内容正文:
第2章 细胞工程
第2节 动物细胞工程
1.动物细胞工程的基础是?
动物细胞培养
2.动物细胞培养的概念? 原理? 结果?
概念:从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖。
原理:细胞增殖(有丝分裂)。
结果:获得细胞群(不是完整生物体)
3.动物细胞培养的条件是什么?(营养 无菌、无毒的环境 温度、pH、渗透压 气体环境)
①按物理性质划分属于什么培养基? 培养动物细胞需要在合成培养基里加入什么天然成分?
液体培养基(培养液) 血清
②培养液为什么要定期更换?
清除代谢产物,防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害
③温度、pH的范围是多少? 适宜渗透压的目的是?
36.5±0.5℃ 7.2−7.4 维持细胞正常的形态和功能
④气体环境中,空气和CO2的比例是多少? CO2的作用是?
95%空气 + 5%CO2 维持培养液的pH
4.动物细胞培养:取材?
取材:胚胎或幼龄动物的组织、器官(细胞分裂能力强)
分散成单个细胞的方法?能用胃蛋白酶处理吗?
机械的方法;或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理 不能(胃蛋白酶适宜pH为酸性)
什么是接触抑制?
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞通常会停止分裂增殖的现象(癌细胞、瘤细胞不会)
培养的动物细胞分为哪两大类? 分裂受阻的原因分别是什么? 分别用什么收集方法?
细胞密度大、有害代谢物积累、营养物质缺乏,贴壁细胞还会发生接触抑制
贴壁细胞:胰蛋白酶处理,离心 悬浮细胞:离心
什么是原代培养? 什么是传代培养?
动物组织经处理后的初次培养 分瓶后的细胞培养
5.干细胞的概念?分类?来源?
概念:具有分裂和分化能力的细胞
胚胎干细胞 (ES):存在于早期胚胎
成体干细胞:骨髓中的造血干细胞、神经系统中的神经干细胞、睾丸中的精原干细胞
诱导多能干细胞(ips细胞)可由什么细胞转化而来? 制备方法? iPS细胞的优点?
成纤维细胞、B细胞、T细胞 制备方法:导入基因或导入蛋白或小分子化合物诱导
优点:诱导过程无须破坏胚胎;避免免疫排斥
6.动物细胞融合技术概念? 原理? 意义? 融合方法? 与植物不同的融合方法是? 融合完成的标志?
概念:两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 原理:细胞膜的流动性
意义:突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能
诱导方法:PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法(动物细胞融合特有) 融合完成的标志:形成一个核
7.植物体细胞杂交与动物细胞融合比较(原理、融合前处理的酶、诱导融合方法、结果、融合完成的标志、意义)
8.单克隆抗体:概念? 使用的技术? 原理?
概念:由单个杂交瘤细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体。
技术:动物细胞融合、动物细胞培养 原理:细胞膜的流动性、细胞增殖
注射特定抗原的目的? 从小鼠的什么部位获得B淋巴细胞? B淋巴细胞的特点?杂交瘤细胞的特点?
获得能产生特定抗体的B淋巴细胞 脾 能产生抗体,不能增殖 既能大量繁殖,又能产生抗体
第一次筛选用什么培养基?目的?
选择培养基 筛选出杂交瘤细胞(未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞死亡)
第二次筛选(可进行多次)的方法、目的?
克隆化培养、抗体检测 筛选出能产生所需特定抗体的杂交瘤细胞
抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞可以在哪培养?
体外:培养液(培养液中获取单克隆抗体) 体内:小鼠腹腔(腹水中获取单克隆抗体)
单克隆抗体的优点?
能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,可大量制备(特异性强,灵敏度高、可大量制备)
单克隆抗体的应用?
诊断试剂、运载药物、治疗疾病
9.动物细胞核移植技术概念? 原理? 生殖方式? 核移植有哪两种?
概念:将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中,使这个重新组合的细胞发育成新胚胎,进而发育成动物个体。
原理:动物细胞核的全能性 生殖方式:无性生殖。
分类:胚胎细胞核移植(分化程度低,易表现全能性)、体细胞核移植(分化程度高,不易表现全能性)
10.体细胞核移植:应用到的技术?
技术:动物细胞培养、动物细胞核移植、胚胎移植
受体细胞为什么选用MⅡ期卵母细胞?
体积大,易操作;细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质;营养物质丰富。
去核原因? 核的实质(MⅡ期核的状态)? 去核方法?
保证核遗传物质全部来自有重要价值的动物提供的体细胞 纺锤体-染色体复合物 显微操作去核法
将供体细胞注入去核卵母细胞后还需要进行细胞融合吗?
需要,电融合法使两细胞融合
什么是重构胚?激活重构胚的方法?
人工重新构建的胚胎,具有发育成完整个体的能力。
激活方法:物理或化学方法(如电刺激、钙离子载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等)
11.克隆动物的遗传特点:用体细胞核移植方法生产的克隆动物,是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗?(不是) 核基因来自? 质基因来自? 与代孕母体有关吗? 与环境有关吗?
核基因来自:核供体(体细胞) 质基因来自:核供体+核受体(体细胞+卵母细胞)
与代孕母体:无关(只提供营养和场所)。 与环境:有关(表现型是基因型与环境共同作用的结果)
1
学科网(北京)股份有限公司
$