精品解析：黑龙江佳木斯市郊区佳木斯市第一中学2025-2026学年度第二学期二月考考试生物试题

佳一中2025-2026学年度第二学期高二月考考试 生物试题 时间：75分钟　总分：100分 一、单选题（共20道小题，每题1.5分，共30分） 1. 下列有关传统发酵技术的描述，正确的是（　　） A. 传统发酵技术所用的菌种一般是接种的纯净的菌种 B. 传统发酵技术是各种微生物在有氧条件下将大分子有机物分解成小分子有机物 C. 传统发酵技术的目的是获得发酵产品或更多的微生物 D. 利用传统发酵技术制作的食品有果酒、果醋、泡菜、酱油和豆豉等 2. 生物技术就像一把“双刃剑”，下列叙述错误的是（　　） A. 生物武器是用病毒类、致病菌及生化毒剂类等来形成杀伤力 B. 干细胞培养在临床医学等领域前景广泛，但也存在导致肿瘤发生的风险 C. 食用转基因食品，其中的基因经消化道吸收后会整合到人的基因组中 D. 反对设计试管婴儿的原因之一是避免有人滥用此技术选择性设计婴儿 3. 腐乳是一种传统发酵食品。制作时需要将豆腐浸入含有酵母菌、曲霉和毛霉等微生物的卤汤中发酵。下列有关说法错误的是（ ） A. 微生物产生的酶系，能够将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸 B. 酵母菌、曲霉和毛霉等微生物参与了豆腐的发酵，其中起主导作用的是曲霉 C. 霉豆腐具有特有的鲜味是因为微生物在发酵时产生了不同的代谢产物 D. 发酵过程中酵母菌、曲霉和毛霉等微生物在数量上相互制约 4. 蛋白质工程的基本工作思路是（　　） ①合成DNA ②预计蛋白质的功能 ③推测DNA序列 ④设计蛋白质的结构 ⑤推测氨基酸的序列 ⑥将合成的DNA导入受体细胞并表达 A. ②④⑤③①⑥ B. ④②⑥③⑤① C. ④①②③⑤⑥ D. ③④⑤①②⑥ 5. 下列有关培养基的叙述，错误的是（　　） A. 培养基中一般都含有碳源、氮源、水和无机盐等主要营养物质 B. 根据微生物对碳源需求上的差别，可在培养基中增减不同的碳源 C. 某些细菌生长过程中需要额外补充营养物质，如在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素 D. 微生物只能在琼脂固体培养基表面生长以及产生菌落 6. 防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键。下列叙述错误的是（ ） A. 利用微生物能够寄生于多种细菌体内使细菌裂解，可实现生物消毒 B. 利用紫外线对超净工作台进行消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果 C. 利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌时，应在160℃的热空气中维持2～3h D. 利用酒精灯对金属用具进行灼烧灭菌时，应在酒精灯火焰充分燃烧层进行 7. 如图是倒平板的操作，下列相关叙述正确的是（　　） A. 正确的操作顺序是丙→乙→甲→丁 B. 上述步骤中需要在酒精灯火焰附近进行的有甲、乙、丙 C. 上述培养基中不含琼脂，所以该培养基为液体培养基 D. 上述过程制备的培养基只能用于菌体的分离 8. 某实验小组利用滤膜法检测饮料中微生物的数量，原理是将待测样品通过微孔滤膜过滤富集后，再将滤膜置于培养基上培养，根据滤膜上的菌落数推算出样品中微生物的数量。过程如图所示。 下列说法错误的是（ ） A. 实验用到滤膜和水样都需要提前灭菌处理 B. 应选取菌落数为30~300的平板进行计数 C. 统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少 D. 滤膜孔径过大可能导致平板上长不出菌落 9. 关于动物细胞培养的条件，下列叙述错误的是（　　） A. 进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等分散细胞 B. 哺乳动物细胞培养的温度均需在（36.5±0.5）℃为宜 C. 进行动物细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶 D. 进行动物细胞培养时，气体环境由95%空气和5%CO₂的混合气体组成 10. 下列是关于发酵工程及其应用的叙述，正确的是（　　） A. 菌种的扩大培养与发酵罐内发酵所需的培养条件是相同的 B. 在菌种确定之前，要选择原料制备培养基 C. 接种和发酵完成后都需要对培养基进行灭菌 D. 微生物农药是利用微生物或其代谢物来防治病虫害 11. 植物细胞工程的应用取得了显著的社会效益和经济效益，以下技术和相应优点的对应关系中，正确的是（ ） A. 微型繁殖技术——打破生殖隔离 B. 单倍体育种技术——利于获得突变体 C. 植物体细胞杂交技术——精准控制成体性状 D. 植物组织培养——不占用耕地，几乎不受季节限制 12. 下列关于受精过程的叙述，错误的是（　　） A. 精子入卵后有核膜破裂和再生的现象 B. 自然条件下，受精在子宫中完成 C. 精子与卵细胞膜相互融合，精子入卵与细胞膜的结构特性有关 D. 在胚胎工程操作中，常以观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志 13. 航天员叶光富和王亚平在天宫课堂上展示了培养的心肌细胞跳动的视频。下列相关叙述正确的是（ ） A. 培养心肌细胞的器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌 B. 培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳 C. 心肌细胞在培养容器中通过有丝分裂不断增殖 D. 心肌细胞在神经细胞发出的神经冲动的支配下跳动 14. 组织培养可快速繁殖植物，得到的试管苗常先移至草炭土或蛭石中炼苗，苗健壮后可移栽定植。关于菊花的组织培养及幼苗的移栽，下列说法错误的是（　　） A. MS培养基的碳源一般用蔗糖而不用葡萄糖，以减少微生物污染 B. MS培养基、NAA溶液、6-BA溶液均可配制成母液，以减少称量的误差 C. 接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，避免倒插 D. 为防止杂菌污染，从接种外植体到生成试管苗尽量在同一个锥形瓶内完成 15. 2024年4月30日，上海长征医院联合中国科学院研究团队发表了一项干细胞领域的重要成果，即国际上首次利用自体干细胞来源的自体再生胰岛移植，成功治愈胰岛功能严重受损的糖尿病人，具体过程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 由患者外周血细胞诱导产生iPS细胞的过程类似于脱分化 B. iPS细胞可以分化为胰岛等多种组织但不属于全能干细胞 C. ENS细胞形成胰岛组织的过程中发生了遗传物质的改变 D. 该成果对解决异体移植排斥反应等问题具有重大意义 16. 单克隆抗体技术在生物工程中占有重要的地位，下列有关单克隆抗体叙述错误的是（ ） A. 利用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成“早早孕诊断试剂” B. 作为诊断试剂，具有准确、高效、快速、简易的优点，可定位诊断肿瘤、心血管畸形、白化病等疾病 C. 从临床试验来看，单克隆抗体主要用于癌症治疗，作用是定位而不是杀伤 D. 将某细菌的抗药基因导入小鼠细胞内不属于单克隆抗体在实践上的应用 17. 如图为哺乳动物细胞工程相关操作的示意图，b、c为不同的体细胞。下列分析错误的是（　　） A. 方法一获得的为克隆动物，a、b一般为同种生物的细胞，其中a为卵母细胞 B. 若通过方法一获得高产奶牛，则b细胞为高产奶牛的体细胞 C. 方法二中的b、c可以是同种生物的细胞，也可以是不同种生物的细胞 D. 用方法二获得杂交细胞与植物体细胞杂交的诱导融合方法完全相同 18. 下图为受精作用及胚胎发育示意图，a、b代表两个发育时期，下列叙述正确的是 A. 受精卵的DNA一半来自精子 B. a、b分别是原肠胚和囊胚时期 C. ①—④过程细胞只分裂不分化 D. a时期胚胎的内部开始出现含有液体的腔 19. 下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示同一种限制性内切酶的酶切位点。下列有关叙述正确的是（ ） A. 基因amp和tet是一对等位基因，常作为基因工程中的标记基因 B. 质粒指细菌细胞中能自我复制的小型环状的DNA和动植物病毒的DNA C. 限制性核酸内切酶的作用部位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的氢键 D. 用质粒4将目的基因导入大肠杆菌，该菌不能在含四环素的培养基上生长 20. 聚苯乙烯作为一种重要的高分子聚合物材料，难降解，污染环境。某兴趣小组为了从土壤中分离能分解聚苯乙烯的细菌，相关实验流程如图所示，每次稀释的倍数相同，统计平板上菌落数的平均值为52，计算出每克土壤中分解聚苯乙烯的细菌数量为2.6×106个。由此推测，该流程中x和y的值分别为（ ） A. 18、0.1 B. 9、0.2 C. 18、0.2 D. 无法求解 二、不定项选择（共5道小题，每题3分，共15分） 21. 为达到相应目的，必须通过分子检测的是（ ） A. 携带链霉素抗性基因受体菌的筛选 B. 产生抗人白细胞介素-8抗体的杂交瘤细胞的筛选 C. 转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定 D. 镰刀形细胞贫血症的诊断 22. 某小组以香蕉为材料进行“DNA粗提取与鉴定”实验，其步骤为：研磨→过滤→析出→鉴定。下列说法正确的是（　　） A. 研磨液中NaCl的作用是溶解DNA B. 可选择将香蕉研磨液离心后获取上清液进行后续操作 C. 在“析出”操作中使用未经过预冷的酒精溶液会导致DNA的粗提取量减少 D. 在“鉴定”操作中观察到蓝色越深，说明DNA纯度越高 23. 植物体细胞杂交技术可克服种间生殖隔离。下图是应用该技术获得“番茄-马铃薯”杂种植株，拓展了植物的种质资源。下列叙述不正确的是（　　） A. ④过程完成的标志是诱导再生出新的细胞壁 B. 愈伤组织是由已分化的细胞所构成的细胞团 C. 杂种细胞的染色体数一定是原细胞染色体数的2倍 D. 杂种植株中的遗传物质的表达存在相互干扰 24. 基因工程自20世纪70年代兴起后，在农牧业、医药卫生领域和食品工业等方面展示出广阔的前景。下列有关基因工程的叙述，不正确的是（　　） A. 基因工程操作程序的核心步骤是目的基因的获取 B. 限制酶可以切割磷酸二酯键形成平末端，也能切割氢键形成黏性末端 C. 基因工程可以按照人们的意愿创造符合需要的生物类型和产品 D. 花粉管通道法可以用微量注射器将含有目的基因的DNA溶液直接注入受精卵中 25. 用A和B两种限制酶同时和分别处理同一DNA片段，限制酶对应切点一定切开。两种酶切位点及酶切产物电泳分离结果如图1和图2所示。下列叙述正确的是（　　） A. 图1中限制酶A、B识别的核苷酸序列不相同 B. 图1中X代表的碱基对数为4500 C. 推测图1中Y是限制酶B的酶切位点 D. 推测图2中①是限制酶A处理得到的酶切产物 三、非选择题（共4道题，共55分） 26. 扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，其次级代谢产物棒曲霉素（Pat）是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示的实验，其中“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处，取样分离的5个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。请回答下列问题： （1）苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌两种微生物在结构上的主要区别是______。 （2）发酵工程中选育性状优良的菌种有哪三种方法______。活化扩展青霉菌种使用的培养基成分如下表，根据物理性质划分，该培养基属于______培养基，其中能为扩展青霉的生长繁殖提供能源的是______NaNO3的作用是______（答两点） 蔗糖 NaNO3 MgSO4 KCl FeSO4 KH2PO4 蒸馏水 30g 2g 0.5g 0.5g 0.01g 1g 1000mL （3）用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是______。 （4）接种扩展青霉前，应对苹果进行______（填“消毒”或“灭菌”）。研究人员测定了病斑直径为1、2、3cm的苹果中①～⑤号部位的Pat含量，请推测最可能的结果：______。 27. 为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法。请根据图示信息回答下面的问题： （1）试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的生物工程技术有______早期胚胎培养及胚胎移植技术等。胚胎移植是将胚胎移植到______动物体内，使之继续发育为新个体的技术。 （2）在体外受精前要对精子进行获能处理，其原因是刚排出的精子必须在______才能获得受精能力；精子体外获能可采用化学诱导法，诱导精子获能的药物是______（答出1点即可）。 （3）核移植时对MⅡ期卵母细胞去核其实是去除______复合物。图中获得试管牛的过程属于______（填“无性”或“有性”）生殖。 （4）图中激素处理可使供体______从而可培育更多的早期胚胎。代孕受体在移植前需要经过______处理，以便早期胚胎成功植入或着床。代孕受体的优良特性主要包括______为筛选出具有优良性状的母牛，胚胎移植前应取滋养层细胞做_____鉴定胚胎的性别。 28. 图中甲、乙分别表示质粒和含目的基因的DNA片段。几种可供选择使用的限制酶识别序列及其切割位点为EcoRI： -G↓AATTC-；BamH I ： -G↓GATCC-； BclI ： -T↓GATCA-；Sau3A I ：-↓GATC-。： 注：tetR表示四环素抗性基因；ampR表示氨苄青霉素抗性基因。 回答下列问题： （1）限制酶的作用是识别______，并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。限制酶_____（填“能”或“不能”）切割原核细胞自身的DNA，推测其理由是______。 （2）经限制酶BamHI切割后得到的DNA片段可以与上述其余限制酶中的______（填限制酶名称）切割后得到的DNA片段连接，请画出其切割后产生的末端______。图甲质粒经Sau3AI完全切割后可得到______种DNA片段。 （3）图甲与图乙经图丙中相应酶切后，成功构建了基因表达载体，其中图甲中的______（填“Tet”或“Amp”或“Tet和Amp”）在载体上可作为标记基因，用于含重组DNA分子受体细胞的筛选。 （4）DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征。如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能______，质粒DNA分子上有______便于外源DNA插入。质粒DNA分子上有标记基因（如某种抗生素抗性基因），利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是______。 29. 菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。如图是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答下列问题： 注：卡那霉素抗性基因（kanR）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感。 （1）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用Ca2+处理农杆菌，目的是使其处于______状态。 （2）将重组质粒导入农杆菌的目的是利用农杆菌能够______的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的______，最终形成转基因植株 （3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和______的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。 （4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据______的核苷酸序列设计特异引物，以______为模板进行第一轮扩增。PCR的产物一般通过______来鉴定，在凝胶中DNA分子的迁移速率与______DNA分子的大小和______等有关。利用添加______的凝胶对PCR。产物进行电泳后，在______下观察结果。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 佳一中2025-2026学年度第二学期高二月考考试 生物试题 时间：75分钟　总分：100分 一、单选题（共20道小题，每题1.5分，共30分） 1. 下列有关传统发酵技术的描述，正确的是（　　） A. 传统发酵技术所用的菌种一般是接种的纯净的菌种 B. 传统发酵技术是各种微生物在有氧条件下将大分子有机物分解成小分子有机物 C. 传统发酵技术的目的是获得发酵产品或更多的微生物 D. 利用传统发酵技术制作的食品有果酒、果醋、泡菜、酱油和豆豉等 【答案】D 【解析】 【详解】A、传统发酵技术一般利用原料表面或环境中天然存在的微生物作为菌种，并非接种的纯净菌种，接种纯净菌种多用于现代工业化发酵，A错误； B、传统发酵技术的发酵条件包含有氧和无氧两种，例如果酒、泡菜的制作均为无氧条件，并非都在有氧条件下进行，B错误； C、传统发酵技术的目的是获得人们需要的发酵产品，而非获得更多的微生物，C错误； D、果酒（酵母菌发酵）、果醋（醋酸菌发酵）、泡菜（乳酸菌发酵）、酱油和豆豉（霉菌发酵）均是利用传统发酵技术制作的常见食品，D正确。 2. 生物技术就像一把“双刃剑”，下列叙述错误的是（　　） A. 生物武器是用病毒类、致病菌及生化毒剂类等来形成杀伤力 B. 干细胞培养在临床医学等领域前景广泛，但也存在导致肿瘤发生的风险 C. 食用转基因食品，其中的基因经消化道吸收后会整合到人的基因组中 D. 反对设计试管婴儿的原因之一是避免有人滥用此技术选择性设计婴儿 【答案】C 【解析】 【详解】A、生物武器是指利用致病菌类、病毒类和生化毒剂类等作为战争武器，危害极大，A正确； B、干细胞培养在临床医学等领域前景广泛，比如用于治疗一些疑难疾病，但由于干细胞的分化和增殖等特性，也可能面临安全性问题，如肿瘤形成等，B正确； C、转基因食品中的基因在人体消化道内会被分解为小分子，不会整合到人的基因组中，C错误； D、为了防止有人滥用设计试管婴儿技术选择性设计婴儿，我国反对设计试管婴儿，D正确。 故选C。 3. 腐乳是一种传统发酵食品。制作时需要将豆腐浸入含有酵母菌、曲霉和毛霉等微生物的卤汤中发酵。下列有关说法错误的是（ ） A. 微生物产生的酶系，能够将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸 B. 酵母菌、曲霉和毛霉等微生物参与了豆腐的发酵，其中起主导作用的是曲霉 C. 霉豆腐具有特有的鲜味是因为微生物在发酵时产生了不同的代谢产物 D. 发酵过程中酵母菌、曲霉和毛霉等微生物在数量上相互制约 【答案】B 【解析】 【分析】千百年来，腐乳一直受到人们的喜爱。这是因为经过微生物的发酵，豆腐中的蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸，味道鲜美，易于消化吸收而腐乳本身又便于保存。多种微生物参与了豆腐的发酵如酵母、曲霉和毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。 【详解】A、微生物产生的蛋白酶能够将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，A正确； B、酵母、曲霉和毛霉等参与了豆腐的发酵，其中起主导作用的是毛霉，B错误； C、微生物在发酵的过程当中会产生不同的代谢产物，这些代谢产物使霉豆腐具有特有的味道，C正确； D、发酵过程中酵母、曲霉和毛霉生活在同一环境下，会竞争营养物质和空间，在数量上相互制约，D正确。 故选B。 4. 蛋白质工程的基本工作思路是（　　） ①合成DNA ②预计蛋白质的功能 ③推测DNA序列 ④设计蛋白质的结构 ⑤推测氨基酸的序列 ⑥将合成的DNA导入受体细胞并表达 A. ②④⑤③①⑥ B. ④②⑥③⑤① C. ④①②③⑤⑥ D. ③④⑤①②⑥ 【答案】A 【解析】 【详解】蛋白质工程的基本流程为：首先②预计蛋白质的功能，其次④设计满足功能的蛋白质结构，之后⑤推测该蛋白质对应的氨基酸序列，再根据密码子的对应关系③推测DNA序列，随后①人工合成目标DNA，最后⑥将合成的DNA导入受体细胞并表达获得目标蛋白质，A符合题意。 5. 下列有关培养基的叙述，错误的是（　　） A. 培养基中一般都含有碳源、氮源、水和无机盐等主要营养物质 B. 根据微生物对碳源需求上的差别，可在培养基中增减不同的碳源 C. 某些细菌生长过程中需要额外补充营养物质，如在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素 D. 微生物只能在琼脂固体培养基表面生长以及产生菌落 【答案】D 【解析】 【详解】A、培养基的核心作用是为微生物生长提供营养，一般都含有碳源、氮源、水和无机盐四类主要营养物质，A正确； B、不同微生物的碳源需求存在差异，如自养微生物可利用无机碳源，异养微生物必须利用有机碳源，因此可根据微生物对碳源的需求差异增减培养基中的碳源，实现特定微生物的选择培养，B正确； C、部分微生物自身无法合成生长所需的生长因子，需要额外补充，乳酸杆菌合成维生素的能力较弱，因此培养时需要在培养基中添加维生素作为生长因子，C正确； D、微生物可以在琼脂固体培养基表面或内部生长、形成菌落，在液体培养基中可生长繁殖，但不能形成菌落，D错误。 6. 防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键。下列叙述错误的是（ ） A. 利用微生物能够寄生于多种细菌体内使细菌裂解，可实现生物消毒 B. 利用紫外线对超净工作台进行消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果 C. 利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌时，应在160℃的热空气中维持2～3h D. 利用酒精灯对金属用具进行灼烧灭菌时，应在酒精灯火焰充分燃烧层进行 【答案】C 【解析】 【分析】获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染。无菌技术主要包括消毒和灭菌，常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法等；灭菌的方法有湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等。 【详解】A、有的微生物能够寄生于多种细菌体内使细菌裂解，因此可以使用这些微生物进行生物消毒，如净化污水、污泥，A正确； B、用紫外线照射30min，可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒石炭酸等消毒液，可以加强消毒效果，B正确； C、培养基应该用高压蒸汽灭菌，C错误； D、接种环等金属用具一般用灼烧灭菌，即直接在酒精灯火焰充分燃烧层灼烧灭菌，D正确。 故选C。 7. 如图是倒平板的操作，下列相关叙述正确的是（　　） A. 正确的操作顺序是丙→乙→甲→丁 B. 上述步骤中需要在酒精灯火焰附近进行的有甲、乙、丙 C. 上述培养基中不含琼脂，所以该培养基为液体培养基 D. 上述过程制备的培养基只能用于菌体的分离 【答案】AB 【解析】 【详解】A、倒平板的操作中，需要在无菌环境下操作，首先轻轻振荡灭菌后的锥形瓶，待冷却至50℃左右之后，然后在酒精灯附近灼烧锥形瓶瓶口灭菌，再在酒精灯附近进行倒平板操作，最后待培养基凝固后倒置存放，故正确的操作顺序为丙→乙→甲→丁，A正确； B、倒平板的核心要求是全程无菌操作，甲、乙、丙步骤都必须在酒精灯火焰的无菌区附近进行，避免空气中的杂菌污染培养基，B正确； C、图示操作为配制固体培养基的操作，C错误； D、固体平板培养基的用途非常广泛，除了分离纯化菌种，还可以用于活菌计数、菌落特征观察、菌种保藏等，并非只能用于分离，D错误。 8. 某实验小组利用滤膜法检测饮料中微生物的数量，原理是将待测样品通过微孔滤膜过滤富集后，再将滤膜置于培养基上培养，根据滤膜上的菌落数推算出样品中微生物的数量。过程如图所示。 下列说法错误的是（ ） A. 实验用到滤膜和水样都需要提前灭菌处理 B. 应选取菌落数为30~300的平板进行计数 C. 统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少 D. 滤膜孔径过大可能导致平板上长不出菌落 【答案】A 【解析】 【分析】微生物常见接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数渐减少，最后可能形成单个菌落；②将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】A、实验用到滤膜需要提前灭菌处理，水样不能灭菌，A错误； B、对微生物进行计数时，为了保证结果准确，通常选择菌落数在30~300的平板进行计数，B正确； C、当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，导致统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少，C正确； D、滤膜孔径过大，微生物可能没有被过滤出来，因而可能导致平板上长不出菌落，D正确。 故选A。 9. 关于动物细胞培养的条件，下列叙述错误的是（　　） A. 进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等分散细胞 B. 哺乳动物细胞培养的温度均需在（36.5±0.5）℃为宜 C. 进行动物细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶 D. 进行动物细胞培养时，气体环境由95%空气和5%CO₂的混合气体组成 【答案】B 【解析】 【详解】A、动物细胞培养前需将组织块分散为单个细胞，胰蛋白酶、胶原蛋白酶可分解细胞间的蛋白质成分，且不会损伤细胞，是常用的分散细胞的试剂，A正确； B、多数哺乳动物细胞培养的适宜温度为（36.5±0.5）℃，但并非所有哺乳动物细胞“均需”在该温度下培养，B错误； C、动物细胞培养需要保证气体交换，通常采用培养皿或松盖培养瓶，便于气体进入培养容器，C正确； D、动物细胞培养的气体环境为95%空气和5%CO2的混合气体，其中95%空气为细胞有氧呼吸提供O₂，5%CO2可维持培养液的pH稳定，D正确。 10. 下列是关于发酵工程及其应用的叙述，正确的是（　　） A. 菌种的扩大培养与发酵罐内发酵所需的培养条件是相同的 B. 在菌种确定之前，要选择原料制备培养基 C. 接种和发酵完成后都需要对培养基进行灭菌 D. 微生物农药是利用微生物或其代谢物来防治病虫害 【答案】D 【解析】 【详解】A、菌种扩大培养的目的是获得足量的优良菌种，需满足菌种大量增殖的最适条件，发酵罐内发酵的目的是获得目标代谢产物或菌体，培养条件会根据目标需求调整，二者培养条件通常不同，A错误； B、发酵工程需先选育确定合适的菌种，再根据菌种的代谢特性、目标产物生成需求选择原料制备培养基，不能在菌种确定前制备培养基，B错误； C、接种前需要对培养基灭菌以避免杂菌污染，接种后灭菌会杀死目的菌种，无法完成发酵过程，C错误； D、微生物农药是发酵工程在农牧业的应用之一，原理是利用微生物或其代谢产物防治病虫害，D正确。 11. 植物细胞工程的应用取得了显著的社会效益和经济效益，以下技术和相应优点的对应关系中，正确的是（ ） A. 微型繁殖技术——打破生殖隔离 B. 单倍体育种技术——利于获得突变体 C. 植物体细胞杂交技术——精准控制成体性状 D. 植物组织培养——不占用耕地，几乎不受季节限制 【答案】D 【解析】 【分析】植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、植物微型繁殖技术具有的优点：能保持植物原有的优良的遗传特性、繁殖速度快、不受季节、气候和地域的限制等，但并不能打破生殖隔离，A错误； B、单倍体育种可以快速获得具有优良性状的纯合子，缩短育种年限，而非有利于获得突变体，B错误； C、植物体细胞杂交技术的优点是克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍（或克服生殖隔离），该技术可能不会按照人们的意愿表达出双亲的优良性状，其原因可能是不同物种的基因在表达时相互干扰，从而不能有序表达，C错误； D、植物组织培养技术是在无菌和人工控制的条件下，让离体的组织和细胞在特定培养基上先脱分化得到愈伤组织，再分化得到胚状体、丛芽等，进而得到新植株，该技术可实现作物的工厂化生产，且不占用耕地，几乎不受季节限制，D正确。 故选D。 12. 下列关于受精过程的叙述，错误的是（　　） A. 精子入卵后有核膜破裂和再生的现象 B. 自然条件下，受精在子宫中完成 C. 精子与卵细胞膜相互融合，精子入卵与细胞膜的结构特性有关 D. 在胚胎工程操作中，常以观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志 【答案】B 【解析】 【详解】A、精子入卵后，其原有核膜会发生破裂，之后重新形成新的核膜，最终发育为雄原核，存在核膜破裂和再生的现象，A正确； B、自然条件下，哺乳动物的受精过程在雌性的输卵管内完成，子宫是胚胎着床和后续发育的主要场所，B错误； C、精子与卵细胞膜相互融合的过程依赖细胞膜的流动性，流动性是细胞膜的结构特性，C正确； D、胚胎工程操作中，常以观察到透明带和卵细胞膜的间隙存在两个极体，或者观察到雌、雄原核作为受精完成的标志，D正确。 13. 航天员叶光富和王亚平在天宫课堂上展示了培养的心肌细胞跳动的视频。下列相关叙述正确的是（ ） A. 培养心肌细胞的器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌 B. 培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳 C. 心肌细胞在培养容器中通过有丝分裂不断增殖 D. 心肌细胞在神经细胞发出的神经冲动的支配下跳动 【答案】B 【解析】 【分析】动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。 【详解】A、培养心肌细胞的器具要先进行高压蒸汽灭菌，但是试剂并不都需要灭菌，如动物血清不能进行高压蒸汽灭菌，否则会使其中的成分失活，A错误； B、培养心肌细胞的时候既需要氧气（有助于进行有氧呼吸）也需要二氧化碳（有助于维持培养液的pH），B正确； C、心肌细胞为终末分化细胞，已丧失有丝分裂能力，无法在培养容器中增殖，C错误； D、心肌细胞本身具有自律性，属于自律细胞，能自发产生节律性的电兴奋，从而引起收缩跳动，不需要神经和体液的额外刺激，因此在太空培养环境中仍能自主跳动，D错误。 故选B。 14. 组织培养可快速繁殖植物，得到的试管苗常先移至草炭土或蛭石中炼苗，苗健壮后可移栽定植。关于菊花的组织培养及幼苗的移栽，下列说法错误的是（　　） A. MS培养基的碳源一般用蔗糖而不用葡萄糖，以减少微生物污染 B. MS培养基、NAA溶液、6-BA溶液均可配制成母液，以减少称量的误差 C. 接种时用镊子夹取菊花茎段，注意茎段的形态学上下端，避免倒插 D. 为防止杂菌污染，从接种外植体到生成试管苗尽量在同一个锥形瓶内完成 【答案】D 【解析】 【详解】A、蔗糖为二糖，多数微生物更易利用单糖葡萄糖，使用蔗糖作为MS培养基碳源，既可满足植物细胞营养需求、维持培养基渗透压，还能减少微生物污染，A正确； B、MS培养基成分、NAA（生长素类生长调节剂）、6-BA（细胞分裂素类生长调节剂）均可提前配制成高浓度母液，使用时按比例稀释，能够减少多次称量的误差，简化配制流程，B正确； C、植物存在生长极性，生长素的极性运输决定了茎段倒插难以正常生根发芽，因此接种时需区分茎段的形态学上下端，避免倒插，C正确； D、植物组织培养的脱分化、生芽、生根阶段对培养基中植物激素的比例、营养成分需求不同，需要更换培养基，且同一容器中长期培养会出现营养枯竭、代谢废物积累的问题，因此不能全程在同一个锥形瓶内完成，D错误。 15. 2024年4月30日，上海长征医院联合中国科学院研究团队发表了一项干细胞领域的重要成果，即国际上首次利用自体干细胞来源的自体再生胰岛移植，成功治愈胰岛功能严重受损的糖尿病人，具体过程如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 由患者外周血细胞诱导产生iPS细胞的过程类似于脱分化 B. iPS细胞可以分化为胰岛等多种组织但不属于全能干细胞 C. ENS细胞形成胰岛组织的过程中发生了遗传物质的改变 D. 该成果对解决异体移植排斥反应等问题具有重大意义 【答案】C 【解析】 【分析】干细胞分为全能干细胞（如胚胎干细胞）、多能干细胞（如造血干细胞）和专能干细胞，其中全能干细胞的全能性最高，可被诱导分化为多种细胞和组织；其次是多能干细胞，如造血干细胞可以分化形成各种细胞；最后是专能干细胞．细胞具有全能性，原因是细胞中含有该生物全部的遗传物质。 【详解】A、由患者外周血细胞诱导产生iPS细胞的过程类似于脱分化，即细胞恢复分裂能力表现为具有分化成各种组织细胞的能力，A正确； B、iPS细胞可以分化为胰岛等多种组织，被称为诱导多能干细胞，不属于全能干细胞，B正确； C、ENS细胞形成胰岛组织的过程中发生了形态、结构和功能的改变，该过程中没有发生遗传物质的改变，C错误； D、该成果将助力实现人体器官的体外再生，解决器官短缺、移植排斥反应等问题，因而具有重大意义，D正确。 故选C。 16. 单克隆抗体技术在生物工程中占有重要的地位，下列有关单克隆抗体叙述错误的是（ ） A. 利用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成“早早孕诊断试剂” B. 作为诊断试剂，具有准确、高效、快速、简易的优点，可定位诊断肿瘤、心血管畸形、白化病等疾病 C. 从临床试验来看，单克隆抗体主要用于癌症治疗，作用是定位而不是杀伤 D. 将某细菌的抗药基因导入小鼠细胞内不属于单克隆抗体在实践上的应用 【答案】B 【解析】 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、 利用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成早早孕诊断试剂， 属于单克隆抗体在实践上应用， A正确； B、 单克隆抗体在诊断的应用上，具有准确、高效、简易、快速的优点， 可定位诊断肿瘤、心血管畸形，白化病的表现型非常直观，不需要单克隆抗体定位诊断，B 错误； C、临床试验中，单克隆抗体主要用于癌症治疗， 也有少量用于其他疾病的治疗， 在“生物导弹”中，单克隆抗体作为瞄准装置， 作用是定位，起杀伤作用的是与其相连接的药物， C正确； D、 将某细菌的抗药基因导入小鼠细胞内属于基因工程的范畴，不属于单克隆抗体在实践上的应用， D正确。 故选B。 17. 如图为哺乳动物细胞工程相关操作的示意图，b、c为不同的体细胞。下列分析错误的是（　　） A. 方法一获得的为克隆动物，a、b一般为同种生物的细胞，其中a为卵母细胞 B. 若通过方法一获得高产奶牛，则b细胞为高产奶牛的体细胞 C. 方法二中的b、c可以是同种生物的细胞，也可以是不同种生物的细胞 D. 用方法二获得杂交细胞与植物体细胞杂交的诱导融合方法完全相同 【答案】D 【解析】 【分析】分析题图：方法一为动物细胞核移植技术，获得的动物为克隆动物，a、b一般为同种生物的细胞，其中a为卵母细胞（体积大，易操作；营养物质丰富；含有激发动物细胞核全能性的物质）；方法二得到的是杂交细胞，将两个的细胞经诱导融合在一起，方法二是利用动物细胞融合技术获得杂交细胞，b、c可以是同种生物的细胞，也可以是不同种生物的细胞。 【详解】A、方法一为动物细胞核移植技术，获得的动物为克隆动物，a、b一般为同种生物的细胞，其中a为卵母细胞（体积大，易操作；营养物质丰富；含有激发动物细胞核全能性的物质），A正确； B、要获得高产奶牛，意味着供体（提供细胞核的动物）为高产奶牛，结合题图故b细胞为供核细胞，所以b细胞为高产奶牛的体细胞，B正确； C、方法二是利用动物细胞融合技术获得杂交细胞，b、c可以是同种生物的细胞，也可以是不同种生物的细胞，C正确； D、植物体细胞杂交技术中诱导植物体细胞融合的方法有物理法、化学法，诱导动物细胞融合的方法有物理法、化学法、灭活的病毒诱导，其中灭活病毒诱导法为诱导动物细胞融合特有的方法，二者不完全相同，D错误。 故选D。 18. 下图为受精作用及胚胎发育示意图，a、b代表两个发育时期，下列叙述正确的是 A. 受精卵的DNA一半来自精子 B. a、b分别是原肠胚和囊胚时期 C. ①—④过程细胞只分裂不分化 D. a时期胚胎的内部开始出现含有液体的腔 【答案】D 【解析】 【详解】A、受精卵的细胞质DNA几乎全部来自卵细胞，而细胞核DNA一半来自精子，一半来自卵细胞，故来自于精子的DNA不到一半，A错误； B、a、b分别是囊胚和原肠胚时期，B错误； C、④过程表示囊胚发育为原肠胚，该时期发生了细胞分化，C错误； D、a 是囊胚时期，囊胚的特点就是内部出现了囊胚腔（充满液体的腔），这是胚胎发育中首次出现含液体的腔，D正确。 19. 下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示同一种限制性内切酶的酶切位点。下列有关叙述正确的是（ ） A. 基因amp和tet是一对等位基因，常作为基因工程中的标记基因 B. 质粒指细菌细胞中能自我复制的小型环状的DNA和动植物病毒的DNA C. 限制性核酸内切酶的作用部位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的氢键 D. 用质粒4将目的基因导入大肠杆菌，该菌不能在含四环素的培养基上生长 【答案】D 【解析】 【分析】分析题图：图示质粒都含有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，其中1中复制原点被破坏，2中复制原点和两种抗性基因都完好，3中氨苄青霉素抗性基因被破坏，4中四环素抗性基因被破坏。 【详解】A、基因amp和tet在同一个DNA分子上，不是一对等位基因，A错误； B、质粒指细菌细胞中或酵母菌细胞中能自我复制的小型环状的DNA，动植物病毒的DNA不属于质粒，B错误； C、限制性核酸内切酶的作用部位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，C错误； D、重组质粒4中，氨苄青霉素抗性基因完好，四环素抗性基因被破坏，因此用质粒4将目的基因导入大肠杆菌，该菌不能在含四环素的培养基上生长，D正确。 故选D。 【点睛】 20. 聚苯乙烯作为一种重要的高分子聚合物材料，难降解，污染环境。某兴趣小组为了从土壤中分离能分解聚苯乙烯的细菌，相关实验流程如图所示，每次稀释的倍数相同，统计平板上菌落数的平均值为52，计算出每克土壤中分解聚苯乙烯的细菌数量为2.6×106个。由此推测，该流程中x和y的值分别为（ ） A. 18、0.1 B. 9、0.2 C. 18、0.2 D. 无法求解 【答案】C 【解析】 【详解】结合图示可知，在该实验流程中，第一次将土壤稀释的倍数为10倍，由于每次稀释的倍数相同，所以x为18；52÷y×104=2.6×106，则由此公式计算出y=0.2，C符合题意,ABD不符合题意。故选C。 二、不定项选择（共5道小题，每题3分，共15分） 21. 为达到相应目的，必须通过分子检测的是（ ） A. 携带链霉素抗性基因受体菌的筛选 B. 产生抗人白细胞介素-8抗体的杂交瘤细胞的筛选 C. 转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定 D. 镰刀形细胞贫血症的诊断 【答案】B 【解析】 【分析】分子水平上检测的目的和方法为：1、用DNA分子杂交技术，检测目的基因是否存在。2、用分子杂交法检测mRNA是否成功转录。3、用抗原——抗体杂交技术检测目的基因是否成功表达成相应的蛋白质。 【详解】A、携带链霉素抗性基因受体菌的筛选，可用含链霉素的培养基进行培养，能存活的即含有相应的抗性基因，A错误； B、产生抗人白细胞介素-8抗体的杂交瘤细胞的筛选，细胞水平的筛选只能选出杂交瘤细胞，如筛选出产生特异性抗体的杂交瘤细胞，必须用抗原-抗体杂交法从分子水平上进一步检测，B正确； C、转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定，属于个体生物学水平的鉴定，需要做抗虫的接种实验来确定，C错误； D、镰刀形细胞贫血症的诊断的红细胞形态与正常的红细胞形态不同，可以直接用显微镜进行观察，D错误。 故选B。 22. 某小组以香蕉为材料进行“DNA粗提取与鉴定”实验，其步骤为：研磨→过滤→析出→鉴定。下列说法正确的是（　　） A. 研磨液中NaCl的作用是溶解DNA B. 可选择将香蕉研磨液离心后获取上清液进行后续操作 C. 在“析出”操作中使用未经过预冷的酒精溶液会导致DNA的粗提取量减少 D. 在“鉴定”操作中观察到蓝色越深，说明DNA纯度越高 【答案】ABC 【解析】 【详解】A、研磨液中加入NaCl可提供离子环境，使DNA溶解于溶液中（因DNA在盐溶液中溶解度较高），A正确； B、将香蕉研磨液离心后获取上清液（含DNA）进行后续操作，符合实验流程，B正确； C、“析出”时需用预冷的酒精（低温降低DNA溶解度），未预冷的酒精中DNA溶解度下降不显著，导致DNA析出量减少，C正确； D、二苯胺试剂与DNA反应呈蓝色，但蓝色深浅仅反映DNA总量，无法直接说明纯度（纯度需通过杂质含量判断），D错误。 23. 植物体细胞杂交技术可克服种间生殖隔离。下图是应用该技术获得“番茄-马铃薯”杂种植株，拓展了植物的种质资源。下列叙述不正确的是（　　） A. ④过程完成的标志是诱导再生出新的细胞壁 B. 愈伤组织是由已分化的细胞所构成的细胞团 C. 杂种细胞的染色体数一定是原细胞染色体数的2倍 D. 杂种植株中的遗传物质的表达存在相互干扰 【答案】ABC 【解析】 【详解】A、④过程是脱分化形成愈伤组织，而再生出新的细胞壁是③过程（杂种细胞形成）的标志，A错误； B、愈伤组织的定义是植物体细胞脱分化后形成的未分化、薄壁、无定形的细胞团，这些细胞已经失去了原来的分化状态，B错误； C、植物体细胞杂交时，融合的原生质体可能有多种情况：马铃薯原生质体 + 番茄原生质体（1:1 融合），此时，染色体数是两者之和；也可能出现多细胞融合（如 2 个马铃薯原生质体 + 1 个番茄原生质体），此时染色体数就不是简单的 2 倍关系，C错误； D、来自两个不同物种的遗传物质在杂种细胞中表达时，会出现相互影响、干扰的情况，导致杂种植株不一定表现出两个物种的所有优良性状，D正确。 24. 基因工程自20世纪70年代兴起后，在农牧业、医药卫生领域和食品工业等方面展示出广阔的前景。下列有关基因工程的叙述，不正确的是（　　） A. 基因工程操作程序的核心步骤是目的基因的获取 B. 限制酶可以切割磷酸二酯键形成平末端，也能切割氢键形成黏性末端 C. 基因工程可以按照人们的意愿创造符合需要的生物类型和产品 D. 花粉管通道法可以用微量注射器将含有目的基因的DNA溶液直接注入受精卵中 【答案】ABD 【解析】 【详解】A、基因工程操作程序的核心步骤是基因表达载体的构建，它决定了目的基因能否在受体细胞中稳定存在、复制和表达，A错误； B、限制酶的作用位点是磷酸二酯键（连接核苷酸之间的化学键），B错误； C、基因工程是按照人们的意愿，把一种生物的某个基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状，从而获得符合人类需求的生物类型或产品（如抗虫棉、胰岛素等），C正确； D、花粉管通道法可以用微量注射器将含目的基因的DNA 溶液直接注人子房中，再借助花粉管通道进入胚囊的受精卵中，D错误。 25. 用A和B两种限制酶同时和分别处理同一DNA片段，限制酶对应切点一定切开。两种酶切位点及酶切产物电泳分离结果如图1和图2所示。下列叙述正确的是（　　） A. 图1中限制酶A、B识别的核苷酸序列不相同 B. 图1中X代表的碱基对数为4500 C. 推测图1中Y是限制酶B的酶切位点 D. 推测图2中①是限制酶A处理得到的酶切产物 【答案】ABD 【解析】 【分析】限制性核酸内切酶酶切，是一项基于DNA限制性核酸内切酶的基因工程技术，其基本原理是利用限制性核酸内切酶对DNA上特定序列的识别，来确定切割位点并实现切割，从而获得所需的特定序列。 【详解】A、酶具有专一性，不同的限制酶识别并切割不同的核苷酸序列，A正确； BC、结合图1和图2可知，①作用后得到三个片段，大小分别为600、3500、500，②作用后得到两个片段，大小分别为2000、8000，推测图1中Y是限制酶A的酶切位点，图1中X代表的碱基对数为4500，B正确，C错误； D、根据以上结论，图1中有两个限制酶A的酶切位点，切割完后得到三个长度的片段：3500、（4500+1500）、500，正好与图2的①结果相符，故推测图2中①是限制酶A处理得到的酶切产物，D正确。 故选ABD。 三、非选择题（共4道题，共55分） 26. 扩展青霉是腐烂苹果中常见的微生物之一，其次级代谢产物棒曲霉素（Pat）是一种具有致突变作用的毒素。为研究腐烂苹果中Pat的分布，研究人员进行了如图所示的实验，其中“病健交界处”为腐烂部位与未腐烂部位的交界处，取样分离的5个部位分别为①号、②号、③号、④号、⑤号。请回答下列问题： （1）苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌两种微生物在结构上的主要区别是______。 （2）发酵工程中选育性状优良的菌种有哪三种方法______。活化扩展青霉菌种使用的培养基成分如下表，根据物理性质划分，该培养基属于______培养基，其中能为扩展青霉的生长繁殖提供能源的是______NaNO3的作用是______（答两点） 蔗糖 NaNO3 MgSO4 KCl FeSO4 KH2PO4 蒸馏水 30g 2g 0.5g 0.5g 0.01g 1g 1000mL （3）用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是______。 （4）接种扩展青霉前，应对苹果进行______（填“消毒”或“灭菌”）。研究人员测定了病斑直径为1、2、3cm的苹果中①～⑤号部位的Pat含量，请推测最可能的结果：______。 【答案】（1）扩展青霉有以核膜为界限的细胞核，枯草杆菌没有 （2） ①. 自然选育、诱变育种、基因工程育种 ②. 液体 ③. 蔗糖 ④. 为扩展青霉的生长提供氮源和无机盐、维持培养液一定的渗透压 （3）第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始 （4） ①. 消毒 ②. 相同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低；相同部位病斑越大，Pat含量越高 【解析】 【小问1详解】 苹果腐烂部位的微生物除扩展青霉外，还有枯草杆菌。青霉属于真核生物，而枯草杆菌属于原核生物，故这两种微生物在结构上的主要区别是扩展青霉有以核膜为界限的细胞核，枯草杆菌无； 【小问2详解】 发酵工程中选育性状优良的菌种有自然选育、诱变育种、基因工程育种三种方法。活化扩展青霉菌种使用的培养基成分中没有凝固剂，故根据物理性质属于液体培养基，其中能为扩展青霉的生长繁殖提供能源的是蔗糖。NaNO3的作用是为扩展青霉的生长提供氮源和无机盐、维持培养液一定的渗透压。 【小问3详解】 划线时需要从上一次划线的末端开始划线。用平板划线法分离扩展青霉时，划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。导致失误的原因可能是：第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始，从而导致这种情况的出现。 【小问4详解】 接种扩展青霉前，为了避免苹果上其他杂菌、病原微生物的污染，应对苹果进行消毒处理。由图分析可知，①号为腐烂部位，②③④⑤依次距离腐烂部位越来越远，推测①号部位的Pat含量最高，离腐烂部位越远的果肉中Pat含量越低，即相同病斑情况下，离病斑越远的部位，Pat含量越低；相同部位病斑越大，Pat含量越高。 27. 为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法。请根据图示信息回答下面的问题： （1）试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的生物工程技术有______早期胚胎培养及胚胎移植技术等。胚胎移植是将胚胎移植到______动物体内，使之继续发育为新个体的技术。 （2）在体外受精前要对精子进行获能处理，其原因是刚排出的精子必须在______才能获得受精能力；精子体外获能可采用化学诱导法，诱导精子获能的药物是______（答出1点即可）。 （3）核移植时对MⅡ期卵母细胞去核其实是去除______复合物。图中获得试管牛的过程属于______（填“无性”或“有性”）生殖。 （4）图中激素处理可使供体______从而可培育更多的早期胚胎。代孕受体在移植前需要经过______处理，以便早期胚胎成功植入或着床。代孕受体的优良特性主要包括______为筛选出具有优良性状的母牛，胚胎移植前应取滋养层细胞做_____鉴定胚胎的性别。 【答案】（1） ①. 动物细胞培养 ②. 同种的、生理状态相同的雌性 （2） ①. 雌性生殖道内发生相应生理变化后 ②. 肝素（或Ca2+载体） （3） ①. 纺锤体—染色体 ②. 有性 （4） ①. 超数排卵 ②. 同期发情 ③. 有健康体质和正常繁殖能力 ④. DNA分析（或核型分析或性染色体分析） 【解析】 【小问1详解】 试管牛（体外受精 - 胚胎移植）和克隆牛（核移植 - 胚胎移植）的培育过程中，均用到的生物工程技术：动物细胞培养（早期胚胎需要在体外培养）、早期胚胎培养及胚胎移植技术。 胚胎移植的定义：将胚胎移植到同种的、生理状态相同的雌性动物体内，使之继续发育为新个体。 【小问2详解】 刚排出的精子必须在雌性生殖道内发生相应生理变化后（即获能），才能获得受精能力。 自然受精中，精子在雌性生殖道内获能；体外受精时，需要人工模拟获能过程。 化学诱导法中，常用的获能药物：肝素（或 Ca²⁺载体，如钙离子载体 A23187）。 【小问3详解】 核移植时去除 MⅡ 期卵母细胞的核，实质是去除纺锤体 - 染色体复合物。试管牛由体外受精（精子和卵子结合形成受精卵）发育而来，经过了两性生殖细胞的结合，属于有性生殖。 【小问4详解】 对供体母牛（良种奶牛 B 牛）进行激素处理，目的是超数排卵（注射促性腺激素，使其排出更多卵子，从而培育更多早期胚胎）。代孕受体（母牛 D 牛）在移植前需要经过同期发情处理（注射孕激素等激素），使受体子宫的生理状态与供体一致，便于胚胎着床和发育。代孕受体的优良特性：有健康体质和正常繁殖能力（不要求遗传性状优良，只需能为胚胎提供良好的发育环境）。胚胎性别鉴定：取滋养层细胞做DNA 分析（或核型分析 / 性染色体分析）鉴定性别（如用 SRY 基因探针检测 Y 染色体，或观察染色体核型）。 28. 图中甲、乙分别表示质粒和含目的基因的DNA片段。几种可供选择使用的限制酶识别序列及其切割位点为EcoRI： -G↓AATTC-；BamH I ： -G↓GATCC-； BclI ： -T↓GATCA-；Sau3A I ：-↓GATC-。： 注：tetR表示四环素抗性基因；ampR表示氨苄青霉素抗性基因。 回答下列问题： （1）限制酶的作用是识别______，并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。限制酶_____（填“能”或“不能”）切割原核细胞自身的DNA，推测其理由是______。 （2）经限制酶BamHI切割后得到的DNA片段可以与上述其余限制酶中的______（填限制酶名称）切割后得到的DNA片段连接，请画出其切割后产生的末端______。图甲质粒经Sau3AI完全切割后可得到______种DNA片段。 （3）图甲与图乙经图丙中相应酶切后，成功构建了基因表达载体，其中图甲中的______（填“Tet”或“Amp”或“Tet和Amp”）在载体上可作为标记基因，用于含重组DNA分子受体细胞的筛选。 （4）DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征。如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能______，质粒DNA分子上有______便于外源DNA插入。质粒DNA分子上有标记基因（如某种抗生素抗性基因），利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是______。 【答案】（1） ①. 双链DNA分子的特定核苷酸序列 ②. 不能 ③. 原核细胞DNA中不存在限制酶的识别序列或能被识别的序列被修饰了 （2） ①. BclⅠ ②. （画出一个即可） ③. 3 （3）tetR （4） ①. 复制（或扩增） ②. 一个至多个限制酶切割位点 ③. 选择性培养（或用含有该抗生素的培养基培养宿主细胞，能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞） 【解析】 【小问1详解】 限制酶的作用是识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。限制酶“不能”切割原核细胞自身的DNA，可能是因为原核细胞DNA中不存在限制酶的识别序列或能被识别的序列被修饰了，因而原核生物细胞自身存在的限制酶不能切割自身的DNA。 【小问2详解】 经限制酶BamHⅠ切割后得到的DNA片段可以与上述其余限制酶中的BamHⅠ、BclⅠ切割后得到的DNA片段连接，这是因为它们切割后产生的片段具有相同的黏性末端。BamHI酶切割后产生的末端为：，图甲质粒经Sau3AI完全切割后可得到3种DNA片段，因为该质粒中有3个该限制酶的识别序列。 【小问3详解】 为避免限制酶切割后的DNA片段自身环化，应该用不同的酶切割DNA的两端，由此分析，图甲质粒应当使用BclⅠ和EcoRⅠ进行切割，在重组质粒构建过程中ampR基因被破坏，故图甲中的“tetR”在载体上可作为标记基因，用于含重组DNA分子受体细胞的筛选。 【小问4详解】 DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征。如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能复制并稳定保存，质粒DNA分子上有一个至多个限制酶切割位点便于外源DNA插入。质粒DNA分子上有标记基因（如某种抗生素抗性基因），利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是用含有该抗生素的培养基培养宿主细胞，能够存活的即为含有质粒载体的宿主细胞，据此可以将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来。 29. 菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。如图是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答下列问题： 注：卡那霉素抗性基因（kanR）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感。 （1）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用Ca2+处理农杆菌，目的是使其处于______状态。 （2）将重组质粒导入农杆菌的目的是利用农杆菌能够______的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的______，最终形成转基因植株 （3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和______的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。 （4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据______的核苷酸序列设计特异引物，以______为模板进行第一轮扩增。PCR的产物一般通过______来鉴定，在凝胶中DNA分子的迁移速率与______DNA分子的大小和______等有关。利用添加______的凝胶对PCR。产物进行电泳后，在______下观察结果。 【答案】（1）一种能吸收周围环境中DNA分子的生理 （2） ①. 侵染菊花（或植物）细胞，并将T-DNA（或可转移的DNA）转移至受体细胞（或侵染双子叶植物和裸子植物，并将T-DNA（或可转移的DNA）转移至受体细胞） ②. 染色体DNA （3）卡那霉素 （4） ①. 抗虫基因（目的基因） ②. 转基因菊花的DNA ③. 琼脂糖凝胶电泳 ④. 凝胶的浓度 ⑤. 构象 ⑥. 核酸染料 ⑦. 波长300nm紫外灯 【解析】 【小问1详解】 用Ca2-处理土壤农杆菌，使其处于感受态，易于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。 【小问2详解】 农杆菌的 Ti 质粒上有一段特殊的 DNA 片段叫T-DNA（可转移 DNA），它能在农杆菌侵染植物细胞时，转移并整合到植物细胞的染色体 DNA 上。 因此，我们把目的基因插入 Ti 质粒的 T-DNA 中，就能借助农杆菌的侵染能力，把目的基因 “送” 进植物细胞，并稳定整合到宿主的染色体 DNA 上，随宿主基因组同步复制、表达。 【小问3详解】 标记基因是卡那霉素抗性基因（kanᴿ），导入重组质粒的细胞能表达出抗性，在含卡那霉素的培养基上存活；未导入的细胞（菊花本身对卡那霉素敏感）会被杀死。 因此培养基中添加卡那霉素，可筛选出成功导入重组质粒的愈伤组织，进而再生为转基因植株。 【小问4详解】 用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据目的基因的核苷酸序列设计特异引物，以含目的基因的菊花DNA为模板进行第一轮扩增。PCR 的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中 DNA 分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA 分子的大小和构象等有关。 凝胶浓度越高，孔径越小，DNA 迁移越慢；DNA 分子越小，迁移越快；线性 DNA、环状 DNA（如质粒）的构象不同，迁移速率也不同（超螺旋环状迁移最快，线性次之，开环最慢）。利用添加核酸染料的凝胶对 PCR 产物进行电泳。 核酸染料能嵌入 DNA 双链，在紫外光下发出荧光，使 DNA 条带可见。在波长 300nm（或 260-300nm）紫外灯下观察结果。 原因是核酸染料结合 DNA 后，在紫外光激发下会发出荧光，因此需在紫外灯照射下才能看到 DNA 条带。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $