山东省济南市莱芜一中2025-2026学年高二下学期期中生物试题

莱芜一中2025～2026学年下学期期中考试 高二生物参考答案 1.C 2.D 3.A 4.B 5.C 6.A 7.C 8.D 9.D 10.B 11.B 12.B 13.C 14.B 15.A 16.ACD 17.C 18.AB 19.ABC 20.AC 21、（9分，除标注外每空1分） (1) 防止杂菌污染 平板划线法、稀释涂布平板法（2分） (2) 以纤维素为唯一碳源 选择 刚果红 透明圈 (3) 偏少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 22、（14分，除标注外每空1分） （1）酒精、次氯酸钠（0,1,2分） 无菌水 (2) MS培养基 固体 维持渗透压，提供能量（2分） （3）生长素和细胞分裂素 未分化、无定形的薄壁组织团块 血细胞计数板 聚乙二醇融合法、高Ca2+-高pH融合法 无细胞壁会吸水涨破 （4）使拟南芥细胞核部分失活，减少其基因组在杂种细胞中的表达，同时保留部分基因的功能（0,1,2分） 23.（12分，除标注外每空1分） (1)体细胞分化程度高，恢复细胞核全能性较难（2分） (2) 血清 原代培养 胰蛋白酶/胶原蛋白酶 (3) 电刺激/Ca²+载体/乙醇/蛋白酶合成抑制剂 (4) 促性腺（激素） 早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移（2分） (5) 提高 组蛋白H3的甲基化水平降低，对基因A表达的抑制作用减弱（2分） 24.（10分，除标注外每空1分） (1) RNA聚合酶识别和结合的部位，起始转录 标记基因 便于重组DNA分子的筛选 HindⅢ (2)Ca²+（或CaCl2溶液） 重组植物乳酸菌（NC8）成功表达了目标蛋白ACEIP (3)内细胞团 桑葚胚或囊胚 对高血压模型小鼠多次测定血压并求平均值，然后给小鼠口服重组植物乳酸菌（NC8），持续给药一段时间，保持其他饲养条件完全一致，在给药结束后再次测定小鼠血压并求平均值，如果处理后血压显著低于处理前，则证明口服NC8具有降压效果（2分） 25.（10分，除标注外每空1分） （1）碱基互补配对 磷酸二酯键 （2）GGUCCUGCGUGA （2分） （3）SpeI和NheI 复制原点、终止子 潮霉素 （4）敲除 用布氏白粉菌感染基因改造的小麦和没有经过基因改造的小麦，如果基因改造的小麦产量高，没有改造的小麦产量低，则说明改造成功   （2分） 高二生物答案第 1 页 共 2 页 学科网（北京）股份有限公司 $莱芜一中2025~2026学年下学期期中考试 高二生物试题 2026.04 注意事项： 1.答卷前，考生务必将自己的姓名、考生号等填写在答题卡和试卷指定位置。 2.回答选择题时，选出每小题答案后、用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。如 需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡 上写在本试卷上无效。 3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1.下列关于传统发酵的说法中，合理的是 A.因为醋酸菌可将酒精氧化为醋酸，因此制作果醋前须先制果酒 B.果酒、果醋、酸奶发酵中菌种的代谢类型不同，且均无核膜包被的细胞核 C.在果酒、果醋和泡菜制作过程中，由于微生物的活动，pH值都会下降 D.泡菜制作过程中装坛压实、盐水没过菜料、坛沿边缘注满水，目的都是制造无菌环境 2.影印接种法是一种用于研究微生物抗药 性和筛选突变体的实验技术。为获得某 灭菌的丝绒布 揭起丝绒布 种氨基酸缺陷型菌株，实验人员的实验 →8 过程如图所示，其中基本培养基中缺乏 菌液 待测 丝绒布 培养基吸附菌体 某种氨基酸，而完全培养基中含有该种 菌落 280 氨基酸。下列叙述错误的是 门② 基本培养 A.过程①对菌液进行诱变处理，日的 28℃ 是提高氨基酸缺陷型菌株出现频率 2d 菌落 完全培养基 B.图中的待测培养基为完全培养基 C.过程②应挑取完全培养基上有、基本培养基对应位置无的菌落 D.氨基酸缺陷型菌株在基本培养基上能形成菌落，只是菌落的生长速度比完全培养基慢 3.通过改良发酵工艺“把玉米变成衣服”，利用大肠杆菌将玉米转化为戊二胺，再将戊二胺 转化为尼龙布，如图所示。其中戊二胺不能从大肠杆菌体内排出，且对细胞有毒害作用。 同时环境pH值低于6.5或高于8.0时，大肠杆菌生长会受到不利影响，下列叙述错误的是 籽粒 淀粉 酶解 其他成分 聚合 尼龙布 非粮原料 大肠杆菌体内 玉米精祥、玉来芯 葡萄糖 戊二胺 生物试题 第1页共10页 A.发酵时定期更换培养液，能降低戊二胺对大肠杆菌的毒害 B.发酵结束后，可采用提取、分离和纯化措施来获得戊二胺 C.该工业生产中要使用淀粉酶、纤维素酶等酶制剂 D.发酵过程中，培养液适宜置于pH中性或接近中性的条件下 4.CMV是危害烟草的主要病毒，CMV侵染烟草后，发病的叶片会褪绿变成黄色。为筛选抗 CMV的烟草突变株，科研小组进行的实验流程如图所示。下列说法正确的是 化学试剂EMS 诱变 接种」 烟草幼苗y发病的叶片一选玫叶片组织—一愈伤组织一→抗©W植株 A.烟草幼苗茎尖病毒极少，直接取其进行组织培养可得到抗CMV植株 B.若发病叶片中出现绿色区域，取该区域进行组织培养可能得到抗CMV植株 C.选取的叶片组织需先进行灭菌处理，再经过脱分化和再分化培养成抗CMV植株 D.接种CMV起到了选择作用，因此经组织培养后得到的植株无需再进行抗CMV鉴定 5.利用山金柑愈伤组织细胞(2N)和早花柠檬叶肉细胞(2N)进行体细胞杂交可以得到高品 质的杂种植株，早花柠檬富含维生素C。下图是对某杂种植株核DNA和线粒体DNA的来 源进行鉴定的结果。下列分析正确的是 1234567 1234567 1234567 1234567 上：山金柑核DNA 上：山金柑线粒体DNA 杂种植株核DNA 杂种植株线粒体DNA 下：早花柠檬核DNA下：早花柠檬线粒体DNA 对照组 实验组 A. 该实验中，诱导原生质体融合有多种手段，包括物理法、化学法和灭活病毒诱导法 B.细胞融合后获得的融合原生质体需放在无菌蒸馏水中以防杂菌污染 C.维生素C的大量合成可能与早花柠檬的线粒体DNA有关 D.杂种细胞经过组织培养得到的杂种植株是四倍体 6.红豆杉是频危植物，其树皮产生的紫杉醇对抗癌有一定的疗效。如图是红豆杉植物组织培 养和细胞培养的流程图，图中②为愈伤组织，通过B过程 可最终产生新的植株，通过C过程可产生大量细胞。下列 ①A②B③+④ 相关叙述正确的是 C⑤ A.紫杉醇属于细胞次生代谢物，可从⑤中获取 B.A过程是脱分化，该过程中细胞增殖的方式是有丝分裂或减数分裂 C.B过程的实质是基因的选择性表达，B过程和A过程的光照条件相同 D.C过程通常采用固体培养基扩大⑤的培养 生物试题 第2页共10页 7.培育肉是利用动物体内分离的成肌细胞或全能干细胞，采用动物细胞培养技术培养出类似 于动物肌肉的肉丝，同时添加了人体所 肉类食品 需的元素如铁、钙等，使之营养更加丰 生物反应器 分离 放入 富。下列相关叙述正确的是 分离， 茨 A.用胃蛋白酶处理肌肉组织，可以获 培养液肌肉纤维 支架 (人造牛肉)》 得分裂能力强的肌肉母细胞 肌肉母细胞 B.生物反应器内应控制温度适宜，并充入一定量的CO2,主要作用是刺激细胞呼吸 C.培养液中的支架提供了更大的细胞附着面积，有利于细胞贴壁生长 D.人造牛肉的培养有利于牛肉的工厂化生产，培养液不需要更换 8.如图是制备抗白细胞介素-6（亚-6）单克隆抗体的示意图。下列说法错误的是 骨髓瘤 细胞 ③ 多种 血函兔0小国@ 某类 诱导融合细胞 淋巴细胞 ④筛选 抗L-6 分泌特定抗体⑤杂交瘤 单克隆抗体 的杂交瘤细胞厂筛选细胞 A.步骤①给小鼠注射L-6后，应从脾中分离筛选B淋巴细胞 B.步骤②在脾组织中加入胰蛋白酶，制成细胞悬液 C.步骤③加入灭活病毒或PEG诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性 D.步骤④⑤分别经过克隆化培养和抗体检测筛选出了杂交瘤细胞 9.动物细胞融合技术突破了有性杂交的局限，可用于制备单克隆抗体、培育杂种细胞等。某 科研人员诱导A、B两种动物细胞融合，之后进行细胞培养。A细胞只能在pH为46的 选择培养基I上生长，B细胞只能在pH为7~8的选择培养基Ⅱ上生长。融合细胞只能在 选择培养基Ⅱ上生长，下列关于该细胞融合实验的叙述，错误的是 A.选择培养基Ⅱ上存活的细胞可能是B细胞自身融合细胞或A-B杂种细胞 B.可用PEG融合法和电融合法诱导动物细胞融合 C.A、B两种动物细胞融合依赖于细胞膜的流动性 D.若要获得纯净的AB杂种细胞，直接收集选择培养基Ⅱ上的细胞即可 10.嵌合型胚胎是指胚胎中同时存在两种或两种以上不同染色体组成的胚胎。利用现代生物 技术，构建“人-猪嵌合胚胎”培育人源肾脏的过程如图所示。下列说法错误的是 注入人多能干细胞 人源 ●- 肾脏 SX1/SALL1缺陷 的猪成纤维细胞 ② SIX1/SALL1缺 猪的重构胚陷的早期胚胎 代孕母猪 嵌合胚胎 猪的去核卵母细胞 注：SX1和SALL1为猪成纤维细胞中的肾脏发育关键基因 生物试题 第3页共10页 A.过程①利用了显微操作技术，且卵母细胞需在体外培养到MⅡ期 B.过程①得到的重构胚具有发育成完整个体的能力 C.过程③进行前需用激素对代孕母猪进行同期发情处理 D.过程④所得的嵌合胚胎细胞中的基因组成不完全相同 11.基因组印记（通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达） 阻碍哺乳动物的“孤雌生殖”。利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变小鼠生 殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个第二极体注入修饰后的次级卵母细 胞（类似受精作用），创造出“孤雌生殖”的小鼠，过程如图所示。下列叙述正确的是 第二极体 卵母细胞 H和G12基因注人完成减数 的甲基化 分裂Ⅱ lg2r、Smpn等多 卵泡 次级卵并酸合经 个基因去甲基化母细胞 囊胚 代孕母鼠孤雌小鼠 A.基因组印记会阻碍次级卵母细胞与精子或第二极体的结合 B.需对代孕母鼠进行同期发情处理后，再进行胚胎移植，受体对移植来的胚胎几乎不发 生免疫排斥 C.“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，所以其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同 D.移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来的过程叫作孵化 I2.有关DNA粗提取与鉴定、DNA片段的扩增及电泳鉴定的实验叙述，错误的是 A.设置一组加二苯胺但是不加DNA的对照组用来排除二苯胺受热变蓝的可能 B.提取到的白色丝状物直接与一定浓度的二苯胺溶液混合，沸水浴5min后变蓝 C.电泳实验中待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时停止电泳 D.琼脂糖凝胶中加入核酸染料，便于在紫外灯下检测扩增产物 I3.THP9基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将TP9 基因转到玉米细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中TP9基因转录的方 向为从左往右。下列相关叙述错误的是 终止子 启动子 BamH I EcoR I Mfe I HindⅢ BamH I 51 上一3 Mfe I 氯苄青露素 引物1 引物2 一EcoR I 抗性基因 HindΠ 引物3 引物4 启动子 Kpn I k 5' 终止子 THP9基因 EcoR I EcoR I BanHI Kpn I Mfe I Hi2dⅢ 5-GAATTC-3 5'-GGATCC-3' 5'-GGTACC-3' S'-CAATTG- 5'-AAGCTT-3' 3'-CTTAAG-5 3'-CCTAGG-5 3'-CCATGG-5' 3'-GTTAAC-5 3-TTCGAA-5 个 个 个 生物试题 第4页共10页 A.THP9基因有2个游离的磷酸基团，而且游离的磷酸基团在5端 B.构建基因表达载体时，用M碗I、Hind III切割质粒，EcoR I、Hind III切割目的基因 C.利用PCR技术获取THP9基因时应选择引物1和引物4 D.为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，需要检测其蛋白质含量 14.乙肝病毒基因工程疫苗的生产和使用流程如图，质粒中LcZ基因可使细菌能够利用物质 X-gl,从而使菌落呈现蓝色，若无该基因，菌落则呈白色。下列叙述错误的是 EcoR I EcoRV EcoR V BamH I 青霉素 lacZ基因 抗性基因 大肠杆菌③乙肝病毒外壳 ④ ①，重组质粒 注射型接种 BamH I BamH I ⑤ ”自的基因 AUUUUUNN 出现抗体 EcoR V EcoR I A.过程①中目的基因和载体重组的效率与载体和目的基因的浓度及比例等有关 B.过程②需要在培养基中加青霉素和X-gl以获得呈蓝色的大肠杆菌菌落 C.大肠杆菌是否成功表达出乙肝病毒外壳，可用抗原一抗体杂交法进行检测 D.该基因工程疫苗不会出现乙肝病毒感染和增殖的情况，安全性高 15.使用限制酶MboI(识别4个核苷酸序列GATC)切割基因组DNA,将外源DNA片段与 载体连接后导入大肠杆菌，成功构建了基因组文库，可以从基因组文库中筛选获取目的 基因，下列相关叙述正确的是 A.使用限制酶MboI可以对基因组DNA有较高的切割频率 B.非互补的黏性末端经E.coliDNA连接酶处理后均可以转变为平末端 C.为获得有生物活性的目的蛋白，基因组文库的构建需要使用相应动植物细胞作为受体 D.使用PC℉技术筛选目的基因的前提是目的基因的全部序列是己知的 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。每小题有一个或多个选项符合题目要求， 全部选对得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 16.啤酒是以大麦芽、啤酒花、水为主要原料，经酵母发酵作用酿制而成的饱含二氧化碳的 低酒精度酒。啤酒中的低分 加啤酒花 冷封接利过沙 子糖和氨基酸很容易被吸收 利用，在体内产生大量的热 量，被称为“液体面包”。 发芽倍烤→展磨糖化藤者 →发酵上消毒→终 如图是啤酒生产工艺流程简 主发酵 后发酵 图。下列说法错误的是 A.焙烤、蒸煮处理方法在杀死活细胞的同时使所含的酶失去活性 生物试题 第5页共10页 B.发酵过程中要适时往外排气，后发酵时期应延长排气时间间隔 C.主发酵阶段酵母菌大量繁殖，后发酵阶段进行糖的分解和代谢物的生成 D.脱落酸溶液浸泡大麦种子可以有效促进-淀粉酶合成，增加麦芽汁中可发酵糖含量 17.拟矮牵牛的原生质体在X培养基(A)上只能形成小细胞团，不能形成植株，在含放线菌 素-D的X培养基(B)上培养结果相同：矮牵牛的原生质体在A上能分化成植株，但在 B上不能生长。在A、B上利用植物体细胞杂交技术均可培养出可育杂种矮牵牛。下列说 法错误的是 A.酶解法制备原生质体时，应在等渗或稍微高渗溶液中进行 B.只有杂种细胞能在B上形成植株 C.获得的杂种矮牵牛可育，说明拟矮牵牛和矮牵牛属于同一物种 D.植物体细胞杂交技术应用的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 18.黄曲霉毒素(AFB)是黄曲霉（一种真菌）产生的具有强致癌力的代谢产物。为准确检测 食品中残留的AFB,科研人员利用小鼠制备抗AFB的单克隆抗体(AFB单抗)，过程如 图所示。下列相关叙述正确的是 小鼠音髓指细胞@细乙第次细泡丙第2次细扩大搭养耶单护 AFB注射小鼠→细胞甲 筛选 筛选 A.悬浮培养的杂交瘤细胞传代培养时，可用离心法直接收集 B.灭活病毒表面的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，诱导细胞融合 C.图中涉及生物技术有动物细胞核移植和动物细胞培养，第1次与第2次筛选目的不同 D.动物细胞培养时为了保证“无菌无毒”，需要在培养基中添加抗生素和干扰素 19.重叠延伸PCR技术是采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成重叠链，从而在随后的 扩增反应中通过重叠链的延伸，获得想要的目的基因。科研人员运用重叠延伸PCR技术 在水蛭素基因的特定位点引入特定突变，以实现基因的定点突变，使水蛭素第47位的天 冬酰胺替换为赖氨酸，以提高水蛭素的抗凝血活性。原理如图。下列说法错误的是 拟突变位点 引物2 引物4 5 53 引物1 ② 引物31③ 3' S' —31 3 5 ④ 3入 ·混合、变性后，杂交 3 -3 ↓⑤ 5 3 3' 突变后的基因 注：引物凸起处代表与模板链不能互补的突变位点。 A.过程②③需要把两对引物同时加入一个扩增体系以提高扩增效率 生物试题 第6页共10页 B.若引物1、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次DNA 分子的复制后，一共会产生2种DNA分子 C.经过程④获得的杂交DNA有2种，都可以完成延伸过程 D.过程⑤使用耐高温的DNA聚合酶延伸，不需要引物 20.医学和农业生产上经常应用胚胎工程技术，相关叙述错误的是 A.进行胚胎移植前，要对供体和受体进行免疫检查，以防止发生免疫排斥反应 B.可以使用雄性动物获能的精子与处于MⅡ期卵母细胞完成受精作用 C.早期胚胎中初次分化的细胞部分形成内细胞团，可取内细胞团细胞进行胚胎性别鉴定 D.为提高胚胎利用率，可采用胚胎分割等无性繁殖技术 三、非选择题：本题共5小题。共55分。 21.滚管培养法是分离厌氧微生物的常用方法，其过程是先将样品稀释液注入盛有50℃左右 培养基的密封试管中，然后将试管平放于盛有冰块的盘中迅速滚动，带菌的培养基会在 试管内壁凝固成薄层，培养一段时间后即可获得单菌落。研究小组按照如图所示流程分 离反刍动物瘤胃中的纤维素分解菌。 连续重复多次 挑选单菌落 ③鉴定观察 瘤胃提取物 菌落特征 梯度稀释 ①滚管培养 ②选择培养 获得纯净培养物 (1)获得纯净的微生物培养物的关键是 获得某菌种的纯培养物的方法 有 (2)为了筛选纤维素分解菌，从培养基成分角度分析，配制过程②所用培养基 应 。该培养基按功能来分应为 培养基。若将样品接种到分离纤维素 分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是，通过观察是否产 生 来筛选纤维素分解菌。 (3)滚管培养法也可以用于细菌计数，该方法统计的菌落数往往比活菌的实际 数目，原因是 22.科研人员通过不对称体细胞杂交技术，将野生油菜(2=18)与X射线处理的拟南芥(2n=10) 原生质体融合。经X射线处理的拟南芥原生质体细胞核部分失活。杂种细胞中检测到拟 南芥抗病基因表达，同时野生油菜基因表达受到部分抑制。 射线处理 拟南①煎伤②原生 异源 组织 质体 生 鬲融合 4 种 原生 里野生① 煎伤②原生 质体 株 油菜 组织 质体 团 (1)取野生油菜和拟南芥充分展开的嫩叶片，用 进行消毒处理，每次 生物试题 第7页共10页 处理后用 冲洗叶片，去除残留于叶片上的药剂。 (2)植物组织培养过程常用的培养基为， 从物理性质上看，为培 养基，此培养基中应添加蔗糖，其作用是 (3)步骤①需要在培养基中加入一定比例的 (填激素名称)才能获得愈 伤组织，获得的愈伤组织的特点是 (至少写出两点)。为确定原生质体密度， 融合前对原生质体在显微镜下采用 计数，步骤③的化学方法有 ，经过 该步骤获得的融合的原生质体不能在清水中培养，原因是 (4)用X射线处理拟南芥原生质体的目的是 23.我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶(Kd4d)的RNA,经体细胞核移植技术培 育出第一批灵长类动物—食蟹猴，流程如图所示，①一⑥表示相关过程。 @ ① 雌性食蟹猴 MⅡ中期 纤维细胞。 ⊙ 卵母细胞 注入Kd4d 1② 基因A的表达 mRNA○.④ 抑制 融合细胞 H乙酰化 H甲基化 ⑤ ⑥ 抑制 Kdm4d 体细胞核移植食蟹猴 图1 图2 (1)科学家已经培育出胚胎细胞核移植猴，获得食蟹猴的体细胞核移植技术难 度明显高于胚胎细胞核移植，原因是 (2)进行图1过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要 的区别在于前者含有 ；动物组织经处理后的初次培养称为， 当细胞发 生接触抑制时，需先用 酶处理，再进行离心法收集。 (3)图1过程④获得的融合细胞需用 (任答一种)等方法激活，使其完 成细胞分裂和发育进程后，才能进行后续操作。 (4)为获得数量较多的卵母细胞，采集前应先用 (填激素名称)处理母 猴。胚胎移植实质是 (⑤)科研人员发现：对灵长类动物供体细胞核染色体组蛋白H3进行表观遗传修饰， 激活重构胚分化潜能调控基因A的表达，是克隆成功的关键。如图2所示，为了激 活基因A的表达，研究人员将组蛋白H3去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入重构胚， 同时用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理重构胚。据图2分析，TSA可以 (填 “提高”或“降低”)组蛋白的乙酰化水平，进而促进基因A的表达；给重构胚注入 Kdn4d的mRNA来促进基因A表达的机理是：Kdm4d的mRNA可以表达组蛋白H, 去甲基化酶， 生物试题 第8页共10页 24.ACEP是一种通过重组技术生产的融合蛋白。植物乳酸菌(LAB)可被改造成具有降压 效果的重组植物乳酸菌(C8),部分改造流程如图所示。 Neo I 'gusA HindⅢ Por6:启动子 NeoI和HindⅢ：限制酶切位点 Porfx Amp:氨苄青霉素抗性基因 Em:红卷素抗性基因 gusA:B葡萄糖醛酸酶基因，其与ACEIP基因长度不同。 ”。”=””-中， 质粒 aceip PSIP409 过程I 重组质粒 过程Ⅱ t pSIP409-aceip 大肠杆菌 左端 重组质粒宿主 aceip Amp 质粒 pUC57-aceip 右端 过程Ⅲ 鉴定ACEIP ○ 过程 重组植物乳酸菌 表达质粒宿主 (1)启动子作用是 ,Em作为 ,作用是 。为了高效地构建 表达载体，图中pUC57-aceip质粒中aceip基因左端应选用进行切割的限制酶是 (2)过程Ⅱ中，用 处理大肠杆菌，使其处于能吸收周围环境中DNA分子 的状态，从而能吸收周围环境中的重组质粒。研究者用凝胶电泳对重组植物乳酸菌 (NC8)的表达产物ACEP进行分析，与对照组相比实验组显示出一条约8.5kd的 特异性目标蛋白条带，说明 (3)为验证口服C8具有降低血压的效果，科研人员需要大量培育转基因高血 压小鼠模型，可通过胚胎分割技术提高转基因小鼠数量，在胚胎分割时要注意 的均等分割，将早期胚胎培养到 时期后进行移植，使其继续发育为转基因小 鼠。对候选小鼠进行血压测定并筛选出高血压模型小鼠继续进行实验，采用自身对 照方法进行验证，写出实验思路并预测实验结果及结论： 25.小麦因M基因存在易被布氏白粉菌感染而患白粉病，导致严重减产。科研人员利用农杆 菌转化法，将gRNA基因和Cs9蛋白基因导入到小麦中，对M基因进行敲除，使其无 法表达。gRNA-Cs9复合体可对DNA的特定序列识别并剪切。复合体首先会定位目标 DNA序列3'端的PAM序列，然后gRNA上的靶向序列与目标DNA的另一条链互补配对， 接着Cs9会切目标DNA某位点，实现基因敲除。相关过程如图1所示。 生物试题 第9页共10页 grNa 8 2 mmmmmy PAM序列 PAM序列 gRNA靶向序列Cas9PAM5'NGG3') 5'-AGATGCATATCCCGGAGATTGGGTCCTGCGTGACGGH3 3'-TCTACGTATAGGGCCTCTAACCCAGGACGCACTGCC-5' mmm mmmm 目标 Avall限制酶 DNA 酶切位点 图1 图2 (1)gRNA中的识别序列与目标DNA的相应序列特异性结合遵循 原则， Cas9蛋白作用的化学键是 (2)为了不破坏其他正常基因，需要设计gRNA精准识别的靶向序列。科研人 员对小麦M基因测序，部分结果如图2所示。若在后续利用限制酶AvaI进行辅助检 测，则gRNA上的靶向序列应设计为5 -3'（写出12个碱基)。 Spe Bsa I Bsa I Nhe I 5-ACTAGT -3 Spe I 3-TGATCA -5 gRNA基因 启动子a 5'-GCTAGC...-3' 载体1 Nhe I 3-CGATCG..-5' 氨苄青霉素抗性基因 5'-GGTCTCN -3 Bea I CCAGAGNNNNN-S Spe I BamH I 5-GGATCC -3' 启动子b Cas9基因 潮霉素抗性基因 BamH I 3-CCTAGG-5 RB 载体2 注：.LB、RB分别为农杆菌中TDNA的 左边界和右边界。右侧为几种限制酶的 识别序列和切割位点，N代表任一碱基 卡那霉素抗性基因 图3 (3)利用图3中的载体1与载体2构建携带gRNA基因和Cas9蛋白基因的最 终表达载体，应选择使用的限制酶有 ,最终表达载体还应具备的基本元 件有 (写出两点)。表达载体通过农杆菌导入小麦后，利用抗生素 筛选含有gRNA基因和Cas9蛋白基因的目标植株。 (4)对转化成功的小麦植株M基因相关序列进行PCR扩增，用限制酶AvaⅡ酶 完全酶切并电泳检测，若检测结果出现1个条带，则该植株为M基因 (填 “敲除”或“未敲除”)的植株。后续还需对小麦进行白粉病抗性鉴定，请简述实验 思路： 生物试题 第10页共10页