精品解析：河南南阳市第一中学校高二年级2025-2026学年春期4月检测生物学科

高二年级2026年春期4月检测生物学科 一、选择题(本题包括20小题，每题2.5分) 1. 我国利用不同微生物的发酵作用制作食品，历史悠久，在多种文献中均有记载： ①《齐民要术》中记载：“作盐水，令极咸，于盐水中洗菜，即内雍中。” ②《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，竹叶五片，隔水煮开，乘热灌封坛口。” ③《齐民要术》中记载了二十三种利用谷物酿制食醋的工艺。其经历的三个主要发酵过程为：糖化→酒化→醋化。 ④《本草纲目拾遗》中记述：“豆腐又名菽乳，豆腐腌过酒糟或酱制者，味咸甘心。” 下列说法错误的是（ ） A. ①介绍的是泡菜制作技术，配制的盐水要煮沸冷却后使用 B. ②中加热杀菌保存酒液的原理和方法，与酿酒中普遍使用的巴氏杀菌法基本相同 C. ③中食醋的酿制过程：淀粉先在微生物的作用下分解成葡萄糖，葡萄糖再在酵母菌的作用下分解成酒精，最后醋酸菌在氧气充足时将糖分解成醋酸，当缺少氧气时将乙醇变为醋酸 D. ④从微生物培养的角度看，豆腐是固体培养基，接种时不需要对其进行严格灭菌 【答案】C 【解析】 【分析】1、用谷物酿制食醋经历的三个主要发酵过程为：糖化→酒化→醋化。分别是淀粉在微生物的作用下水解成葡萄糖，葡萄糖在微生物的作用下分解成乙醇和二氧化碳（在无氧的条件下），乙醇被微生物在有氧的环境下氧化成乙酸。 2、在制作泡菜时所配制的泡菜盐水要煮沸，以杀灭盐水中的微生物，防止杂菌污染。泡菜制作过程中，温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短、容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。 3、采用较低温度(一般在60~82℃)，在规定的时间内，对食品进行加热处理，达到杀死微生物营养体的目的，是一种既能达到消毒目的又不损害食品品质的方法。由法国微生物学家巴斯德发明而得名。巴氏杀菌热处理程度比较低，一般在低于水沸点温度下进行加热，加热的介质为热水 。《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，竹叶五片，隔水煮开，乘热灌封坛口。”这种用加热杀菌保存酒液的原理和方法，与酿酒中普遍使用的巴氏杀菌法基本相同。 4、腐乳发酵过程中，豆腐就是毛霉的固体培养基；现代腐乳生产是在严格无菌条件下将优良的毛霉菌种接种在豆腐上；味咸是因为加了盐，加盐的目的除了调味外，还有抑制微生物的生长，避免腐败变质以及析出豆腐中的水分、使豆腐变硬的作用，酒的含量一般控制在12%左右，目的是抑制微生物生长，同时使腐乳具有独特的香味。 【详解】A.根据以上分析可知，①介绍的是泡菜制作技术，配制的盐水要煮沸冷却后使用，以杀灭盐水中的微生物，防止杂菌污染，A正确； B.根据以上分析可知，②中加热杀菌保存酒液的原理和方法，与酿酒中普遍使用的巴氏杀菌法基本相同，都是采用了低温加热处理的方法，B正确； C.传统酿醋工艺先是淀粉在微生物作用下分解成葡萄糖，葡萄糖再在酒化酶的作用下反应生成乙醇，在氧气充足的条件下，乙醇再被氧化生成乙酸，C错误； D.从微生物培养的角度看，豆腐是固体培养基，接种时不需要对其进行严格灭菌，D正确。 故选C。 2. 下列有关微生物实验室培养的说法不正确的有几项（ ） ①微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤 ②扩大培养时用不加琼脂的液体培养基效果更好 ③稀释涂布平板法是需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面 ④灭菌是指杀灭物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子 ⑤用选择性培养基筛选特定菌种时，需要设置一组用完全培养基培养的实验作为对照，两者所接种的菌种不同 ⑥稀释涂布平板法进行梯度稀释时，要用移液管吹吸试管中溶液几次，目的是达到足够稀释倍数 ⑦平板划线在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来自第一次划线末端 A. 1 项 B. 2 项 C. 3 项 D. 4 项 【答案】B 【解析】 【分析】含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。 1、最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，Z后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。 2、涂布平板法。首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。 【详解】①微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤，①正确； ②液体的空间更大，营养也更多，菌体繁殖上限高，所以一般用液体扩大，固体用来活化或者保藏较多，②正确； ③稀释涂布平板法是将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内，③正确； ④灭菌是指采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等，④正确； ⑤用选择性培养基筛选特定菌种时，需要设置一组用完全培养基培养的实验作为对照，两者所接种的菌种相同，⑤错误； ⑥梯度稀释过程中，用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀，⑥错误； ⑦平板划线在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来自第一次划线末端，⑦正确。 故选B。 3. 非洲猪瘟病毒是一种双链DNA病毒，可引起急性猪传染病。基因A编码该病毒的主要结构蛋白A，其在病毒侵入宿主细胞和诱导机体免疫应答过程中发挥重要作用。为了制备特定的抗原及对应的单克隆抗体，科学家获取基因A，构建了重组质粒（该质粒的部分结构如图所示），以下叙述正确的是（　　） 注：P1、P2和P3表示引物 A. 重组质粒的构建过程中用到的工具酶有限制酶，DNA连接酶，载体等 B. 为确定基因A已连接到质粒中且插入方向正确，应选用图中的P2和P3对该质粒进行PCR扩增 C. 可将重组质粒转入大肠杆菌构建重组菌，收集重组菌发酵液，进行离心，上清液中不一定能收集蛋白A D. 用蛋白A对小鼠进行免疫后，从免疫小鼠获得的B淋巴细胞就是所需的细胞 【答案】C 【解析】 【详解】A、载体不属于工具酶，重组质粒构建的工具酶是限制酶和DNA连接酶，A错误； B、应选用P1和P3引物进行PCR扩增，若能扩增出对应片段，说明基因A插入方向正确，B错误； C、大肠杆菌可作为工程菌表达蛋白A，发酵后离心，如果蛋白A没有释放到细胞外，上清液不一定能收集到A蛋白，C正确； D、免疫后的B淋巴细胞有多种，需通过抗原-抗体杂交筛选出能产生特异性抗体的B淋巴细胞，D错误。 4. 一定浓度的福尔马林（甲醛的水溶液）通过使蛋白质变性而起防腐作用。可从活性污泥中分离出高效分解甲醛的细菌，以处理废弃的福尔马林。下图是筛选和纯化甲醛分解菌的实验过程示意图，其中LB培养基能使菌种成倍扩增。下列相关叙述错误的是（ ） A. 筛选甲醛分解菌的培养基中要添加甲醛作为唯一的碳源 B. ③→④接种的目的是通过单个菌落分离出甲醛分解菌 C. 步骤⑤中，各个培养瓶中的甲醛溶液要有一定的浓度梯度 D. 测定并选出甲醛浓度最低的培养瓶后，筛选对应的菌株 【答案】C 【解析】 【分析】在分离和纯化分解甲醛的细菌的过程中，通过①过称制取各种菌的悬浊液，此过程中的活性污泥不需要灭菌操作，②过程可以获得各种微生物，③中的培养基中的碳源只含有甲醛，只有可以分解甲醛的细菌能够存活，所以通过③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物，④过程可以获得单菌落，获得单菌落过程中常用的接种方法是平板划线法或者稀释涂布平板法。 【详解】A、由于甲醛分解菌能利用甲醛作为碳源，而不能分解甲醛的菌体不能利用甲醛做碳源，所以筛选甲醛分解菌的培养基中要添加甲醛作为唯一的碳源，在此培养基上不能分解甲醛的菌体因缺少碳源而不能生长，A正确； B、③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物，④过程可以获得单菌落，接种目的是通过单个菌落分离出分解甲醛的菌体，B正确； CD、步骤⑤中，各个培养瓶中的甲醛溶液的浓度要相同，将不同的甲醛分解菌分别接种到各个培养瓶中，一段时间后检测培养瓶中甲醛的含量，选出甲醛浓度最低的培养瓶后，筛选对应的菌株可获得分解甲醛能力强的甲醛分解菌，C错误；D正确。 故选C。 【点睛】本题知识点是微生物的选择培养，主要考查学生的识图能力和利用题图信息解决问题的能力。 5. 某研究小组用图1所示的玻璃发酵罐、充氧泵、回旋式单向阀等组装了一种果酒、果醋两用发酵装置。图2是发酵过程中培养液pH可能的变化情况。下列叙述错误的是（　　） A. 图1中空气过滤器可以过滤通入空气中的细菌 B. 由果酒发酵转为果醋发酵时，需要降低温度，并打开软管夹 C. 进行果酒发酵后期，需关软管夹，隔段时间开单向阀排气 D. 图2中，能表示整个发酵过程中pH变化情况的是曲线② 【答案】B 【解析】 【详解】A、空气过滤器能对通入的空气进行无菌过滤，从而对发酵罐中的培养液实现无菌换气，A正确； B、利用图1中装置进行果酒发酵时，需要的是无氧条件，此时软管夹应关闭，酵母菌发酵的最适温度为18~30℃，而醋酸菌最适宜的生长温度为30~35℃，比酵母菌酒精发酵时的温度高，醋酸菌是好氧菌，因此由果酒转变成果醋的制作时，需要升高温度和打开软管夹与充氧泵，通入氧气，B错误； C、果酒发酵前期，需打开软管夹通气，有利于酵母菌大量繁殖；果酒发酵后期，需关闭软管夹，有利于无氧呼吸产生酒精，酵母菌无氧呼吸产生酒精的同时会产生少量CO2，所以隔段时间开单向阀排气，C正确； D、整个发酵过程中酵母菌细胞呼吸会产生CO2，使培养液的pH逐渐降低，因此图2中能表示整个发酵过程中 pH变化情况的是曲线②，D正确。 故选B。 6. 进行生物工程设计时，下表各组所选择的实验材料与实验目的配置错误的是（　　） 组别 实验目的 实验材料 材料特点 A 动物细胞核移植 卵母细胞 细胞体积大、细胞质能有效激发细胞核全能性表达 B 体细胞诱变育种 愈伤组织细胞 分裂能力强，易诱发突变 C 植物体细胞杂交育种 花粉粒 易于获取，易于培养 D 烧伤患者皮肤细胞移植 自体皮肤生发层细胞 分裂能力强，且不会引起免疫排斥 A. A B. B C. C D. D 【答案】C 【解析】 【详解】A、动物细胞核移植常选去核卵母细胞作为受体，卵母细胞体积大便于操作，且细胞质中含有能激发细胞核全能性表达的物质，材料选择合理，A正确； B、愈伤组织是植物脱分化形成的组织，细胞分裂能力强，分裂间期易受诱变因素诱导发生基因突变，适合用于体细胞诱变育种，B正确； C、植物体细胞杂交育种的材料应为不同种植物的体细胞，最终获得兼具两个亲本遗传物质的杂种植株；花粉粒是生殖细胞，用花粉粒进行育种属于单倍体育种范畴，不符合植物体细胞杂交的材料要求，C错误； D、自体皮肤生发层细胞分裂能力强，且遗传物质和患者完全一致，移植后不会发生免疫排斥反应，适合用于烧伤患者皮肤细胞移植，D正确。 7. 研究者拟通过有性杂交的方法将簇毛麦（2n=14）的优良性状导入普通小麦（2n=42）中。用簇毛麦花粉给数以千计的小麦小花授粉，10天后只发现两个杂种幼胚，将其离体培养，产生愈伤组织，进而获得含28条染色体的大量杂种植株。以下表述错误的是（　　） A. 簇毛麦与小麦之间存在生殖隔离 B. 培养过程中幼胚细胞经过脱分化和再分化 C. 杂种植株减数分裂时染色体能正常联会 D. 杂种植株的染色体加倍后能产生可育植株 【答案】C 【解析】 【分析】1、生殖隔离是指由于各方面的原因，使亲缘关系接近的类群之间在自然条件下不交配，即使能交配也不能产生后代或不能产生可育后代的现象。 2、植物组织培养： ①原理：植物细胞具有全能性。 ②过程：离体的植物组织、器官或细胞（外植体）经过脱分化形成愈伤组织，又经过再分化形成胚状体，最终形成植株（新植体）。 【详解】A、簇毛麦与小麦的后代在减数分裂时染色体联会紊乱，不可育，故二者之间存在生殖隔离，A正确； B、幼胚细胞经过脱分化形成愈伤组织，愈伤组织经过再分化形成胚状体或丛芽，从而得到完整植株，B正确； C、杂种植株细胞内由于没有同源染色体，故减数分裂时染色体无法正常联会，C错误； D、杂种植株的染色体加倍后能获得可育植株，D正确。 故选C。 8. 光敏色素在调节作物生长发育中具有重要作用。为研究拟南芥中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在小麦种质资源创制中的利用价值，科研人员将A基因转入到小麦中，对小麦受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列说法正确的是（　　） A. 构建基因表达载体时应选用BamHⅠ和HindⅢ这两种限制酶 B. PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温 C. 表达载体导入受体细胞后，可用含卡那霉素的培养基进行初步筛选 D. 由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因小麦均培育成功 【答案】B 【解析】 【详解】A、限制酶的选择要确保目的基因和质粒相应结构的完整性，BamHⅠ会将质粒的四环素抗性基因和卡那霉素抗性基因全部破坏，基因表达载体将没有标记基因，后续无法进行筛选，A错误； B、PCR的过程包括（90°C~95°C）变性、（50°C~65°C）退火、（72°C）延伸等三个过程，B正确； C、目的基因正确插入会导致卡那霉素抗性基因被破坏，而四环素抗性基因完整，所以初步筛选使用含四环素的培养基，C错误； D、如图丙所示结果只能说明转基因小麦中含有光敏色素基因A，但不能说明基因A是否表达，无法确定转基因小麦是否培育成功，D错误。 故选B。 9. 2018年3月14日物理学家霍金去世，他曾经患有肌肉萎缩性侧索硬化症即“渐冻症”。有研究表明该病是由于突变的基因是神经元合成了某种毒蛋白，从而阻碍了轴突内营养物质的流动；也有最新研究结果表明，利用诱导多功能干细胞（IPS细胞）制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命。下列相关描述错误的是 A. 将控制合成破坏运动神经元的毒蛋白基因替换，可以起到一定的治疗作用 B. 植入神经干细胞，使受损的运动功能得到恢复，也可以起到一定的治疗作用 C. 诱导多功能干细胞分化成多种细胞中核遗传物质不完全相同 D. 诱导多功能干细胞的分化实质是基因的选择性表达，细胞种类增多 【答案】C 【解析】 【详解】A、替换毒蛋白基因，导致神经元不能合成破坏神经元的毒蛋白，从而达到治疗的目的，A项正确； B、植入神经干细胞，可增殖分化形成相应的运动神经元，使受损的运动功能得到恢复，B项正确； C、诱导多功能干细胞分化成多种细胞属于细胞分化过程，细胞分化的实质是基因的选择性表达，细胞中的遗传物质不变，C错误； D、诱导多功能干细胞分化成多种细胞属于细胞分化过程，细胞分化过程中遗传物质不变，细胞种类增多，D正确。 故选C。 【点睛】本题考查基因工程的应用、胚胎干细胞的应用、细胞分化的相关知识。解题的关键是要结合题干信息，综合应用所学的知识进行分析和判断。 10. 如图表示培育转基因克隆羊和胚胎工程的部分操作流程，其中字母代表有关结构或个体，数字代表过程、方法．下列有关说法错误的是（ ） A. 图中过程1-7所涉及的生物技术有转基因、动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植、细胞核移植等 B. 通过1、2过程获取分散的细胞时，用到的酶是胰蛋白酶（或胶原蛋白酶），当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制 C. 图中动物细胞培养过程中应将细胞置于5％CO2的气体环境中．此培养过程中为防止杂菌感染，需要添加一定量的抗生素 D. 通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它含有促进细胞核全能性表达的物质 【答案】A 【解析】 【分析】分析题图：1是动物细胞培养，2是用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，3是取出细胞核，4是去掉卵母细胞的核，再经过核移植形成重组细胞，5是早期胚胎培养，6是胚胎移植，7是从早期胚胎中获取胚胎干细胞。 【详解】A、据分析可知，图中过程l-7所涉及的生物技术有动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植、细胞核移植等，没有使用到转基因技术，A错误； B、l、2过程需用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理贴壁生长的细胞以获取分散的细胞，因为当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制现象，B正确； C、图中动物细胞培养过程中应将细胞置于5％CO2的气体环境中，以维持培养液的pH值，此培养过程中需要添加一定量的抗生素以防止杂菌感染，C正确； D、由于去核的卵母细胞体积大、易操作、营养物质丰富以及含有促进细胞核全能性表达的物质，故通常用去核的卵母细胞作为受体细胞，D正确。 故选A。 11. 新冠病毒是一种RNA病毒，极易产生变异，其通过表面棘突蛋白（S蛋白）的受体结合域（RBD）与人体细胞表面的ACE2受体相互作用而感染细胞。科学家设计了一种自然界中不存在的蛋白质LCB1，可与S蛋白RBD紧密结合，以干扰新冠病毒的感染。下列有关说法，错误的是（ ） A. LCB1的作用效应与抗S蛋白抗体类似 B. 可用蛋白质工程进行LCB1的设计和生产 C. 新冠病毒侵入人体后可在内环境中大量增殖 D. 易感人群即使注射疫苗也仍然具有被感染的可能 【答案】C 【解析】 【分析】根据题干分析，新冠病毒通过表面棘突蛋白（S蛋白）的受体结合域（RBD）与人体细胞表面的ACE2受体相互作用而感染细胞；而蛋白质LCB1可与S蛋白的RBD结合，阻断上述过程，从而干扰新冠病毒的感染。 病原体表面的一些特定的蛋白质等物质，能够与免疫细胞表面的受体结合，从而引发免疫反应，这些能引发免疫反应的物质称为抗原。新冠病毒表面的S蛋白就是一种抗原。 抗体是机体产生的专门应对抗原的蛋白质，能与相应抗原发生特异性结合。抗体与病原体的结合可以抑制病原体的增殖或对人体细胞的黏附。 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。、蛋白质工程能够生产自然界中不存在的蛋白质。 【详解】A、LCB1能S蛋白结合，干扰新冠病毒对人体细胞的感染，说明其作用与抗体类似，A正确； B、LCB1自然界中不存在的蛋白质，可能通过蛋白质工程进行设计和生产，B正确； C、新冠病毒无细胞结构，必需寄生在人体细胞中，C错误； D、新冠病毒是一种RNA病毒，极易产生变异；易感人群注射疫苗也具有被变异的新冠病毒感染的可能，D正确。 故选C。 【点睛】 12. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述，错误的是（ ） A. 酵母菌和菜花均可作为提取DNA的材料 B. DNA溶于2mol/L的NaCl溶液 C. 向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻璃棒上有白色絮状物 D. DNA溶液中加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝 【答案】C 【解析】 【分析】DNA粗提取的原理是：DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，DNA在0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最低；DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离。 【详解】A、酵母菌和菜花含有DNA，可作为提取DNA的材料，A正确； B、DNA溶于2mol/L的NaCl溶液，B正确； C、向鸡血溶液中加蒸馏水搅拌，可使细胞破裂，释放DNA，但不会观察到玻璃棒上有白色絮状物，C错误； D、DNA与二苯胺沸水浴加热呈蓝色，D正确。 故选C。 13. 甜玉米因可溶性糖含量高具有较高商品价值，科研人员拟构建超量表达G蛋白的重组Ti质粒培育转基因甜玉米，所用含G基因的DNA片段如图1，Ti质粒的酶切位点如图2。下列关于该基因工程操作的叙述，正确的是（　　） A. M、N端分别添加SacI和NotI，可实现目的片段和Ti质粒正确连接构建重组质粒 B. 强启动子需与RNA聚合酶结合后，才能启动G基因在甜玉米细胞中的翻译过程 C. 质粒中T-DNA的作用是将G基因等目的片段整合到玉米细胞的染色体DNA上 D. 农杆菌转化后筛选转基因甜玉米时，应在培养基中加入卡那霉素进行抗性筛选 【答案】C 【解析】 【详解】A、分析酶切位点，N端在上游，M端在下游，所以M、N端分别添加Not Ⅰ和Sac Ⅰ可实现与Ti质粒的连接，A错误； B、启动子与RNA聚合酶结合后启动的是基因的转录，B错误； C、Ti质粒的T-DNA可将目的基因整合到植物细胞的染色体DNA上，C正确； D、T-DNA上的抗性基因为潮霉素抗性基因，筛选转基因甜玉米时应加入潮霉素，卡那霉素抗性基因不在T-DNA上，D错误。 14. 基因工程中，使用单个限制酶酶切构建的表达载体易出现连接方向错误和重复插入目的基因片段等现象，可通过酶切及筛选标记鉴定出符合预期的重组载体。研究小组选用的载体P和目的基因CDS片段特征如图，将CDS片段插入载体P的SacⅡ位点后对重组载体进行扩增、筛选和检测。下列叙述错误的是（　　） 注：LacZ基因表达产物为β-半乳糖苷酶，X-gal会被β-半乳糖苷酶分解，产生蓝色产物。 A. 含重组载体的宿主细胞在含X-gal的培养基上，菌落颜色为白色 B. 重组载体被PstⅠ充分酶切后电泳可能会获得长度为9.4kbDNA片段 C. 用EcoRⅠ与PstⅠ充分酶切重组载体，可判断CDS片段的连接方向 D. 用EcoRⅠ与SacⅡ充分酶切重组载体，可得到2个长度的DNA片段 【答案】D 【解析】 【详解】A、目的基因插入LacZ基因的SacⅡ位点后，LacZ被插入而导致LacZ失活，进而无法表达出有活性的β−半乳糖苷酶，不能分解X−gal产生蓝色物质，因此含重组载体的菌落为白色，A正确； B、单个限制酶酶切可能出现重复插入目的基因的情况，若插入2个CDS，重组载体总长度为4.2+2.6×2=9.4kb；载体仅含1个PstⅠ位点，CDS无 𝑃𝑠𝑡 Ⅰ位点，因此酶切后得到1条长度为9.4kb的线性片段，存在这种可能性，B正确； C、PstⅠ位于载体上紧邻 SacⅡ，若CDS插入方向不同，EcoRⅠ距离PstⅠ的长度分别为 0.5 kb和 2.1 kb，双酶切后得到的片段长度不同，因此可以判断连接方向，C正确； D、插入1个CDS的重组载体，共含有2个SacⅡ位点（CDS两端）和1个EcoRⅠ位点（CDS内部），共3个酶切位点，环状DNA经3个切点酶切后，会得到3个不同长度的DNA片段（0.5 kb、2.1 kb、4.2 kb），插入多个CDS会得到更多长度的片段，不可能只得到2个长度的片段，D错误。 15. 应用生物工程技术培育人们需要的生物新品种或新产品，提高了经济效益。如图表示培育生物新品种的过程，请据图判断下列叙述中正确的是（ ） A. 图中①过程需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶和载体 B. 图中⑤过程需要的培养基中只需加入无机营养和植物激素 C. 将prG导入细胞I，细胞I是B淋巴细胞 D. 要检测抗虫棉的抗虫特性，不需要做抗虫的接种实验，检测毒蛋白即可 【答案】C 【解析】 【分析】根据题意和图示分析可知：图中①表示基因表达载体的构建，②表示利用显微注射法将目的基因导入动物细胞的受精卵中，③表示早期胚胎发育和胚胎移植，④表示将目的基因导入植物细胞，⑤表示植物组织培养技术。 【详解】A、①表示基因表达载体的构建，该过程需要的工具酶是限制酶和DNA连接酶，载体不是工具酶，A错误； B、⑤表示采用植物组织培养技术将转基因植物细胞培育成转基因植株，该过程需要的培养基中含有植物激素、无机营养、有机营养、琼脂等，B错误； C、将PrG导入到细胞Ⅰ形成的重组细胞能产生单克隆抗体，PrG能无限增殖，则Ⅰ是B淋巴细胞，能产生抗体，C正确； D、转基因棉花是否具有抗虫特性，应该直接用害虫来食用棉花叶片，做毒性检测，D错误。 故选C。 16. T4溶菌酶耐热性差，若将该酶的第3位氨基酸进行改造（如图所示），并使第3位氨基酸和第97位氨基酸之间形成1个二硫键，可以大大提高其耐热性。下列叙述错误的是（　　） A. 根据设计的T4溶菌酶的氨基酸序列可推测出多种脱氧核苷酸序列 B. 与原基因相比，改造后的基因至少有两个碱基发生了改变 C. T4溶菌酶经高温变性后仍可与双缩脲试剂发生紫色反应 D. 改造后的T4溶菌酶需要进行功能鉴定才能应用于生产实践 【答案】B 【解析】 【详解】A、由于一种氨基酸可能对应多种密码子，因此根据设计的T4溶菌酶的氨基酸序列可能推测出多种脱氧核苷酸序列，A正确； B、基因为双链结构，参考图中密码子，与原基因相比，改造后的基因至少有两对碱基发生了改变，B错误； C、高温变性破坏蛋白质的空间结构，但肽键仍存在，双缩脲试剂与肽键反应，仍可发生紫色反应，C正确； D、改造后的蛋白质需要进行功能鉴定，确认耐热性等符合要求后才能应用于生产，D正确。 17. 下图表示生物工程常用技术的流程，下列叙述错误的是（ ） A. 若上图表示用良种牛体细胞克隆牛的培育流程，要通过细胞培养得到大量的供体细胞1，需将动物组织块分散成单个细胞 B. 若上图表示利用胚胎工程繁殖试管牛的操作流程，若要进一步增大良种牛的繁殖数量可对胚胎4进行分割处理 C. 若上图表示单克隆抗体的制备流程：用来促进细胞1和细胞2融合的灭活病毒，并未破坏其抗原结构 D. 若上图表示植物体细胞杂交流程，形成3的过程表示原生质层的融合过程，完成融合的标志是再生新的细胞壁 【答案】D 【解析】 【分析】1、动物细胞培养的具体过程：取胚胎或幼龄动物的器官或组织--剪碎组织--用胰蛋白酶处理分散成单个细胞--制成细胞悬液--转入培养液中（原代培养）--放入二氧化碳培养箱培养--贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液--转入培养液（传代培养）--放入二氧化碳培养箱培养。 2、利用植物体细胞杂交技术培育杂种植物，具体过程包括诱导植物细胞融合成杂种细胞和植物组织培养技术培育成杂种植株两过程。 【详解】A、为避免接触抑制并使细胞与培养液充分接触，通过细胞培养得到大量的供体细胞1，需将动物组织块分散成单个细胞，A正确； B、若要进一步增大良种牛的繁殖数量可对胚胎4进行分割处理，这属于无性繁殖范畴，B正确； C、若图表示单克隆抗体的制备流程：用来促进细胞1和细胞2融合的灭活病毒，并未破坏其抗原结构，只是失去其感染能力，C正确； D、植物体细胞杂交过程，形成3的过程表示原生质体（而非原生质层）的融合，完成融合的标志是再生新的细胞壁，D错误。 故选D。 18. 科研人员为研究M蛋白，构建了编码M蛋白的M基因与编码荧光蛋白的G基因融合表达的重组质粒，该质粒的部分结构如图1。为确定融合基因是否正确表达，科研人员提取了发荧光的受体细胞中的总蛋白，分成两组进行相关实验，并分别用抗M蛋白抗体和抗荧光蛋白抗体检测相应蛋白的表达情况，结果如图2和图3（抗体与相应蛋白结合后会显示出条带，条带位置与蛋白质大小有关）。下列叙述错误的是（ ） A. 用PCR检测重组质粒中是否插入完整的G-M融合基因时，应选择引物2和引物3 B. G-M融合基因在受体细胞内转录时，以a链作为模板 C. 条带1检出的蛋白为受体细胞表达的G-M融合蛋白 D. 条带2检出的蛋白可能是受体细胞自身的M基因控制合成的M蛋白 【答案】B 【解析】 【详解】A、重组质粒的模板链为3'→5'方向，PCR扩增需要引物与模板链的3'端结合。引物1结合在a链5'端，方向与扩增方向不符；引物4结合在b链5'端，方向也不符；正确引物应为引物2和引物3，A正确； B、启动子位于G基因上游（a链的5'端），转录时RNA聚合酶结合启动子，沿5'→3'方向合成RNA，因此模板链是b链（3'→5'），B错误； C、据图2可知，用抗M蛋白抗体和抗荧光蛋白抗体分别检测，均出现条带1，说明条带1是G-M融合蛋白，C正确； D、据图2可知，抗M蛋白抗体检测出现条带2，抗荧光蛋白抗体检测不出现条带2，说明条带2所检出的蛋白不是由重组质粒上的融合的M基因表达的，可能是受体细胞自身的M基因控制合成的M蛋白，D正确。 19. 下列关于试管婴儿技术的叙述，正确的是（ ） A. 在采集卵母细胞之前，需要给供卵者注射大量的促性腺激素，促进排卵 B. 从卵巢中吸取的卵母细胞，必须经体外培养获能处理后才能用于受精 C. 受精过程中，卵母细胞会发生透明带反应和卵细胞膜反应，阻止多精入卵 D. 设计试管婴儿技术，有利于生育健康的下一代，不会造成社会危害 【答案】C 【解析】 【分析】卵母细胞的采集和培养 对于实验动物如小鼠、兔，以及家畜猪、羊等，采用的主要方法是：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精；对于大家畜或大型动物，如牛，采用的主要方法是：从屠宰场已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞，或直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞，采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。 【详解】A、在采集卵母细胞之前，需要给供卵者注射适量的促性腺激素，促进超数排卵，A错误； B、从卵巢中吸取的卵母细胞，必须经体外培养成熟后才能与获能的精子受精，B错误； C、受精过程中，卵母细胞会发生透明带反应和卵细胞膜反应，这是防止多精入卵的两道屏障，C正确； D、以治疗为目的的设计试管婴儿技术，是救治患者最好、最快捷的办法之一，不是有利于生育健康的下一代，并存在伦理问题，D错误。 故选C。 20. 用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，两种引物及其与模板链的结合位置如图所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，下列叙述错误的是（　　） A. 第一轮复制得到2个DNA分子，即①②各一个 B. 第二轮复制得到4个DNA分子，即①②③④各一个 C. 第三轮复制得到8个DNA分子，其中有2个是等长的，也就是有2个X基因 D. 第四轮复制得到16个DNA分子，其中有4个X基因 【答案】D 【解析】 【分析】DNA的复制： 条件：a、模板：亲代DNA的两条母链；b、原料：四种脱氧核苷酸为；c、能量：（ATP）；d、一系列的酶。缺少其中任何一种，DNA复制都无法进行。 过程： a、解旋：首先DNA分子利用细胞提供的能量，在解旋酶的作用下，把两条扭成螺旋的双链解开，这个过程称为解旋；b、合成子链：然后，以解开的每段链（母链）为模板，以周围环境中的脱氧核苷酸为原料，在有关酶的作用下，按照碱基互补配对原则合成与母链互补的子链。 【详解】A、第一轮复制得到2个DNA分子分别含有模板链中的一条，即第一轮复制得到2个DNA分子，即①②各一个，A正确； B、第二轮复制得到4个DNA分子，①复制得到①和③，②复制得到②和④，故得到①②③④各一个，B正确； C、第三轮复制得到8个DNA分子，①复制得到①和③，③复制得到③和⑤，②复制得到②和④，④复制得到④和⑤，故第三轮复制得到8个DNA分子中到①和②各一个，③和④各两个，⑤两个且等长，即2个X基因，C正确； D、第四轮复制得到16个DNA分子，①复制得到①和③，②复制得到②和④，两个③复制得到两个③和两个⑤，两个④复制得到两个④和两个⑤，两个⑤复制得到四个⑤，故第四轮复制得到的16个DNA分子中有8个X基因，D错误。 故选D。 二、非选择题(本题包括5小题，共50分) 21. “口嚼酒”因日本著名动画电影导演新海诚的新作《你的名字》而引起人们的关注。世界上有些地方很早就有口嚼酒的记载。请回答下列相关问题： （1）口嚼酒的做法：首先需要先将米煮熟，然后放入口中咀嚼一段时间。直至米粒变为糊状，再将其吐出装入特制容器，令其发酵。在口中咀嚼的作用可能是__________。 （2）参与口嚼酒形成初期的微生物主要是来自空气中的__________，其产生酒精的场所是__________。末期形成酸味，可能是因为密封不严产生了__________等物质。 （3）口嚼酒是一种自酿酒，卫生条件难以把握，会有杂菌滋生的危险。某生物兴趣小组想探究口嚼酒制作过程中会滋生哪些微生物。进行了进一步的实验，请完善并分析实验步骤： ①制作口嚼酒 ②制作培养基 ③接种：每天同一时间将口嚼酒液体摇匀后，用稀释涂布平板法进行接种。该方法使用到的工具有__________。 ④接种：接种后在培养皿的__________注明培养日期，将所有培养基放在相同且适宜的环境下培养。 （4）经过一段适宜时间后，观察不同培养基上__________的数目和形态，并进行品种鉴定。 （5）上述实验在时间上已形成前后对照，但是还需要设置一个空白对照。目的是______。 【答案】 ①. 磨碎米粒并利用口腔唾液中的淀粉酶将米粒中的淀粉初步水解 ②. 酵母菌 ③. 细胞质基质 ④. 醋酸 ⑤. B、C ⑥. 皿底 ⑦. 菌落 ⑧. 排除培养基本身被污染的可能性 【解析】 【分析】微生物常见的接种方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种、划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。 【详解】（1）在口中咀嚼可以用牙齿磨碎米粒，并且利用口腔唾液中的淀粉酶将米粒中的淀粉初步水解成麦芽糖，通过咀嚼可以增大酶与米饭的接触面积，有利于发酵。 （2）酿酒是利用酵母菌无氧呼吸产生酒精，该酵母菌主要是来自空气，无氧呼吸的场所在细胞质基质中。末期形成酸味，可能是因为密封不严，混入了醋酸菌，导致产生了醋酸等物质。 （3）③稀释涂布平板法进行接种时，用到的工具有B涂布器和C移液管。 ④接种后在培养皿的皿底注明培养日期。 （4）因为探究口嚼酒制作过程中会滋生哪些微生物，故经过一段适宜时间后，观察不同培养基上菌落的数目和形态，并进行品种鉴定。 （5）上述实验在时间上已形成前后对照，但是还需要设置一个空白对照，目的是排除培养基本身被污染的可能性。 【点睛】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。酵母菌无氧呼吸会产生酒精、CO2等物质。 22. 如图为A、B不同物种间体细胞杂交示意图，请回答下列问题： （1）去除细胞壁而不损伤细胞可用_____和_____处理。在用化学促融剂处理时，使用的促融剂主要是_____。 （2）融合细胞中可能包括_____种类型（仅考虑细胞两两融合）的情况，其中杂种细胞的遗传物质组成是_____。 （3）由杂种细胞经人工诱导培养，经_____（填分裂方式）分裂增加细胞数目并不断分化，逐渐发育成C杂种植株。 （4）整个培养过程应用了细胞工程的_____和_____两大技术，这种方法培育杂种植株的意义是_____。 【答案】（1） ①. 纤维素酶 ②. 果胶酶 ③. PEG##聚乙二醇 （2） ①. 3 ②. A和B植物的遗传物质之和 （3）有丝 （4） ①. 植物体细胞杂交 ②. 植物组织培养 ③. 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育作物新品种等 【解析】 【分析】采用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁；诱导原生质体融合的化学试剂是聚乙二醇；原生质体融合的理论基础是细胞膜的流动性；原生质体融合时，有AA、BB、AB三种类型；杂种细胞具有融合前两种植物的遗传物质；植物组织培养包括脱分化和再分化，其原理是植物细胞具有全能性，涉及的细胞分裂方式是有丝分裂；植物体细胞杂交的优点是克服远缘杂交不亲和的障碍。 【小问1详解】 细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性可推测，去除细胞壁而不损伤细胞可用纤维素酶和果胶酶处理。在用化学促融剂处理时，使用的促融剂主要是PEG（或聚乙二醇），原生质体的融合过程体现了膜的流动性。 【小问2详解】 若仅仅考虑两两融合，则融合细胞中可能包括3种类型，分别为AA、BB和AB融合型，其中杂种细胞为AB型，其中的遗传物质组成是A和B植物的遗传物质之和。 【小问3详解】 由杂种细胞经人工诱导培养，即经过植物组织培养可获得杂种植株，该过程中涉及的分裂方式为有丝分裂，经过分化逐渐发育成C杂种植株。 【小问4详解】 结合图示可知，整个培养过程应用了细胞工程的植物体细胞杂交和植物组织培养两大技术，该杂种植株的培育表现出的优势为打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育作物新品种等。 23. 随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图分析并回答下列问题。 （1）图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的有应用___________(填数字)。 （2）应用1中，为了大量获取细胞B，需对供体2注射___________，使用___________技术获得重组细胞，最终获得的良种小牛性别为___________。 （3）供体1完成体内受精的场所在___________。在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其___________，胚胎移植前需要对受体进行___________处理。 （4）应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题：对囊胚阶段的胚胎通过___________技术获得二分胚①和②，操作时需要注意___________，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。 【答案】（1）1、3 （2） ①. 促性腺激素 ②. 体细胞核移植 ③. 雌性 （3） ①. 输卵管 ②. 获能 ③. 同期发情 （4） ①. 胚胎分割 ②. 将内细胞团进行均等分割 【解析】 【小问1详解】 应用1采用了核移植技术，形成克隆动物，属于无性生殖；应用2采用体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植技术，形成的是试管动物，属于有性生殖；应用4表示从早期胚胎或原始性腺中提取胚胎干细胞；应用3采用了胚胎分割技术，属于无性生殖，故图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的为应用1、3。 【小问2详解】 应用1中，为了大量获取细胞B，即卵母细胞，需要对供体2注射促性腺激素，使其超数排卵，使用动物体细胞核移植技术获得重组细胞，由于供体1是良种荷斯坦高产奶牛，其提供细胞核，所以最终获得的良种小牛为雌性。 【小问3详解】 供体1完成体内受精的场所发生在输卵管内，在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行获能处理，因为获能后的精子才具备与卵细胞受精的能力，应用2过程中得到的胚胎应该移植到和供体同种的、生理状态相同的雌性动物体内，因此受体雌性动物需要经过同期发情处理。 【小问4详解】 应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题：对囊胚阶段的胚胎通过胚胎分割技术获得二分胚①和②，对囊胚阶段的胚胎进行分割时需要将内细胞团进行均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育，若要进行性别鉴定，取滋养层细胞进行。 24. 科学家卡彭蒂娜和杜德娜发现，细菌中存在清除入侵病毒DNA的功能系统，并发明了CRISPR/Cas9基因编辑技术，因此获得2020年诺贝尔化学奖。该系统主要包含向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白两部分：sgRNA能特异性识别结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白到相应位置剪切DNA，最终实现对靶基因序列定点编辑，其工作原理如图1所示。科研人员通过诱变得到丧失剪接功能的dCas9，并建构CRISPR/dCas9系统，保留了sgRNA引导进入基因组的能力；dCas9与VP64、P65等转录激活因子融合，形成的dCas9-SAM可用于基因调控等研究。 （1）CRISPR/Cas9系统能精准识别相关基因，依据的原理是sgRNA与目标DNA发生___________；Cas9蛋白可催化___________（填化学键名称）水解，剪切特定DNA片段。CRISPR/Cas9系统广泛存在于细菌等原核生物中的生理意义是______________________。 （2）将OCT4、KLF4、MYC及SOX2四个基因的sgRNA序列串联成的sgRNA质粒和dCas9-SAM质粒与磷脂等混合，形成包埋DNA脂质体，将脂质体加入细胞系MCF7的细胞培养皿中，即可将外源DNA导入细胞中。24h后通过添加___________筛选并进行单细胞培养即可得到基因编辑后的细胞。此过程须在37℃，气体环境为___________的细胞培养箱中进行。该实验通过4种sgRNA对MCF7细胞进行基因编辑，可实现多基因___________的目的。 （3）实验发现，CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错面造成“脱靶”，sgRNA的序列长短影响成功率，序列越短，脱靶率越高。分析脱靶最可能的原因：______________________。 （4）为了获得某水稻品种的不育系，研究人员利用Cas9蛋白对该品种的TMS5基因进行编辑。首先从水稻组织中提取总RNA，经逆转录获得总cDNA，然后通过PCR 技术可准确扩增出TMS5基因，原因是___________。在筛选出成功导入TMS5基因表达载体的水稻愈伤组织后，经多代培养仍能提取出TMS5基因，你认为TMS5基因是否已成功转化？说明你的观点及理由：___________。 【答案】 ①. 碱基互补配对 ②. 磷酸二酯键 ③. 防止外源基因插入和表达，保证原核生物自身安全和遗传稳定 ④. 抗生素G418和嘌呤霉素 ⑤. 95%空气加5%CO2的混合气体 ⑥. 同时调控(或表达) ⑦. 非基因编辑对象也可能含有与sgRNA配对的碱基序列，造成sgRNA选错对象与之错误结合而脱靶 ⑧. 加入的特定引物能与总cDNA中TMSS基因特异性结合 ⑨. 不一定，转化是指目的基因成功导入受体细胞并稳定存在和表达，仅提取到TMS5基因不能说明它能否正常表达 【解析】 【分析】1、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导入受体细胞，④目的基因的检测与鉴定。 2、基因工程的三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。 3、标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 【详解】（1）图1为CRISPR/Cas9系统作用示意图，向导RNA与DNA根据碱基互补配对原则结合；转入的基因与原DNA片段之间要形成新的磷酸二酯键才能连接起来。CRISPR/Cas9系统广泛存在于原核生物中，细菌这种清除入侵病毒DNA的生理意义是防止外源基因插入并表达，保证了细菌遗传性状的稳定。 （2）分析图2可知：将OCT4、KLF4、MYC及SOX2四个基因的sgRNA序列串联成的sgRNA质粒和dCas9- SAM质粒与磷脂等混合(形 成包埋DNA脂质体结构)，将脂质体加入到细胞系MCF7的细胞培养皿中，若外源DNA导入细胞中，则细胞中有G418抗性基因和嘌呤霉素抗性基因，24h后通过添加抗生素G418和嘌呤霉素筛选并进行单细胞培养即可得到基因编辑后细胞。动物细胞培养过程须在37°C，气体环境为95%空气加5%CO2的混合气体的细胞培养箱中进行。该实验通过4种sgRNA对MCF7细胞进行编辑，可通过调控启动子序列等调控基因的表达，进而可实现多基因同时调控的目的。 （3）CRISRP/Cas9基因编辑技术中sgRNA能特异性识别结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白到相应位置剪切DNA，最终实现对靶基因序列定点编辑，非基因编辑对象也可能含有与sgRNA配对的碱基序列，若sgRNA的序列越短，越容易造成sgRNA选错对象与之错误结合而脱靶。 （4）从水稻组织中提取总RNA，经逆转录获得总cDNA，因为加入的特定引物能与总cDNA中TMSS基因特异性结合，可通过PCR技术可准确扩增出TMS5基因。转化是指目的基因成功导入受体细胞并稳定存在和表达，仅提取到TMS5基因不能说明它能否正常表达。在筛选出成功导入TMS5基因表达载体的水稻愈伤组织后，经多代培养仍能提取出TMS5基因，不能说明TMS5基因一定成功转化。 【点睛】本题考查了基因工程的原理及技术的有关知识，要求学生掌握基因工程的工具以及作用部位，并结合题图信息准确答题。 25. 草莓果实采后难以保鲜是生产实践的难题。乙烯在调控果实成熟基因的协同表达中起着非常重要的作用。研究人员通过反义RNA技术抑制乙烯受体基因Ersl的表达，达到延长储藏期的效果。CTAB法提取草莓叶片DNA的部分实验步骤如图1。请回答下列问题： （1）CTAB提取液中含有CTAB、EDTA、NaCl等物质，CTAB能破坏膜结构，使蛋白质变性，使核酸分离出来；EDTA是一种DNA酶抑制剂，加入其的目的是___________。氯仿、异戊醇密度均大于水且不溶于水，DNA不溶于氯仿、异戊醇，而蛋白质等杂质可溶，实验中加入氯仿、异戊醇离心后，应取①是___________(填“上清液”或“中层溶液”或“沉淀”)，该步骤重复1—2次，继续进行下面两个步骤就可得到DNA粗制品。 （2）通过上述方法获得DNA后，DNA经进一步提纯后，通过PCR技术扩增Ersl。在PCR体系中，加入的dNTP可提供___________，耐高温的DNA聚合酶需要___________激活，添加引物的序列不能过短，否则会导致其特异性___________(填“降低”或“升高”)。 （3）为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Ersl时，需在引物的___________端添加限制酶Xho I的识别序列。经Xho I酶切后的载体和Ersl进行连接(如图2)，连接产物经筛选得到的载体主要有___________三种类型。为鉴定这些连接方式，选择Hpa I酶和BamH I酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析。若电泳结果出现长度为___________的片段，该重组质粒即为所需的基因表达载体。 （4）将筛选得到的重组质粒与用___________处理后的农杆菌混合，使重组质粒进入农杆菌。用阳性农杆菌感染植物细胞，在含___________的培养基中培养，筛选所需的植物细胞经过一系列处理，最终得到的转基因植株的乙烯受体的合成受阻，其原因___________。 【答案】（1） ①. 减少 DNA 水解(，提高 DNA 的完整性和总量) ②. 上清液 （2） ①. 原料和能量 ②. Mg2+ ③. 降低 （3） ①. 5， ②. 载体自连、Ers1与载体正向连接、Ers1与载体反向连接 ③. 800 bp 和5900 bp （4） ①. Ca2+(CaCl2） ②. 潮霉素 ③. 反义 Ers1 的转录产物通过与草莓体内 Ers1的转录产物碱基互补配对结合，使翻译过程受阻 【解析】 【分析】引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸 【小问1详解】 EDTA是一种DNA酶抑制剂，加入其目的是​​抑制DNA酶的活性，减少 DNA 水解(提高 DNA 的完整性和总量)。氯仿、异戊醇密度均大于水且不溶于水，DNA不溶于氯仿、异戊醇，而蛋白质等杂质可溶，实验中加入氯仿、异戊醇离心后，蛋白质等杂质溶解在下层，DNA存在于上清液。 【小问2详解】 在PCR体系中，加入的dNTP可提供​​合成DNA的原料和能量​​。 耐高温的DNA聚合酶需要​​Mg²⁺​​激活。 添加引物的序列不能过短，否则会导致其特异性​​降低​​。 【小问3详解】 为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Ersl时，需在引物的​​5'​​端添加限制酶Xho I的识别序列。 经Xho I酶切后的载体和Ersl进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有载体自连、Ers1与载体正向连接、Ers1与载体反向连接三种类型。由图根据Ersl的转录方向，选择Hpa I酶和BamH I酶对筛选的载体进行双酶切，会产生200+（700-100）=800bp 和6000+700-800=5900 bp两个片段，则该重组质粒即为所需的基因表达载体。 【小问4详解】 农杆菌是原核生物，需要Ca2+（CaCl2）处理，使其处于易于吸收外源DNA的状态，完成将基因表达载体导入受体细胞的过程。其中基因表达载体上含有潮霉素抗性基因，属于标记基因，故可在含潮霉素的培养基上培养、筛选农杆菌，筛选所需的植物细胞经过一系列处理，最终得到的转基因植株，反义 Ers1 的转录产物通过与草莓体内 Ers1的转录产物碱基互补配对结合，使翻译过程受阻，使得到的植株的乙烯受体的合成受阻。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 高二年级2026年春期4月检测生物学科 一、选择题(本题包括20小题，每题2.5分) 1. 我国利用不同微生物的发酵作用制作食品，历史悠久，在多种文献中均有记载： ①《齐民要术》中记载：“作盐水，令极咸，于盐水中洗菜，即内雍中。” ②《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，竹叶五片，隔水煮开，乘热灌封坛口。” ③《齐民要术》中记载了二十三种利用谷物酿制食醋的工艺。其经历的三个主要发酵过程为：糖化→酒化→醋化。 ④《本草纲目拾遗》中记述：“豆腐又名菽乳，豆腐腌过酒糟或酱制者，味咸甘心。” 下列说法错误的是（ ） A. ①介绍的是泡菜制作技术，配制的盐水要煮沸冷却后使用 B. ②中加热杀菌保存酒液的原理和方法，与酿酒中普遍使用的巴氏杀菌法基本相同 C. ③中食醋的酿制过程：淀粉先在微生物的作用下分解成葡萄糖，葡萄糖再在酵母菌的作用下分解成酒精，最后醋酸菌在氧气充足时将糖分解成醋酸，当缺少氧气时将乙醇变为醋酸 D. ④从微生物培养的角度看，豆腐是固体培养基，接种时不需要对其进行严格灭菌 2. 下列有关微生物实验室培养的说法不正确的有几项（ ） ①微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤 ②扩大培养时用不加琼脂的液体培养基效果更好 ③稀释涂布平板法是需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面 ④灭菌是指杀灭物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子 ⑤用选择性培养基筛选特定菌种时，需要设置一组用完全培养基培养的实验作为对照，两者所接种的菌种不同 ⑥稀释涂布平板法进行梯度稀释时，要用移液管吹吸试管中溶液几次，目的是达到足够稀释倍数 ⑦平板划线在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来自第一次划线末端 A. 1 项 B. 2 项 C. 3 项 D. 4 项 3. 非洲猪瘟病毒是一种双链DNA病毒，可引起急性猪传染病。基因A编码该病毒的主要结构蛋白A，其在病毒侵入宿主细胞和诱导机体免疫应答过程中发挥重要作用。为了制备特定的抗原及对应的单克隆抗体，科学家获取基因A，构建了重组质粒（该质粒的部分结构如图所示），以下叙述正确的是（　　） 注：P1、P2和P3表示引物 A. 重组质粒的构建过程中用到的工具酶有限制酶，DNA连接酶，载体等 B. 为确定基因A已连接到质粒中且插入方向正确，应选用图中的P2和P3对该质粒进行PCR扩增 C. 可将重组质粒转入大肠杆菌构建重组菌，收集重组菌发酵液，进行离心，上清液中不一定能收集蛋白A D. 用蛋白A对小鼠进行免疫后，从免疫小鼠获得的B淋巴细胞就是所需的细胞 4. 一定浓度的福尔马林（甲醛的水溶液）通过使蛋白质变性而起防腐作用。可从活性污泥中分离出高效分解甲醛的细菌，以处理废弃的福尔马林。下图是筛选和纯化甲醛分解菌的实验过程示意图，其中LB培养基能使菌种成倍扩增。下列相关叙述错误的是（ ） A. 筛选甲醛分解菌的培养基中要添加甲醛作为唯一的碳源 B. ③→④接种的目的是通过单个菌落分离出甲醛分解菌 C. 步骤⑤中，各个培养瓶中的甲醛溶液要有一定的浓度梯度 D. 测定并选出甲醛浓度最低的培养瓶后，筛选对应的菌株 5. 某研究小组用图1所示的玻璃发酵罐、充氧泵、回旋式单向阀等组装了一种果酒、果醋两用发酵装置。图2是发酵过程中培养液pH可能的变化情况。下列叙述错误的是（　　） A. 图1中空气过滤器可以过滤通入空气中的细菌 B. 由果酒发酵转为果醋发酵时，需要降低温度，并打开软管夹 C. 进行果酒发酵后期，需关软管夹，隔段时间开单向阀排气 D. 图2中，能表示整个发酵过程中pH变化情况的是曲线② 6. 进行生物工程设计时，下表各组所选择的实验材料与实验目的配置错误的是（　　） 组别 实验目的 实验材料 材料特点 A 动物细胞核移植 卵母细胞 细胞体积大、细胞质能有效激发细胞核全能性表达 B 体细胞诱变育种 愈伤组织细胞 分裂能力强，易诱发突变 C 植物体细胞杂交育种 花粉粒 易于获取，易于培养 D 烧伤患者皮肤细胞移植 自体皮肤生发层细胞 分裂能力强，且不会引起免疫排斥 A. A B. B C. C D. D 7. 研究者拟通过有性杂交的方法将簇毛麦（2n=14）的优良性状导入普通小麦（2n=42）中。用簇毛麦花粉给数以千计的小麦小花授粉，10天后只发现两个杂种幼胚，将其离体培养，产生愈伤组织，进而获得含28条染色体的大量杂种植株。以下表述错误的是（　　） A. 簇毛麦与小麦之间存在生殖隔离 B. 培养过程中幼胚细胞经过脱分化和再分化 C. 杂种植株减数分裂时染色体能正常联会 D. 杂种植株的染色体加倍后能产生可育植株 8. 光敏色素在调节作物生长发育中具有重要作用。为研究拟南芥中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在小麦种质资源创制中的利用价值，科研人员将A基因转入到小麦中，对小麦受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列说法正确的是（　　） A. 构建基因表达载体时应选用BamHⅠ和HindⅢ这两种限制酶 B. PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温 C. 表达载体导入受体细胞后，可用含卡那霉素的培养基进行初步筛选 D. 由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因小麦均培育成功 9. 2018年3月14日物理学家霍金去世，他曾经患有肌肉萎缩性侧索硬化症即“渐冻症”。有研究表明该病是由于突变的基因是神经元合成了某种毒蛋白，从而阻碍了轴突内营养物质的流动；也有最新研究结果表明，利用诱导多功能干细胞（IPS细胞）制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命。下列相关描述错误的是 A. 将控制合成破坏运动神经元的毒蛋白基因替换，可以起到一定的治疗作用 B. 植入神经干细胞，使受损的运动功能得到恢复，也可以起到一定的治疗作用 C. 诱导多功能干细胞分化成多种细胞中核遗传物质不完全相同 D. 诱导多功能干细胞的分化实质是基因的选择性表达，细胞种类增多 10. 如图表示培育转基因克隆羊和胚胎工程的部分操作流程，其中字母代表有关结构或个体，数字代表过程、方法．下列有关说法错误的是（ ） A. 图中过程1-7所涉及的生物技术有转基因、动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植、细胞核移植等 B. 通过1、2过程获取分散的细胞时，用到的酶是胰蛋白酶（或胶原蛋白酶），当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制 C. 图中动物细胞培养过程中应将细胞置于5％CO2的气体环境中．此培养过程中为防止杂菌感染，需要添加一定量的抗生素 D. 通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它含有促进细胞核全能性表达的物质 11. 新冠病毒是一种RNA病毒，极易产生变异，其通过表面棘突蛋白（S蛋白）的受体结合域（RBD）与人体细胞表面的ACE2受体相互作用而感染细胞。科学家设计了一种自然界中不存在的蛋白质LCB1，可与S蛋白RBD紧密结合，以干扰新冠病毒的感染。下列有关说法，错误的是（ ） A. LCB1的作用效应与抗S蛋白抗体类似 B. 可用蛋白质工程进行LCB1的设计和生产 C. 新冠病毒侵入人体后可在内环境中大量增殖 D. 易感人群即使注射疫苗也仍然具有被感染的可能 12. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述，错误的是（ ） A. 酵母菌和菜花均可作为提取DNA的材料 B. DNA溶于2mol/L的NaCl溶液 C. 向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻璃棒上有白色絮状物 D. DNA溶液中加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝 13. 甜玉米因可溶性糖含量高具有较高商品价值，科研人员拟构建超量表达G蛋白的重组Ti质粒培育转基因甜玉米，所用含G基因的DNA片段如图1，Ti质粒的酶切位点如图2。下列关于该基因工程操作的叙述，正确的是（　　） A. M、N端分别添加SacI和NotI，可实现目的片段和Ti质粒正确连接构建重组质粒 B. 强启动子需与RNA聚合酶结合后，才能启动G基因在甜玉米细胞中的翻译过程 C. 质粒中T-DNA的作用是将G基因等目的片段整合到玉米细胞的染色体DNA上 D. 农杆菌转化后筛选转基因甜玉米时，应在培养基中加入卡那霉素进行抗性筛选 14. 基因工程中，使用单个限制酶酶切构建的表达载体易出现连接方向错误和重复插入目的基因片段等现象，可通过酶切及筛选标记鉴定出符合预期的重组载体。研究小组选用的载体P和目的基因CDS片段特征如图，将CDS片段插入载体P的SacⅡ位点后对重组载体进行扩增、筛选和检测。下列叙述错误的是（　　） 注：LacZ基因表达产物为β-半乳糖苷酶，X-gal会被β-半乳糖苷酶分解，产生蓝色产物。 A. 含重组载体的宿主细胞在含X-gal的培养基上，菌落颜色为白色 B. 重组载体被PstⅠ充分酶切后电泳可能会获得长度为9.4kbDNA片段 C. 用EcoRⅠ与PstⅠ充分酶切重组载体，可判断CDS片段的连接方向 D. 用EcoRⅠ与SacⅡ充分酶切重组载体，可得到2个长度的DNA片段 15. 应用生物工程技术培育人们需要的生物新品种或新产品，提高了经济效益。如图表示培育生物新品种的过程，请据图判断下列叙述中正确的是（ ） A. 图中①过程需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶和载体 B. 图中⑤过程需要的培养基中只需加入无机营养和植物激素 C. 将prG导入细胞I，细胞I是B淋巴细胞 D. 要检测抗虫棉的抗虫特性，不需要做抗虫的接种实验，检测毒蛋白即可 16. T4溶菌酶耐热性差，若将该酶的第3位氨基酸进行改造（如图所示），并使第3位氨基酸和第97位氨基酸之间形成1个二硫键，可以大大提高其耐热性。下列叙述错误的是（　　） A. 根据设计的T4溶菌酶的氨基酸序列可推测出多种脱氧核苷酸序列 B. 与原基因相比，改造后的基因至少有两个碱基发生了改变 C. T4溶菌酶经高温变性后仍可与双缩脲试剂发生紫色反应 D. 改造后的T4溶菌酶需要进行功能鉴定才能应用于生产实践 17. 下图表示生物工程常用技术的流程，下列叙述错误的是（ ） A. 若上图表示用良种牛体细胞克隆牛的培育流程，要通过细胞培养得到大量的供体细胞1，需将动物组织块分散成单个细胞 B. 若上图表示利用胚胎工程繁殖试管牛的操作流程，若要进一步增大良种牛的繁殖数量可对胚胎4进行分割处理 C. 若上图表示单克隆抗体的制备流程：用来促进细胞1和细胞2融合的灭活病毒，并未破坏其抗原结构 D. 若上图表示植物体细胞杂交流程，形成3的过程表示原生质层的融合过程，完成融合的标志是再生新的细胞壁 18. 科研人员为研究M蛋白，构建了编码M蛋白的M基因与编码荧光蛋白的G基因融合表达的重组质粒，该质粒的部分结构如图1。为确定融合基因是否正确表达，科研人员提取了发荧光的受体细胞中的总蛋白，分成两组进行相关实验，并分别用抗M蛋白抗体和抗荧光蛋白抗体检测相应蛋白的表达情况，结果如图2和图3（抗体与相应蛋白结合后会显示出条带，条带位置与蛋白质大小有关）。下列叙述错误的是（ ） A. 用PCR检测重组质粒中是否插入完整的G-M融合基因时，应选择引物2和引物3 B. G-M融合基因在受体细胞内转录时，以a链作为模板 C. 条带1检出的蛋白为受体细胞表达的G-M融合蛋白 D. 条带2检出的蛋白可能是受体细胞自身的M基因控制合成的M蛋白 19. 下列关于试管婴儿技术的叙述，正确的是（ ） A. 在采集卵母细胞之前，需要给供卵者注射大量的促性腺激素，促进排卵 B. 从卵巢中吸取的卵母细胞，必须经体外培养获能处理后才能用于受精 C. 受精过程中，卵母细胞会发生透明带反应和卵细胞膜反应，阻止多精入卵 D. 设计试管婴儿技术，有利于生育健康的下一代，不会造成社会危害 20. 用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，两种引物及其与模板链的结合位置如图所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，下列叙述错误的是（　　） A. 第一轮复制得到2个DNA分子，即①②各一个 B. 第二轮复制得到4个DNA分子，即①②③④各一个 C. 第三轮复制得到8个DNA分子，其中有2个是等长的，也就是有2个X基因 D. 第四轮复制得到16个DNA分子，其中有4个X基因 二、非选择题(本题包括5小题，共50分) 21. “口嚼酒”因日本著名动画电影导演新海诚的新作《你的名字》而引起人们的关注。世界上有些地方很早就有口嚼酒的记载。请回答下列相关问题： （1）口嚼酒的做法：首先需要先将米煮熟，然后放入口中咀嚼一段时间。直至米粒变为糊状，再将其吐出装入特制容器，令其发酵。在口中咀嚼的作用可能是__________。 （2）参与口嚼酒形成初期的微生物主要是来自空气中的__________，其产生酒精的场所是__________。末期形成酸味，可能是因为密封不严产生了__________等物质。 （3）口嚼酒是一种自酿酒，卫生条件难以把握，会有杂菌滋生的危险。某生物兴趣小组想探究口嚼酒制作过程中会滋生哪些微生物。进行了进一步的实验，请完善并分析实验步骤： ①制作口嚼酒 ②制作培养基 ③接种：每天同一时间将口嚼酒液体摇匀后，用稀释涂布平板法进行接种。该方法使用到的工具有__________。 ④接种：接种后在培养皿的__________注明培养日期，将所有培养基放在相同且适宜的环境下培养。 （4）经过一段适宜时间后，观察不同培养基上__________的数目和形态，并进行品种鉴定。 （5）上述实验在时间上已形成前后对照，但是还需要设置一个空白对照。目的是______。 22. 如图为A、B不同物种间体细胞杂交示意图，请回答下列问题： （1）去除细胞壁而不损伤细胞可用_____和_____处理。在用化学促融剂处理时，使用的促融剂主要是_____。 （2）融合细胞中可能包括_____种类型（仅考虑细胞两两融合）的情况，其中杂种细胞的遗传物质组成是_____。 （3）由杂种细胞经人工诱导培养，经_____（填分裂方式）分裂增加细胞数目并不断分化，逐渐发育成C杂种植株。 （4）整个培养过程应用了细胞工程的_____和_____两大技术，这种方法培育杂种植株的意义是_____。 23. 随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图分析并回答下列问题。 （1）图中产生小牛的几个途径中，属于无性繁殖途径的有应用___________(填数字)。 （2）应用1中，为了大量获取细胞B，需对供体2注射___________，使用___________技术获得重组细胞，最终获得的良种小牛性别为___________。 （3）供体1完成体内受精的场所在___________。在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其___________，胚胎移植前需要对受体进行___________处理。 （4）应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题：对囊胚阶段的胚胎通过___________技术获得二分胚①和②，操作时需要注意___________，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。 24. 科学家卡彭蒂娜和杜德娜发现，细菌中存在清除入侵病毒DNA的功能系统，并发明了CRISPR/Cas9基因编辑技术，因此获得2020年诺贝尔化学奖。该系统主要包含向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白两部分：sgRNA能特异性识别结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白到相应位置剪切DNA，最终实现对靶基因序列定点编辑，其工作原理如图1所示。科研人员通过诱变得到丧失剪接功能的dCas9，并建构CRISPR/dCas9系统，保留了sgRNA引导进入基因组的能力；dCas9与VP64、P65等转录激活因子融合，形成的dCas9-SAM可用于基因调控等研究。 （1）CRISPR/Cas9系统能精准识别相关基因，依据的原理是sgRNA与目标DNA发生___________；Cas9蛋白可催化___________（填化学键名称）水解，剪切特定DNA片段。CRISPR/Cas9系统广泛存在于细菌等原核生物中的生理意义是______________________。 （2）将OCT4、KLF4、MYC及SOX2四个基因的sgRNA序列串联成的sgRNA质粒和dCas9-SAM质粒与磷脂等混合，形成包埋DNA脂质体，将脂质体加入细胞系MCF7的细胞培养皿中，即可将外源DNA导入细胞中。24h后通过添加___________筛选并进行单细胞培养即可得到基因编辑后的细胞。此过程须在37℃，气体环境为___________的细胞培养箱中进行。该实验通过4种sgRNA对MCF7细胞进行基因编辑，可实现多基因___________的目的。 （3）实验发现，CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错面造成“脱靶”，sgRNA的序列长短影响成功率，序列越短，脱靶率越高。分析脱靶最可能的原因：______________________。 （4）为了获得某水稻品种的不育系，研究人员利用Cas9蛋白对该品种的TMS5基因进行编辑。首先从水稻组织中提取总RNA，经逆转录获得总cDNA，然后通过PCR 技术可准确扩增出TMS5基因，原因是___________。在筛选出成功导入TMS5基因表达载体的水稻愈伤组织后，经多代培养仍能提取出TMS5基因，你认为TMS5基因是否已成功转化？说明你的观点及理由：___________。 25. 草莓果实采后难以保鲜是生产实践的难题。乙烯在调控果实成熟基因的协同表达中起着非常重要的作用。研究人员通过反义RNA技术抑制乙烯受体基因Ersl的表达，达到延长储藏期的效果。CTAB法提取草莓叶片DNA的部分实验步骤如图1。请回答下列问题： （1）CTAB提取液中含有CTAB、EDTA、NaCl等物质，CTAB能破坏膜结构，使蛋白质变性，使核酸分离出来；EDTA是一种DNA酶抑制剂，加入其的目的是___________。氯仿、异戊醇密度均大于水且不溶于水，DNA不溶于氯仿、异戊醇，而蛋白质等杂质可溶，实验中加入氯仿、异戊醇离心后，应取①是___________(填“上清液”或“中层溶液”或“沉淀”)，该步骤重复1—2次，继续进行下面两个步骤就可得到DNA粗制品。 （2）通过上述方法获得DNA后，DNA经进一步提纯后，通过PCR技术扩增Ersl。在PCR体系中，加入的dNTP可提供___________，耐高温的DNA聚合酶需要___________激活，添加引物的序列不能过短，否则会导致其特异性___________(填“降低”或“升高”)。 （3）为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Ersl时，需在引物的___________端添加限制酶Xho I的识别序列。经Xho I酶切后的载体和Ersl进行连接(如图2)，连接产物经筛选得到的载体主要有___________三种类型。为鉴定这些连接方式，选择Hpa I酶和BamH I酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析。若电泳结果出现长度为___________的片段，该重组质粒即为所需的基因表达载体。 （4）将筛选得到的重组质粒与用___________处理后的农杆菌混合，使重组质粒进入农杆菌。用阳性农杆菌感染植物细胞，在含___________的培养基中培养，筛选所需的植物细胞经过一系列处理，最终得到的转基因植株的乙烯受体的合成受阻，其原因___________。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $