抢分09 生物工程与技术（3大考点抢分）（抢分专练）（北京专用）2026年高考生物终极冲刺讲练测

**基本信息** 聚焦发酵工程、细胞工程、基因工程三大考点，通过考情分析、方法对比及典例解析构建系统性突破体系，强化生命观念与科学思维。 **专项设计** |模块|题量/典例|方法提炼|知识逻辑| |----|-----------|----------|----------| |发酵工程|4题+4表格|培养基类型区分、微生物计数/纯化方法对比|从传统发酵技术到现代发酵工程，构建“培养-分离-计数”技术链| |细胞工程|6题+8图解|植物组织培养激素调控、单克隆抗体制备流程|以细胞全能性为核心，串联植物/动物细胞工程及胚胎技术| |基因工程|6题+5表格|PCR原理、基因载体构建及检测方法|围绕“工具-流程-应用”主线，整合基因操作与跨技术交叉命题|

抢分09 生物工程与技术 3大考点抢分 题型 考情分析 考向预测 发酵工程 2025年北京卷：培养基的成分及其功能，其他微生物的分离与计数 2024年北京卷：发酵工程的应用，果酒和果醋的制作原理 2023年北京卷：无菌技术，泡菜的腌制，培养基的成分及其功能，微生物的接种方法，微生物的培养与菌种保藏 1.发酵工程：重点考察传统发酵技术与现代发酵工程技术（微生物的培养、分离、技术，灭菌技术等），常以选择题考察。 2.细胞工程：重点考察植物细胞工程、动物细胞工程和胚胎工程，常与基因工程交叉命题。 3.基因工程：重点考察基因工程的工具和流程，近年来考察的热点，常与细胞工程、遗传进化相关的知识进行交叉命题，题目难度较大。 细胞工程 2025年北京卷：动物细胞培养技术 2024年北京卷：植物体细胞杂交技术，植物组织培养技术综合，胚胎发育，胚胎移植技术，胚胎干细胞技术 2023年北京卷：动物细胞融合与单克隆抗体的制备 基因工程 2025年北京卷：PCR扩增的原理和过程 2024年北京卷：PCR扩增的原理和过程，基因表达载体的构建，目的基因的检测与鉴定 2023年北京卷：PCR扩增的原理和过程，基因工程在农牧业、制药及环境等方面的应用 考点1 发酵工程 1．（2026·北京昌平·一模）研究人员从重金属污染土壤中筛选出一株耐镉并促进植物生长的菌株——高地芽胞杆菌。相关叙述错误的是（    ） A．实验中应使用含镉培养基作为选择培养基 B．可用稀释涂布法或平板划线法筛选高地芽胞杆菌 C．大规模发酵培养该菌株需控制溶氧、温度、pH等条件 D．高地芽胞杆菌可替代化肥用于镉污染农田的农业生产 2．（2026·北京朝阳·一模）研究者筛选西北高原乳酸菌株，通过深层液态发酵中药，提升药效。下列叙述错误的是（　　） A．筛选菌株活性优于野生菌，更适配中药成分环境 B．发酵降解大分子为小分子，可提升药物吸收效率 C．液态发酵较固体发酵，更易规模化与连续化生产 D．液态发酵需通氧并搅拌，利于菌株大量快速增殖 1.果酒和果醋的发酵装置及各个部件的作用 装置图 结构 目的 充气口 醋酸发酵时连接充气泵，输入无菌空气； 制酒时关闭充气口 排气口 用来排出CO2 长而弯曲的胶管 防止空气中微生物的污染 出料口 便于取料，及时监测发酵进行的情况 2.区分选择培养基与鉴别培养基 种类 特点 用途 举例 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品，进而产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌 3.两种纯化方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 分离结果 关键操作 接种环在固体培养基表面连续划线 ①一系列的梯度稀释；②涂布平板操作 接种用具 接种环 涂布器 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特征 缺点 不能计数 操作复杂，需要涂布多个平板 共同点 都要用到固体培养基；都需进行无菌操作； 都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于观察菌落特征 4.间接计数法和直接计数法 项目 间接计数法(稀释涂布平板法) 直接计数法(显微镜计数法) 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 公式 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数 每毫升原液所含细菌数＝每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数 缺点 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不能区分活菌和死菌 结果 比实际值偏小 比实际值偏大 1．传统发酵技术是人类利用微生物的智慧结晶，不仅丰富了饮食文化，也为现代发酵工业奠定了基础。下列叙述错误的是（　　） A．传统果醋发酵时，主要通过产生气泡量来判定发酵程度 B．泡菜发酵过程中泡菜液中的亚硝酸盐含量先增多后减少 C．可利用乳酸菌厌氧发酵产生乳酸，使酸奶具有独特风味 D．发酵产品的品质受原料、菌种、发酵条件等多种因素影响 2．某同学探究公园土壤中分解尿素的细菌的数量，部分结果如图。相关叙述正确的是（　　） A．培养基以尿素为唯一碳源 B．采用平板划线法进行接种 C．用无菌水对土壤浸出液进行梯度稀释 D．菌落太少，不适合分解尿素细菌的计数 考点2 细胞工程 1．（2026·北京·二模）为培育脱毒草莓，科研人员采用茎尖分生组织进行植物组织培养，流程如下：①茎尖经酒精消毒等处理；②接种到含植物激素的培养基中诱导脱分化；③愈伤组织转至另一培养基中再分化出芽；④炼苗后移栽至温室。经检测，该组培苗病毒携带率为0%，而常规扦插苗携带率35%。下列叙述错误的是（　　） A．生长素和细胞分裂素的浓度和比例都会影响植物细胞的发育方向 B．选择茎尖分生组织作为外植体是因为该区域细胞分裂快且基本不含病毒 C．植物组织在脱分化时一般需要避光培养，再分化时需要进行照光培养 D．组培苗病毒携带率低的主要原因是植物细胞全能性表达抑制了病毒增殖 2．（2026·北京东城·一模）某种IL-17A单抗能够阻断IL-17A与IL-17A受体结合，抑制强直性脊柱炎的炎症发生和发展。有关单抗制备过程叙述不正确的是（    ） A．需要利用动物细胞培养及动物细胞融合技术 B．从IL-17A免疫的小鼠中获取骨髓瘤细胞和B细胞 C．使用PEG、灭活病毒均可诱导骨髓瘤细胞和B细胞融合 D．将抗体检测阳性的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔大量生产单抗 1.植物组织培养技术 （1）过程 （2）条件 （3）理论基础（原理）：植物细胞的全能性。 （4）植物激素的浓度控制 ①生长素的浓度＞细胞分裂素，有利于诱导植物根的生成； ②生长素的浓度＜细胞分裂素，有利于诱导植物芽的生成； ③生长素的浓度=细胞分裂素且都较高时，有利于愈伤组织的形成。 2.植物体细胞杂交技术的流程 3.植物组织培养技术与植物体细胞杂交的比较 4.动物细胞培养 5.单克隆抗体制备过程 （1）第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，方法是用特定的选择性培养基培养。经过筛选后未融合的细胞或者融合后具有同种核型的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 （2）第二次筛选的目的是筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，方法是专一抗体检验。 （3）抗体——药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。 6.体细胞核移植过程（以克隆高产奶牛为例） 7.胚胎移植 （1）胚胎移植：以牛的胚胎移植为例，胚胎移植主要包括供体、受体的选择和处理，配种或人工授精，胚胎的收集、检查、培养或保存，胚胎的移植，以及移植后的检查等步骤（下图）。 （2）胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。 （3）进行胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。 （4）意义：①可以充分发挥 雌 性优良个体的繁殖潜力。 ②大大缩短了供体本身的繁殖周期。 ③对供体施行超数排卵处理后，可增加后代的数量。 8.胚胎分割 1．下列生物工程技术中，不需要用到胚胎移植技术的是（　　） A．利用成纤维细胞等培养出可供移植的皮肤 B．利用乳腺生物反应器生产珍贵的医用蛋白 C．利用本地黄牛快速大量繁殖引进的良种奶牛 D．利用试管婴儿技术帮助有生育困难的夫妇 2．细胞工程在社会生产中的应用日益广泛。下列相关技术和方法正确的是（　　） A．原生质体需在低渗溶液中长期保存，以防止过度失水而死亡 B．可利用灭活病毒诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合 C．正常细胞体外培养时，都具有贴壁生长的特点 D．动物克隆过程中，核移植的受体细胞通常是去核的卵原细胞 考点3 基因工程 1．（2026·北京昌平·一模）NDRG2基因表达量在阿尔茨海默病（AD）患者脑内异常升高，研究人员构建能表达NDRG2反义RNA（与NDRG2 mRNA互补的RNA分子）的基因表达载体，导入AD模型小鼠海马神经元以抑制该基因表达。相关叙述正确的是（    ） A．需用同种限制性内切核酸酶获取目的基因、切割表达载体 B．NDRG2反义RNA通过与NDRG2的mRNA结合抑制其转录 C．用DNA聚合酶将相关片段与载体连接形成重组DNA分子 D．将重组质粒导入农杆菌，再利用农杆菌感染小鼠海马神经元 2．（2026·北京顺义·一模）pmi基因编码的酶使水稻细胞获得利用甘露糖的能力。为培育富含β-胡萝卜素的“黄金大米”，科学家将八氢番茄红素合酶基因(crtI)和胡萝卜素脱饱和酶基因(psy)导入含pmi基因的质粒中，利用农杆菌转染水稻愈伤组织。下列叙述合理的是（　　） A．该研究的目的基因是crtI、psy和pmi基因 B．用限制酶和DNA聚合酶构建基因表达载体 C．应以甘露糖为唯一碳源的选择培养基筛选 D．目的基因不会整合到水稻的基因组DNA上 1.重组DNA技术的基本工具 （1）限制性内切核酸酶（简称：限制酶） 限制酶在识别序列中心轴线两侧切开产生的是黏性末端，在识别序列中心轴线处切开产生的是平末端。 （2）DNA连接酶 常用类型 E.coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 “缝合”黏性末端和平末端。E.coliDNA连接酶连接平末端的效率远远低于T4DNA连接酶 结果 恢复被限制酶切开的磷酸二酯键 （3）载体——质粒 ①质粒的本质：是一种裸露的、结构简单，独立于真核细胞的细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。 ②质粒适于作基因载体的特点（载体须具备的条件） 特点（条件） 作用 有一个至多个限制酶切割位点 供外源DNA片段插入其中 能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体细胞DNA同步复制 便于目的DNA在受体细胞中稳定存在 带有标记基因（常是人工改造后具有），一般为抗生素抗性基因或荧光基因等 便于重组DNA分子的筛选（鉴定目的基因是否导入成功） 2.与DNA有关的酶 酶 作用 作用相关“键” 限制酶 切割DNA片段，产生两个（具有相同黏性末端或平末端）DNA片段 破坏磷酸二酯键 DNA连接酶 催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而连接起来 形成磷酸二酯键 解旋酶 将双链DNA分子局部解旋为单链（ATP水解供能） 破坏氢键（氢键非化学键） DNA聚合酶 把游离的脱氧核苷酸连接到引物或者已有的DNA单链的3′端上 形成磷酸二酯键 DNA(水解)酶 将DNA水解为脱氧核苷酸 破坏磷酸二酯键 逆转录酶 以RNA为模板合成cDNA 形成磷酸二酯键 3.PCR（聚合酶链式反应） PCR定义 在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术 PCR原理 DNA半保留复制 条件 模板 目的基因的两条链 原料 4种脱氧核苷酸 酶 耐高温的DNA聚合酶 引物 一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。2种 在一定的缓冲溶液中进行；需要控制温度的变化 PCR反应过程 变性 当温度超过90℃时，双链DNA解聚为单链 复性 温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 延伸 72℃左右时，在耐高温的DNA聚合酶作用下，从引物3′端开始进行互补链的合成 扩增 方向 DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从引物的3′端延伸DNA链，即DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸 方式 指数形式扩增（约为2n，n为扩增循环的次数） 结果 短时间内大量扩增目的基因 产物鉴定 琼脂糖凝胶电泳 4.将目的基因导入受体细胞 细胞类型 方法 原理/操作步骤 植物细胞 花粉管通道法 ①可以用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中； ②可以在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊 农杆菌转化法 农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T­DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。如果将目的基因插入Ti质粒的T­DNA中，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞 动物细胞（受精卵） 显微注射技术 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 微生物细胞（原核细胞） Ca2＋处理法 用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中 5.目的基因的检测与鉴定 （1）通过PCR等技术检测目的基因是否导入或是否转录出mRNA。 （2）利用抗原—抗体杂交技术检测目的基因是否翻译。 （3）进行个体生物学水平的抗虫、抗病、功能活性等鉴定。 1．利用转基因技术将绿色荧光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如图甲所示。实验得到表达Gata3 - GFP蛋白质的杂合子小鼠，交配获得Gata3 - GFP基因纯合子小鼠。为鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，设计引物1和引物2用于PCR扩增，PCR产物电泳结果如图乙所示。 下列叙述正确的是（　　） A．Gata3基因的启动子无法控制GFP基因表达 B．翻译时先合成GFP蛋白，再合成Gata3蛋白 C．2号小鼠是Gata3 - GFP基因的纯合子，4号小鼠是野生型 D．用引物1和引物3进行PCR，能更好区分杂合子和纯合子 2．化疗会造成癌症病人血小板减少，血小板生成素（TPO）可促进血小板产生。研究人员将含人TPO基因的表达载体导入中国仓鼠卵巢细胞中，获得有生物活性的TPO并应用于临床。下列不正确的是（　　） A．构建表达载体需要解旋酶和DNA聚合酶 B．用PCR技术可获取和扩增人TPO基因 C．表达载体包括TPO基因、标记基因、启动子和终止子等 D．用抗原—抗体杂交技术可检测TPO基因的表达情况 1．（2026·北京昌平·一模）科研人员以长叶轮钟草茎段为外植体，设置MS、1/2MS（把MS培养基的大量元素浓度减半，其余成分不变）两种基础培养基，搭配不同浓度6-BA、2，4-D进行愈伤组织诱导实验，结果如下表。相关叙述错误的是（    ） 培养基 6-BA/（mg/L） 2，4-D（mg/L） 愈伤组织诱导率（%） 生长状况 MS 0.5 0.5 79.17 生长一般、质地紧密、白色 MS 1 1 58.33 生长一般、质地紧密、浅白 MS 1.5 1.5 79.17 生长良好、质地紧密、深白 1/2MS 0.5 1 100.00 生长良好、质地紧密、白色 1/2MS 1 1.5 100.00 生长好、质地紧密、深白 1/2MS 1.5 0.5 100.00 生长好、质地紧密、白色 注：6-BA属于细胞分裂素类植物生长调节剂，2，4-D属于生长素类植物生长调节剂 A．植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性 B．每瓶接种的外植体数量相同，观察愈伤组织的时间点一致 C．本实验无法比较激素和培养基哪个因素对愈伤组织诱导的影响更显著 D．要进一步验证最佳配方，需在三个1/2MS处理中选择一组进行重复实验 2．（2026·北京西城·一模）为制备抗甲肝抗原的人源单克隆抗体，从病毒携带者的淋巴细胞获取抗体基因，通过基因工程使抗体展示在噬菌体表面，从中筛选携带目标抗体的噬菌体克隆。此过程中不需要的步骤是（　　） A．设计引物，通过PCR获取抗体基因 B．将分离的B细胞与骨髓瘤细胞融合并筛选 C．构建抗体基因—噬菌体表面蛋白基因融合基因 D．通过抗原—抗体杂交对噬菌体抗体库进行筛选 3．（2026·北京·二模）研究发现，植物根际微生物对石油的降解起重要作用。如图为从土壤中筛选出高效石油降解菌的部分流程示意图，相关叙述错误的是（　　） A．为获得分解石油的细菌，配制培养基时，应以石油为唯一碳源 B．配制步骤A、B所需培养基时，应先调节pH后再高压蒸汽灭菌 C．可使用稀释涂布平板法或细菌计数板计数法对目的菌进行计数 D．在B培养基中出现的菌落均是由能够降解石油的细菌形成的 4．（2026·北京东城·一模）下图表示猕猴桃醋生产的基本工艺流程，下列叙述正确的是（    ） A．与酵母菌相比，乳酸菌和醋酸菌均没有核膜包被的细胞核 B．75℃和121℃处理都属于灭菌，能杀灭发酵液中所有微生物 C．酒精发酵阶段所添加的乳酸菌能够无氧呼吸产生酒精 D．醋酸发酵阶段需要密封，以免有氧时醋酸被分解为二氧化碳 5．（2026·北京门头沟·一模）诱导多能干细胞（iPSCs）在生物医药领域有广阔的应用前景。研究人员利用多种小分子化合物协同诱导小鼠胎儿成纤维细胞，成功获得iPSCs。相关叙述错误的是（    ） A．利用胰蛋白酶处理小鼠胎儿某些组织可获得分散的成纤维细胞 B．小分子化合物改变了小鼠胎儿成纤维细胞的基因表达 C．小鼠胎儿成纤维细胞形成iPSCs的过程属于细胞分化 D．培养小鼠胎儿成纤维细胞和iPSCs时需提供一定浓度的CO2 6．（2026·北京顺义·一模）科研人员将等量药液注入培养基表面的4个牛津杯中，测定药物的抑菌效果。如图所示，下列选项不正确的是（　　） A．培养基、培养皿、牛津杯需提前灭菌 B．需采用涂布法将细菌接种在平板上 C．牛津杯中的药液可扩散进入培养基 D．3号药物的抑菌效果优于4号 7．（2026·北京石景山·一模）辣椒素作为一种常见的酚类生物碱，广泛用于食品保健、医药工业等领域，目前获得辣椒素的两条途径如下图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A．外植体灭菌后，经过程①脱分化形成不定形的薄壁组织团块 B．脱毒苗和高产细胞系的获得均体现了植物细胞的全能性 C．过程②通常选择植物茎尖培养脱毒苗，是因为其分裂能力强 D．过程③采用的植物细胞培养技术几乎不受气候条件的限制 8．（2026·北京丰台·一模）诺如病毒（NV）是引起非细菌性流行性胃肠炎的主要病原体。科学家以NV的核衣壳蛋白VP1为抗原，制备出了单克隆抗体。下列叙述错误的是（　　） A．对小鼠反复注射VP1，能从小鼠脾中得到产生VP1抗体的B淋巴细胞 B．将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞 C．对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，多次筛选可获得特定的杂交瘤细胞 D．制备出该单克隆抗体，有利于进一步开发快速检测诊断试剂，控制疾病传播 9．（2025·北京海淀·一模）利用基因工程技术生产特定单克隆抗体的流程如下图。下列错误的是（    ） A．过程①需要使用限制酶、DNA连接酶 B．过程②是将重组质粒导入噬菌体并启动基因表达 C．过程③利用抗原-抗体的特异性结合筛选目标抗体 D．过程④可将目标抗体A的基因导入酵母菌进行发酵生产 10．（2025·北京·模拟预测）下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下叙述正确的是（　　） A．①中Ti质粒应该包含标记基因、复制原点等元件 B．②的构建需要使用限制性核酸内切酶和DNA聚合酶 C．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上 D．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状 11．（2025·北京·模拟预测）下列关于动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（　　） A．它们的原理都涉及细胞膜的流动性 B．新产生的细胞中染色体数目增加 C．均需要使用胰蛋白酶处理组织细胞 D．均可用PEG融合法诱导细胞融合 12．（2025·北京·模拟预测）传统杂交瘤技术常使用日本血凝病毒（HVJ）诱导细胞融合，生产单克隆抗体。改良杂交瘤技术通过施加不均匀的交流电场，使骨髓瘤细胞、B淋巴细胞在电极表面形成相邻的单层，在电场作用下融合成杂交瘤细胞。下列相关叙述不正确的是（    ） A．用特定抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾脏中获得B淋巴细胞 B．上述过程使用具活性HVJ，其表面某些糖蛋白可促进细胞互相凝聚而发生融合 C．杂交瘤细胞需要经过克隆化培养和抗体检测，进而获得能分泌特定抗体的细胞 D．改良杂交瘤技术可以提高细胞融合效率，但不能完全避免骨髓瘤细胞相互融合 13．（2026·北京门头沟·一模）枯草芽孢杆菌在营养不足、环境恶劣等条件下会形成抗逆性强的芽孢，环境适宜时，芽孢恢复活性。我国科学家通过将芽孢包埋在可降解塑料PCL中，制备出能在特定条件下加速降解的“活塑料”（制备原理如图1），以期用于食品、日用品等包装。 (1)为获得用于制备“活塑料”的芽孢，需先在培养基中培养枯草芽孢杆菌。培养基中应提供____________（答出两种）以及水和无机盐等营养物质，全程保证____________操作。 (2)研究者构建图2所示的基因表达载体转入枯草芽孢杆菌，获得只有在木糖存在时才能大量表达并分泌脂肪酶（塑料降解酶）的工程菌。请从以下选项中选择合适的启动子和基因，将所选序号填入相应位置__。 启动子：①芽孢杆菌内源启动子②T7启动子（只被T7RNA聚合酶识别）③木糖诱导型启动子 基因： A．脂肪酶基因                                    B．脂肪酶基因+分泌信号肽基因 C．T7RNA聚合酶基因                            D．木糖合成酶基因 （注：分泌信号肽能引导蛋白质分泌到细胞外） (3)研究者将上述表达载体转入用____________处理过的枯草芽孢杆菌中，筛选得到转化成功的工程菌。再利用重金属刺激工程菌形成工程芽孢，进一步制备出活塑料。 (4)活塑料能实现“在日常使用时不降解、需要回收时启动降解”的目标。活塑料使用完回收后快速降解所需的条件是____________。 (5)为保证该技术在实际应用中的安全性，在选取工程菌株时，还需要考虑的是____________。 A．对人体和动植物无致病性 B．在完成降解任务后种群会自然衰退 C．在自然环境中具备较强的生存和扩散能力 D．所携带的外源基因不易转移至自然环境 14．（25-26高三上·北京海淀·月考）D-乳酸是生产生物可降解塑料——聚乳酸的重要原料，因天然乳酸菌菌株的生产能力无法满足工业化生产需求，科研人员利用基因工程技术对酵母菌进行了改造。 (1)酵母菌常被改造为基因工程菌，是因其具有______等优点。 (2)D-乳酸是丙酮酸经D-乳酸脱氢酶（DH酶）催化转化而来的，酵母菌本身不具有此酶，故需从其他菌种中筛选合适的DH基因作为目的基因，从而获得转基因酵母。此项转基因技术的操作流程为：______。（请将下列字母进行排序） A．通过PCR等技术检测各DH基因是否导入 B．将各表达载体分别导入酵母菌细胞 C．人工合成各DH基因，再PCR扩增 D．构建各DH基因的表达载体 E.通过实验测定各受体细胞的D-乳酸产量 F.通过序列比对等方法在基因数据库中筛选得到多个DH基因 (3)培养获得的酵母菌进行发酵，结果见图1，结果显示：______。科研人员推测，D-乳酸可能被细胞中原有的其他代谢途径所消耗。为获得更多的D-乳酸，还需从分子水平上改造酵母菌，思路为：______。 (4)科研人员用获得的目标菌株进行发酵实验，发酵过程应严格控制发酵条件，检测微生物数量和产物浓度等，结果如图2所示。估测酵母菌种群数量时，使用分光光度计测定溶液的OD值（与酵母菌密度正相关），种群呈现______增长。由图可知，在24小时补料的目的是______。50小时后，若想获得更多产物，可考虑采取的措施是______。 15．（2026·北京东城·一模）阿卡波糖是治疗Ⅱ型糖尿病的药物，部分患者长期使用后出现耐药现象，推测与肠道微生物有关。 (1)阿卡波糖是绝大多数生物不能利用的低聚糖，但能抑制淀粉酶等的活性，通过______来降低糖尿病患者的血糖浓度。 (2)为寻找影响阿卡波糖疗效的肠道微生物，研究者收集耐药患者的粪便样本，进行图1实验。经过图中①～⑤的步骤实现目的菌______，⑥采用______法接种以分离单个菌落，筛选后鉴定出能降解阿卡波糖的菌种TD1。 (3)为研究TD1对阿卡波糖治疗Ⅱ型糖尿病疗效的影响，研究者将Ⅱ型糖尿病模型小鼠分为4组，用如图2所示的溶液进行灌胃15天，每天1次。第15天同时还用______溶液对4组小鼠灌胃，检测结果表明TD1能够降低阿卡波糖的疗效，依据是________________________。 (4)进一步从TD1中筛选到编码阿卡波糖降解酶的apg基因。基于以上信息，请提出一种解决使用阿卡波糖后出现耐药问题的思路________________________。 16．（2026·北京石景山·一模）甘氨酸广泛应用于工业和医疗中，可通过大肠杆菌（MG）发酵生产，但高浓度甘氨酸会影响MG膜的通透性，抑制其生长。研究者利用Tn5转座酶系统激活与甘氨酸耐受性相关基因的表达，以获得可用于生产的工程菌。 (1)培养实验所用MG时，培养基的成分应包含水、蛋白胨、酵母提取物和无机盐，其中蛋白胨为MG提供________和维生素等。将工程菌用于生产前，需通过_______培养基进行扩大培养。 (2)Tn5转座酶可特异性识别两端含有ME序列的DNA片段（转座DNA），形成Tn5转座体，该转座体可随机插入靶DNA，见图1．基于此原理，研究者构建了Tn5介导的基因激活系统。 ①首先，研究者构建以氯霉素抗性基因（cat）为标记基因的质粒1（图2a）。由于缺乏_______，导致cat无法表达。 ②随后，将质粒1与Tn5系统（图2b）共同孵育，再转至MG中。先利用含氨苄青霉素与卡那霉素的培养基筛选，以确认_______，再经筛选获得工程菌P-01，见图2c。 ③为验证Tn5系统可激活基因表达，将MG和P-01在不同条件下培养，请完善表中的实验方案及预期结果。（注：用“+/–”表示“有/无”菌落生长） 氯霉素 _______ MG — _______ P-01 _______ _______ (3)写出利用图2b所示Tn5系统制备具有甘氨酸高耐受性工程菌的机理_______。 17．（2025·北京东城·二模）癌症是人类健康的重大威胁之一，传统治疗手段难以实现精准治疗。超声波具有非侵入、组织穿透性强、时空特异性等特点，科研人员拟开发“响应超声波的药物递送系统”细菌以实现癌症的精准治疗。 (1)用于培养药物递送细菌的液体培养基中包含水、酵母提取物、蛋白胨等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供____和维生素。可利用____的方法快速直观地测定细菌数量，以便即时使用适量的细菌进行治疗。 (2)C蛋白有抗肿瘤作用，超声波可导致局部温度升高到42℃。科研人员制备了工程菌1，其中含有图1所示的基因表达载体。37℃培养的工程菌1接受超声波刺激后，可升温至42℃，____，从而发挥抗肿瘤作用。 (3)T蛋白有T1、T2和T3三种亚型，具有相似的功能，制备分别含有这三种基因的工程菌1，并检测C蛋白表达量，结果如图2所示。科研人员最终选择____（填T1、T2或T3）基因进行后续研究，判断的依据是_____。 (4)工程菌1只能在超声波刺激期间发挥作用，科研人员设计了含图3所示的基因表达载体的工程菌2，可以实现在短时间的超声波刺激后维持长时间的治疗。已知B基因编码的B酶可以作用于识别位点a和b，使a、b处的DNA发生断裂，最终导致a、b之间的DNA片段发生倒转。请根据以上信息，使用下列选项将表达载体补充完整。____；____；____；____；____。 ①P1启动子②P3启动子（持续表达型启动子）③T基因④C基因⑤B基因 18．（2025·北京·模拟预测）靶向抗癌药物EGFR抑制剂的早期治疗是有效的，但后期癌细胞产生耐药性，使癌症无法根治。科学家通过基因工程开发出基因驱动癌细胞联合靶向抗癌药物来根治癌症。 (1)对癌细胞进行转基因操作时，常用的“分子运输车”是质粒，此外还可以是__________________。 (2)已知细胞膜上存在表皮生长因子受体EGFR，接受生长因子刺激后发生磷酸化，进而激活下游激酶，完成细胞增殖。肺癌细胞内EGFR含量远高于正常细胞。EGFR抑制剂是治疗癌症的靶向药物。科学家向肺癌细胞内导入SvEGFR融合基因表达载体获得转基因癌细胞，表达出融合蛋白，如图1所示。测定转基因癌细胞（S）内相关蛋白含量，如图2所示。 由图1可知，vEGFR_________是活化下游激酶的必要条件。 图2中第2、4组结果显示_________，说明在二聚化诱导剂作用下，靶向药物EGFR抑制剂失去了抑癌效果，S产生了耐药性。进一步研究发现，转SvEGFR的S癌细胞在特定条件下增殖能力强于普通癌细胞。 (3)科学家向上述S内进一步转入CyD基因表达载体构建基因驱动癌细胞（SC），CyD编码胞嘧啶脱氨酶，能将无细胞毒性的5-氟胞嘧啶（5-FC）转化为强效细胞毒素5-氟尿嘧啶（5-FU），5-FU能杀死癌细胞。基于上述研究，科学家开展体外实验验证基因驱动癌细胞是否具有治疗效果。 上图中i、ii、iii处分别应加入__________。 A．EGFR抑制剂 B．二聚化诱导剂 C．5-FC D．癌细胞 E．耐药癌细胞 F．SC癌细胞 (4)该研究为不同类型癌症的治疗奠定了基础，若对基因驱动癌细胞进行改造以实现精准个性化医疗，请提出改造思路_________。 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $ 抢分09 生物工程与技术 3大考点抢分 题型 考情分析 考向预测 发酵工程 2025年北京卷：培养基的成分及其功能，其他微生物的分离与计数 2024年北京卷：发酵工程的应用，果酒和果醋的制作原理 2023年北京卷：无菌技术，泡菜的腌制，培养基的成分及其功能，微生物的接种方法，微生物的培养与菌种保藏 1.发酵工程：重点考察传统发酵技术与现代发酵工程技术（微生物的培养、分离、技术，灭菌技术等），常以选择题考察。 2.细胞工程：重点考察植物细胞工程、动物细胞工程和胚胎工程，常与基因工程交叉命题。 3.基因工程：重点考察基因工程的工具和流程，近年来考察的热点，常与细胞工程、遗传进化相关的知识进行交叉命题，题目难度较大。 细胞工程 2025年北京卷：动物细胞培养技术 2024年北京卷：植物体细胞杂交技术，植物组织培养技术综合，胚胎发育，胚胎移植技术，胚胎干细胞技术 2023年北京卷：动物细胞融合与单克隆抗体的制备 基因工程 2025年北京卷：PCR扩增的原理和过程 2024年北京卷：PCR扩增的原理和过程，基因表达载体的构建，目的基因的检测与鉴定 2023年北京卷：PCR扩增的原理和过程，基因工程在农牧业、制药及环境等方面的应用 考点1 发酵工程 1．（2026·北京昌平·一模）研究人员从重金属污染土壤中筛选出一株耐镉并促进植物生长的菌株——高地芽胞杆菌。相关叙述错误的是（    ） A．实验中应使用含镉培养基作为选择培养基 B．可用稀释涂布法或平板划线法筛选高地芽胞杆菌 C．大规模发酵培养该菌株需控制溶氧、温度、pH等条件 D．高地芽胞杆菌可替代化肥用于镉污染农田的农业生产 【答案】D 【详解】A、选择培养基可允许特定类型微生物生长，抑制其他微生物，筛选耐镉菌株时使用含镉的选择培养基，只有耐镉的菌株可存活，A正确； B、稀释涂布平板法和平板划线法是分离纯化微生物的常用接种方法，可用来筛选获得高地芽胞杆菌的单菌落，B正确； C、大规模发酵培养高地芽胞杆菌时，溶氧、温度、pH等条件会直接影响菌株的生长代谢，需进行精准调控，C正确； D、高地芽胞杆菌仅具备耐镉、促进植物生长的作用，无法为植物提供生长必需的N、P、K等矿质营养，不能替代化肥的功能，D错误。 故选D。 2．（2026·北京朝阳·一模）研究者筛选西北高原乳酸菌株，通过深层液态发酵中药，提升药效。下列叙述错误的是（　　） A．筛选菌株活性优于野生菌，更适配中药成分环境 B．发酵降解大分子为小分子，可提升药物吸收效率 C．液态发酵较固体发酵，更易规模化与连续化生产 D．液态发酵需通氧并搅拌，利于菌株大量快速增殖 【答案】D 【详解】A、筛选菌株的目的就是获得比野生菌活性更优、对中药成分环境适配性更强的菌株，以满足发酵需求，A正确； B、发酵过程中微生物产生的相关酶可将中药中的大分子物质降解为小分子，小分子物质更易被机体吸收，因此可提升药物吸收效率，B正确； C、液态发酵的发酵基质混合均匀，发酵条件更易精准调控，相比固体发酵更易实现规模化和连续化生产，C正确； D、乳酸菌属于厌氧型微生物，无氧条件下才能正常生长繁殖和进行乳酸发酵，液态发酵过程不能通氧，通氧会抑制乳酸菌的代谢和增殖，D错误。 1.果酒和果醋的发酵装置及各个部件的作用 装置图 结构 目的 充气口 醋酸发酵时连接充气泵，输入无菌空气； 制酒时关闭充气口 排气口 用来排出CO2 长而弯曲的胶管 防止空气中微生物的污染 出料口 便于取料，及时监测发酵进行的情况 2.区分选择培养基与鉴别培养基 种类 特点 用途 举例 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 从众多微生物中分离所需的微生物 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品，进而产生特定的颜色或其他变化 鉴别不同种类的微生物 用伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌 3.两种纯化方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 分离结果 关键操作 接种环在固体培养基表面连续划线 ①一系列的梯度稀释；②涂布平板操作 接种用具 接种环 涂布器 优点 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 可以计数，可以观察菌落特征 缺点 不能计数 操作复杂，需要涂布多个平板 共同点 都要用到固体培养基；都需进行无菌操作； 都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于观察菌落特征 4.间接计数法和直接计数法 项目 间接计数法(稀释涂布平板法) 直接计数法(显微镜计数法) 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 公式 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数 每毫升原液所含细菌数＝每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数 缺点 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 不能区分活菌和死菌 结果 比实际值偏小 比实际值偏大 1．传统发酵技术是人类利用微生物的智慧结晶，不仅丰富了饮食文化，也为现代发酵工业奠定了基础。下列叙述错误的是（　　） A．传统果醋发酵时，主要通过产生气泡量来判定发酵程度 B．泡菜发酵过程中泡菜液中的亚硝酸盐含量先增多后减少 C．可利用乳酸菌厌氧发酵产生乳酸，使酸奶具有独特风味 D．发酵产品的品质受原料、菌种、发酵条件等多种因素影响 【答案】A 【详解】A、果醋发酵的菌种为醋酸菌，当以酒精为底物进行醋酸发酵时，反应过程无CO2生成，不会产生气泡，因此不能通过产生气泡量判定发酵程度，A错误； B、泡菜发酵初期，硝酸盐还原菌活动旺盛，将硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐含量升高；后期发酵环境pH降低，硝酸盐还原菌活性受抑制，同时亚硝酸盐被分解，含量下降，因此泡菜液中亚硝酸盐含量先增多后减少，B正确； C、乳酸菌为厌氧微生物，无氧呼吸可产生乳酸，酸奶制作就是利用乳酸菌的厌氧发酵产生乳酸，赋予酸奶独特风味，C正确； D、发酵产品的品质受原料的种类和品质、菌种的活性和纯度、发酵的温度、pH、氧气条件等多种因素共同影响，D正确。 2．某同学探究公园土壤中分解尿素的细菌的数量，部分结果如图。相关叙述正确的是（　　） A．培养基以尿素为唯一碳源 B．采用平板划线法进行接种 C．用无菌水对土壤浸出液进行梯度稀释 D．菌落太少，不适合分解尿素细菌的计数 【答案】C 【详解】A、筛选分解尿素的细菌，原理是只有能利用尿素的细菌可以生长，因此培养基是以尿素为唯一氮源，不是唯一碳源，A错误； B、对细菌数量进行计数需要采用稀释涂布平板法，平板划线法不能用于菌落计数，且图中菌落均匀分布，也不符合平板划线法的菌落分布特征，B错误； C、稀释涂布平板法操作中，需要用无菌水对土壤浸出液进行梯度稀释，既可以避免杂菌污染，也能获得合适浓度的菌液，C正确； D、微生物计数要求平板上的菌落数在30~300之间，图中菌落数符合该范围，可用于计数，D错误。 考点2 细胞工程 1．（2026·北京·二模）为培育脱毒草莓，科研人员采用茎尖分生组织进行植物组织培养，流程如下：①茎尖经酒精消毒等处理；②接种到含植物激素的培养基中诱导脱分化；③愈伤组织转至另一培养基中再分化出芽；④炼苗后移栽至温室。经检测，该组培苗病毒携带率为0%，而常规扦插苗携带率35%。下列叙述错误的是（　　） A．生长素和细胞分裂素的浓度和比例都会影响植物细胞的发育方向 B．选择茎尖分生组织作为外植体是因为该区域细胞分裂快且基本不含病毒 C．植物组织在脱分化时一般需要避光培养，再分化时需要进行照光培养 D．组培苗病毒携带率低的主要原因是植物细胞全能性表达抑制了病毒增殖 【答案】D 【详解】A、在植物组织培养中，生长素和细胞分裂素的浓度、使用顺序及比例都会调控细胞的脱分化和再分化过程，决定植物细胞的发育方向，比如生长素比例偏高时利于根的分化，细胞分裂素比例偏高时利于芽的分化，A正确； B、茎尖分生组织细胞分裂速度快，病毒难以在该区域运输和积累，几乎不含病毒，因此常被选作培育脱毒苗的外植体，B正确； C、脱分化阶段若进行光照，容易诱导外植体分化出维管组织，不利于愈伤组织的形成，因此通常需要避光培养；再分化阶段需要光照诱导叶绿素的合成，保障芽、叶等结构的正常发育，需要照光培养，C正确； D、组培苗病毒携带率低的主要原因是选取的茎尖分生组织外植体本身几乎不含病毒，而非植物细胞全能性表达抑制了病毒增殖，D错误。 2．（2026·北京东城·一模）某种IL-17A单抗能够阻断IL-17A与IL-17A受体结合，抑制强直性脊柱炎的炎症发生和发展。有关单抗制备过程叙述不正确的是（    ） A．需要利用动物细胞培养及动物细胞融合技术 B．从IL-17A免疫的小鼠中获取骨髓瘤细胞和B细胞 C．使用PEG、灭活病毒均可诱导骨髓瘤细胞和B细胞融合 D．将抗体检测阳性的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔大量生产单抗 【答案】B 【详解】A、单克隆抗体制备过程中，需要先诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，再对筛选得到的杂交瘤细胞进行克隆化培养，涉及动物细胞融合和动物细胞培养技术，A正确； B、制备IL-17A单抗时，用IL-17A免疫小鼠的目的是从小鼠脾脏中获取能产生特异性抗体的B淋巴细胞，骨髓瘤细胞是具有无限增殖能力的小鼠肿瘤细胞，不需要从免疫后的小鼠中获取，B错误； C、诱导动物细胞融合的常用方法包括化学法（PEG即聚乙二醇）、生物法（灭活病毒）等，二者均可诱导骨髓瘤细胞和B细胞融合，C正确； D、大量生产单克隆抗体的方法包括体外培养杂交瘤细胞、或将抗体检测阳性的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔增殖，从小鼠腹水中提取单抗，D正确。 1.植物组织培养技术 （1）过程 （2）条件 （3）理论基础（原理）：植物细胞的全能性。 （4）植物激素的浓度控制 ①生长素的浓度＞细胞分裂素，有利于诱导植物根的生成； ②生长素的浓度＜细胞分裂素，有利于诱导植物芽的生成； ③生长素的浓度=细胞分裂素且都较高时，有利于愈伤组织的形成。 2.植物体细胞杂交技术的流程 3.植物组织培养技术与植物体细胞杂交的比较 4.动物细胞培养 5.单克隆抗体制备过程 （1）第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，方法是用特定的选择性培养基培养。经过筛选后未融合的细胞或者融合后具有同种核型的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。 （2）第二次筛选的目的是筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，方法是专一抗体检验。 （3）抗体——药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。 6.体细胞核移植过程（以克隆高产奶牛为例） 7.胚胎移植 （1）胚胎移植：以牛的胚胎移植为例，胚胎移植主要包括供体、受体的选择和处理，配种或人工授精，胚胎的收集、检查、培养或保存，胚胎的移植，以及移植后的检查等步骤（下图）。 （2）胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。 （3）进行胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。 （4）意义：①可以充分发挥 雌 性优良个体的繁殖潜力。 ②大大缩短了供体本身的繁殖周期。 ③对供体施行超数排卵处理后，可增加后代的数量。 8.胚胎分割 1．下列生物工程技术中，不需要用到胚胎移植技术的是（　　） A．利用成纤维细胞等培养出可供移植的皮肤 B．利用乳腺生物反应器生产珍贵的医用蛋白 C．利用本地黄牛快速大量繁殖引进的良种奶牛 D．利用试管婴儿技术帮助有生育困难的夫妇 【答案】A 【详解】A、利用成纤维细胞培养可供移植的皮肤，仅涉及动物细胞培养技术，只需获得皮肤组织，无需发育为完整动物个体，不需要胚胎移植，A符合题意； B、构建乳腺生物反应器需要先获得导入药用蛋白基因的早期胚胎，再通过胚胎移植将胚胎移入代孕母体内发育为转基因动物，需要用到胚胎移植，B不符合题意； C、快速大量繁殖良种奶牛，需要将良种奶牛的早期胚胎移植到本地代孕黄牛体内发育，需要用到胚胎移植，C不符合题意； D、试管婴儿技术需要将体外受精得到的早期胚胎，移植到母体子宫内继续发育，需要用到胚胎移植，D不符合题意。 2．细胞工程在社会生产中的应用日益广泛。下列相关技术和方法正确的是（　　） A．原生质体需在低渗溶液中长期保存，以防止过度失水而死亡 B．可利用灭活病毒诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合 C．正常细胞体外培养时，都具有贴壁生长的特点 D．动物克隆过程中，核移植的受体细胞通常是去核的卵原细胞 【答案】B 【详解】A、原生质体无细胞壁保护，若在低渗溶液中会大量吸水涨破，应在等渗或略高渗溶液中保存，A错误； B、诱导动物细胞融合的方法包含灭活病毒诱导法，B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合属于动物细胞融合，可利用灭活病毒诱导，B正确； C、正常动物细胞体外培养时，大多数具有贴壁生长的特点，但并非所有细胞都如此，如淋巴细胞可悬浮生长，“都具有”表述绝对，C错误； D、动物克隆过程中，核移植的受体细胞通常是去核的减数第二次分裂中期的卵母细胞，其细胞质含有诱导细胞核全能性表达的物质，并非卵原细胞，D错误。 考点3 基因工程 1．（2026·北京昌平·一模）NDRG2基因表达量在阿尔茨海默病（AD）患者脑内异常升高，研究人员构建能表达NDRG2反义RNA（与NDRG2 mRNA互补的RNA分子）的基因表达载体，导入AD模型小鼠海马神经元以抑制该基因表达。相关叙述正确的是（    ） A．需用同种限制性内切核酸酶获取目的基因、切割表达载体 B．NDRG2反义RNA通过与NDRG2的mRNA结合抑制其转录 C．用DNA聚合酶将相关片段与载体连接形成重组DNA分子 D．将重组质粒导入农杆菌，再利用农杆菌感染小鼠海马神经元 【答案】A 【详解】A、构建基因表达载体时，用同种限制性内切核酸酶获取目的基因、切割表达载体，可使二者产生相同的末端，便于后续连接形成重组DNA分子，A正确； B、NDRG2反义RNA与NDRG2的mRNA结合后，会阻止核糖体与mRNA结合，抑制其翻译，B错误； C、将目的基因片段与载体连接形成重组DNA分子需要使用DNA连接酶，C错误； D、农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的常用方法，将重组质粒导入动物细胞常用显微注射法，农杆菌无法感染动物细胞，D错误。 故选A。 2．（2026·北京顺义·一模）pmi基因编码的酶使水稻细胞获得利用甘露糖的能力。为培育富含β-胡萝卜素的“黄金大米”，科学家将八氢番茄红素合酶基因(crtI)和胡萝卜素脱饱和酶基因(psy)导入含pmi基因的质粒中，利用农杆菌转染水稻愈伤组织。下列叙述合理的是（　　） A．该研究的目的基因是crtI、psy和pmi基因 B．用限制酶和DNA聚合酶构建基因表达载体 C．应以甘露糖为唯一碳源的选择培养基筛选 D．目的基因不会整合到水稻的基因组DNA上 【答案】C 【详解】A、该研究的目的是培育富含β-胡萝卜素的“黄金大米”，因此目的基因为八氢番茄红素合酶基因（crtI）和胡萝卜素脱饱和酶基因（psy），pmi基因是用于筛选阳性细胞的标记基因，不属于目的基因，A错误； B、构建基因表达载体时，需要用限制酶切割目的基因和载体，再用DNA连接酶将二者连接，不需要DNA聚合酶，B错误； C、成功导入重组质粒的水稻细胞含有pmi基因，可编码利用甘露糖的酶，能在以甘露糖为唯一碳源的选择培养基上存活，未导入重组质粒的细胞无法利用甘露糖，不能在该培养基上存活，因此可通过该培养基筛选成功导入目的基因的细胞，C正确； D、农杆菌转化法的原理是农杆菌Ti质粒上的T-DNA可将携带的目的基因整合到植物细胞的染色体基因组DNA上，因此目的基因会整合到水稻的基因组DNA上，D错误。 1.重组DNA技术的基本工具 （1）限制性内切核酸酶（简称：限制酶） 限制酶在识别序列中心轴线两侧切开产生的是黏性末端，在识别序列中心轴线处切开产生的是平末端。 （2）DNA连接酶 常用类型 E.coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 “缝合”黏性末端和平末端。E.coliDNA连接酶连接平末端的效率远远低于T4DNA连接酶 结果 恢复被限制酶切开的磷酸二酯键 （3）载体——质粒 ①质粒的本质：是一种裸露的、结构简单，独立于真核细胞的细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。 ②质粒适于作基因载体的特点（载体须具备的条件） 特点（条件） 作用 有一个至多个限制酶切割位点 供外源DNA片段插入其中 能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体细胞DNA同步复制 便于目的DNA在受体细胞中稳定存在 带有标记基因（常是人工改造后具有），一般为抗生素抗性基因或荧光基因等 便于重组DNA分子的筛选（鉴定目的基因是否导入成功） 2.与DNA有关的酶 酶 作用 作用相关“键” 限制酶 切割DNA片段，产生两个（具有相同黏性末端或平末端）DNA片段 破坏磷酸二酯键 DNA连接酶 催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而连接起来 形成磷酸二酯键 解旋酶 将双链DNA分子局部解旋为单链（ATP水解供能） 破坏氢键（氢键非化学键） DNA聚合酶 把游离的脱氧核苷酸连接到引物或者已有的DNA单链的3′端上 形成磷酸二酯键 DNA(水解)酶 将DNA水解为脱氧核苷酸 破坏磷酸二酯键 逆转录酶 以RNA为模板合成cDNA 形成磷酸二酯键 3.PCR（聚合酶链式反应） PCR定义 在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术 PCR原理 DNA半保留复制 条件 模板 目的基因的两条链 原料 4种脱氧核苷酸 酶 耐高温的DNA聚合酶 引物 一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。2种 在一定的缓冲溶液中进行；需要控制温度的变化 PCR反应过程 变性 当温度超过90℃时，双链DNA解聚为单链 复性 温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 延伸 72℃左右时，在耐高温的DNA聚合酶作用下，从引物3′端开始进行互补链的合成 扩增 方向 DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从引物的3′端延伸DNA链，即DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸 方式 指数形式扩增（约为2n，n为扩增循环的次数） 结果 短时间内大量扩增目的基因 产物鉴定 琼脂糖凝胶电泳 4.将目的基因导入受体细胞 细胞类型 方法 原理/操作步骤 植物细胞 花粉管通道法 ①可以用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中； ②可以在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊 农杆菌转化法 农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T­DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。如果将目的基因插入Ti质粒的T­DNA中，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞 动物细胞（受精卵） 显微注射技术 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 微生物细胞（原核细胞） Ca2＋处理法 用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中 5.目的基因的检测与鉴定 （1）通过PCR等技术检测目的基因是否导入或是否转录出mRNA。 （2）利用抗原—抗体杂交技术检测目的基因是否翻译。 （3）进行个体生物学水平的抗虫、抗病、功能活性等鉴定。 1．利用转基因技术将绿色荧光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如图甲所示。实验得到表达Gata3 - GFP蛋白质的杂合子小鼠，交配获得Gata3 - GFP基因纯合子小鼠。为鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，设计引物1和引物2用于PCR扩增，PCR产物电泳结果如图乙所示。 下列叙述正确的是（　　） A．Gata3基因的启动子无法控制GFP基因表达 B．翻译时先合成GFP蛋白，再合成Gata3蛋白 C．2号小鼠是Gata3 - GFP基因的纯合子，4号小鼠是野生型 D．用引物1和引物3进行PCR，能更好区分杂合子和纯合子 【答案】C 【详解】A、分析图中可知，启动子在左侧，GFP基因整合于Gata3基因的右侧，启动子启动转录后，可以使GFP基因转录，Gata3基因的启动子能控制GFP基因的表达，A错误； B、因启动子在左侧，转录的方向向右，合成的mRNA从左向右为5'→3'，刚好是翻译的方向，所以翻译时先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白，B错误； C、整合GFP基因后，核酸片段变长，2号个体只有大片段，所以是Gata3-GFP基因纯合子，4号个体只有小片段，是野生型，C正确； D、用引物1和引物3进行PCR扩增，杂合子和Gata3—GFP基因纯合子都能扩增出相应片段，因此无法区分杂合子和纯合子，D错误。 故选C。 2．化疗会造成癌症病人血小板减少，血小板生成素（TPO）可促进血小板产生。研究人员将含人TPO基因的表达载体导入中国仓鼠卵巢细胞中，获得有生物活性的TPO并应用于临床。下列不正确的是（　　） A．构建表达载体需要解旋酶和DNA聚合酶 B．用PCR技术可获取和扩增人TPO基因 C．表达载体包括TPO基因、标记基因、启动子和终止子等 D．用抗原—抗体杂交技术可检测TPO基因的表达情况 【答案】A 【分析】基因表达载体的组成：1、启动子在基因的首端，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；2、终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；3、标记基因便于目的基因的鉴定和筛选。 【详解】A、构建表达载体需要限制酶切割目的基因和载体，并用DNA连接酶连接，不需要解旋酶和DNA聚合酶。解旋酶用于DNA复制时解开双链，而构建载体时无需此过程，A错误； B、PCR技术可通过体外扩增快速获取大量人TPO基因，B正确； C、表达载体必须包含目的基因（TPO基因）、标记基因、启动子（启动转录）和终止子（终止转录）等结构，C正确； D、抗原—抗体杂交技术通过特异性结合检测TPO蛋白（基因表达的产物），D正确。 故选A。 1．（2026·北京昌平·一模）科研人员以长叶轮钟草茎段为外植体，设置MS、1/2MS（把MS培养基的大量元素浓度减半，其余成分不变）两种基础培养基，搭配不同浓度6-BA、2，4-D进行愈伤组织诱导实验，结果如下表。相关叙述错误的是（    ） 培养基 6-BA/（mg/L） 2，4-D（mg/L） 愈伤组织诱导率（%） 生长状况 MS 0.5 0.5 79.17 生长一般、质地紧密、白色 MS 1 1 58.33 生长一般、质地紧密、浅白 MS 1.5 1.5 79.17 生长良好、质地紧密、深白 1/2MS 0.5 1 100.00 生长良好、质地紧密、白色 1/2MS 1 1.5 100.00 生长好、质地紧密、深白 1/2MS 1.5 0.5 100.00 生长好、质地紧密、白色 注：6-BA属于细胞分裂素类植物生长调节剂，2，4-D属于生长素类植物生长调节剂 A．植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性 B．每瓶接种的外植体数量相同，观察愈伤组织的时间点一致 C．本实验无法比较激素和培养基哪个因素对愈伤组织诱导的影响更显著 D．要进一步验证最佳配方，需在三个1/2MS处理中选择一组进行重复实验 【答案】D 【详解】A、植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给与适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术，其原理利用了植物细胞的全能性，A正确； B、实验设计需遵循单一变量原则，接种的外植体数量、观察愈伤组织的时间属于无关变量，应保持相同且适宜，B正确； C、本实验同时存在培养基种类、6-BA浓度、2，4-D浓度三个自变量，没有设置专门的对照单独对比激素和培养基的影响程度，因此无法比较两个因素对愈伤组织诱导的影响显著性，C正确； D、要进一步验证最佳配方，应先选择1/2MS处理中生长状况最优的组别，围绕该组的激素浓度设置更小的浓度梯度进行探究，仅任选一组重复实验只能减小实验误差，无法确定最佳配方，D错误。 2．（2026·北京西城·一模）为制备抗甲肝抗原的人源单克隆抗体，从病毒携带者的淋巴细胞获取抗体基因，通过基因工程使抗体展示在噬菌体表面，从中筛选携带目标抗体的噬菌体克隆。此过程中不需要的步骤是（　　） A．设计引物，通过PCR获取抗体基因 B．将分离的B细胞与骨髓瘤细胞融合并筛选 C．构建抗体基因—噬菌体表面蛋白基因融合基因 D．通过抗原—抗体杂交对噬菌体抗体库进行筛选 【答案】B 【详解】A、获取抗体基因时，可根据已知抗体基因序列设计引物，通过PCR技术特异性扩增得到目的基因，A不符合题意； B、题干为基因工程方法，直接获取抗体基因导入噬菌体表达，不需要进行细胞融合，B符合题意； C、要实现抗体展示在噬菌体表面，需要将抗体基因与噬菌体表面蛋白基因拼接为融合基因，使表达的抗体随表面蛋白共同呈现在噬菌体外壳上，C不符合题意； D、抗原与抗体可特异性结合，因此可通过抗原-抗体杂交技术从噬菌体抗体库中筛选出携带目标抗体的噬菌体克隆，D不符合题意。 3．（2026·北京·二模）研究发现，植物根际微生物对石油的降解起重要作用。如图为从土壤中筛选出高效石油降解菌的部分流程示意图，相关叙述错误的是（　　） A．为获得分解石油的细菌，配制培养基时，应以石油为唯一碳源 B．配制步骤A、B所需培养基时，应先调节pH后再高压蒸汽灭菌 C．可使用稀释涂布平板法或细菌计数板计数法对目的菌进行计数 D．在B培养基中出现的菌落均是由能够降解石油的细菌形成的 【答案】D 【详解】A、为获得分解石油的细菌，配制培养基时，应以石油为唯一碳源，在该培养基中，只有分解石油的微生物才能生长，A正确； B、配制培养基时，应该先调节pH再灭菌，B正确； C、对目的菌计数可以采用稀释涂布平板法或细菌计数板计数法，C正确； D、在B培养基中出现的菌落不一定都是由能够降解石油的细菌形成的，例如有些自养型微生物可以以CO2为碳源，D错误。 4．（2026·北京东城·一模）下图表示猕猴桃醋生产的基本工艺流程，下列叙述正确的是（    ） A．与酵母菌相比，乳酸菌和醋酸菌均没有核膜包被的细胞核 B．75℃和121℃处理都属于灭菌，能杀灭发酵液中所有微生物 C．酒精发酵阶段所添加的乳酸菌能够无氧呼吸产生酒精 D．醋酸发酵阶段需要密封，以免有氧时醋酸被分解为二氧化碳 【答案】A 【详解】A、酵母菌是真核生物，有核膜包被的细胞核；乳酸菌和醋酸菌都是原核生物，都没有核膜包被的细胞核，A正确； B、75℃处理30分钟属于消毒，只能杀死部分微生物，无法杀灭芽孢等休眠体，不能杀死所有微生物，只有121℃的处理属于灭菌，B错误； C、乳酸菌无氧呼吸的产物是乳酸，不能产生酒精，酒精发酵的酒精来自酵母菌的无氧呼吸，C错误； D、醋酸菌是好氧细菌，醋酸发酵过程需要持续通入氧气，醋酸不会在有氧条件下被分解为二氧化碳，D错误。 5．（2026·北京门头沟·一模）诱导多能干细胞（iPSCs）在生物医药领域有广阔的应用前景。研究人员利用多种小分子化合物协同诱导小鼠胎儿成纤维细胞，成功获得iPSCs。相关叙述错误的是（    ） A．利用胰蛋白酶处理小鼠胎儿某些组织可获得分散的成纤维细胞 B．小分子化合物改变了小鼠胎儿成纤维细胞的基因表达 C．小鼠胎儿成纤维细胞形成iPSCs的过程属于细胞分化 D．培养小鼠胎儿成纤维细胞和iPSCs时需提供一定浓度的CO2 【答案】C 【详解】A、动物细胞培养时，胰蛋白酶可分解细胞间的粘连蛋白，使组织块分散为单个细胞，因此利用胰蛋白酶处理小鼠胎儿相关组织可获得分散的成纤维细胞，A正确； B、小分子化合物诱导高度分化的成纤维细胞转化为多能干细胞iPSCs的本质是细胞发生重编程，改变了细胞的基因表达情况，B正确； C、细胞分化是细胞在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程，通常是分化程度升高、全能性降低的过程。成纤维细胞是分化程度高的体细胞，iPSCs是分化程度低、全能性较高的干细胞，该过程属于细胞脱分化（重编程），不属于细胞分化，C错误； D、动物细胞培养时，需要提供一定浓度的CO₂以维持培养液的pH，因此培养成纤维细胞和iPSCs都需要提供一定浓度的CO₂，D正确。 故选C。 6．（2026·北京顺义·一模）科研人员将等量药液注入培养基表面的4个牛津杯中，测定药物的抑菌效果。如图所示，下列选项不正确的是（　　） A．培养基、培养皿、牛津杯需提前灭菌 B．需采用涂布法将细菌接种在平板上 C．牛津杯中的药液可扩散进入培养基 D．3号药物的抑菌效果优于4号 【答案】D 【详解】A、为防止杂菌污染，培养基、培养皿、牛津杯需提前灭菌，A正确； B、图示的情况是采用涂布法将细菌接种在平板上，B正确； C、牛津杯中的药液可扩散进入培养基，以此来判断药液的抑菌效果，C正确； D、抑菌效果的评估应使用抑菌圈的直径比上菌落直径，比值越大，说明抑菌效果越好，因此4号药物的抑菌效果优于3号，D错误。 7．（2026·北京石景山·一模）辣椒素作为一种常见的酚类生物碱，广泛用于食品保健、医药工业等领域，目前获得辣椒素的两条途径如下图所示。下列相关叙述正确的是（　　） A．外植体灭菌后，经过程①脱分化形成不定形的薄壁组织团块 B．脱毒苗和高产细胞系的获得均体现了植物细胞的全能性 C．过程②通常选择植物茎尖培养脱毒苗，是因为其分裂能力强 D．过程③采用的植物细胞培养技术几乎不受气候条件的限制 【答案】D 【详解】A、外植体需要消毒，不需要灭菌，A错误； B、只有脱毒苗的获得体现了细胞的全能性，后者的原理是细胞增殖，B错误； C、过程②通常选择植物茎尖培养脱毒苗，是因为其几乎不带毒，C错误； D、过程③采用的植物细胞培养技术几乎不受气候条件的限制，因而能够高产、稳产，其原理是细胞增殖，D正确。 8．（2026·北京丰台·一模）诺如病毒（NV）是引起非细菌性流行性胃肠炎的主要病原体。科学家以NV的核衣壳蛋白VP1为抗原，制备出了单克隆抗体。下列叙述错误的是（　　） A．对小鼠反复注射VP1，能从小鼠脾中得到产生VP1抗体的B淋巴细胞 B．将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞 C．对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，多次筛选可获得特定的杂交瘤细胞 D．制备出该单克隆抗体，有利于进一步开发快速检测诊断试剂，控制疾病传播 【答案】B 【详解】A、VP1作为抗原反复注射小鼠，可刺激小鼠发生体液免疫，脾脏中会产生能分泌抗VP1抗体的B淋巴细胞，A正确； B、诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后，融合细胞有三类：B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞，因此诱导融合后的细胞不都是杂交瘤细胞，还需进一步筛选，B错误； C、获得杂交瘤细胞后，需进行克隆化培养和专一抗体检测，经过多次筛选才能获得既能无限增殖又能产生所需抗VP1抗体的特定杂交瘤细胞，C正确； D、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，制备出抗VP1的单克隆抗体可用于开发诺如病毒快速检测试剂，便于早发现早防控，控制疾病传播，D正确。 9．（2025·北京海淀·一模）利用基因工程技术生产特定单克隆抗体的流程如下图。下列错误的是（    ） A．过程①需要使用限制酶、DNA连接酶 B．过程②是将重组质粒导入噬菌体并启动基因表达 C．过程③利用抗原-抗体的特异性结合筛选目标抗体 D．过程④可将目标抗体A的基因导入酵母菌进行发酵生产 【答案】B 【分析】据图分析，①表示构建基因表达载体的过程，②表示将目的基因表达产生噬菌体蛋白质外壳的过程，③表示对噬菌体外壳的蛋白质进行筛选的过程，④表示合成大量噬菌体获得更多抗体的过程。 【详解】A、过程①利用质粒构建表达载体，该过程需要用到限制酶和DNA连接酶，A正确； B、②表示将目的基因导入大肠杆菌或酵母菌并将抗体蛋白表达的过程，从而产生外壳上携带不同抗体的不同的噬菌体，B错误； C、③表示利用抗原抗体特异性结合的原理筛选能与特定抗原结合的抗体，C正确； D、酵母菌是真核表达系统，适合生产复杂蛋白如抗体，④表示将目标抗体A的基因导入酵母菌进行发酵生产，D正确。 故选B。 10．（2025·北京·模拟预测）下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下叙述正确的是（　　） A．①中Ti质粒应该包含标记基因、复制原点等元件 B．②的构建需要使用限制性核酸内切酶和DNA聚合酶 C．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上 D．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状 【答案】A 【分析】农杆菌转化法的原理是：农杆菌的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入Ti质粒上的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA分子中。 【详解】A、基因工程的关键步骤是构建基因表达载体，基因表达载体主要由启动子、目的基因、标记基因和终止子、复制原点组成，A正确； B、构建载体需要限制酶和DNA连接酶，B错误； C、③侵染植物细胞后，重组Ti质粒上的T-DNA整合到染色体上，C错误； D、染色体上含有目的基因，但目的基因也可能不能转录或者不能翻译，或者表达的蛋白质不具有生物活性，D错误。 故选A。 11．（2025·北京·模拟预测）下列关于动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（　　） A．它们的原理都涉及细胞膜的流动性 B．新产生的细胞中染色体数目增加 C．均需要使用胰蛋白酶处理组织细胞 D．均可用PEG融合法诱导细胞融合 【答案】C 【分析】1、植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。 2、动物细胞融合技术就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 【详解】A、动物细胞融合和植物体细胞杂交过程中，细胞的融合都依赖细胞膜的流动性，所以它们的原理都涉及细胞膜的流动性，A正确； B、动物细胞融合后形成的杂种细胞染色体数是两个细胞染色体数之和，植物体细胞杂交形成的杂种细胞染色体数也是两个细胞染色体数之和，新产生的细胞中染色体数目增加，B正确； C、动物细胞融合需要使用胰蛋白酶处理组织细胞，将组织分散成单个细胞；而植物体细胞杂交不需要胰蛋白酶处理，植物体细胞杂交需先用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，C错误； D、动物细胞融合和植物体细胞杂交均可用PEG融合法诱导细胞融合，PEG能促进细胞间融合，D正确。 故选C。 12．（2025·北京·模拟预测）传统杂交瘤技术常使用日本血凝病毒（HVJ）诱导细胞融合，生产单克隆抗体。改良杂交瘤技术通过施加不均匀的交流电场，使骨髓瘤细胞、B淋巴细胞在电极表面形成相邻的单层，在电场作用下融合成杂交瘤细胞。下列相关叙述不正确的是（    ） A．用特定抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾脏中获得B淋巴细胞 B．上述过程使用具活性HVJ，其表面某些糖蛋白可促进细胞互相凝聚而发生融合 C．杂交瘤细胞需要经过克隆化培养和抗体检测，进而获得能分泌特定抗体的细胞 D．改良杂交瘤技术可以提高细胞融合效率，但不能完全避免骨髓瘤细胞相互融合 【答案】B 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、用特定抗原对小鼠免疫，刺激小鼠产生免疫反应，从而从该小鼠的脾脏中获得B淋巴细胞，A正确； B、诱导细胞融合应使用灭活病毒，B错误； C、杂交瘤细胞需要经过克隆化培养和抗体检测，进而获得能分泌特定抗体的细胞，C正确； D、改良杂交瘤技术通过施加不均匀的交流电场，使骨髓瘤细胞、B淋巴细胞在电极表面形成相邻的单层，在电场作用下融合成杂交瘤细胞，因此可能存在同种细胞融合的现象，D正确。 故选B。 13．（2026·北京门头沟·一模）枯草芽孢杆菌在营养不足、环境恶劣等条件下会形成抗逆性强的芽孢，环境适宜时，芽孢恢复活性。我国科学家通过将芽孢包埋在可降解塑料PCL中，制备出能在特定条件下加速降解的“活塑料”（制备原理如图1），以期用于食品、日用品等包装。 (1)为获得用于制备“活塑料”的芽孢，需先在培养基中培养枯草芽孢杆菌。培养基中应提供____________（答出两种）以及水和无机盐等营养物质，全程保证____________操作。 (2)研究者构建图2所示的基因表达载体转入枯草芽孢杆菌，获得只有在木糖存在时才能大量表达并分泌脂肪酶（塑料降解酶）的工程菌。请从以下选项中选择合适的启动子和基因，将所选序号填入相应位置__。 启动子：①芽孢杆菌内源启动子②T7启动子（只被T7RNA聚合酶识别）③木糖诱导型启动子 基因： A．脂肪酶基因                                    B．脂肪酶基因+分泌信号肽基因 C．T7RNA聚合酶基因                            D．木糖合成酶基因 （注：分泌信号肽能引导蛋白质分泌到细胞外） (3)研究者将上述表达载体转入用____________处理过的枯草芽孢杆菌中，筛选得到转化成功的工程菌。再利用重金属刺激工程菌形成工程芽孢，进一步制备出活塑料。 (4)活塑料能实现“在日常使用时不降解、需要回收时启动降解”的目标。活塑料使用完回收后快速降解所需的条件是____________。 (5)为保证该技术在实际应用中的安全性，在选取工程菌株时，还需要考虑的是____________。 A．对人体和动植物无致病性 B．在完成降解任务后种群会自然衰退 C．在自然环境中具备较强的生存和扩散能力 D．所携带的外源基因不易转移至自然环境 【答案】(1) 碳源、氮源 无菌 (2)启动子 Ⅰ：③（木糖诱导型启动子），基因Ⅱ：C（T7RNA 聚合酶基因）；启动子Ⅲ：②（T7启动子），基因Ⅳ：B（脂肪酶基因+分泌信号肽基因） (3)CaCl2（或Ca²⁺） (4)添加木糖；提供适宜环境条件 (5)ABD 【详解】（1）微生物的培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。为获得用于制备“活塑料”的芽孢，需先在培养基中培养枯草芽孢杆菌，所以培养基中应提供碳源、氮源以及水和无机盐等营养物质。在微生物培养过程中，为防止杂菌污染，全程要保证无菌操作。 （2）要实现 “木糖存在才大量表达”，必须用木糖诱导型启动子（③） 来控制脂肪酶的表达。同时，脂肪酶需要分泌到胞外，因此对应的基因必须是脂肪酶基因+分泌信号肽基因（B）。T7启动子（②）只能被 T7 RNA 聚合酶识别，因此需要一个 “开关” 来控制 T7 RNA 聚合酶的表达。用木糖诱导型启动子（③）控制T7 RNA 聚合酶基因（C）：木糖存在时，启动子③激活，表达 T7 RNA 聚合酶；用T7启动子（②）控制脂肪酶 + 分泌信号肽基因（B）：T7RNA聚合酶大量表达后，会特异性识别T7启动子，启动下游脂肪酶基因的高强度转录，实现 “大量表达” 的效果。因此启动子Ⅰ（③木糖诱导型启动子）→基因Ⅱ（C T7 RNA聚合酶基因）、启动子Ⅲ（②T7启动子）→基因Ⅳ（B脂肪酶基因+分泌信号肽基因）。 （3）将基因表达载体导入微生物细胞时，常用CaCl2（Ca²⁺）处理枯草芽孢杆菌，使其成为感受态细胞，便于吸收外源DNA。 （4）由于该“活塑料”是将芽孢包埋在可降解塑料PCL中，制备出能在特定条件下加速降解的塑料，所以该塑料使用后回收后快速降解所需的条件是：添加木糖（作为诱导剂，激活木糖诱导型启动子，启动脂肪酶基因表达）；提供适宜环境条件（包括水分、温度、pH、营养物质等，促使芽孢萌发为活性工程菌，进而分泌脂肪酶降解PCL）。 （5）A、为保证技术在实际应用中的安全性，工程菌株需对人体和动植物无致病性，这样可以避免对生物造成危害，A正确； B、工程菌株在完成降解任务后种群会自然衰退，能防止其在环境中过度繁殖带来不良影响，保障安全性，B正确； C、工程菌株在自然环境中不应具备较强的生存和扩散能力，否则可能会扩散到不该去的环境中造成生态问题，C错误； D、所携带的外源基因不易转移至自然环境，可防止基因污染等安全隐患，D正确。    14．（25-26高三上·北京海淀·月考）D-乳酸是生产生物可降解塑料——聚乳酸的重要原料，因天然乳酸菌菌株的生产能力无法满足工业化生产需求，科研人员利用基因工程技术对酵母菌进行了改造。 (1)酵母菌常被改造为基因工程菌，是因其具有______等优点。 (2)D-乳酸是丙酮酸经D-乳酸脱氢酶（DH酶）催化转化而来的，酵母菌本身不具有此酶，故需从其他菌种中筛选合适的DH基因作为目的基因，从而获得转基因酵母。此项转基因技术的操作流程为：______。（请将下列字母进行排序） A．通过PCR等技术检测各DH基因是否导入 B．将各表达载体分别导入酵母菌细胞 C．人工合成各DH基因，再PCR扩增 D．构建各DH基因的表达载体 E.通过实验测定各受体细胞的D-乳酸产量 F.通过序列比对等方法在基因数据库中筛选得到多个DH基因 (3)培养获得的酵母菌进行发酵，结果见图1，结果显示：______。科研人员推测，D-乳酸可能被细胞中原有的其他代谢途径所消耗。为获得更多的D-乳酸，还需从分子水平上改造酵母菌，思路为：______。 (4)科研人员用获得的目标菌株进行发酵实验，发酵过程应严格控制发酵条件，检测微生物数量和产物浓度等，结果如图2所示。估测酵母菌种群数量时，使用分光光度计测定溶液的OD值（与酵母菌密度正相关），种群呈现______增长。由图可知，在24小时补料的目的是______。50小时后，若想获得更多产物，可考虑采取的措施是______。 【答案】(1)酵母菌繁殖速度快、易培养，遗传背景清晰（三选一） (2)FCDBAE (3)随时间延长，D-乳酸相对产量逐渐下降 敲除酵母菌自身的消耗D-乳酸相关酶基因 (4)S 为酵母菌生长和D-乳酸生产提供足够的碳源 保证连续发酵去除发酵液中的乳酸（补充葡萄糖） 【分析】基因工程技术的基本步骤（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测，个体水平上的鉴定。 【详解】（1）酵母菌常被改造为基因工程菌，其具有繁殖速度较快、遗传背景清晰、基因工程操作技术成熟等优点。 （2）基因工程的基本操作步骤为：目的基因的获取、表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 故将DH基因导入酵母菌过程为：通过序列比对等方法在基因数据库中筛选得到多个DH基因、通过PCR等方法获取各DH基因（目的基因的获取及扩增）、构建各DH基因的表达载体（表达载体的构建）、将各表达载体分别导入酵母菌细胞（将目的基因导入受体细胞）、通过PCR等技术检测各DH基因是否导入（检测目的基因是否导入受体细胞）、通过实验测定各受体细胞的D-乳酸产量（检测目的基因是否正常表达）。则此项转基因技术的操作流程为FCDBAE。 （3）图1显示随时间延长，D-乳酸相对产量逐渐下降。由图2可知，D-乳酸在D1酶和A酶的催化下被转化为乙醇。故敲除酵母菌自身的消耗D-乳酸相关酶基因，使其不能分解D-乳酸，且在无氧条件下使其进行无氧呼吸即可获得D-乳酸。 （4）图2中种群数量先增加，最后趋于稳定，这种增长方式属于S型增长。据图可知，24h时葡萄糖几乎被消耗完，此时进行补料操作可为酵母菌生长和D-乳酸生产提供足够的碳源，保证连续发酵。还可以保证连续发酵去除发酵液中的乳酸（补充葡萄糖）。 15．（2026·北京东城·一模）阿卡波糖是治疗Ⅱ型糖尿病的药物，部分患者长期使用后出现耐药现象，推测与肠道微生物有关。 (1)阿卡波糖是绝大多数生物不能利用的低聚糖，但能抑制淀粉酶等的活性，通过______来降低糖尿病患者的血糖浓度。 (2)为寻找影响阿卡波糖疗效的肠道微生物，研究者收集耐药患者的粪便样本，进行图1实验。经过图中①～⑤的步骤实现目的菌______，⑥采用______法接种以分离单个菌落，筛选后鉴定出能降解阿卡波糖的菌种TD1。 (3)为研究TD1对阿卡波糖治疗Ⅱ型糖尿病疗效的影响，研究者将Ⅱ型糖尿病模型小鼠分为4组，用如图2所示的溶液进行灌胃15天，每天1次。第15天同时还用______溶液对4组小鼠灌胃，检测结果表明TD1能够降低阿卡波糖的疗效，依据是________________________。 (4)进一步从TD1中筛选到编码阿卡波糖降解酶的apg基因。基于以上信息，请提出一种解决使用阿卡波糖后出现耐药问题的思路________________________。 【答案】(1)抑制淀粉的消化 (2) 浓度增加 稀释涂布平板 (3) 淀粉 血糖增量相对水平组2显著低于组1，组4显著高于组2 (4)抑制apg基因的表达；抑制阿卡波糖降解酶的活性 【详解】（1）阿卡波糖抑制淀粉酶等糖类消化酶的活性，可抑制淀粉的消化，减少葡萄糖的生成和肠道吸收，从而降低糖尿病患者的血糖。 （2）图1逐步提高阿卡波糖浓度，可筛选出能降解阿卡波糖的目的菌，同时让目的菌数量增加，该过程实现目的菌的浓度增加；由图示可知分离获得单个菌落，采用的接种方法为稀释涂布平板法。 （3）阿卡波糖作用是降低餐后血糖，因此第15天需要给各组灌胃等量的淀粉，再检测血糖增量；根据图2结果，血糖增量相对水平组2显著低于组1，组4显著高于组2，证明阿卡波糖降血糖效果下降，即TD1会降低阿卡波糖的疗效。 （4）耐药的原因是TD1产生降解阿卡波糖的酶，因此可从抑制apg基因的表达；抑制阿卡波糖降解酶的活性等角度提出思路。 16．（2026·北京石景山·一模）甘氨酸广泛应用于工业和医疗中，可通过大肠杆菌（MG）发酵生产，但高浓度甘氨酸会影响MG膜的通透性，抑制其生长。研究者利用Tn5转座酶系统激活与甘氨酸耐受性相关基因的表达，以获得可用于生产的工程菌。 (1)培养实验所用MG时，培养基的成分应包含水、蛋白胨、酵母提取物和无机盐，其中蛋白胨为MG提供________和维生素等。将工程菌用于生产前，需通过_______培养基进行扩大培养。 (2)Tn5转座酶可特异性识别两端含有ME序列的DNA片段（转座DNA），形成Tn5转座体，该转座体可随机插入靶DNA，见图1．基于此原理，研究者构建了Tn5介导的基因激活系统。 ①首先，研究者构建以氯霉素抗性基因（cat）为标记基因的质粒1（图2a）。由于缺乏_______，导致cat无法表达。 ②随后，将质粒1与Tn5系统（图2b）共同孵育，再转至MG中。先利用含氨苄青霉素与卡那霉素的培养基筛选，以确认_______，再经筛选获得工程菌P-01，见图2c。 ③为验证Tn5系统可激活基因表达，将MG和P-01在不同条件下培养，请完善表中的实验方案及预期结果。（注：用“+/–”表示“有/无”菌落生长） 氯霉素 _______ MG — _______ P-01 _______ _______ (3)写出利用图2b所示Tn5系统制备具有甘氨酸高耐受性工程菌的机理_______。 【答案】(1) 碳源、氮源 液体 (2) 启动子 质粒1和Tn5系统已成功转入MG 氯霉素+aTC – – + (3)利用Tn5转座酶系统，将携带报告基因（如cat）或调控元件的转座DNA随机插入大肠杆菌MG基因组中。当转座事件发生在甘氨酸耐受相关基因的启动子区域或上游时，可激活该基因表达，增强菌株对高浓度甘氨酸的耐受能力。通过在含高甘氨酸培养基中筛选存活菌株，即可获得高耐受性工程菌株（如P-01） 【详解】（1）蛋白胨是天然氮源，同时可提供碳源、维生素等营养物质，满足微生物生长需求。 液体培养基能为微生物提供充足的营养和氧气，适合工程菌的扩大培养，固体培养基多用于分离、计数和保藏。 （2）①从图2a可见，cat基因前无启动子，因此即使有抗性基因也无法转录表达。 ②使用含氨苄青霉素（amp）和卡那霉素（kan）的培养基，可筛选出成功转入Tn5系统（含kan抗性）和质粒1（含amp抗性）的菌株，只有成功转入的细胞才能在这类培养基上生长。 ③根据题干图2c，P-01中cat基因被插入某个启动子下游（由Tn5随机插入激活），且其表达受阻遏蛋白调控，而该阻遏蛋白可被aTC解除抑制。为了验证“Tn5激活了cat表达”，应在含氯霉素+aTC条件下观察P-01能否生长。若P-01中cat因Tn5插入而被启动子驱动，且aTC解除阻遏，则可在氯霉素存在下生长；而野生型MG无cat或其未被激活，故无论是否加aTC，在氯霉素下均不生长。 （3）Tn5转座酶可识别两端含ME序列的转座DNA，将其随机插入宿主基因组（靶DNA）中。当转座DNA插入甘氨酸耐受相关基因的上游（或附近）并携带启动子（如图2c中ME-cat插入后可能使下游基因被启动子驱动），即可激活该基因的表达，从而提高细胞对高浓度甘氨酸的耐受性。随后通过含高浓度甘氨酸的选择压力，筛选出因基因被激活而具有高耐受性的突变株（如P-01），最终获得可用于生产的工程菌。 17．（2025·北京东城·二模）癌症是人类健康的重大威胁之一，传统治疗手段难以实现精准治疗。超声波具有非侵入、组织穿透性强、时空特异性等特点，科研人员拟开发“响应超声波的药物递送系统”细菌以实现癌症的精准治疗。 (1)用于培养药物递送细菌的液体培养基中包含水、酵母提取物、蛋白胨等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供____和维生素。可利用____的方法快速直观地测定细菌数量，以便即时使用适量的细菌进行治疗。 (2)C蛋白有抗肿瘤作用，超声波可导致局部温度升高到42℃。科研人员制备了工程菌1，其中含有图1所示的基因表达载体。37℃培养的工程菌1接受超声波刺激后，可升温至42℃，____，从而发挥抗肿瘤作用。 (3)T蛋白有T1、T2和T3三种亚型，具有相似的功能，制备分别含有这三种基因的工程菌1，并检测C蛋白表达量，结果如图2所示。科研人员最终选择____（填T1、T2或T3）基因进行后续研究，判断的依据是_____。 (4)工程菌1只能在超声波刺激期间发挥作用，科研人员设计了含图3所示的基因表达载体的工程菌2，可以实现在短时间的超声波刺激后维持长时间的治疗。已知B基因编码的B酶可以作用于识别位点a和b，使a、b处的DNA发生断裂，最终导致a、b之间的DNA片段发生倒转。请根据以上信息，使用下列选项将表达载体补充完整。____；____；____；____；____。 ①P1启动子②P3启动子（持续表达型启动子）③T基因④C基因⑤B基因 【答案】(1) 碳源、氮源 显微镜直接计数 (2)解除T蛋白二聚体对P1启动子的抑制，启动C基因的表达 (3) T3 温度由37℃到42℃时，含有T3亚型的C蛋白表达量变化最大 (4) P3启动子 C基因 P1启动子 B基因 T基因 【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等，标记基因可便于目的基因的鉴定和筛选。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是钙离子处理法；（4）目的基因的检测与鉴定。 【详解】（1）蛋白胨的作用：蛋白胨是由蛋白质水解得到的产物，含有多种氨基酸、多肽等，可为细菌生长提供碳源、氮源（合成蛋白质、核酸等的原料），同时也可提供部分碳源和维生素。 细菌计数方法：题目要求 “快速直观” 测定细菌数量，常用方法为显微镜直接计数法（如血球计数板法），通过显微镜直接观察并计数菌体，无需培养，适合即时检测。 （2）根据图 1，工程菌 1 的基因表达载体中，C 基因由 P1 启动子驱动，且 T 基因（编码 T 蛋白）由持续表达型启动子 P2 驱动。 37℃时，T 蛋白可能抑制 P1 启动子活性，导致 C 基因不表达；当超声波刺激升温至 42℃，温度变化可能使 T 蛋白的抑制作用解除（或 P1 启动子在高温下激活），从而启动 C 基因转录，产生具有抗肿瘤作用的 C 蛋白。 （3）图 2 纵坐标为 C 蛋白表达量，横坐标为温度。观察不同 T 蛋白亚型（T1、T2、T3）对应的曲线，T3 亚型在 37℃时表达量最低，42℃时表达量最高，即温度响应最显著（表达量变化幅度最大）。 选择 T3 基因的原因是：在超声波升温（37℃→42℃）后，其驱动的 C 基因表达量激增最明显，能更高效地发挥抗肿瘤作用。 （4）目标：工程菌 2 需在短时间超声波刺激后维持长时间治疗，即通过一次刺激启动持续表达。 B 酶的作用：B 酶可识别位点 a 和 b，使中间 DNA 片段倒转。倒转后，启动子方向需与转录方向一致。 载体设计逻辑：P2启动子之后应连接T3基因；a、b之间应为持续表达型启动子，即P3启动子，其后应连接的是④C 基因；中间应为P1 启动子和B 基因，超声刺激升温后，P1启动子的抑制解除，启动B基因转录，表达的B酶使a、b之间DNA片段逆转，进而启动C基因的持续表达。 18．（2025·北京·模拟预测）靶向抗癌药物EGFR抑制剂的早期治疗是有效的，但后期癌细胞产生耐药性，使癌症无法根治。科学家通过基因工程开发出基因驱动癌细胞联合靶向抗癌药物来根治癌症。 (1)对癌细胞进行转基因操作时，常用的“分子运输车”是质粒，此外还可以是__________________。 (2)已知细胞膜上存在表皮生长因子受体EGFR，接受生长因子刺激后发生磷酸化，进而激活下游激酶，完成细胞增殖。肺癌细胞内EGFR含量远高于正常细胞。EGFR抑制剂是治疗癌症的靶向药物。科学家向肺癌细胞内导入SvEGFR融合基因表达载体获得转基因癌细胞，表达出融合蛋白，如图1所示。测定转基因癌细胞（S）内相关蛋白含量，如图2所示。 由图1可知，vEGFR_________是活化下游激酶的必要条件。 图2中第2、4组结果显示_________，说明在二聚化诱导剂作用下，靶向药物EGFR抑制剂失去了抑癌效果，S产生了耐药性。进一步研究发现，转SvEGFR的S癌细胞在特定条件下增殖能力强于普通癌细胞。 (3)科学家向上述S内进一步转入CyD基因表达载体构建基因驱动癌细胞（SC），CyD编码胞嘧啶脱氨酶，能将无细胞毒性的5-氟胞嘧啶（5-FC）转化为强效细胞毒素5-氟尿嘧啶（5-FU），5-FU能杀死癌细胞。基于上述研究，科学家开展体外实验验证基因驱动癌细胞是否具有治疗效果。 上图中i、ii、iii处分别应加入__________。 A．EGFR抑制剂 B．二聚化诱导剂 C．5-FC D．癌细胞 E．耐药癌细胞 F．SC癌细胞 (4)该研究为不同类型癌症的治疗奠定了基础，若对基因驱动癌细胞进行改造以实现精准个性化医疗，请提出改造思路_________。 【答案】(1)噬菌体的衍生物、动植物病毒 (2) 磷酸化 酸化的EGFAH和下游被活化的激酶含量在第D组高于第B组 (3)CEB (4)可以针对不同癌症特有的标志物基因，将其调控序列与CyD基因连接，构建特定的表达载体转入癌细胞，使改造后的基因驱动癌细胞只在特定癌症类型中发挥作用 【分析】基因工程的基本操作程序：目的基因的获取、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。 【详解】（1）在基因工程中，常用的“分子运输车”（载体）除了质粒外，还可以是噬菌体的衍生物、动植物病毒。 （2）由图1可知，v的磷酸化是活化下游激酶的必要条件。因为从图1的作用机制可以看到，EGFR接受生长因子刺激后发生磷酸化，才进而激活下游激酶。图2中第2组是没有二聚化诱导剂时加入EGFR抑制剂，第4组是有二聚化诱导剂时加入EGFR抑制剂。第2、4组结果显示磷酸化的EGFR和下游被活化的激酶含量在第4组高于第2组 ，说明在二聚化诱导剂作用下，靶向药物EGFR抑制剂失去了抑制效果，S产生了耐药性。 （3）首先分析实验目的是验证基因驱动癌细胞（SC）是否具有治疗效果。已知SC细胞中的CyD编码胞嘧啶脱氨酶能将5 - FC转化为5 - FU来杀死癌细胞，且存在耐药癌细胞（抗EGFR抑制剂）。 在第一步培养中，要让三种细胞（癌细胞、耐药癌细胞、SC癌细胞）在培养液中混合培养，之后加入能被SC细胞中酶转化的物质5 - FC，即i处应加入C；经过一段时间培养后，能被5 - FU杀死的癌细胞会被杀死，这里主要是普通癌细胞，即ii处应是E普通癌细胞；然后加入EGFR抑制剂，由于耐药癌细胞抗EGFR抑制剂，而SC癌细胞在有5 - FC转化出5 - FU的情况下能发挥作用，所以还需要加入二聚化诱导剂（题干虽未详细提及二聚化诱导剂作用，但从选项和实验逻辑推测，此处需要一种能辅助体现SC细胞治疗效果的物质 ），即iii处应加入B。 所以i、ii、iii处分别应加入C、E、B。 （4）可以针对不同癌症特有的标志物基因，将其调控序列与CyD基因连接，构建特定的表达载体转入癌细胞，使改造后的基因驱动癌细胞只在特定癌症类型中发挥作用。例如，若某种癌症有独特的细胞表面抗原基因的调控序列，将其与CyD基因连接，那么改造后的癌细胞就会在该种癌症细胞环境中因特异性表达而发挥治疗效果 。 -对CyD基因进行修饰，改变其编码的胞嘧啶脱氨酶的活性、底物特异性等特性，使其能更精准地响应不同癌症微环境中的信号，实现对不同类型癌症的个性化治疗。比如通过基因编辑技术改变酶的关键氨基酸位点，调整其活性强弱，以适应不同癌症治疗需求。 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $ 抢分09 生物工程与技术 答案版 考点1 发酵工程 1．D 2．D 1．A 2．C 考点2 细胞工程 1．D 2．B 1．A 2．B 考点3 基因工程 1．A 2．C 1．C 2．A 1．D 2．B 3．D 4．A 5．C 6．D 7．D 8．B 9．B 10．A 11．C 12．B 13． 【答案】(1) 碳源、氮源 无菌 (2)启动子 Ⅰ：③（木糖诱导型启动子），基因Ⅱ：C（T7RNA 聚合酶基因）；启动子Ⅲ：②（T7启动子），基因Ⅳ：B（脂肪酶基因+分泌信号肽基因） (3)CaCl2（或Ca²⁺） (4)添加木糖；提供适宜环境条件 (5)ABD 14． 【答案】(1)酵母菌繁殖速度快、易培养，遗传背景清晰（三选一） (2)FCDBAE (3)随时间延长，D-乳酸相对产量逐渐下降 敲除酵母菌自身的消耗D-乳酸相关酶基因 (4)S 为酵母菌生长和D-乳酸生产提供足够的碳源 保证连续发酵去除发酵液中的乳酸（补充葡萄糖） 15． 【答案】(1)抑制淀粉的消化 (2) 浓度增加 稀释涂布平板 (3) 淀粉 血糖增量相对水平组2显著低于组1，组4显著高于组2 (4)抑制apg基因的表达；抑制阿卡波糖降解酶的活性 16． 【答案】(1) 碳源、氮源 液体 (2) 启动子 质粒1和Tn5系统已成功转入MG 氯霉素+aTC – – + (3)利用Tn5转座酶系统，将携带报告基因（如cat）或调控元件的转座DNA随机插入大肠杆菌MG基因组中。当转座事件发生在甘氨酸耐受相关基因的启动子区域或上游时，可激活该基因表达，增强菌株对高浓度甘氨酸的耐受能力。通过在含高甘氨酸培养基中筛选存活菌株，即可获得高耐受性工程菌株（如P-01） 17． 【答案】(1) 碳源、氮源 显微镜直接计数 (2)解除T蛋白二聚体对P1启动子的抑制，启动C基因的表达 (3) T3 温度由37℃到42℃时，含有T3亚型的C蛋白表达量变化最大 (4) P3启动子 C基因 P1启动子 B基因 T基因 18． 【答案】(1)噬菌体的衍生物、动植物病毒 (2) 磷酸化 酸化的EGFAH和下游被活化的激酶含量在第D组高于第B组 (3)CEB (4)可以针对不同癌症特有的标志物基因，将其调控序列与CyD基因连接，构建特定的表达载体转入癌细胞，使改造后的基因驱动癌细胞只在特定癌症类型中发挥作用 1 / 2 学科网（北京）股份有限公司 $