1.2.2 微生物的基本培养技术（第2课时) 课件 2025—2026学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第1节 微生物的培养技术及应用 第2课时 微生物的选择培养和计数 第1章 选择性必修三：生物技术与工程 发酵工程 课标要求 核心素养要求 1.获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。 2.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的基础。 3.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品和无菌区域不被微生物污染的技术。 4.举例说明通过调整培养基的配方可有目的的培养某种微生物。 5.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。 6.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。 1.生命观念：物质与能量观：微生物的培养需要适宜的培养基；稳态与平衡观：获得纯净的微生物必须保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染 2.科学思维：分析培养基的成分及其作用；平板划线法和稀释涂布平板法的异同；选择培养基和鉴别培养基的区别。 3.科学探究：通过微生物的相关实验，学会培养、分离微生物，以及微生物计数的实验设计。 4.社会责任：微生物纯培养时注意操作规范，关注自身安全和环境安全；关注有害微生物的控制及宣传健康生活方式等。 微生物的培养技术和应用 选择性必修三：生物技术与工程 微生物的选择培养和计数 内容聚焦 内容1 选择培养基 内容2 微生物的选择培养 内容3 微生物的数量测定 在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶。 寻找耐高温的DNA聚合酶 PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 耐高温的酶 耐高温生物体 寻找 高温环境 寻找 原因 选择培养基 问题探讨 美国黄石公园 筛选原因： 水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存 寻找目的菌种时要根据它对___________的要求，到相应的环境中去寻找。 生存环境 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 热泉 冰川冻土层 被石油污染的土壤 【实验室中微生物筛选原理】 人为提供有利于 的条件（包括 、 和 等），同时 其他微生物的生长。 目的菌生长 营养 温度 pH 抑制或阻止 问题探讨 一、选择培养基 1.概念 在微生物学中，将允许 生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 特定种类的微生物 抑制 阻止 类型 条件 分离得到的菌种 改变培养条件 70～80℃的高温 添加某种化学物质 加入青霉素 高浓度食盐 特殊碳、氮源 石油是唯一碳源 营养缺陷 不加碳源 不加氮源 水生栖热菌 酵母菌、霉菌等真菌 金黄色葡萄球菌 能消除石油污染的微生物 自养型微生物 固氮菌 内容1 选择培养基 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 基础培养基 选择培养基 【讨论】那么如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？ 内容1 选择培养基 【思考·讨论】选择培养基配方的设计 【资料】 尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，被某些细菌分解成 ， 等才能被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成 ，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。 CO(NH2)2+H2O 脲酶 2NH3+CO2 内容1 选择培养基 脲酶 NH3 NH3再转化成NO3－、NH4＋ 1、如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。 组分 含量 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g H2O 定容至1000mL 内容1 选择培养基 【思考·讨论】选择培养基配方的设计 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 组分 含量 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml 组分 含量 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g H2O 定容至1000mL 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 内容1 选择培养基 【思考·讨论】选择培养基配方的设计 3.通过选择培养基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？ 分离： 计数： 获得分解尿素的细菌的纯培养物 测定分解尿素的细菌的数量 可否直接制备土壤溶液，利用平板划线法接种到选择培养基上，进行培养计数？为什么？ ①平板划线法最开始的划线细菌可能会长成一片，导致无法计数。 ②灼烧接种环的时候也会杀死一部分细菌，导致计数偏小。 内容1 选择培养基 稀释涂布平板法 释释涂布平板法 将菌液进行一系列 ，然后将不同稀释度的菌液分别____ 到固体培养基的表面，进行培养。 梯度稀释 涂布 (1)梯度稀释 (2)涂布平板 1.方法 2.主要过程 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 内容2 微生物的选择培养和计数 【讨论】1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 微生物的选择培养和计数 3.稀释涂布平板法具体操作过程 (1)梯度稀释 铲取土样，将样品装入纸袋中。 1 1 mL 1×102 1 mL 1×103 1 mL 1×104 1 mL 1×105 1 mL 1×106 1 mL 1×107 1×10 90mL无菌水 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶，充分摇匀。 2 3 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 内容2 微生物的选择培养和计数 【讨论】稀释后，需要进行涂布平板，不同的稀释倍数该如何考虑呢？ 3.稀释涂布平板法具体操作过程 (2)涂布平板 ①取菌液：取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ②涂布器消毒： 将涂布器浸在盛有 的烧杯中。 ④涂布平板：用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 ③涂布器灭菌：将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 滴 浸 涂 灼 内容2 微生物的选择培养和计数 酒精 (2)涂布平板 内容2 微生物的选择培养和计数 3.稀释涂布平板法具体操作过程 (3)培养与观察 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板 ，放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。 内容2 微生物的选择培养和计数 一、微生物的数量测定 倒置 一、微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法 ——间接计数法 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (1)原理: 内容3 微生物的数量测定 一个 1.稀释涂布平板法 ——间接计数法 选择 个菌落的平板进行计数； 每个稀释度至少 平板取其 ； 分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着 操作有误，需 。 (2)计数原则: 1×102 1×103 1×104 1×105 内容3 微生物的数量测定 一、微生物的数量测定 30-300 取3个 平均值 重新实验 ——间接计数法 【思考】：通过此方法统计的细菌的数目与它的实际数目相同吗 ？ 统计的菌落数往往比活菌的实际数目______。 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 1.稀释涂布平板法 内容3 微生物的数量测定 一、微生物的数量测定 ——间接计数法 (3)计算公式: 每g样品中的菌落数 = M代表稀释倍数 C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) 【例1】某研究小组测定某地1克土壤中有多少能分解尿素的细菌。甲同学用稀释倍数105的菌液涂布了3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？ （80+90+100）/3 0.1 × 105 =9 ×107个 1.稀释涂布平板法 内容3 微生物的数量测定 ( C ÷ V ) × M 1.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(　　) A.3号试管中的菌液稀释倍数为103倍 B.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数理论上是5号试管的10倍 C.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×107个 D.该实验方法统计得到的结果往往会比活菌的实际数目要高 B 习题检测 2.(2025·湖南·高考真题)采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（ ） A.稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B.完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C.土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D.用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 B 习题检测 2.显微镜直接计数法 ——直接计数法 利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 细菌计数板和血细胞计数板有什么区别？ 血细胞计数板 细菌计数板 常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。 对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 内容3 微生物的数量测定 一、微生物的数量测定 还有没有更加简便的技术方法呢? 优点 快速、直观、设备简单； 能观察微生物的形态特征。 缺点 ——直接计数法 ①不能区分死菌和活菌，统计结果会_______； ②不适于对运动细菌的计数。 ③个体小的细菌在显微镜下难以观察。 偏大 台盼蓝染液染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。 内容2 微生物的选择培养和计数 2.显微镜直接计数法 一、微生物的数量测定 ——直接计数法 = 80 ×400×104×稀释倍数 A1+A2+A3+A4+A5 1mL样品中酵母菌数= A1+A2+A3+A4+A5 80 ×400÷0.1mm3×稀释倍数 A1、A2、A3、A4、A5分别为五个中方格中的酵母菌数。 25×16型 A1 A2 A3 A4 A5 1mm3=10-3mL 2.显微镜直接计数法 一、微生物的数量测定 内容3 微生物的数量测定 ——直接计数法 = 100 ×400×104×稀释倍数 A1+A2+A3+A4 16×25型 A1 A2 A4 A3 1mL样品中酵母菌数= A1、A2、A3、A4分别为四个中方格中的酵母菌数。 A1+A2+A3+A4 100 ×400÷0.1mm3×稀释倍数 1mm3=10-3mL 2.显微镜直接计数法 一、微生物的数量测定 内容3 微生物的数量测定 比较 平板划线法 稀释涂布平板法 关键 操作 菌体 获取 特点 平板 示图 共同点 接种环在固体培养基 表面连续划线 系列梯度稀释操作和涂布平板操作 从最后划线的区域挑取 稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落 ①都能分离纯化菌种，获得单菌落； ②都是在固体培养基上进行的。 方法简单，但不能计数 可以计数，但操作复杂，需涂布多个平板 【小结1】 内容3 微生物的数量测定 测定方法 稀释涂布平板法 显微镜直接计数法 主要用具 计数数据 优点 缺点 计算结果 计算公式 菌体本身 培养基上的菌落数 计算方便、操作简单 计数的是活菌 不能区分死菌与活菌 不适于对运动细菌的计数 当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 比实际值偏小 比实际值偏大 每克样品中的菌株数 ＝(C÷V )×M 每mL含菌量＝每小格平均菌体数×400×104×稀释倍数 显微镜、细菌计数板或血细胞计数板 涂布器 【小结2】 内容3 微生物的数量测定 1.(2025·黑吉辽卷)科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素(C23H23CIN2O8)能力强的菌株,旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是( ) A.以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基 B.逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株 C.配制选择培养基时,需确保 pH 满足实验要求 D.用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面 D 习题检测 2．(2023·山东等级考)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　) A．不含氮源的平板不能用于微生物培养 B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 D 习题检测 3．如图是纯化微生物时采用的两种接种方法接种后培养的效果图，下列相关叙述正确的是(　　) A．图甲三个平板中所用培养液的稀释倍数相同 B．图甲、乙均适合分离微生物，但乙不适合对微生物进行计数 C．图甲、图乙所用的接种工具分别是接种环和涂布器 D．图乙每次划线应从同一起点开始，以便使聚集的菌种逐步稀释获 得单菌落 B 习题检测 1.提出问题 （1）如何分离土壤中能分解尿素的细菌？ （2）如何计算每克土壤样品中有多少分解尿素的细菌？ 2.实验原理 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 思考讨论 内容3 微生物的数量测定 土壤 取样 样品稀释 涂布平板 微生物的观察培养 细菌的计数 酸碱度接近 的潮湿土壤。细菌适宜在该环境中生长。 铲去表层土（一般3cm左右）。绝大部分细菌分布在距地表3～8cm的土壤层。 取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要 。操作完成后，一定要洗手。 内容3 微生物的数量测定 ①取样地点要求： ②取样过程： ③注意事项： 3、实验步骤 灭菌 中性 分离不同的微生物采用 的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同。 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。 测细菌数：一般用104、105、106 稀释液 测放线菌：一般用103、104、105 稀释液 测真菌数：一般用102、103、104 稀释液 内容3 微生物的数量测定 3、实验步骤 土壤 取样 样品稀释 涂布平板 微生物的观察培养 细菌的计数 不同 【思考】在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？ 第一次做这个实验可以将稀释的范围放宽一点，如将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。 内容3 微生物的数量测定 3、实验步骤 土壤 取样 样品稀释 涂布平板 微生物的观察培养 细菌的计数 3、实验步骤 ➊每个浓度至少设置 个平板， 1、2、3平板是 （实验组，三个重复）， 4为 。 选择培养基（平行重复） 牛肉膏蛋白胨培养基 内容3 微生物的数量测定 土壤 取样 样品稀释 涂布平板 微生物的观察培养 细菌的计数 4 选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 选择培养基（平行重复） 牛肉膏蛋白胨培养基 ➋注：整个实验还要设置 个空白对照平板：未接种的_____________培养基和______培养基；目的是： 。 2 牛肉膏蛋白胨 选择 内容3 微生物的数量测定 3、实验步骤 土壤 取样 样品稀释 涂布平板 微生物的观察培养 细菌的计数 判断培养基中是否含有杂菌 内容3 微生物的数量测定 3、实验步骤 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板 ，放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。 稀释104倍 稀释105倍 稀释106倍 空白对照 每隔 统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果， 原因： 。 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 24h 倒置 土壤 取样 样品稀释 涂布平板 微生物的观察培养 细菌的计数 (1)无菌操作: (2)做好标记: (3)规划时间: 本实验耗时较长，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。 ①取土样的用具在使用前都需要 。 ②实验操作均应在 进行。 操作提示 灭菌 酒精灯火焰旁 本实验使用的平板和试管较多，为避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的 等。 稀释度 内容3 微生物的数量测定 内容3 微生物的数量测定 【视频】 3、实验步骤 40 4、实验结果分析与评价 内容 现象 结论 有无杂菌污 染的判断 选择培养基 的筛选作用 样品的稀 释操作 重复组的结果 对照的培养皿中无菌落生长 未被杂菌污染 选择培养基中菌落数偏高 被杂菌污染 菌落形态多样，菌落数偏高 培养基中混入其他氮源 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目 选择培养基具有筛选作用 得到3个或3个以上菌落数目在30～300的平板 操作成功 若选取同一种土样，统计结果应接近 内容3 微生物的数量测定 二 你知道本实验用了多少培养基平板吗？都是什么类型的培养基平板？ 未接种的牛肉膏蛋白胨培养基平板一个 未接种的选择培养基平板一个 102 103 104 105 106 不同稀释倍数的已接种的牛肉膏蛋白胨培养基各1个 102 103 104 105 106 不同稀释倍数的已接种的选择培养基每种稀释倍数至少3个 减少实验误差，保证实验结果更准确 内容3 微生物的数量测定 4、实验结果分析与评价 【小结】每个稀释度下应涂布平板数，本实验使用总培养基平板数及其类型。 组别 具体组别 具体操作 作用 实 验 组 实验组1 选择 培养基 接种 3次重复，排除偶然因素对实验结果的影响； 用以分离并计数能分解尿素的细菌。 实验组2 接种 实验组3 接种 实验组4 完全 培养基 接种 验证选择培养基是否具有选择作用 对 照 组 对照组1 选择 培养基 不接种 验证选择培养基中是否含有杂菌 对照组2 完全 培养基 不接种 验证完全培养基中是否含有杂菌 本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如：注明组别、培养日期和稀释度。 内容3 微生物的数量测定 5.进一步探究 【思考】 在以尿素作为唯一氮源的培养基中分离出的微生物都是能分解尿素的吗？ 例如： ①固氮微生物利用N2也能生长； ②有些微生物可以利用尿素分解菌的代谢产物进行生长繁殖。 内容3 微生物的数量测定 拓展延伸 如何判定选择培养基上的菌落是否为尿素分解菌? 所以需要进一步验证 鉴定培养基 原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 CO(NH2)2+H2O 脲酶 CO2+2NH3 呈碱性，遇酚红指示剂呈红色。 酚红可用作酸碱指示剂，其变色范围较为明确。 在低pH值时（如pH<6.8），酚红呈现黄色； 在高pH值时（如pH>8.4），则呈现红色。 在pH值6.8至8.4之间，酚红会呈现橙色过渡色。 内容3 微生物的数量测定 5.进一步探究 鉴别培养基——尿素分解菌 脲酶催化尿素分解成氨 → 培养基碱性增强 → 酚红变红 → 脲酶阳性 液体培养基： 可以直接看液体的变色情况； 可以观察菌落周围是否出现 ； 红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力 。 固体培养基： 内容3 微生物的数量测定 5.进一步探究 红色环带 越强 鉴别培养基 在培养基中加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应，从而达到鉴定的作用。 伊红—亚甲蓝琼脂培养基 （鉴别大肠杆菌——菌落 呈深紫色，有金属光泽） 内容3 微生物的数量测定 几种常用的鉴别培养基 伊红—亚甲蓝琼脂培养基分离鉴别革兰氏阴性肠道杆菌 淀粉培养基 尿路菌群显色培养基 念珠菌群显色培养基 1.判断关于微生物的培养与计数的叙述 (1)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际 数(　　) (2)统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行 统计(　　) (3)利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数(　　) × × × 习题检测 2.（2021年江苏高考）（多选）为提高一株石油降解菌的净化能力，将菌涂布于石油为唯一碳源的固体培养基上,以致死率为90%的辐照剂量诱变处理，下列叙述不合理的是（ ） A.将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培养基污染的概率 B.涂布用的菌浓度应控制在30～300个/mL C.需通过预实验考察辐照时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间 D.挑取培养基上长出的较大单菌落，纯化后进行降解效率分析 AB 习题检测 3．(2023·广东汕头一模)热纤梭菌是一种能高效降解纤维素的嗜热厌氧细菌，可分泌一种多酶复合体将纤维素水解为可溶性糖，在农林废弃物的转化利用中具有应用价值。下图是筛选该菌的过程，相关叙述错误的是(　 　) A．从牛粪堆的深层取样比从表层取样更加合理 B．甲、丙都是以纤维素为唯一碳源的选择培养基 C．用平板乙统计菌落数可准确反映该菌的真实数量 D．丙中纤维素的残留量可反映该菌降解纤维素的能力 C 习题检测 50 4.在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素(浓度相同)的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如图。以下判断错误的是(　　) A. a处抑菌效果小于b处 B. b处的滤纸片没有沥干 C. c处抗生素无效 D. d为对照 A 习题检测 5.下列有关土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作，错误的是 (　　) A.取土壤用的小铁铲和装土样的信封在使用前都需要灭菌 B.测定土壤中细菌的数量一般选用102、103、104倍稀释的稀释液进行平板 培养 C.鉴定分解尿素的细菌，利用了尿素分解成氨，从而使pH升高的原理 D.用牛肉膏蛋白胨培养基作对照，来验证选择培养基是否有选择性 B 在测定土壤中细菌的数量时，一般选用104、105和106倍稀释的稀释液进行平板培养 习题检测 6.解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成脂肪酸和甘油并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是(　　) A.甲菌属于解脂菌 B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比 D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力 B 菌落周围深蓝色的直径越大，说明解脂菌分泌脂肪酶的能力越强 为了便于比较结果，可以将两种菌接种到同一平板的不同区域 乙不能分泌脂肪酶分解脂肪，没有脂肪酸的产生，不能利用脂肪，但由于乙能在该培养基上生存繁殖产生菌落，说明该培养基中除了脂肪作为碳源外，还存在别的碳源，否则乙不能在该培养基上生存 练习与应用 7.(2023·广东，10)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是( ) A.a点时取样、尿素氮源培养基 B.b点时取样、角蛋白氮源培养基 C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基 D.c点时取样、角蛋白氮源培养基 D 习题检测 （1）7.5%NaCl肉汤培养基为微生物提供的营养成分包括             ，用7.5%NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是                          。 （2）操作中在血平板上的接种方法是                       ，接种操作前后需要对接种工具进行            灭菌。 8.金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题。 增加金黄色葡萄球菌的数量 平板划线法　 灼烧 习题检测 碳源、氮源、水和无机盐 55 （3）在制备血平板时，待培养基      后，再加入适量血液．按培养基功能分类，血平板属于      培养基． （4）经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现            的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是  。 设置不加鲜牛奶但其他操作均相同的对照组 冷却 鉴别 周围存在透明圈 8.金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题。 习题检测 56 微生物的数量测定 选择培养基的作用 微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法 微 生 物 的 选 择 培 养 和 计 数 选择培养基 微生物的选择培养 科学实例 筛选原则 选择培养基的概念及举例 稀释涂布平板法的操作过程 间接计数法 — 稀释涂布平板法 直接计数法 —计数板计数法 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 培养基的制备 实验设计 （1）土壤取样 （2）样品的稀释 （3）稀释涂布平板法接种 （4）微生物的培养与观察 【小结】 课堂总结 1. 研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石油降解菌。判断下列相关表述是否正确。 (1)这种培养基是一种选择培养基。（ ） (2)用这种石油降解菌可以降解石油。修复土壤。（ ） (3)相对于未被污染的土壤,从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌。( ） √ √ √ 2.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是（ ） A. 菌落中的细菌数目是固定的 B. 平板上的一个菌落就是一个细菌 C. 通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同 D. 平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 D 练习与应用 一、概念检测 二、拓展应用 1.反刍动物，如牛和羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。 提示：反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。 ①用“尿素为唯一氮源”的选择培养基进行培养； ②创造无氧环境进行培养。 练习与应用 59 2. 地球上的植物每年产生的纤维素超过70 亿吨，其中40%～ 60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈（如下图所示）。请回答下列问题。 练习与应用 60 (1)现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。 用“纤维素为唯一碳源”的选择培养基进行培养，并在培养基加入刚果红进行鉴别。 练习与应用 几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈 土壤取样 → 富含纤维素的环境 → 以纤维素为唯一碳源，增加目的菌浓度 （选择培养基） → 制备系列稀释液 筛选产生透明圈的菌落 选择培养 涂布平板 → 将样品涂布到含刚果红的培养基上 （鉴别培养基） 梯度稀释 挑选 (2)你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？ 纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。 练习与应用 高效降解菌株的筛选： 挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落。 【进一步思考】根据培养结果，怎样选择出分解纤维素能力更强的纤维素分解菌？ 这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境，腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。 (3)有同学说，可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。 稀释涂布平板法 - 梯度稀释 1. 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶，充分摇匀。 👉 请按住左侧的土样袋，将其拖动到锥形瓶上方松开，以加入土样。 重置实验 稀释倍数 待制备 90mL 无菌水 梯度稀释组 稀释倍数 10² 9mL 水 1 10g 土样 1000 μL 移液枪 ⚠️ 提示信息 Lavf58.51.100 $