第3章 第2节 基因工程的基本操作程序-【创新大课堂系列】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程同步辅导与测试(人教版)

生物学选择性必修3 随堂巩固·评价演练 循纲忆知素养培育 1.科学家经过多年的努力，创立了一种新兴的生物： 限制酶 Ken I Sau3A I Sma I 技术一基因工程。实施该工程的最终目的是 ( 识别序列和 GGTAC'C GATC CCC'GGG A.定向对DNA分子进行人工“剪切” 切割位点 B.在生物体外对DNA分子进行改造 (注：Y表示C或T,R表示A或G) C.定向改造生物的遗传性状 A.一种限制酶只能识别一种脱氧核苷酸序列 D.定向提取生物体的DNA分子 B.限制酶的切割位点一定位于识别序列的内部 2.CRISPR-Cas9是生物学科研的热门技术，该技术： C.不同限制酶切割后一定形成不同的黏性末端 源于细菌的一种防御机制。如图所示，当细菌感知： D.限制酶切割后形成的不一定都是黏性末端 到噬菌体侵入时，会通过gRNA识别噬菌体DNA,4.下图所示为“DNA的粗提取与鉴定”实验的部分 并通过Cas9蛋白切断目标DNA,从而起到防御作 操作过程，下列有关分析错误的是 用。下列关于该机制的描述不正确的是 体积分数为 95%酒精C Cas9蛋白 蒸馏水 含DNA的浓 切割 gRNA 鸡血 NaCl溶液 细胞液 T ① ② 噬菌体DNA 黏稠物©公 A.gRNA与目标DNA结合片段中最多含有8 蒸馏水包 物质的量浓度为 含DNA的 种核苷酸 2mol/L NaCl溶液画 浓NaCl溶液 B.噬菌体DNA的变化体现了基因突变的不定向性： ③ ④ C.Cas9蛋白可破坏DNA分子的磷酸二酯键 A.图①④中加入蒸馏水的目的相同 D.光学显微镜下无法观察到该现象 B.图①中向鸡血细胞液内加入少许嫩肉粉（含有 3.如表为常用的限制酶及其识别序列和切割位点， 蛋白酶)有助于去除杂质 据表分析以下说法正确的是 ( C.图②操作的目的是纯化DNA,去除溶于体积 分数为95%的酒精中的杂质 限制酶 BamH I EcoR I HindⅡ D.图③中物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液 识别序列和 切割位点 GGATCC GAATTC GTY￥RAC 能溶解黏稠物中的DNA 温馨提示 请做课时分层检测（十二）》 第2节 基因工程的基本操作程序 【学习目标】 课程内容标准 核心素养对接 L.阐明基因工程的原理和基本操作程序，尝试进行PC℉的 1.科学思维一一对基因工程的基本程序有整体的认识，结合生 基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。 产实例，举例说出基因工程的基本操作程序。 2.阐明将目的基因导人受体细胞的方法，阐明目的基因的 2.科学探究—能复述PCR技术的原理和基本过程，了解扩增 检测与鉴定的方法。 目的基因的方法。 3.利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳 针对人类生产和生活的某一需求，尝试提出初步的基因工程 鉴定。 构想，完成初步设计。 必备知识·自主梳理 预习新知夯实基础 知识梳理 等的基因，主要是指 的基因。 (一)目的基因的筛选与获取 (2)筛选合适的目的基因：从相关的已知 1.目的基因的筛选 清晰的基因中进行筛选是较为有效的 (1)目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于： 或获得 方法之一。 70 第3章 基因工程 2.目的基因的获取 :2.目的基因导入受体细胞的方法 (1)利用PCR获取和扩增目的基因 受体 导入方法 操作方式 ①PCR的概念及反应条件 是一项根据 的原理，在体外 ①用微量注射器将含日的基因的DNA PCR(聚合 提供参与DNA复制的各种 与反 花粉管 溶液直接注人 中 酶链式反应) 应条件，对目的基因的核苷酸序列进行 通道法 ②在植物受粉后的一定时间内，剪去柱 的技术 头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使 植物 目的基因借助 进入 细胞 定的 DNA模板、2种 PCR反 、4种 DNA聚合 农杆菌细胞内的Ti质粒上的 应的条件 农杆菌 酶，以及能自动调控 的仪器 可携带目的基因整合到受体细胞的 转化法 DNA上 ②PCR扩增的过程 变性 当温度超过℃时，双链DNA解聚为 动物 常用受体细胞： 细胞 技术 复性 温度下降到℃左右时，两种 通过碱基 互补配对与两条单链DNA结合 当温度上升到℃左右时，溶液中的4种脱氧 Ca2+处理 用 处理细胞，使细胞处于一种 原核 延伸 核苷酸在耐高温的 的作用下，根 法（感受态 能吸收周围环境中DNA分子的生理状 细胞 据碱基互补配对原则合成新的DNA链 细胞法) 态 ③PCR产物的鉴定：常采用 (四)目的基因的检测与鉴定 鉴定。 (2)通过构建 来获取目的基因。 1.分子水平检测 (二)基因表达载体的构建 (1)通过 等技术检测受体细胞染色体 1.构建基因表达载体的目的 DNA上是否插入了 或检测目的基因是 (1)使目的基因在受体细胞中 ,并且可 否转录出 以 给下一代。 (2)从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体 (2)使目的基因能够表达和发挥作用。 进行 杂交，检测目的基因是否翻译 2.基因表达载体的组成 成了 2.个体生物学水平鉴定 〔位置：目的基因的 动 功能 识别和结合的部位， 包括 抗病的接种实验，以确定是否有 驱动基因的 表达载体 :人们所需要的基因 抗性及抗性程度。基因工程产品需要与天然产 终止子位置：目的基因的 品活性进行比较等。 功能：终止转录 :用于目的基因的检测与筛选 (五)DNA片段的扩增及电泳鉴定 1.实验基础 3.基因表达载体的构建过程 (1)PCR原理：利用 原理，通过调节 质粒 外源DNA 温度来控制DNA双链的解聚与结合。 同一种限制酶或产生相 (2)电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定 同末端的限制酶切割 的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。 两个切口，获 一个切口， 《-DNA连接酶→ 两个黏性末端 得目的基因 在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带 电荷 的电极移动，这个过程就 基因表达载体 是电泳。 (三)将目的基因导入受体细胞 (3)PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴 1.转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并在受 定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓 体细胞内维持稳定和 的过程。 度 等有关。 71 生物学 选择性必修3 2.PCR实验操作步骤 教材边角 移液 用 按照配方或PCR试剂盒的说明书 向微量离心管中依次加入各组分 教材P78图示拓展 离心 盖严离心管的盖子，将微量离心管放入离心机里， 离心约10s,使反应液集中在管的 1.结合下图分析PCR过程中DNA链复制的方向 是怎样的。 反应 设置好PCR仪的循环程序，将离心管放入 中进行反应 3端-0H 琼脂 制作琼脂糖凝胶放入电泳槽内一→将电泳缓冲液 糖凝 加入电泳槽内→将扩增得到的PCR产物与凝胶载 戴基 基 做基 胶电 样缓冲液混合→用微量移液器将混合液加样（留 戴基 泳 一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物) 接通电源，电泳 3 3.DNA的测定：凝胶中的DNA分子通过染色，可 复制方向 以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。 自查自纠 (1)目的基因一定是编码蛋白质的基因 (2)DNA聚合酶能够从引物的5'端开始连接脱 氧核苷酸 ( (3)每一次循环后目的基因的量可以增加一倍，： 呈指数形式扩增 ( 教材P80图示拓展 (4)真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要 2.观察基因表达载体构建模式图，写出结构①和② Mg2+激活。因此，PCR反应缓冲溶液中一般要 的名称：① ,② ;物质A和B的 添加Mg2+ ( 名称：A. B. (5)PCR过程不需要解旋酶 ( (6)基因表达载体中含有启动子和密码子( 限制酶切割位点 ① ② 获取目的基因 (7)终止子相当于一盏红色信号灯，使翻译在所 GA B 重组 需要的地方停下来 ( 质粒 标记 DNA 基因 分子 (8)Ti质粒上的T-DNA可与植物受体细胞的 染色体DNA整合在一起 ( )3.下图为农杆菌转化法示意图，请将①~④的操作 (9)基因工程操作程序的核心工作是将目的基因： 序号填写在图中相应的横线上。 导入受体细胞 ( ①转入农杆菌②构建表达载体③导入植物 (10)目的基因导入双子叶植物一般采用农杆菌 细胞 ④将目的基因插入染色体DNA中 转化法 ( ) T-DNA 目的基因 (11)为培育抗除草剂的作物新品种，导入抗除草 B 剂基因时只能以受精卵为受体 ( ) (12)用PCR技术检测目的基因是否转录出mR-； 含目的基 因的重组 NA,利用了碱基互补配对原则 ( Ti质粒 (13)转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定必须通 过分子检测 ( (14)检测目的基因是否导入受体细胞可用抗原： 含重组Ti质 植物细胞 表现出新性 抗体杂交技术 ) 粒的农杆菌 状的植株 72 第3章基因工程 关键能力·合作探究 讲练设计探究重，点 提能点（一） PCR技术与目的基因的获取 情景导引 2.生物体内DNA复制与PCR反应的比较 比较项目 生物体内DNA复制 PCR反应 如图所示为PCR过程中部分原理示意图。 在解旋酶作用下，细 90℃以上高温下解 据图回答下列问题： 解旋 胞提供能量，部分 旋，DNA双链全部解 3端-0H40-p-04'0-P-046-P 5 DNA双链解开 开，不需要解旋酶 -0-1 3 2风0 03 2 05'端 解旋酶、DNA聚合 1 1 1 1 酶 耐高温的DNA聚合酶 碱基 碱基 碱基 碱基 酶等 碱基 碱基 1人2 可以是RNA或单链 0'Q 引物 一小段RNA 0-p-0-43%108. 3' DNA分子片段 5'端0 0 3'端 复制方向 在引物基础上，一条 分别从两条链的引物 合成 链连续合成：另一条 (1)结合上图分析PCR过程中为什么需要引物？ 子链 的3'端开始连接脱氧 链不连续合成，再由 DNA链复制的方向是怎样的？ 核苷酸，都是连续合成 DNA连接酶连接 3′ 5 过程 5 T (2)P℃R扩增目的基因时，复性温度的设定与引： 3 物长度、碱基组成有关，假设引物的长度相同，在 边解旋，边复制 变性→复性→延伸 G一C含量高时，对复性温度的设定有什么要求？ 循环次数 与细胞分裂同步 人为设置 说明理由。 两个引物之间的DNA 产物 完整DNA 片段 都需要DNA模板、4种脱氧核苷酸、分别与两 (3)在利用PCR获取和扩增目的基因时，从第几 相同点 条模板链相结合的两种引物；都是半保留复 轮循环才会产生完整的目的基因（可用相关图解 制，严格遵循碱基互补配对原则 解释)？ [典例] PCR技术可用于临床的病原菌检测。为 检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相 关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样 本中提取DNA;③利用PCR扩增DNA片段： ④采集病人组织样本。回答下列问题： 核心归纳 (1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序 1.PCR反应的过程 应该是 (用数字序号表示)。 目的基因 (2)操作③中使用的酶是 。 PCR反应 TTTTTT CDNA文库 中的每次循环可分为变性、复性 L 温度超过90℃：受热变性使DNA片段双链解开 步，其中复性的结果是 温度下降到50℃左右：复性使解聚的DNA两条单链 (3)为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物 分别与相应的引物结合 ☑：引物 应该能与 特异性结合 照 (4)PCR(多聚酶链式反应)技术是指 温度上升到72℃左右：耐高温的DNA聚合酶催化 从引物起始合成子链 。 该技术目前被 mm 广泛地应用于疾病诊断等方面。 73 生物学选择性必修3 微点拨 C.体内DNA复制需要能量，PCR反应也需要 PCR产物数量的计算 能量 以1个DNA分子经n次循环扩增的产物分析 : D.二者遵循的碱基互补配对原则相同 (1)PCR产物的总数量：2m。 2.下图a、b、c均为PCR扩增的DNA片段，下列有 (2)PCR扩增的特异性片段的数量：2”一2。 关说法正确的是 () (3)PCR扩增n次，需要的引物的数量是2+1-2 引物Ⅱ 引物Ⅱ 8g:gmmg'gmΠg: 跟踪训练 引物I 引物I a 6 1.下列有关体内DNA复制与PCR技术比较的叙： A.片段a、b、c的长度均相同 述，错误的是 ( B.片段a、b只是第一次循环的产物 A.二者子链的延伸方向相同，均为5'端→3'端 C.片段c最早出现在第二次循环的产物中 B.二者均需要解旋酶破坏氢键来实现解旋 D.经过30次循环后，片段c的数量为230 提能点（二） 基因表达载体构建的过程和方法 情境导引 核心归纳 目的基因导入受体细胞之前，需构建基因表 1.启动子与起始密码子和终止子与终止密码子的 达载体，图甲、乙表示质粒及目的基因所在DNA: 区别 片段，图中箭头表示相关限制酶的切割位点。 位置 作用 抗生素 BamH I 位于DNA RNA聚合酶识别结合位点， 抗性基因 HindⅢ 启动子 分子上 启动转录过程 Sma 质粒 EcoR I 起始 位于mRNA 决定翻译的开始 密码子 分子上 甲 位于DNA EcoR I目的基因EcoR I 终止子 决定转录的结束 分子上 一 外源DNA 终止 位于mRNA BamH I Sma I HindⅢ 决定翻译的结束 密码子 分子上 (1)构建基因表达载体时需要使用的工具酶为 2.构建基因表达载体中限制酶的选择技巧 PstI Smal PstI PstI (2)用图中质粒和DNA构建基因表达载体时，不 目的基因云↑ EcoRI 能使用SaI切割，原因是 SmaT EcoR I 父 乙 (3)构建基因表达载体时，可用EcoR I同时切割： (1)根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限 质粒和DNA,但会导致 制酶的种类 等问题，为避免以上问题出现，应使用 ①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶， 两种限制酶。 如图甲可选择PstI。 (4)构建好的基因表达载体在目的基因前要加上： ②不能选择切割位点位于目的基因内部的限制 ,其是 识别和结合的部位。 酶，如图甲不能选择SmaI。 (5)请简要描述基因表达载体的构建过程。 ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连 接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质 粒，如图甲也可选择用PstI和EcoR I两种限制 酶（但要确保质粒上也有这两种酶的切点，如 图乙)。 74 第3章基因工程 (2)根据质粒的特点确定限制酶的种类 :2.如图是利用基因工程技术构建重组表达载体的 其切割位 点不在启 -Xhol 过程示意图，其中PstI、SmaI、EcoR I、Apa 动子与终 其会破坏启动子， HindⅢ I为四种限制酶。下列相关叙述错误的是 止子之间， 不宜选择 启动子 -Nde I 不宜选择 其位于启动子、终 ( 抗生素 XbaI PstI 抗性基因终止子授 -BamHI 止子之间，宜选择 复制原点 其会破坏终止子， Pst I Sma I EcoR I EcoRI* 其会破坏 不宜选择 标记基因， 含抗原基 不宜选择pnl 因的DNA 抗原基因 表达 复制原点被破坏后，目的基因不能在受体细胞中复制，不宜选择 PstI 载体 跟踪训练 Sma I. 抗青霉 质粒 EcoR I 1.(2023·五省新课标卷，T6)某同学拟用限制酶 素基因 Apa I (酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将 A.需要用限制酶PstI和EcoR I来切割质粒 目的基因（两端含相应限制酶的识别序列和切割 B.表达载体中的抗青霉素基因在受体细胞中能 位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载： 复制 体。限制酶的切割位点如图所示。 C.表达载体中抗原基因的终止子位于抗青霉素 酶3 酶2 酶1 基因的下游 D.表达载体中目的基因的上游有启动子 3.如图所示为某质粒限制酶酶切图谱。某基因不 抗生素 酶4 抗性基因 含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的该基 因与该质粒构建重组质粒，则扩增的该基因两端 需分别引入哪两种限制酶的识别序列( 5-GAATTC-35-GGATCC-35-CCCGGG-35-AGATCT-3 3-CTTAAG-5 -CCTAGG-5-GGGCCC-5-TCTAGA-5' Xho I 酶1 酶2 酶3 酶4 HindⅢ 下列重组表达载体构建方案合理且效率最高： 动 Nde I 抗生素 XbaI 的是 ( Pst I- 抗性基因 终止 BamH I A.质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coli DNA连接酶连接 复制原点 子厨 EcoR I B.质粒用酶3切割、日的基因用酶1切割，用T4 Kpn I DNA连接酶连接 注：图中不同限制酶的识别序列及切割形成的黏 C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 性末端均不相同。 DNA连接酶连接 A.NdeI和BamH I B.NdeI和XbaI D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E. coli DNA连接酶连接 C.XbaI和BamH I D.EcoR I和KnI 提能点（三） 将目的基因导入受体细胞及目的基因的检测与鉴定 情景导引 :2.农杆菌转化法是将目的基因导入双子叶植物和 裸子植物的一种方法，原因是双子叶植物和裸子 1.为什么在用农杆菌转化法将目的基因导入植物 植物能够产生一种吸引农杆菌的化学物质，而大 细胞的过程中，一定要将目的基因插入到T质 多数单子叶植物不能产生这种物质，能不能利用 粒的T-DNA上？ 农杆菌转化法将目的基因导入单子叶植物？说 明原因。 75 生物学选择性必修3 3.植物基因工程常用的受体细胞为什么可以是体：[典例] 下图是利用基因工程培育抗虫植物的示 细胞，而动物基因工程一般只用受精卵？ 意图。下列相关叙述正确的是 构建表 转入 导入植 再生成 达载体 农杆菌心O 物细胞 植株 T含抗虫基重组、 含重组Ti质 质粒因的ONA TI质粒粒的农杆菌 植物细胞 植株 ② ③ ④ ⑤ A.②的构建需要限制性内切核酸酶和DNA聚 合酶参与 B.③侵染植物细胞后，重组质粒整合到④的染色 4.鉴定抗虫棉中导入的抗虫基因是否表达的最简 体上 便的方法是什么？ C.④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗 虫性状 D.⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可 遗传变异 跟踪训练 1.下列关于将目的基因导入受体细胞的叙述，错误 核心归纳 的是 () A.可利用花粉管通道法培育转基因植物 1.农杆菌转化法分析 B.用Ca2+处理大肠杆菌，以改变大肠杆菌细胞 目的 的生理状态 供体细胞基因 转入 C.对于动物来说，受体细胞一般是受精卵 农杆菌 T-DNA D.将目的基因转入微生物细胞常用显微注射法 构建基因 表达载体 感 2.为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克 Ti质粒 目的基因插 组织 入了染色体 隆出花色基因C(图1)，拟将其与质粒（图2）重 培养 DNA中 组，再借助农杆菌导入菊花中。下列操作与实验 植株 受体细胞 目的不符的是 (1)构建携带目的基因的表达载体，需要两种工 EcoR I倉动子 BamH I 具酶：限制酶和DNA连接酶。 终止子 (2)基因表达载体（重组质粒）导入农杆菌细胞 EcoR I EcoR I 启动 质粒 时，要用Ca2+处理农杆菌细胞，使其处于感受 C基因 潮霉素抗 性基因 终止子 态，利于重组质粒的导入 (3)由导入目的基因的受体细胞培育成完整的植 图1 图2 株要用到植物组织培养技术 A.用限制性内切核酸酶EcoR I和DNA连接酶 2.目的基因的检测与鉴定 构建重组质粒 目的基因转录 B.用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C 翻译 是否插入 mRNA 蛋白质 个体 基因导入细胞 C.在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花 PCR等技术 检测 鉴定 抗原一抗 抗虫抗病 细胞 体杂交 接种实验 D.用PCR技术检测C基因是否整合到菊花染色 体上 提能点（四） DNA片段的扩增及电泳鉴定实验分析 核心归纳 (2)为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验 1.实验注意事项 中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前 (1)微量移液器不能超量程使用。使用一次性屏 必须进行高压灭菌处理。 蔽式吸液枪头有助于防止吸取的液体流入微量： (3)为保证加入反应体系中的各试剂体积的准确 移液器，从而减少实验过程中的交叉污染 性，要按照加人体积的大小，由大到小依次加入 各试剂，即最先加人无菌水。为保护酶的活性， 76 第3章基因工程 一般最后加入Tag DNA聚合酶。 聚合酶失活；引物出现质量问题，浓度不合适； (4)应按照教材或试剂盒说明书建议的体积加入 Mg2+浓度过低；变性温度低，变性时间短；目的 各试剂，随意加大试剂用量并不会提高PCR扩 序列变异等。 增的成功率。例如，高浓度的引物可能引发错 配，导致非特异性扩增；高浓度的4种脱氧核苷 跟踪训练 酸可能对扩增起抑制作用。 1.下列关于PCR操作过程的叙述，错误的是( (5)该实验所需材料可以直接购买，缓冲液和酶： A.PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液 应分装成小份，并在一20℃储存。使用前，将所： 以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌 需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。 B.P℃R所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在 (6)在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取： 一20℃储存 一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。 C.PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后，迅 2.实验结果分析 速融化 (1)判断是否成功扩增出DNA片段的依据 D.在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种 次成功的DNA片段扩增应该产生与预期大小： 试剂后，移液器上的枪头都必须更换 一致的DNA片段。若出现与预期不一致的结2.某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果 果，可尝试从以下几个方面进行分析：模板DNA; 显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外， 的制备、引物的质量与特异性、酶的质量以及 还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。 PCR循环的条件。 为了减少反应非特异条带的产生，以下措施有效 (2)电泳结果没有出现扩增条带的原因分析 的是 模板DNA含有蛋白质或含有Tag DNA聚合酶： A.增加模板DNA量B.延长热变性的时间 的抑制剂（如蛋白酶K、苯酚、EDTA);Tag DNA: C.延长延伸的时间 D.提高复性的温度 能力提升·核心素养 提升技能素养提高 社会责任一RT-PCR技术与病毒核酸检测 B.过程②③拟对单链cDNA进行第n次循环的 RT-PCR是将RNA的逆转录(RT)和cD 扩增，理论上需要n个引物B NA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首 C.该技术用于对某些微量RNA病毒的检测，可 先经逆转录酶的作用，从RNA合成cDNA,再以 提高检测的灵敏度 cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下扩增合成目 D.游离的脱氧核苷酸只能从引物的3'端开始连接 的片段，操作原理如下图： 2.实时荧光定量PCR简称qPCR,灵敏度高、特异 RNA链DNA链 性好，是目前检测微小残留病变的常用方法。将 荧光标记的Taqman探针与待测样本DNA混 逆转录酶 核酸酶H DNA聚合酶 合，当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程 (RNase H) 中，与目的基因结合的探针被Tag DNA聚合酶 单链RNA 杂交双链 单链DNA 双链DNA 水解，R与Q分离后，在特定光激发下R发出的 RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检 荧光可被检测到（如图所示），随着循环次数的增 测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含 加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号 量和直接克隆特定基因的cDNA序列。 强度，可得Ct值（该值与待测样本中目的基因的 应用体验 个数呈负相关)。下列相关叙述错误的是( 引物1 ® 12000 1.乙肝病毒的检 5 3 -5'0 mRNA 测可以采用实 1① 3 5 引物2 时荧光RT -5 PCR(逆转录 35B 5 31 00 聚合酶链式反 315 ↓③ 注：R表示荧光基因， ■ Q表示淬灭基因。 应)的方法，RT 。4.2循织秋数2站和 -PCR的具体 A.每个模板DNA分子含有2个游离的磷酸基团 过程如图。下列有关叙述错误的是 B.在反应过程中，无需ATP为新链的合成提供 A.过程①以mRNA为模板合成单链DNA 能量 77 生物学选择性必修3 C.做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸 序列合成引物和Tagman探针 L.PCR是聚合酶链式反应的缩写，该技术的原理是 D.荧光信号达到设定的阈值时，经历的循环数越 DNA半保留复制。 少，说明含有的病变的概率越小 2.PCR反应进行的条件有缓冲溶液、DNA模板、2种引 课堂小结 物、4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、温度条 件等。 人工合成目的基因 目的基因的 3.PCR扩增的过程：变性→复性→延伸。 通过构建基因文库获取目的基因 筛选与获取 4.在构建基因表达载体时，首先会用一定的限制酶切割 利用PCR获取和扩增目的基因 载体，然后再用同种限制酶或能产生相同末端的限制 酶切割含有目的基因的DNA片段；再利用DNA连 组成 启动子、目的基因、终 基因表达载 止子、标记基因等 接酶连接形成重组DNA分子。 晨读 体的构建 5.转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞 构建 限制酶切割、DNA连 必背 接酶连接 内维持稳定和表达的过程。 6.在基因工程操作中，常用原核生物作为受体细胞，其 思维 目的基因的筛选与获取 导图 中大肠杆菌的应用最为广泛。一般先用Ca+处理大 基因表达载体的构建 肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中 程 导入植物细胞：农杆菌转化 DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载 将目的基 法、花粉管通道法 体导人其中。 本 因导入受 导入动物细胞：显微注射法 7.检测转基因生物的染色体DNA上是否插人了目的 体细胞 导入微生物细胞：Ca+处理法 基因或目的基因是否转录出了mRNA常用PCR等 程 序 目的基因 分子水平上的检测 技术，检测目的基因是否翻译成蛋白质常用抗原一抗 的检测与 体杂交技术。 鉴定 个体生物学水平上的鉴定 随堂巩固·评价演练 循纲忆知素养培育 1.利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂，用； A.该载体最可能为环状DNA分子 于降解某种农药的残留，基本流程如图所示。下 B.两种限制酶在载体上各有一个酶切位点 列叙述正确的是 ( ) C.限制酶R1与R2的切点最短相距约200bp 抗农药小菜绿一→RNA CDNA CarE基因表达载体 D.限制酶作用位点会导致氢键和肽键断裂 降解农药残留 3.在核酸分子杂交技术中，常常使用已知序列的单 1② CarB制剂工程闲@大肠杆菌，® 链核酸片段作为探针（探针是指以放射性同位 重组表达载体 素、生物素或荧光染料等进行标记的已知核苷酸 A.过程①的反应体系中需要加入逆转录酶和核： 序列的核酸片段)。为了获得B链作探针，可应 糖核苷酸 用PCR技术进行扩增，应选择的引物种类是 B.过程②需使用限制酶、Tag DNA聚合酶以及 DNA连接酶 A链 C.过程③需要使用NaCl溶液制备感受态的大肠 杆菌细胞 引物5” 引物2 D.过程④可利用PCR技术鉴定CarE基因是否 引物33 引物4 成功导入受体细胞 B链 2.在基因工程操作过程 Marker R R+R2 A.引物1与引物2 B.引物3与引物4 中，科研人员利用识别 负极 bp C.引物2与引物3 D.引物1与引物4 两种不同序列的限制酶 1000 4.采矿污染和不当使用化肥导致重金属镉(Cd)在 800 (R1和R2)处理基因载 600 400 土壤中过量积累。利用植物修复技术将土壤中 体，进行聚丙烯酰胺凝 200 的Cd富集到植物体内，进行后续处理（例如，收 胶电泳检测，结果如右 正极 集植物组织器官异地妥善储存)，可降低土壤中 图所示。以下相关叙 缓冲液 Cd的含量。为提高植物对Cd污染土壤的修复 述，不正确的是 能力，研究者将酵母液泡Cd转运蛋白(YCF1)基 78 第3章基因工程 因导入受试植物，并检测了相关指标。回答下列： “耐性”或“富集能力”)；据图2可知，对转基因植 问题： 株的 进行后续处理对于缓解土壤Cd污 (1)为获取YCF1基因，将酵母细胞的全部DNA 染最为方便有效。 提取、切割后与载体连接，导入受体菌的群体中 60 口野生型 15 口野生型 储存，这个群体称为 口转基因植株 口转基因植株 e040 10 (2)将DNA序列插入Ti质粒构建重组载体时，： +20 所需要的两种酶是 。 构建 .w)/ 的重组基因表达载体中必须含有标记基因，其作： 0 地上部分地下部分 整株 叶 茎 用是 图1 图2 (3)进行前期研究时，将含有YCF1基因的重组 (5)已知YCF1特异定位于转基因植物细胞的液 载体导入受试双子叶植物印度芥菜，采用最多的 泡膜上。据此分析，转基因杨树比野生型能更好 方法是 研究者进一步获 地适应高Cd环境的原因是 得了转YCF1基因的不育杨树株系，采用不育株 系作为实验材料的目的是 相较于草本植物，采用杨树这种乔木作为Cd污 染土壤修复植物的优势在于 (4)将长势一致的野生型和转基因杨树苗移栽到 Cd污染的土壤中，半年后测定植株干重（图1）及 (写出两点即可)。 不同器官中Cd含量（图2）。据图1可知，与野生 温馨提示 请做课时分层检测（十三） 型比，转基因植株对Cd具有更强的 (填 第3节 基因工程的应用 【学习目标】 课程内容标准 核心素养对接 1.举例说出基因工程在农牧业、医药卫生和食品工业等方 1.生命观念一举例说出植物基因工程、动物基因工程的成果 面的应用。 及其给人类带来的影响。 2.认同基因工程的应用价值。 2.社会责任一用基因工程培育优良品种或细胞产品，造福 3.关注基因工程的进展。 人类。 必备知识·自主梳理 预习新知夯实基础 知识梳理 将某种必需氨基酸含量 一)基因工程在农牧业方面的应用 多的蛋白质编码基因导 改良植 利用 技术可 入植物中，可以提高这种 应用 方法 成果 物的 以改良植物的营养价 品质 氨基酸的含量，如培育的 值、观赏价值等品质 某种转基因玉米中赖氨 从某些生物中分离出 转基因 酸的含量比对照高30% 抗虫 具有 的基因， 转基因抗虫棉花、玉米、 将它导入作物中培育 大豆、水稻和马铃薯等 植物 出具有抗虫性的作物 将外源生长激素基因导 提高动将外源 基因 入鲤鱼，在同等养殖条件 将来源于某些病毒、真 物的生 导入动物体内，以提高 下，转基因鲤鱼的生长速 转基因 菌等的 导人 如转基因抗病毒甜椒、番 长速率 抗病 动物的生长速率 率比非转基因鲤鱼提高 植物中，培育出转基因 木瓜和烟草等 植物 了42%~115% 抗病植物 将 某种除草 改善畜 基因导入 转基因牛乳汁中 转基因 剂的基因导入作物，可 转基因抗除草剂玉米、大 产品的 将 的含量大大降低，而 抗除草 奶牛基因组 以培育出抗除草剂的 豆、油菜和甜菜等 品质 其他营养成分不受影响 剂植物 作物品种 792.B[图1中的丝状物含有DNA,A正确：图1所示操作的原理是！关键能力·合作探究 DNA不溶于酒精，而蛋白质等杂质溶于酒精，B错误；图2所示实验！提能点（一） 操作完成后，最好待试管中溶液冷却后观察颜色变化，C正确：图2！情景导引 中的溶液b是2mol/L的NaCI溶液，能够溶解DNA,D正确。] (1)提示DNA聚合酶不能从开始合成子链，只能把游离的脱氧核 提升·核心素养 苷酸连接到已经存在的片段上。DNA链复制的方向总是从子链的 应用体验 5端向3'端延伸。 1.C[T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末 (2)提示在引物的G一C含量高时，设定的复性温度要高一些。因 端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，A错误：E.coli DNA连 为DNA分子中G一C之间有三个氢键，A一T之间有两个氢键。 接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端连接起来，不能在双链！ (3)提示第3轮，如图所示： DNA片段平未端之间进行连接，B错误：DNA连接酶能使两个 DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而将它们连接起来，C正确，D 错误。] 2.C[由图示分析可知，①处为氢键，是解旋酶的作用部位：②处为磷 酸二酯键，是限制酶的作用部位：③处为两个DNA片段的缺口，是 、 DNA连接酶的作用部位。] 完幕的 3.D[限制性内切核酸酶切割DNA分子时破坏的是DNA链中的磷 目的基因 酸二酯键，如图a处。DNA聚合酶是将单个脱氧核苷酸加到已有！ 的核酸片段上，形成磷酸二酯键，因此DNA聚合酶可以连接a处。 解旋酶解开碱基对之间的氢键，即使b处解开。DNA连接酶连接 第1轮 第2轮 第3轮 的是两个相邻的脱氧核苷酸的磷酸和脱氧核糖，形成磷酸二酯键，！核心归纳 如处，而图示的©处连接的是同一个脱氧核苷酸的磷酸和脱氧！典例解析(1)PCR技术可用于临床的病原菌检测，若要得到正确 核糖。门 的检测结果，正确的操作顺序应该是④采集病人组织样本·②从病 随堂·评价演练 人组织样本中提取DNA→③利用PCR扩增DNA片段·①分析 1.C[实施基因工程的最终目的是定向改造生物的遗传性状，C! PCR扩增结果。(2)在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程 正确。」 与细胞内DNA的复制类似，操作③中使用的酶是Taq酶（耐高温的 2.B[gRNA为RNA,最多含有4种核糖核苷酸，DNA含有4种脱氧 DNA聚合酶)，PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、廷仲三 核苷酸，故gRNA与目标DNA结合片段中最多含有8种核苷酸，A 步，其中复性的结果是Tg酶从引物起始进行互补链的合成。 正确；噬菌体DNA被细菌gRNA识别并被Cs9蛋白切割属于特定 (3)DNA复制需要引物，为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引 物应该能与两条单链DNA特异性结合。(4)PCR(多聚酶链式反 位点的切割，不能体现基因突变的不定向性，B错误：Cs9蛋白可切 断目标DNA,该过程破坏的是DNA分子的磷酸二酯键，C正确：该， 应)技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。 过程属于分子水平的改变，光学显微镜下无法观察到该现象，D 正确。] 答案(1)④②③①(2)Tag酶（耐高温的DNA聚合酶）延伸 Tag酶从引物起始进行互补链的合成(3)两条单链DNA(4)一 3.D[由于Y表示C或T,R表示A或G,说明一种限削性内切核酸 酶能识别一种或多种特定的脱氧核苷酸序列，A错误：限制酶的切！跟踪训练 项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术 割位点不一定在识别序列的内部，如Sau3AI,B错误；不同限制酶；1，B[DNA体内复制与利用PCR技术扩增DNA时，子链的延伸方 切割后形成的黏性末端不一定相同，如EcoR I、HidⅡ、KpnI切 向相同，均为5端~3端，A正确；P(CR扩增中双链DNA解开不需 割后形成的黏性未端各不相同，而BamH I和Sau3AI切割后形成！ 要解旋酶，在高温条件下氢键断裂，B错误：DNA体内复制与利用 的黏性末端相同，C错误。] PCR扩增DNA时都需要能量，但两者所需能量来源不同，C正确： 4.A[①中加落馏水是为了使血细胞吸水涨破，④中加入蒸馏水是为 DNA体内复制与利用PCR扩增DNA时，遵循的碱基互补配对原 了降低NCI溶液的浓度，使DNA析出，A错误：嫩肉粉中含有蛋白 则相同，D正确。] 酶，能够水解蛋白质，因此图①中向鸡血细胞液内加入少许撇肉粉 !2.C[图中片段a、b只有一种引物，是由原始DNA链为模板复制而 有助于去除杂质，B正确；DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某 来，其长度比片段℃长，A不正确。由于原始模板在每次循环中均 些蛋白质则溶于酒精，因此②操作的目的是纯化DNA,去徐溶于体： 可作为模板，则每次循环都能产生图中片段、b,B不正确。由于第 积分数为95%的酒精中的杂质，C正确：图③中2mol/L的NCl溶： 一次循环的产物只有一种引物，而图中片段℃有两种引物，则最早 液能溶解黏稠物中的DNA,D正确。] 出现在第二次循环，C正确。经过30次循环后，得到的DNA片段 第2节基因工程的基本操作程序 总数为20，这包括图中的片段a、b,D不正确。] 必备知识·自主梳理 提能点（二） :情景导引 知识梳理 (1)限制酶和DNA连接酶(2)SmaI会破坏质粒的抗生素抗性基 (一)1.(1)改变受体细胞性状预期表达产物编码蛋白质(2)结 因和外源DNA中的目的基因(3)目的基因和质粒的白身环化，目 构和功能2.(1)①DNA半保留复制组分大量复制缓冲 的基因不能定向连接BamH I和HindⅢ（或EcoR I和HindⅢ） 溶液引物脱氧核苷酸耐高温的温度②90单链50 (4)启动子.RNA聚合酶 引物72DNA聚合酶③琼脂糖凝胶电泳(2)基因文库 (5)提示用相同的限制酶分别切割载体和含目的基因的DNA片 (二)1，(1)稳定存在遗传2.上游RNA聚合酶转录目的基！ 段，产生末端相同的切口，再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接 因下游标记基因 到载体的切口处（如图）。 (三)1，表达2.子房花粉管通道胚囊T一DNA染色体显 微注射受精卵Ca2+ (○质粒 外源DNA 同一种限 (四)1.(1)PCR目的基因mRNA(2)抗原一抗体蛋白质 制酶切割 2.抗虫 (五)1.(1)DNA的热变性(2)相反(3)DNA分子的大小和构象 -DNA连接酶 两个切口，获 一个切口， 2.微量移液器底部P℃R仪 取目的基因 两个黏性末端 自查自纠 (1)×(2)×(3)/(4)/(5)/(6)×(7)×(8)/ 基因表达载体 (9)×(10)/(11)×(12)/(13)×(14)× !跟踪训练 教材边角 !1.D[酶3切割后得到的是平末端，应该用T4DNA连接酶连接，A 1,提示DNA聚合酶能从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，所以！ 错误：质粒用酶3切割后得到平未端，目的基因用酶1切割后得到 DNA链复制的方向，总是从子链的5'端向3'端延伸。 的是黏性末端，二者不能连接，B错误：质粒和目的基因都用酶1和 2.启动子终止子限制酶DNA连接酶 酶2切割，得到的黏性末端不互补，不能连接，C错误：酶2和酶4切 3.②④①③ 割后得到的黏性末端都是“GATC一”，可以互补，E.coli DNA连接 184 酶可以连接黏性末端，故质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，能： 循环数越少，说明扩增次数少，说明更多的荧光探针与目的基因进 用E.coli DNA连接酶连接，D正确。] 行了碱基互补配对，可推测获得的核酸产物中含有病变的概率越 2.C[限制酶SmaI的识别序列位于目的基因中，因此表达载体构！ 大，D错误。门 建时不能用限制酶SmaI,应用限制酶PstI,EcoR I,A正确：表！随堂·评价演练 达载体中的抗青霉素基因在受体细胞中能稳定存在且造传给下一！1，D[过程①表示通过逆转录法合成目的基因，该过程需要逆转录酶 代，B正确：表达载体中抗原基因的终止子位于抗青露素基因的上 和脱氧核糖核苷酸，A错误：过程②是基因表达载体的构建，不需要 游，C错误：表达载体中目的基因的上游有启动子，是RNA聚合酶 使用Tag DNA聚合酶，B错误：过程③常用Ca+处理大肠杆菌使 识别和结合的部位，D正确。] 其成为易于吸收DNA的感受态细胞，C错误：过程④可利用PCR 3.A[构建重组质粒时，要将目的基因插入到启动子和终止子之间， 技术鉴定CarE基因是否成功导入受体细胞，D正确。 而且不能破坏启动子、终止子、复制原点、抗生素抗性基因等部位， 2,D[当仅用一种限制酶切割载体时，仅产生一种长度的DNA片 故只能选用NdeI和BamH I切割质粒和含目的基因的DNA片 段，因此该载体最有可能为环状DNA分子，A正确：当仅用一种限 段，因此在PCR扩增的该基因的两端分别引入NdeI和BamH I 制酶切割载体时，两种限制酶分别切割产生的DNA片段等长，而两 两种限制酶的识别序列。] 种限制酶同时切割时则产生两种长度的DNA片段，所以两种限制 提能点（三） 酶在载体上各有一个酶切位点，B正确：两种限制酶同时切割时则 情景导引 产生600bp和200bp两种长度的DNA片段，所以两种限制酶的酶 1,提示Ti质粒上的T-DNA也称为可转移DNA,可转移至受体细！ 切位点至少相距200bp,C正确：限制酶切割DNA分子，破坏的是 胞，并且整合到受体细胞的染色体DNA上。 作用位点上两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键，D错误。] 2.提示能，可从双子叶植物中提取该化学物质，再用该化学物质处 :3.C[要获得B链，根据PCR中子链延仲方向为5到3'，则需选择引 理单子叶植物细胞，然后就可以用农杆菌转化法将目的基因导入单 物2与引物3进行扩增，故选C。门 子叶植物细胞。 3.提示植物体细胞的全能性较高，可经植物组织培养过程形成完整 4.解析(1)为获取YCF1基因，将酵母细胞的全部DNA提取、切割 植物体，因此受体细胞可以是体细胞：动物体细胞的全能性受到严 后与载体连接，导入受体菌的群体中储存，这个群体含有酵母首的 格限制，因此动物基因工程中的受体细胞一般只用受精卵。 全部基因，称为基因组文库。(2)将DNA序列插入Ti质粒构建重 4,提示用抗虫棉叶片饲养棉铃虫，观察棉铃虫是否死亡。 组载体时，需要用限制酶切割供体DNA和质粒，以产生相同的黏性 核心归纳 末端，然后用DNA连接酶进行连接。基因表达载体中的标记基因 典例解析重组质粒的构建需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶 可用于目的基因的鉴定和筛选。(3)农杆菌容易侵染双子叶植物， 参与，DNA聚合酶一般用于DNA复制过程，A错误：③侵染植物细 其质粒中的T-DNA可转移并插入受体细胞DNA中，将含有 胞后，重组Ti质粒上的T一DNA整合到植物细胞的染色体上，B错 YCF]基因的重组载体导入受试双子叶植物印度芥莱，采用最多的 误：如果受体细胞的染色体上含抗虫基因，只能说明抗虫基因成功 方法是农杆菌转化法。考虑转基因技术的安全性，采用不育株系作 整合到受体细胞的染色体上，不代表该基因就一定能表达成功，因 为实验材料，可避免目的基因在自然界中的扩散。(4)根据图1分 此不能确定⑤是否表现出抗虫性状，C锆误：⑤只要表现出抗虫性· 析可知，与野生型相比，转基因植株地上部分、地下部分和整株千重 状就表明植株发生了可遗传变异，D正确。 均增加，说明转基因植株在Cd污染的土壤中生长较好，即对Cd具 答案D 有更强的耐性：据图2分析可知，转基因植株的茎、叶中Cd含量高 跟踪训练 于野生型，因此对转基因植株的茎、叶进行后续处理，可使转基因植 1.D[可利用花粉管通道法培育转基因植物，A正确：用Ca+处理大 株待续发挥富集Cd的作用，对于缓解土壤Cd污染最为方便有效。 肠杆菌，使之处于一种能够吸收周围环境中DNA分子的生理状态， (5)Y℃℉1特异定位于转基因植物细胞的液泡膜上，可通过主动运输 B正确：对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵的全能！ 将Cd离子运到液泡中，提高了细胞液的浓度，有利于桩株吸水，所 性易于表现，C正确：将目的基因转入动物细胞常用显微注射法，将！ 以转基因杨树比野生型能更好地适应高C环境。相较于草本植 目的基因转入微生物细胞常用Ca+处理法，D错误。] 物，杨树具有发达的根系和高大的树冠，更适应污染矿区等不良环 2.C「目的基因(C基因)两端有EcoR I酶切割位点，可用限制性内！ 境，同时可充分吸收土壤中的Cd,木材也方便运输，利用，作为Cd 切核酸酶EcoR I和DNA连接酶构建重组质粒，A正确：一般用农！ 污染土壤修复植物更具有优势。 杆菌等作为媒介去侵染植物的愈伤组织等，将含有目的基因的质粒： 答案(1)基因组文库(2)限制酶和DNA连接酶便于目的基因 导入细胞，B正确：据图可知，质粒中含有潮霉素抗性基因，不含卡· 的鉴定和筛选(3)农杆菌转化法避免耳的基因在自然界中的扩 那霉素抗性基因，故无法用卡那露素来筛选被转化的菊花细胞，C 散(4)耐性茎、叶(5)YCF1可通过主动运输将Cd离子运到液 错误：检测C基因是否整合到菊花染色体上，常采用PCR技术，D 泡中，提高了细胞液的浓度，有利于植株吸水杨树具有发达的根 正确。] 系和高大的树冠，更适应污染矿区等不良环境，同时可充分吸收土 提能点（四） 壤中的Cd,木材也方便运输、利用 跟踪训练 第3节 1.C[在冰箱中放置的缓冲流和酶，取出后应放在冰块上拨授融化，必备知识·自主梳理 基因工程的应用 不能迅速融化。门 2.D [增加模板DNA的量可以提高反应速度，但不能有效减少非特！知识梳理 异条带，A错误：延长热变性的时间和延长延仲的时间会影响变性、（一）抗虫功能抗病基因降解或抵抗转基因生长激素 肠乳 延仲过程，但对引物与单链DNA的结合配对影响不大，故不能有效！ 糖酶乳糖 减少反应非特异条带，B,C错误：非特异产物增加的原因可能是复（二）基因药用蛋白启动子抗原决定抗原决定免疫排斥 性温度过低会造成引物与模板的结合位点增加，故可通过提高复性！（仁）工业用酶维生素凝乳酶基因T程菌 的温度来减少反应非特异条带的产生，D正确。门 ；自查自纠 提升·核心素养 (1)×(2)×(3)X(4)×(5)×(6)× 应用体验 !教材边角 1,B[过程①是由mRNA形成单链DNA的过程，表示逆转录，A正： (1)提示让害虫去吃转基因棉花的植株，观察害虫的生存状况。 确：过程②③拟对单链cDNA进行第n次循环的扩增，根据DNA分 (2)提示 减少了化学农药的使用量，降低了环境污染。 子半保留复制特点可知，该过程理论上至少需要2”一1个引物B,B错 (3)提示不能：抗虫基因具有专一性。 误：利用实时荧光RT-PCR技术对某些微量RNA病毒进行检测时关键能力·合作探究 可提高检测的灵敏度，是因为增加了待测RNA逆转录产生的DNA!提能点（一） 的数量（或浓度），便于检测，C正确：游离的脱氧核苷酸只能从引物：情景导引 的3端开始连接，D正确。」 !1.用基因工.程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类 2,D[DNA分子为反向平行的两条链，每条链都含有1个游离的磷！2.提示当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠道上皮细胞 酸基团，则一个DNA分子含有2个游离的磷酸基团，A正确：在反！的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。B:抗虫 应过程中，dNTP为新链的合成提供能量，无需ATP,B正确：做 蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和性 PCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成1对引物和 畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体。因此Bt抗虫蛋白 1种Taqman探针，C正确；若荧光信号达到设定的阙值时，经历的 不会对人畜产生上述影响。 185