MⅡ中期卵母细胞的细胞质中有能让体细胞核恢复全能性的因子，且细胞大，容易操作；滋养层 部分得分答案：卵母细胞体积大，易操作；内细胞团（得1+0=1分） 不得分答案：卵母细胞的细胞核大；卵细胞（0分） （3）【标准答案】 第一空：LFcinB基因的启动子区域发生DNA甲基化修饰，抑制了基因的转录过程；第二空：不改变基因的碱基序列，但可稳定遗传给子代细胞；易受环境因素影响，具有可逆性（答出任意1点即可） 【评分细则】 第一空：满分2分。答出“DNA甲基化抑制基因转录”得2分；仅答“基因转录受抑制”得1分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答出任意1点表观遗传的核心特点得2分；表述不完整得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：LFcinB基因的启动子发生DNA甲基化，抑制了基因的转录；不改变基因的碱基序列，但可以稳定遗传给子代细胞 部分得分答案：基因发生了表观遗传修饰；可以改变生物的性状（得1+1=2分） 不得分答案：基因发生了突变；改变了基因的碱基序列（0分） （4）【标准答案】 第一空：牛奶中是否存在异常表达产物、是否含有过敏原、是否符合国家食品安全标准；第二空：严格限定养殖范围，建立生殖隔离管控体系，防止该基因编辑奶牛与野生近缘物种杂交，避免基因扩散 【评分细则】 第一空：满分3分。答出“异常表达产物”“过敏原”“食品安全”任意2点得3分；答出1点得1-2分；表述错误不得分。 第二空：满分2分。答出“建立生殖隔离”“防止基因扩散”得2分；仅答“严格管控养殖环境”得1分；表述错误不得分。 【分等级答题示例】 满分答案：牛奶中是否有异常的表达产物、是否含有过敏原，是否符合食品安全标准；严格控制养殖范围，建立生殖隔离，防止与野生近缘物种杂交造成基因扩散 部分得分答案：牛奶是否安全；不让奶牛跑到野外（得1+1=2分） 不得分答案：奶牛的生长速度；杀死所有克隆奶牛（0分） 学科网（北京）股份有限公司 $