二轮专题(九) 生物技术与工程-【真题密卷】2026年高考生物二轮专题精准提升（贵甘滇晋豫陕青宁新藏专用）

真题密卷 (3)海草床如同陆地上的森林，是健康海洋环境 的重要标志。海草床的功能有：固定沙滩、固堤 减灾；为海洋生物提供栖息地；为海洋生物提供 食物来源。所以，为保护海草床生态系统，应做 2025一2026学年度二 生物学·生物 一、选择题 1.A【解析】醋酸呈酸性，可以抑制杂菌繁殖，因此 制果醋不需要严格灭菌，A正确；制作果醋在糖源 和氧气充足的情况下，醋酸菌可以利用葡萄糖直接 进行醋酸发酵，B错误；醋酸发酵后的发酵液颜色浑 浊，发酵液表面有白色菌膜，白色菌膜主要是醋酸 菌在有氧条件下大量繁殖生长而成的代谢产物，C 错误；醋酸菌是好氧型细菌，当在有氧条件下但缺 少糖源时，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸，利用酒精进 行醋酸发酵，发酵液面不会出现气泡，D错误。 2.D【解析】杀青和漂烫通过高温使酶失活，防止 褐变并杀灭表面微生物，确保发酵过程由目标菌 群主导，A正确；乳酸菌作为主要菌群，产酸抑制 腐败菌，同时赋予酸味和香气，符合实际发酵机 制，B正确；酵母菌在无氧条件下产酒精，酒精可 为醋酸菌（需氧条件下）提供底物转化为醋酸，但 酸笋发酵以厌氧为主，若存在短暂有氧阶段，此过 程可行，C正确；乳酸菌（厌氧）与醋酸菌（需氧）对 氧气需求矛盾，无法同时高效活动。实际发酵分 阶段进行：初期酵母菌产酒精（微氧或无氧），后期 乳酸菌主导产酸（厌氧）。若强制同时发酵，需交 替条件，反而延长时长且降低效率。因此，“同时 发酵缩短时长并提高酸度”的表述不符合科学实 际，D错误。 3.B【解析】厨房下水道是一个富含淀粉等有机物 的环境，因此可能存在能够降解淀粉的微生物。 从这样的环境中采集微生物，正是基于生物与环 境相适应的原理，即生物会根据其生存环境进化 出相应的生存策略或能力，A正确；Y培养基为液 体培养基，可用于微生物的扩大培养，也可用于计 数，如可用显微镜直接计数法进行计数，B错误； 。40 二轮专题精准提升 到禁止过度开发海岸线、禁止随意采摘海草和捕 捞鱼虾、加强海草床检测、建立海草床自然保护 区等。 轮专题精准提升（九） 技术与工程 固体培养基X的凝固特性使微生物形成单菌落， 菌落形态（如透明圈大小）可用于初步鉴定高效降 解菌，即加碘液后，菌落周围会出现透明圈，这样 可以通过菌落特征和透明圈大小来鉴定，C正确； 为了筛选能高效降解淀粉的微生物，需要使用以 淀粉为唯一碳源的选择培养基。这样，只有那些 能够利用淀粉作为碳源的微生物才能在这种培养 基上生长，从而达到筛选的目的，D正确。 4.C【解析】培养黑曲霉时一般需将培养基调至酸 性，单细胞蛋白指的是微生物菌体，而果胶酶不属 于单细胞蛋白，A错误；伊红一亚甲蓝培养基是鉴 定大肠杆菌的培养基，本实验应该用刚果红培养 基筛选高产纤维素酶菌株，B错误；由图可知，菌 种接种量为15%时对应的酒精含量达到最大值， 接种量超过15%，菌种数量大，自身的生长会大量 消耗反应物，导致酒精产量降低，C正确；酒精发 酵的菌种为酵母菌，当接种量为12%左右时，发酵 后的酒精含量与残糖含量曲线有交点，但两者的 纵坐标数值及单位均不同，故发酵后二者含量不 同，D错误。 5.C【解析】实验目的是验证某细菌分泌的X酶为 青霉素酶，在培养基上接种大肠杆菌，培养基中加 入青霉素，如果X酶为青霉素酶，则可以将青霉素 分解，大肠杆菌可以存活，如果不是青霉素酶，则 青霉素抑制大肠杆菌的生长，所以培养基上接种 的是青霉素敏感型大肠杆菌，A正确；①中没有出 现抑菌圈，对比四组，应该是加入了无菌水，作为 空白对照，②出现抑菌圈，说明加入了青霉素，B 正确；丙加入了经青霉素酶处理的青霉素溶液，也 是对照组，只有丁是实验组，C错误；如果③为“未 出现抑菌圈”，说明X酶是青霉素酶，将青霉素分 解，不能抑制大肠杆菌的生长，D正确。 ·生物学· 6.C【解析】影印接种法和稀释涂布平板法都是微 生物学实验中常用的接种方法，用于分离和纯化 微生物，菌落不都是由单个菌体发育而来，当两个 或多个细胞连在一起时，平板上形成的可能是一 个菌落，A错误；进行过程②培养时，为了防止将 完全培养基中特定营养成分带入基本培养基，应 先将丝绒布转印至基本培养基上再“复印”至完全 培养基上，B错误；在基本培养基中氨基酸缺陷型 菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，比较 基本培养基和完全培养基中的菌落可知氨基酸缺 陷型菌株应从基本培养基上没有、完全培养基上 对应位置有的菌落中挑选，然后用于后续的培养 和研究，C正确；培养皿在使用后通常需要进行灭 菌处理，而不是消毒处理。灭菌处理能够更彻底 地杀死所有微生物，包括芽孢和孢子等难以杀死 的微生物形态。而消毒处理只能杀死大部分微生 物，但无法确保完全无菌。因此，为了实验的安全 性和准确性，培养皿在使用后应该进行灭菌处理， D错误。 7.B【解析】植物组织培养过程均需无毒无菌，均 要对分离的外植体进行消毒处理，A错误；再分化 阶段提高培养基中生长素和细胞分裂素的比值， 有利于诱导生根，B正确；再分化过程，愈伤组织 细胞分化时进行有丝分裂，可能会发生基因突变， 不会发生基因重组，C错误；刚培育出的试管苗弱 小，抗病能力差，携带培养基炼苗易被微生物污 染，需要用流水清洗掉根部的培养基，D错误。 8.D【解析】红豆杉幼嫩器官被诱导形成愈伤组织 的过程是脱分化，该过程有基因的选择性表达，细 胞从已分化状态转变为未分化状态，需要特定基 因表达来调控，A错误；用果胶酶和纤维素酶处理 愈伤组织，目的是分解植物细胞之间的胞间层，获 得分散的植物细胞，再进行悬浮细胞培养，B错 误；生产次生代谢产物紫杉醇，只是利用植物细胞 增殖来生产代谢产物，不需要发育成完整植株，没 有利用植物细胞全能性原理，C错误；利用搅拌式 生物反应器进行培养，可使培养液中氧气分布更 均匀，有利于细胞有氧呼吸，同时能让细胞与营养 物质充分接触，充分利用营养物质，D正确。 9.B【解析】植物细胞由于有细胞壁的存在不能直 接融合，需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，A 正确；Y射线照射的作用是破坏芜菁细胞的染色 。4 参考答案及解析 质，B错误；两种细胞融合产生的CMS甘蓝植株 (BB)只含有甘蓝的染色体组，并且获得了芜菁细 胞的细胞质基因，C正确；由题干信息可知，培育 CMS甘蓝采用了植物体细胞杂交技术，即植物体 细胞杂交技术为培育CMS甘蓝提供一种路径，D 正确。 10.D【解析】三白草和鱼腥草细胞杂交前需先用 酶解法处理获得原生质体，而不是原生质层，常 使用纤维素酶、果胶酶，A错误；诱导三白草和鱼 腥草的细胞融合可以使用PEG,不使用灭活的病 毒，B错误；甲组愈伤组织形成过程中存在基因 的选择性表达，C错误；甲组处理是三白草细胞 和鱼腥草细胞杂种愈伤组织的蒸馏水提取物，乙 组处理是三白草细胞和鱼腥草细胞直接混合后 的蒸馏水提取物，丙组是空白对照组，若甲、乙组 结果相同且大于丙组，说明杂交愈伤组织能同时 产生两种植物的细胞产物，D正确。 11.A【解析】更换培养基可清除有害的代谢物质 进而延缓衰退期细胞数量下降的速率，A错误； Vero细胞在培养时会出现贴壁现象，贴壁培养 的细胞在增殖时会因密度过大、有害代谢物质积 累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻， 细胞表面相互接触后会出现接触抑制现象而停 止生长进入平台期，②处细胞即将进入平台期， 说明其生长可能停止了，而①处正处于对数生长 期的起始，其生长和增殖速率均很快，B正确；在 潜伏期Vero细胞刚进入新的培养瓶中，由于贴 附因子的存在大部分细胞会贴附在瓶壁然后开 始进行分裂，C正确；将细胞所需的营养物质按 照种类和所需量严格配制而成的培养基是合成 培养基，由于人们对细胞所需的营养物质尚未全 部研究清楚，因此在使用合成培养基时通常需要 加入血清等一些天然成分，但是由于血清的批次 差异使得合成培养基的成分存在不确定性，故使 用无血清培养基可使成分相对明确，消除上述不 确定性，更能保证实验的连续性，D正确。 12.B【解析】胎羊X的细胞质由乙羊提供，胎羊Y 的细胞质由丙羊提供，细胞质中含有部分遗传物 质，因此胎羊X、Y的性状均主要取决于甲羊的 遗传物质，也和乙、丙羊有关，A错误；制备供体 细胞前可用胰蛋白酶消化胎羊的组织，胰蛋白酶 的作用是消化动物细胞之间的胶原纤维，从而得 1 真题密卷 到单个细胞，B正确；胎羊Y的形成是将胎羊X 的体细胞注射到丙羊去核的卵母细胞中，因此胎 羊Y细胞中线粒体DNA来源于丙羊和胎羊X, C错误；第2次克隆的重构胚融合成功率高是因 为胎羊细胞的分化程度低，细胞核的全能性相对 容易表达，D错误。 13.C【解析】浆细胞分泌抗体具有特异性，多次注 射S抗原免疫小鼠是为了获得大量的能产生抗S 抗体的B淋巴细胞，A正确；培养用于生产单克 隆抗体的杂交瘤细胞时，需要保证无菌无毒的环 境，可对培养用具灭菌、通过定期更换培养液等 实现，B正确；由题意可知，病毒颗粒表面有一特 征性的大分子结构蛋白S(含有多个不同的抗原 决定簇，每一个抗原决定簇能够刺激机体产生一 种抗体)，故单克隆抗体M和单克隆抗体N都能 够识别S蛋白，但该现象仍可说明抗体具有特异 性，C错误；灭活的病毒可用于对动物细胞进行 融合，D正确。 14.B【解析】若双功能抗体应用于肿瘤治疗，则a 和阝抗原中至少有一种为癌细胞表面抗原，这样 才能保证药物定向作用于癌细胞，A正确；双杂 交瘤细胞AB本身就是由杂交瘤细胞A、B融合 而成，利用选择培养基无法筛选出双杂交瘤细胞 AB,B错误；杂交瘤细胞是悬浮培养的细胞，细胞 之间并未接触，若要传代培养，细胞培养液直接 离心，去除上清液，加入新鲜培养基即可，不用胰 蛋白酶处理，C正确；将杂交瘤细胞注射到小鼠 腹水中培养，腹水作为天然培养基，为细胞提供 各种生长条件，D正确。 15.B【解析】卵母细胞体积大、易操作，且细胞质 中含有促进细胞核全能性表达的物质，去核体细 胞不具备这些特性，不能替代去核卵母细胞，A 正确；人源肾脏嵌合胚胎是在猪的早期胚胎基础 上注入人源干细胞形成的，所以肾脏的遗传物质 不完全来自人源干细胞，还包含猪的部分遗传物 质，B错误；由图可知，最终形成的胚胎出现肾脏 缺陷或能培育出人源肾脏嵌合胚胎，说明这两个 基因与肾脏的形成有关，C正确；该研究能培育 出含人源肾脏的嵌合胚胎，有望为肾脏移植提供 更多的器官来源，且人源肾脏可降低自身排斥反 应，有助于解决自身排斥问题，D正确。 1 二轮专题精准提升 16.B【解析】作为基因表达载体必须具备的条件： ①要具有限制酶的切割位，点；②要有标记基因 (如抗性基因)，以便于重组后重组子的筛选；③ 能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的， 对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出 来。图甲中有启动子和终止子等，因此质粒还需 具备的结构有限制酶的切割位，点、标记基因、复 制原，点等，A正确；据图甲可知，引物F1能与J 基因左端序列配对，引物R2能与终止子序列配 对，因此推测为检测J基因是否插入到图甲所示 的位置，需进行PCR检测，若仅用一对引物，应 选择图甲中的引物F1和R2,B错误；b链是模板 链，而根据图中启动子和终止子的位置可知转录 方向是从左向右，对应的模板链方向应该是3'→5'， 非模板链（也就是a链）是5'→3'；考虑到DNA 复制的方向是子链的5′→3'，引物基础上延伸的 方向肯定是5'>3'，所以引物结合的单链其方向 是3'→5′：图中F2是后引物，在右侧，所以其配 对的单链是3'→5'的b链，故其序列应该与a链 相应部分的序列相同，C正确；据图乙可知，用抗 J蛋白抗体和抗V5抗体分别检测，均出现条带 1,说明条带1是J-V5融合蛋白。抗J蛋白抗体 检测出现条带2，抗V5抗体检测不出现条带2， 说明条带2所检出的蛋白不是由重组质粒上的 融合的J基因表达的，D正确。 二、非选择题 17.(10分，除标注外，每空1分) (1)高压蒸汽灭菌PHE (2)稀释涂布平板降解圈 (3)B2B2对PHE的降解率最高，且降解时间 最短 (4)B2配制七组培养基，将培养基的pH分别 调整为5、6、7、8、9、10、11（或配制pH为5~11 内的一系列pH梯度的培养基)，在各组培养基 上分别接种等量的B2,在相同且适宜的条件下培 养一段时间，测定各组培养基中B2的吸光值 OD600,吸光值OD600最大的一组的相邻两组 对应的pH范围即为B2生长的最佳pH范围 (3分) 【解析】(1)培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进 行灭菌，微生物生长所需要的营养物质包括各种 2 ·生物学· 无机盐、碳源、氨源，为获得高效降解PHE的降 解菌，配制的培养基必须以PHE为唯一碳源。 (2)经富集培养得到的菌液用稀释涂布平板法进 行分离后，通过比较降解圈大小判断不同微生物 的降解能力，降解圈大的，降解能力强。 (3)根据表中数据可知，B2对PHE的降解率最 高，且降解时间最短，因此，在实验条件下降解效 果最好的菌群是B2。 (4)与B1和B3相比，B2在20~40℃内，各组生 物量相差不大，且都有较高的生物量，说明B2对 温度耐受性最好。要测定B2的最适生长pH的 范围，可以配制七组培养基，将培养基的pH分 别调整为5、6、7、8、9、10、11（或配制pH为5~11 内的一系列pH梯度的培养基)，在各组培养基 上分别接种等量的B2,在相同且适宜的条件下培 养一段时间，测定各组培养基中B2的吸光值 OD600,吸光值OD600最大的一组的相邻两组 对应的pH范围即为B2生长的最佳pH范围。 18.(10分，除标注外，每空1分) (1)纤维素酶和果胶酶生长素和细胞分裂素 (2)花药离体培养利用显微镜观察根尖有丝分 裂中期细胞中染色体的数目 (3)①HindⅢ、Bam H I(2分)交链格孢② 设计引物利用PCR扩增野生百合的基因L及其 pL;插人T质粒构建基因表达载体，利用农杆菌 转化法导入百合B的体细胞，经植物组织培养 获得转基因植株；筛选L表达量提高的转基因百 合；用病原体微生物侵染转基因百合，检测其抗 病能力（要体现基因工程的步骤和关键技术，最 后要进行个体生物学水平鉴定)(3分) 【解析】(1)因植物细胞细胞壁的成分主要是纤 维素和果胶，因此获得原生质体的方法是用纤维 素酶和果胶酶对植物细胞进行处理。得到原生 质体后使原生质体融合，形成杂种细胞，再用生 长素和细胞分裂素诱导愈伤组织形成和分化，从 而获得完整的杂种植株。 (2)获得单倍体植株的常用方法是花药（花粉）离 体培养；鉴定百合单倍体植株的方法是利用显微 镜观察根尖有丝分裂中期细胞中染色体的数目， 如果染色体数目减少一半，则获得的植株即为单 倍体植株。 参考答案及解析 (3)①根据目的片段以及质粒上限制酶的识别位 ,点，启动子两侧都有两种酶，若要获得L并连接 到质粒上，可选用限制酶HindⅢ、Bam H I进行 酶切，以替换Ti质粒中的启动子，从而达到根据 GUS酶活性反映启动子活性的目的。根据图c 的结果可知，交链格孢处理的每一组转基因烟草 中的GUS酶活性都最高，可确定其诱导作用最 强。②欲培育具有高抗病原微生物能力的百合 新品种，可利用转基因技术将百合B中L基因的 启动子替换为野生百合中L基因的启动子pL, 具体思路：设计引物利用PCR扩增野生百合的 基因L及其pL;插入Ti质粒构建基因表达载 体，利用农杆菌转化法导入百合B的体细胞，经 植物组织培养获得转基因植株；筛选L表达量提 高的转基因百合；用病原体微生物侵染转基因百 合，检测其抗病能力（要体现基因工程的步骤和 关键技术，最后要进行个体生物学水平鉴定)。 19.(10分，除标注外，每空1分) (1)骨髓瘤细胞（已免疫的）B淋巴细胞 (2)相同不相同 (3)抗体能分泌抗H1N1病毒抗体的杂交瘤细 胞确保每个孔中的子细胞都来源于同1个亲 本细胞，便于筛选出能分泌抗H1N1病毒抗体的 杂交瘤细胞(2分) (4)C和D(2分) 【解析】(1)图中X细胞为骨髓瘤细胞，Y细胞为 已免疫的B淋巴细胞，因此Z细胞为能产生特定 抗体的杂交瘤细胞，对该细胞进行体外或体内培 养可获得大量的抗体。 (2)经过①②过程获得的肝细胞与神经细胞的核 基因相同，因为它们都是由诱导千细胞经过有丝 分裂、分化形成的，但由于基因的选择性表达，两 种细胞中mRNA不相同。 (3)③过程先用选择培养基对融合后的细胞进行 筛选，获得杂交瘤细胞，再将其接种到96孔板上 进行培养和抗原一抗体检测，经过多次筛选后选 择出能分泌抗H1N1病毒抗体的杂交瘤细胞，该 操作过程体现了抗原一抗体特异性结合的原理。 在96孔板的每个孔中尽量只接种1个细胞，这 样可以确保每个孔中的子细胞都来源于同1个 亲本细胞，便于筛选出能分泌抗H1N1病毒抗体 1 真题密卷 的杂交瘤细胞，进而获得由单一杂交瘤细胞克隆 出的细胞群分泌的抗体。 (4)将待测液体加到A处，若待测液体中含有 H1N1,则其带有的抗原会与B处的游离的结合 胶体金的抗体1结合，并向左移动，由于C处有 抗体2，因而病毒抗原在该处会与抗体2结合并 显色，多余的抗体1继续向左移动，会与固定在 D处的抗体1特异性结合的抗体结合进而显色， 据此可推测，若C处和D处会变为红色，则说明 受检个体感染H1N1。 20.(11分，除标注外，每空1分) (1)促性腺激素/外源促性腺激素MⅡ中/减Ⅱ 中/减数分裂Ⅱ中5%C02/5%二氧化碳 (2)与印记基因相应序列碱基互补配对/与印记 基因一条链特异性结合 (3)使胚胎干细胞a能正常发育/避免胚胎发育 时过度生长、器官畸形，无法形成功能性胎盘 (2分) (4)①诱导细胞融合（写具体的物理方法，化学方 法或者灭活病毒)精子甲和精子乙(2分)发 育所需的营养等条件②胚胎移植 【解析】(1)超数排卵是指应用外源促性腺激素， 诱发卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子；成 熟的卵母细胞处于减数第二次分裂中期，可以选 用该时期的卵母细胞去核；体外培养动物细胞应 置于含有95%空气和5%C02的混合气体的 CO2培养箱中进行培养。 (2)研究人员运用CRISPR/Cas9编辑系统对相 关印记基因进行编辑，应制备与印记基因相应序 列碱基互补配对的gRNA,以准确确定基因组中 的特定位置的基因。 (3)父源的印记基因能促进胚胎生长发育，母源 的印记基因能抑制胚胎过度生长并促进胎盘生 长，对haESCs进行印记基因编辑可使胚胎千细 胞a能正常发育。 (4)①2细胞融合能形成四倍体胚胎；母源的印记 基因能抑制胚胎过度生长并促进胎盘生长，培育 印记基因编辑小鼠，体外培养至囊胚阶段，其作 用一方面是四倍体囊胚无法正常发育成个体，从 而保证培育出工程小鼠的细胞核遗传物质来自 精子甲和精子乙；另一方面为胚胎千细胞a提供 1 。4 二轮专题精准提升 发育所需的营养等条件。②胚胎移植可以将体 外发育的胚胎移植到子宫中。 21.(11分，除标注外，每空1分) (1)154C变为AG变为T (2)温度偏低时DNA双链解旋不充分，延伸时模 板减少，产生的产物量偏少 (3)A (4)3诱变前的抗菌肽基因引物1和引物2 (5)500插入位点不受限制酶识别序列限制；能 够实现目的基因在载体任意位点上的插入；避免 限制酶切割对质粒功能区的破坏等(2分) 【解析】(1)mRNA上3个相邻的碱基决定一个 氨基酸为一个密码子，第51位的氨基酸对应的 mRNA上的碱基为51X3=153,脯氨酸密码子 为CCA,苏氨酸密码子为ACA,若想将抗菌肽第 52位的脯氨酸替换成苏氨酸，可将mRNA上 154位的碱基替换，碱基具体变化为C变为A。 模板链与mRNA碱基互补配对，则基因模板链 对应的碱基改变为G变为T。 (2)变性的目的是使双链DNA打开，若变性是温 度偏低DNA双链解旋不充分，延伸时模板减少， 产生的产物量偏少会导致反应效率降低。 (3)由图可知，模板链方向为3′→5'，则诱变引物 与转录非模板链碱基互补配对，则诱变引物序列 与转录模板链相同，且需将模板连上154位碱基G 变为T,则诱变引物序列位5'CCTGTTAT3', A正确。 (4)产物1最早出现可在PCR1的第3轮循环： DNA的复制方式为半保留复制，因此PCR2的 产物除改良的抗菌肽基因外，还有诱变前的抗菌 肽基因。由图可知，通过PCR3扩增时应选用的 引物是引物1和引物2。 (5)已知In-Fusion酶能够识别任何具有15bp 相同末端序列的线性DNA分子并使其形成黏性 末端，实现目的基因和载体的连接。因此最终获 得的重组DNA分子长度为载体(320bp)十改良 的抗菌肽基因(180bp)=500bp。与传统方法相 比，这种技术的优点是插入位，点不受限制酶识别 序列限制、能够实现目的基因在载体任意位点上 的插入、避免限制酶切割对质粒功能区的破 坏等。2025一2026学年度二轮专题精准提升（九） 生物学·生物技术与工程 本试卷总分100分，考试时间75分钟。 一、选择题：本题共16小题，每小题3分，共48分。在每小题给出的四个选项中，只有一项 是符合题目要求的。 题号 1 2 3 4 5 6 8 10 11 12 13 14 15 16 答案 1.果醋中含有多种有机酸和人体所需的氨基酸，下列叙述正确的是 A.制果醋不需要严格灭菌，发酵产物醋酸可以抑制杂菌繁殖 B.制作果醋的程序一定是先进行酒精发酵再进行醋酸发酵 C.在醋酸发酵液表面出现的白色菌膜是酵母菌繁殖的结果 D.利用酒精进行醋酸发酵，发酵液面会出现气泡 2.酸笋具有独特的酸味和香气，是乳酸菌、酵母菌、醋酸菌等多种微生物发酵而成的传统 食品，主要流程如图。下列叙述错误的是 ) 菌种选择和优化 选材、清洗 竹笄切割，杀青、漂烫—一冷却一接种发酵 →发酵监控 →终止发酵一→包装、贮藏 A.竹笋杀青、漂烫既能使酶失活保持竹笋天然色泽，又能有效杀灭竹笋表面的微生物 B.乳酸菌是酸笋发酵的主要菌群，其产酸既能抑制腐败菌生长，又能形成独特的酸香 C.酵母菌是酸笋发酵的次要菌群，其产酒精既能增加醇香，又能为醋酸菌发酵提供底物 D.发酵过程监控好条件使微生物同时发酵，既能缩短发酵时长，又能提高酸度 3.某生物兴趣小组打算筛选能高效降解淀粉的微生物，进行相关操作：采集微生物→接种 至固体培养基X→培养一段时间滴加碘液→挑选目的菌落鉴定并分别接种至多个液体 培养基Y→培养出大量高效降解淀粉的微生物。下列叙述错误的是 A.可从厨房下水道采集微生物，体现了生物与环境相适应 B.Y培养基可用于微生物的扩大培养，但不适用于计数 C.X培养基表面可形成形态清晰的菌落，便于分离与鉴定 D.X培养基是以淀粉为唯一碳源的选择培养基 4.利用杨木生产二代燃料乙醇，需要预处理、酶解和发酵等阶段（预处理过程所需的果胶 酶常来自于黑曲霉等微生物)。如图为发酵阶段菌种接种量对发酵结果的影响。下列 说法正确的是 ( ) A.培养黑曲霉时一般需将培养基调至酸性，果胶酶是 9本酒精含量·残糖含量B.5 黑曲霉分泌的一种单细胞蛋白 9. 9.2 B.在伊红一亚甲蓝培养基上可筛选出高产纤维素酶 9.0 2.5 倒8.8 2.0 的菌株用于酶解糖化过程 8.6 1.5 8.4 1.0 C.接种量超过15%时酒精产量反而有所降低的原因 8.2 8.0 0.5 可能是菌种生长消耗大量的糖分 180 1052025300 D.接种的菌种为酵母菌，当接种量为12%左右时，发 菌种接种量/% 酵后的酒精含量与残糖含量相等 二轮专题精准提升（九）生物学第1页（共8页） 真题空 勤奋辅就成功路，智慧点亮梦想灯 5.科研小组欲验证某细菌分泌的X酶为青霉素酶（能分解青霉素），进行相关实验：在培养 班级 基上接种大肠杆菌，分别放置经不同溶液浸润的滤纸圆片甲~丁，并在适宜条件下培 养。一段时间后观察滤纸圆片周围的抑菌圈（细菌生长被抑制而形成的透明环形区 域)，实验处理和结果如表所示。 姓名 组别 滤纸圆片浸润的溶液种类 实验结果 甲 ① 未出现抑菌圈 得分 乙 ② 出现抑菌圈 丙 经青霉素酶处理的青霉素溶液 未出现抑菌圈 经X酶处理的青霉素溶液 ③ 下列叙述错误的是 A.培养基上接种的是青霉素敏感型大肠杆菌 B.①和②分别为无菌水和青霉素溶液 C.甲、乙为对照组，丙、丁为实验组 D.③为“未出现抑菌圈”，则X酶为青霉素酶 6.影印接种法是一种用于研究微生物抗药性和筛选突变体的实验技术。为检测某种氨基 酸缺陷型菌株，实验人员的实验过程如图所示，其中基本培养基中缺乏某种氨基酸，而 完全培养基中含有该种氨基酸。下列叙述正确的是 () 灭菌的丝绒布 ,揭起丝绒布 吧®' 0→8 经诱变处待测 丝绒布 理的菌液培养基吸附菌体 菌落 基本培养基 ®○· 菌落完全培养基 A.影印接种法和稀释涂布平板法相似，每个菌落都由单个菌体发育而来 B.过程②培养时丝绒布先转印至完全培养基上再转印到基本培养基上 C.应从完全培养基上挑选出氨基酸缺陷型菌株用于后续的培养和研究 D.实验结束后对培养皿进行消毒处理后即可再次使用或者废弃 7.利用植物组织培养技术繁殖菊花的示意图如图。下列叙述正确的是 固体培养基 西片气是一层卷 离体的组 愈伤组织根、芽试管苗 织或细胞 A.只有培养脱毒菊花试管苗才需要对分离的外植体进行消毒处理 B.再分化阶段提高培养基中生长素和细胞分裂素的比值，有利于诱导生根 C.再分化过程，愈伤组织细胞分化时可能会发生基因突变或基因重组 D.刚培育出的试管苗弱小，应携带培养基炼苗后再移栽至花盆 8.紫杉醇是一种具有抗癌活性的化合物，紫杉醇的工厂化生产流程为：红豆杉器官→愈伤 组织→悬浮细胞培养→筛选稳定高产紫杉醇的细胞群→利用搅拌式生物反应器进行培 养→提取紫杉醇。下列叙述正确的是 () 卷 二轮专题精准提升（九）生物学第2页（共8页） 1 A.红豆杉幼嫩器官易被诱导形成愈伤组织，该过程不会发生基因的选择性表达 B.一般用果胶酶和纤维素酶处理愈伤组织，获得原生质体后再进行悬浮细胞培养 C.生产次生代谢产物紫杉醇的过程中，利用了植物细胞具有全能性的原理 D.利用搅拌式生物反应器培养，有利于细胞进行有氧呼吸和充分利用营养物质 9.胞质雄性不育(CMS)是线粒体基因引起的胞质功能混乱现象，表现为花粉不育。经Y 射线处理的芜菁细胞(AA,A表示染色体组)和甘蓝细胞(BB,B表示染色体组)融合，可 获得CMS甘蓝植株(BB)。下列分析错误的是 () A.芜菁细胞和甘蓝细胞融合前需要去除两者的细胞壁 B.Y射线照射的作用是促进芜菁细胞与甘蓝细胞融合 C.融合后的CMS甘蓝获得了芜菁细胞的细胞质基因 D.植物体细胞杂交技术为培育CMS甘蓝提供一种路径 10.研究表明，一般能增加免疫器官重量的物质也具有一定增强免疫力的作用。为判断融 合体对动物免疫力的影响，科研人员取同种小鼠30只，雌雄各半，随机均分为三组；实 验处理如表。下列叙述正确的是 ( ) 组别 甲组 乙组 丙组（空白对照组） 三白草细胞和鱼腥草细胞杂种 三白草细胞和鱼腥草细胞直接 实验 愈伤组织的蒸馏水提取物 混合后的蒸馏水提取物 处理 每天一次等量灌胃；连续一周，检测各组小鼠的胸腺重量 A.三白草和鱼腥草细胞杂交前需先用酶解法处理获得原生质层 B.诱导三白草和鱼腥草的细胞融合可以使用PEG或灭活的病毒 C.丙组处理为加入等量蒸馏水，甲组愈伤组织形成过程中不发生基因的选择性表达 D.若甲、乙组结果相同且大于丙组，说明杂交愈伤组织能产生两种植物的细胞产物 11.科研人员将复苏128代含血清冻存的非洲绿猴肾(Vero)细胞传代至136代后，用无血 清冻存液制备成无血清Vero细胞库，随后从中取出1mL细胞补加9mL无血清培养 基进行培养，结果如图。下列叙述错误的是 () 24.01 平台期 对数增长期 20.0 ② 16.0 12.0潜 期 期 8.0 1 4.0 01 12345678910111213141516 时间d A.更换培养基对衰退期细胞数量下降无影响 B.②处细胞的生长速率较①处细胞慢 C.潜伏期的大部分细胞贴壁后开始分裂 D.使用无血清培养可保证实验的连续性 12.研究发现，采用2次克隆来制备转基因克隆动物，无论在重构胚的融合率、发育率还是 移植受体妊娠率方面均明显高于传统的体细胞核移植。如图为2次克隆的简易流程 图。下列叙述正确的是 () 二轮专题精准提升（九）生物学第3页（共8页）】 真题密 供体细胞 胎羊甲 →& 注射 外源基因 供体细胞注射 8 胎羊X →胎羊Y 重构胚 丙羊 重构胚 核 核 卵母细胞 卵母细胞 第1次克隆 第2次克隆 A.胎羊X、Y的性状均完全取决于甲羊的遗传物质 B.制备供体细胞前可用胰蛋白酶消化胎羊的组织 C.胎羊Y细胞中线粒体DNA只来源于丙羊 D.第2次克隆的重构胚融合成功率高是因为胎羊细胞的分化程度高 13.某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S(含有多个不同的抗原决定簇，每一个 抗原决定簇能够刺激机体产生一种抗体)。研究人员制备抗S单克隆抗体的过程如图 所示，下列说法错误的是 () A.多次注射S抗原免疫小鼠是为了获得大 筛选单 类型杂交 量的能产生抗S抗体的B淋巴细胞 瘤细胞 边+ 单克降 B.培养用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞 抗体M 时，需要保证无菌无毒的环境 堯製智阅·厨 细胞杂交瘤 9 8→。/融谷细能 ● ）→ 筛选单 C.单克隆抗体M和单克隆抗体N都能够识 型杂交 单克隆 培养骨髓分散骨髓 瘤细胞 抗体N 别S蛋白，说明制备的抗体不具有特异性瘤细胞瘤细胞 D.可用灭活病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合 14.一种杂交瘤细胞只能产生一种抗体，抗体由两条相同的重链和两条相同的轻链构成。 科研人员通过动物细胞融合技术将两种不同的杂交瘤细胞(A和B)融合形成双杂交瘤 细胞AB,双杂交瘤细胞能够悬浮在液体培养基中生长繁殖，产生的双特异性抗体AB 如图所示。下列叙述错误的是 () 0 杂交瘤 细胞A 杂交瘤 细胞AB 轻链 杂交瘤 重链 细胞B 抗体A 抗体B 抗体AB A.若双特异性抗体应用于肿瘤治疗，则α、阝抗原中至少有一种为癌细胞表面抗原 B.诱导杂交瘤细胞A、B融合后利用选择培养基筛选出双杂交瘤细胞AB C.对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，无需使用胰蛋白酶处理 D.将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔，腹水能为细胞提供所需的营养条件 15.用SIX1基因缺陷的猪胎儿成纤维细胞和猪去核卵母细胞构建重构胚，敲除SALL1 基因后形成早期胚胎，其中一组注入人源干细胞，再植入代孕母猪，最后可得到肾脏缺 陷或人源肾脏嵌合胚胎，操作过程如图所示。下列叙述错误的是 () e ● SXI缺陷的猪胎 敲除 SIXI/SALLI缺 肾脏缺陷胚胎 陷的早期胚胎 儿成纤维细胞 注入人源干细胞 @ 猪的重构胚 代孕母猪 猪的去核卵母细胞 -合 SXI/SALL1缺 嵌合胚胎 陷的早期胚胎 卷 二轮专题精准提升（九）生物学第4页（共8页） A.图中猪的去核卵细胞不能用去核体细胞替代 B.人源肾脏嵌合胚胎中肾脏的遗传物质完全来自人源干细胞 C.SIX1基因和SALL1基因与肾脏的形成有关 D.该项研究有助于解决肾脏移植中的器官短缺及自身排斥反应问题 16.科研人员构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构 如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5;该重组质粒在受体细胞内正确表达 后，用抗J蛋白抗体和抗V5抗体分别检测相应蛋白是否表达以及表达水平，结果如图 乙所示。下列分析错误的是 () 启动子 J基因V5编码序列终止子 F2 a链 条带1 条带1 -b链 条带2 Rl R2 抗J蛋白抗体抗V5抗体 图甲 图乙 A.作为基因表达载体，图甲中的质粒还必须具有特殊标记基因、复制原点 B.为检测J基因是否插入到图甲所示的位置，需用引物F1和R1进行PCR C.若J基因转录的模板链位于b链，则引物F2与图甲中a链相应部分的序列相同 D.图乙中，条带1的出现证明重组质粒在受体细胞内表达了J-V5融合蛋白 二、非选择题：本题共5小题，共52分。 17.(10分)三环芳烃一菲(PHE)是一种典型的疏水性有机污染物，广泛存在于沉积物、 水体、土壤和大气中，因其具有潜在致癌性、致畸性及致突变性，受到人类广泛关注。 实验人员从长期受污染的内河河流采集表层沉积物，经富集筛选后得到一组PHE高 效降解菌群，并测试其在不同环境条件下降解PHE的能力。回答下列问题。 (1)实验人员先制备富集培养基，然后采用 法灭菌，冷却后再接入 沉积物样品。富集培养基中除含微生物生长所必需的各种无机盐外，还需要加入氮 源，并以 作为唯一碳源。 (2)经富集培养得到的菌液用 法进行分离后，实验人员通过比较 的大小来判断不同菌种的降解能力。 (3)实验人员统计了三种不同种类菌群对PHE的降解效果，在实验条件下降解效果最 好的菌群是 ,依据是 菌群种类 PHE浓度/(mg·L1) 降解率/%降解时间/d B1 100 85.48 7.0 B2 100 95.78 2.5 B3 100 87.40 9.0 (4)实验人员进一步测定了不同培养温度下三种菌群的吸光值OD600(吸光值越大，菌 体生物量越多)，结果如图所示。在图中培养条件下，三种菌群中对温度耐受性最好的 菌群是 。进一步研究发现，B2在pH为5~11时都能够生长，若要测定B2的最 适生长pH的范围，则实验的设计思路是 二轮专题精准提升（九）生物学第5页（共8页） 真题密 2s1 2.0 □B1 0090 ☑B2 1.0 田B3 温度/℃ 18.(10分)百合具有观赏、食用和药用等多种价值，科研人员对其进行了多种育种技术研 究。回答下列问题。 ☐对照 厨尖孢镰刀菌 0 ☐厚垣镰刀菌■交链格孢 复制起点 SmaI ·抗性基因 40 启动子pL 爆冬止子 Ti质粒 3020 BamH I SmaI Sac I 终止子启动 XbaI 入Hind 10 Hind III XbaI 0 SacI SmaI BamH I P P2 P3 图a 图b 图c (1)体细胞杂交育种。进行不同种百合体细胞杂交前，先用 去除细 胞壁获得原生质体，使原生质体融合，得到杂种细胞后，继续培养，常用 (填植物激素名称)诱导愈伤组织形成和分化，获得完整的杂种植株。 (2)单倍体育种。常用 的方法来获得单倍体植株，鉴定百合单倍体 植株的方法是 (3)基因工程育种。研究人员从野生百合中获得一个抵抗尖孢镰刀菌侵染的基因L,该 基因及其上游的启动子pL和下游的终止子结构如图a。图b是一种Ti质粒的结构示 意图，其中基因gus编码GUS酶，GUS酶活性可反映启动子活性。 ①研究病原微生物对L的启动子pL活性的影响。从图a所示结构中获取pL,首先选 用 酶切，将其与相同限制酶酶切的T质粒连接，再导人烟草。随机 选取三组转基因成功的烟草(P1、P2和P3)进行病原微生物胁迫，结果如图c。由此可 知：三种病原微生物都能诱导pL的活性增强，其中 的诱导作用 最强。 ②现发现栽培种百合B中也有L,但其上游的启动子与野生百合不同，且抗病性弱。若 要提高该百合中L的表达量，培育具有高抗病原微生物能力的百合新品种，简要写出 实验思路 19.(10分)H1N1病毒是甲型流感病毒的一种，也是人类最常感染的流感病毒之一，该病 毒危害性很大，可利用细胞工程生产H1N1病毒抗体用于检测和治疗，生产流程图如 图。请回答下列问题。 甲小鼠的纤 诱导基 维母细胞 →诱导干细胞②肝细胞、神经细胞、 ① 上皮细胞等 +X细胞 ®，乙细胞④，单克隆抗体 将H1N1病毒外壳 →Y细胞 蛋白注入乙小鼠 卷 二轮专题精准提升（九）生物学第6页（共8页） 1 (1)图中X细胞和Y细胞分别代表 和 (2)经过①②过程获得的肝细胞与神经细胞的核基因 (填“相同”或“不相同”)， mRNA (填“相同”或“不相同”)。 (3)③过程先用选择培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，再将其接种到 96孔板上进行培养和 检测，经过多次筛选后选择出 。 在96孔板的每个孔中尽量只接种1个细胞，原因是 (4)已知H1N1病毒表面同一抗原的不同位点可分别与抗体1和抗体2发生特异性结 合。现将制备好的H1N1抗体1和H1N1抗体2用于检测患者是否感染H1N1,原理 如图，其中待测液体加到A处样本垫，B处含有过量游离的结合胶体金的抗体1，C处 的垫子上固定有抗体2，D处垫子上固定有与抗体1特异性结合的抗体。将待测液体 加到A处，一段时间后，若 (填图中字母)处会变为红色，则说明受检个体感 染H1N1。 注：胶体金与抗体1结合后可显红色，胶体金和抗原与抗体1的结合位点不同，且不固定在垫子上。 吸水垫D B A 液流方向 20.(11分)科研人员制备双父源（遗传物质来自两个雄原核）小鼠，以期为濒危动物保护提 供新思路。在研究过程中，发现双父源小鼠胚胎过度生长、器官畸形，无法形成功能性 胎盘，这与基因组印记有关。已知印记基因是一类对生物个体发育具有重要调控作用 的基因，这类基因表达与否取决于它们所在染色体的来源（父源或母源），父源的印记 基因能促进胚胎生长发育，母源的印记基因能抑制胚胎过度生长并促进胎盘生长。我 国科研人员利用相关工程技术成功培育出双父源小鼠，相关技术流程如图所示。请 回答。 雌原核 雌原核 代孕 66 精子甲( 印记基因编辑的 小鼠 单倍体 单倍体胚胎干细胞 胚胎干细胞a 卵母细胞1 胚胎干细胞 卵母细胞2 四倍体囊胚 精子乙 (I)培育单倍体胚胎干细胞(haESCs)。对雌鼠注射 使其超数排卵，选 择 期的卵母细胞去核，并与精子甲完成受精；进而将获得的单倍体胚胎干细胞 置于95%空气和 气体条件下进行培养。 (2)编辑haESCs印记基因。研究人员运用CRISPR/Cas9编辑系统对相关印记基因进 行编辑，该编辑系统由一个具有剪切DNA链的蛋白质(Cas9)和一段将Cas9精确地引 导到基因组中的特定位置的RNA(gRNA)结合而成。为精确对印记基因进行编辑，应 制备 的gRNA。 (3)培育胚胎干细胞a。将精子乙和编辑印记基因的haESCs共注射到去核卵母细胞2 中，经诱导培育得到二倍体的胚胎干细胞a。其中对haESCs进行印记基因编辑的目的 是 (4)培育印记基因编辑小鼠。 ①从代孕小鼠中收集一个2细胞，经 处理获得四倍体胚胎，体外培 养至囊胚阶段，其作用一方面是四倍体囊胚无法正常发育成个体，从而保证培育出工 二轮专题精准提升（九）生物学第7页（共8页） 真题密 程小鼠的细胞核遗传物质来自 ；另一方面为胚胎干细胞a提供 ②将胚胎干细胞a注入四倍体囊胚中，运用 技术送人代孕小鼠，进而培育出 印记基因编辑小鼠。 21.(11分)抗生素的长期使用易导致病菌产生严重的耐药性。抗菌肽以其快速杀菌活性、 低耐药可能性、免疫调节特性和促进伤口愈合的潜力成为最有前景的抗菌药物。研究 发现将抗菌肽第52位的脯氨酸（密码子为CCA)替换成苏氨酸（密码子为ACA)可增 强抗菌肽的杀菌活性。科研人员利用大引物PCR定点诱变技术对抗菌肽基因进行改 造的过程如图所示。回答下列问题。 153(碱基对编号 5'-ATGGCTGC…CCTGGTAT…CACGTGAC-3转录模板链 3-TACCGACG…GGACCATA…GTGCACTG-5' 抗菌肽基因 大引物 引物 3'←-- 5 5 ■3 ■5 3' 诱变引物· 引物2→ PCRI PCR2↓ .3 产物1 5 3 产物23 PCR3↓ 大量扩增 (1)将抗菌肽第52位的脯氨酸替换成苏氨酸，需要将mRNA对应的碱基序列中第 位的碱基替换，碱基具体变化为 。 基因模板链对应的碱基改变 为 (2)PCR过程中温度的控制至关重要，若变性时温度偏低则会导致反应效率降低，原因 是 (3)据图分析，“大引物PCR定点诱变”技术中设计的“诱变引物”应选择 A.5'…CCTGTTAT…3 B.5'…CCTGGTAT…3 C.5'…ATACCAGG…3 D.5'…ATAACAGG…3 (4)进行大引物PCR定点诱变获得改良的抗菌肽基因需要进行2次PCR(PCR1和 PCR2),产物1最早出现在PCR1的第 轮循环；PCR2的产物除改良的抗菌肽基 因外，还有 ;通过PCR3快速扩增时应选用的引物是 (5)In-Fusion酶能够识别任何具有15bp相同末端序列的线性DNA分子并使其形成 黏性末端，实现目的基因和载体的连接。科研人员将载体(320bp)两端连接上与改良 的抗菌肽基因(180bp)两端相同的序列(15bp)并利用In-Fusion酶实现两者的连接， 如图所示。最终获得的重组DNA分子长度为 bp。与传统方法相比，这种技术 的优点是 (至少写两点)。 改良的抗菌肽基因 IN 15bp相 In--Fusion酶 同序列 50℃，15min 载体 卷 二轮专题精准提升（九）生物学第8页（共8页）