精品解析：辽宁大连市第四十八中学2025-2026学年度第二学期阶段性学情反馈高二生物学试题

科目：高二生物 (试题卷) 注意事项： 1.答题前，考生务必将自己的姓名、班级、考号写在答题卡指定位置上，并认真核对条形码上的相关信息，确认无误后，将条形码粘贴在答题卡指定位置上。 2.选择题和非选择题均须在答题卡上作答，在本试卷和草稿纸上作答无效。考生在答题卡上按如下要求答题： (1)选择题部分请按对应题号用2B铅笔规范填涂方框，如需修改，请用橡皮擦除干净，不要留有痕迹。 (2)非选择题部分请用0.5毫米黑色签字笔在对应区域作答。 (3)请勿折叠答题卡。答题时保持字体工整、笔迹清晰、卡面清洁。 3.考试结束后，将本试题卷和答题卡一并交回。 4.本试题卷共10页，如有缺页，考生须及时报告监考老师，否则后果自负。 2025-2026学年度第二学期阶段性学情反馈 高二生物学试题 (考试时间：75分钟 满分：100分) 注意事项： 1.答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2.答选择题时，选出每一小题答案后，用铅笔把答题卡对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 第Ⅰ卷 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共计30分。每小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的。 1. 大豆异黄酮是腐乳毛坯发酵产生的次生代谢物，其合成由异黄酮合酶基因调控，具有降血压、缓解更年期综合征等功效，被称为“植物雌激素”。下列叙述错误的是（　　） A. 腐乳的制作需要多种微生物的参与，起主要作用的是毛霉 B. 腐乳制作过程中，有机物的种类和含量都在不断减少 C. 基因可以通过控制酶的合成，间接控制大豆异黄酮的合成 D. 大豆异黄酮的产生需要在一定的环境和时间条件下才进行 2. 某科研小组从土壤中分离出一种解脂菌，它能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，而脂肪不能。下列叙述正确的是（　　） A. 加入了脂肪为唯一碳源的醇溶青琼脂培养基只能起到鉴别作用 B. 配制好固体培养基后依次进行灭菌、调节pH和倒平板等操作 C. 可采用稀释涂布平板法对土壤中的解脂菌进行分离与计数 D. 纯培养物指的是在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体 3. 我国科学家利用如下图所示的液态厌氧发酵工艺，实现了高效产出乙醇和乙醇梭菌蛋白。下列叙述错误的是（　　） A. 乙醇梭菌以CO、CO2为主要的碳源，具有较强的固碳潜力 B. 乙醇梭菌在发酵罐中的厌氧发酵，是该发酵工程的中心环节 C. 通过该工艺高效生产清洁能源乙醇，对解决资源短缺有重要意义 D. 发酵完成后，可通过提取、分离和纯化等方法获得单细胞蛋白 4. 关于植物组织培养，下列叙述错误的是（　　） A. 通常可以选择植物的幼嫩茎段作为外植体进行培养 B. 培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 C. 培养过程中应给予适当光照以促进愈伤组织的光合作用 D. 接种外植体到培养基时，需要注意形态学方向，不可倒插 5. 植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用，并取得了显著的社会效益和经济效益。关于植物细胞工程的应用，下列叙述正确的是（　　） 选项 应用技术 原理或取材原因 优势 A 快速繁殖 植物细胞的全能性 繁殖快、保持亲本遗传特性 B 作物脱毒 植物顶端分生区几乎不含病毒 提高作物抵抗病毒的能力 C 突变体的利用 为适应培养条件发生新的突变 加快育种进程，培育新品种 D 生产细胞产物 提高单个细胞中产物的产量 不受季节、天气等限制 A. A B. B C. C D. D 6. 科学家利用成纤维细胞，借助载体将特定基因导入细胞，来制备诱导多能干细胞(iPS细胞)，并通过诱导iPS细胞定向分化，可培育出所需器官进行自体移植。下列叙述正确的是（　　） A. 成纤维细胞和iPS细胞中所含基因相同，但表达的基因不完全相同 B. iPS细胞体外增殖方式为有丝分裂，体外分化过程与细胞内基因表达的调控有关 C. 将iPS细胞分化形成的特定组织移植回患者后，患者需要使用免疫抑制剂 D. iPS细胞应用前景优于胚胎干细胞，用于临床治疗时不存在导致肿瘤发生的风险 7. 通过支架培养生成的人工肌肉组织，可用于创伤或手术后的肌肉修复。科研人员利用大鼠骨骼肌细胞生成三维肌束结构的培养流程如下图所示。培养过程中非成肌细胞贴壁速度快(0.5～2小时)，而成肌细胞(目标细胞)贴壁较慢(数小时)，三维培养阶段需加入胶原支架使细胞贴附，同时促进细胞三维排列。下列叙述错误的是（　　） 新生大鼠 腿部肌肉 原代培养 与纯化 传代培养 3代以内 三维培养 与分化 三维肌束 结构 A. 用机械的方法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理肌肉组织将其分散成单个细胞 B. 原代培养2小时左右可倒掉培养液，然后轻柔收集贴壁细胞用于传代培养 C. 传代培养时通过无菌操作和定期更换培养液等维持无菌、无毒的环境 D. 三维培养阶段胶原支架为细胞提供更大附着面积，有利于细胞贴壁生长 8. 牛的自然生育率比较低，可通过现代生物科技提高其繁殖能力，下列叙述正确的是（　　） A. 促使牛超数排卵是通过应用性激素，诱发卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子 B. 核移植技术得到的牛胚胎，移植前需取滋养层细胞进行性别鉴定才能确定胚胎性别 C. 试管牛与克隆牛都是无性繁殖，培育过程中均用到动物细胞培养、胚胎移植技术 D. 胚胎移植是胚胎工程的最终技术环节，移植前不需要对供体和受体进行免疫检查 9. 目前发现的双胞胎有同卵双胞胎、异卵双胞胎和“半同卵双胞胎”。1对“半同卵小姐弟双胞胎”形成过程如图所示，下列叙述错误的是（　　） A. 半同卵双胞胎极其罕见的主要原因是过程1有透明带反应和卵细胞膜反应 B. 动物排出的卵子成熟程度不同，图1中的卵子已彻底完成减数分裂II C. 过程2所示的P1、P2和M包括了两个雄原核和一个雌原核 D. 这对姐弟来源于母亲的染色体相同，来源于父亲的常染色体可能不同 10. 研究表明，DNA连接酶能够封闭DNA双螺旋骨架上的切口(图a)，却无法封闭缺口(图b)，下列叙述正确的是（　　） A. DNA连接酶封闭切口时，需要识别DNA片段特定的核苷酸序列 B. DNA连接酶的封闭是指催化核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成 C. 用限制酶产生磷酸二酯键切口时，还必须与解旋酶配合使用 D. 修复缺失的核苷酸缺口，可用DNA聚合酶沿缺口5＇→3＇方向进行 11. 下图为“DNA的粗提取和鉴定”实验中几个重要步骤的示意图，下列叙述错误的是（　　） A. 实验的操作顺序是③②①④，图②中的纱布不能用滤纸代替 B. 图①的原理是DNA不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精 C. 图③中的鸡血细胞不可以用哺乳动物成熟的红细胞代替 D. 图④操作后加入二苯胺试剂充分振荡，可观察到颜色变蓝 12. 某同学将质粒DNA进行限制酶酶切时，发现DNA完全没有被酶切，分析可能的原因并提出解决方法。下列叙述错误的是（　　） A. 限制酶放置时间过久导致活性丧失，更换新的限制酶 B. 限制酶的用量过少或酶切时间过短，调整反应条件 C. 该质粒上没有所用限制酶的酶切位点，重新选择限制酶 D. 质粒的酶切位点被甲基化，更换对DNA甲基化不敏感的限制酶 13. 现有一长度为3000个碱基对(bp)的线性DNA分子，用限制酶切割后进行凝胶电泳，使降解产物分开。用酶H单独酶切，结果如图l；用酶B单独酶切，结果如图2；用酶H和酶B同时酶切，结果如图3。下列相关叙述正确的是（ ） A. 酶H在该DNA分子上有2个识别并切割的位点 B. 酶B和酶H同时切割时，有3个识别并切割的位点 C. 酶B和酶H同时切割后，能产生完全相同的DNA片段 D. 酶B和酶H有相同的识别并切割位点 14. 研究者欲将X基因导入到大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、LacZ基因(表达产物可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈蓝色；否则菌落为白色)，其结构如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 电泳时，X基因和重组质粒在琼脂糖凝胶中的迁移速率不同 B. 导入重组质粒前通常需要用适宜浓度的Ca2+溶液处理大肠杆菌 C. 成功导入X基因的细菌在含X-gal的培养基上的菌落呈蓝色 D. X基因在筛选出的细菌中是否稳定维持与表达仍需检测与鉴定 15. 番茄在低温下运输、储存的过程中，容易出现冻伤，影响番茄的品质。科学家利用基因工程技术将AFPs抗冻基因转入番茄植株，培育抗冻番茄。下列叙述错误的是（　　） A. 筛选与获取AFPs抗冻基因是培育抗冻番茄的首要及核心工作 B. 获得的AFPs基因应插入在质粒的启动子与终止子之间 C. AFPs抗冻基因可通过农杆菌转化法转移至番茄植物的细胞中 D. 分子水平上抗冻番茄细胞中应含有AFPs基因及其表达产物 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有一项或多项是符合题目要求的。全部选对得3分，选对但选不全得1分，有选错得0分。 16. 青梅果实中含有大量的活性物质，常制作成具有保健功能的青梅饮品，其中青梅酒和青梅醋深受人们喜爱，其制作流程如下图。下列叙述正确的是（　　） A. 常用纤维素酶和果胶酶处理细胞破碎物，来提高果汁出汁率 B. 生物A和C的细胞结构不同，但都能进行无氧呼吸并产生CO2 C. 反应①和②的代谢过程不同，但反应后溶液的pH均表现为下降 D. 后发酵要在低温、密闭的环境下储存，以使青梅酒澄清、成熟 17. 藿香长期种植会出现种质退化、易感染病虫害等问题。为解决这些问题，研究者对组织培养过程中不同阶段的藿香进行了辐射处理(如下图)，以期获得性状优良的突变株。下列叙述错误的是（　　） A. 过程①中的外植体依次经过次氯酸钠和70%的酒精溶液进行消毒 B. 选择藿香的不同部位细胞经培养获得的愈伤组织基因型可能不同 C. 过程③～④经过再分化使细胞表达基因的种类和水平产生差异 D. 筛选出目标突变株后可利用植物组织培养技术生产藿香药用成分 18. 科学家通过如图流程成功克隆出“中中”和“华华”，攻克了当时技术无法通过体细胞克隆非人灵长类动物的世界难题，为建立人类疾病的动物模型、研究疾病机理、研发诊治药物等带来光明前景。下列叙述正确的是（　　） A. 将乙猕猴的卵母细胞培养至MII期，具备支持细胞核全能性表达的物质和环境 B. 对代孕猕猴丙进行同期发情处理，可为供体胚胎移入受体提供相同的生活环境 C. 可用电刺激、蛋白酶合成抑制剂等激活重构胚，使其完成细胞分化和发育进程 D. 过程③还可以通过将囊胚的内细胞团均等分割，从而提高胚胎的数量与成活率 19. 关于PCR技术，下列叙述正确的是（　　） A. 用PCR技术扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 B. 温度超过90℃时，双链DNA解聚为单链不需要解旋酶 C. 引物可使DNA聚合酶从引物的5’端开始连接脱氧核苷酸 D. 一个目的基因(双链DNA片段)在PCR仪中经n次循环可得到2n个目的基因 20. 双向启动子可同时结合两个RNA聚合酶来驱动下游基因的表达，降低了基因工程的成本与复杂性，研究人员利用双向启动子构建了下图所示表达载体，下列叙述错误的是（　　） A. 为正确连入目的基因，可在其两端添加能产生相同黏性末端的不同限制酶的识别序列 B. 表达载体中的GUS基因和LUC基因进行转录时，会使用DNA的不同单链作为模板 C. 壮观霉素抗性基因可用于鉴定目的基因是否插入受体细胞染色体上 D. 可通过观察是否出现荧光和蓝色物质检测双向启动子作用效果 第Ⅱ卷 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 21. 合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。 （1）配制培养基后需进行灭菌处理，常用的灭菌工具是___________。倒平板后等待培养基冷却凝固后，将培养皿___________放置。 （2）该同学在用稀释涂布平板法进行活细胞数量统计时，其结果往往小于实际值，主要原因是___________。统计菌落数目时，选取菌落数稳定时记录作为结果，原因是___________。 （3）初步估算细菌原液中细胞数为3×107个/mL，若在每个平板上涂布0.1mL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过300个，则至少应该将细菌原液稀释___________倍。 （4）据图可知杀菌效果最好的消毒液是___________，判断依据是___________。(答出2点即可) （5）为进一步探究该消毒液对不同细菌的杀菌效果，首先可以对细菌原液中的细菌进行筛选。用___________的选择培养基筛选分解尿素的细菌，再用___________指示剂进行初步鉴定。而在加入___________染料的纤维素培养基上，纤维素分解菌的菌落会形成透明圈。 22. 紫罗兰（2n=14）花色丰富、抗虫性强、种子油富含亚麻酸。为了让油菜（2n=38）具有紫罗兰的诸多优良性状，科研工作者进行了下图所示实验，请分析回答： （1）因“紫罗兰”和“油菜”之间存在__________，所以用有性杂交方法很难得到可育后代，上述培育“紫罗兰一油菜植株”过程所应用的是__________技术。该技术的原理是__________。 （2）用酶解法制备原生质体时，需先用较__________（填“高”或“低”）渗透压的溶液处理植物细胞，使细胞处于微弱的__________状态，然后用酶消化去除细胞壁，获得原生质体。 （3）培养出的“紫罗兰一油菜植株”细胞中的染色体组数目为_________。该植株是_______（可育/不可育）植株。 23. CD47是一种跨膜蛋白，可抑制巨噬细胞的吞噬作用。多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为验证抗CD47的单克隆抗体可以解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，某实验室按照如图所示流程进行了实验。请回答下列问题： （1）抗CD47的单克隆抗体制备过程中，运用的动物细胞工程技术有___________和动物细胞融合，涉及的原理包括___________。 （2）与植物体细胞杂交技术相比，诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的特有方法是___________。若只考虑两两融合的细胞类型，则细胞①最多有___________种，用___________将杂交瘤细胞筛选出来，并进行多次克隆化培养和抗体检测，获得的细胞具有___________的特点。 （3）根据图中的实验组设置进行分析，对照组的设置应该是___________。若要验证实验目的，则实验结果应该是___________。 （4）由上述过程生产出的单克隆抗体___________(填“能”或“不能”)直接用于人体，理由是___________。 24. 研究人员欲用质粒构建胰岛素基因的表达载体，培养能产生人胰岛素的大肠杆菌。请回答下列相关问题： （1）人工构建基因表达载体时，载体中启动子的作用是___________，而标记基因的作用是___________。 （2）采用PCR技术对胰岛素基因进行扩增时，每一循环包括___________三步，除了向反应体系中加入相应模板和引物外，还需要加入___________(至少答出2点)。 （3）若利用酵母菌作为受体细胞生产胰岛素等分泌蛋白，与大肠杆菌相比，酵母菌的优势有___________。若要检测酵母菌是否表达出胰岛素，常用___________技术。 25. 水稻的TCP2基因表达产物能显著促进分蘖(从主茎基部的节上长出的侧枝)的萌发与生长，水稻分蘖过多会造成主茎养分过度分散，导致籽粒灌浆不足、产量降低。科研人员采用反义RNA技术，将TCP2基因的序列反向插入表达载体，经农杆菌转化法导入水稻细胞。该载体在水稻细胞内可转录出与TCP2基因的正常mRNA互补的反义RNA，以此实现对靶基因表达的精准调控，如图为TCP2基因、Ti质粒的结构示意图，如表为相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）构建反义基因表达载体时，需将TCP2基因序列反向插入Ti质粒的___________中，该结构的作用是___________。 （2）构建表达载体有两种方法： 方法一：选用图中的限制酶___________对TCP2基因进行酶切，选择限制酶___________对Ti质粒进行完全酶切，再用DNA聚合酶将产生的黏性末端补平，然后用限制酶___________再次酶切Ti质粒，用DNA连接酶进行连接，构建表达载体； 方法二：如图位置，在TCP2基因的___________(填“左”或“右”)侧引物的5’端添加限制酶___________的识别序列，以便和切割后的载体连接。 （3）若完全抑制了TCP2基因的表达，则转基因水稻可能表现出___________(答出1点)等不良性状。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 科目：高二生物 (试题卷) 注意事项： 1.答题前，考生务必将自己的姓名、班级、考号写在答题卡指定位置上，并认真核对条形码上的相关信息，确认无误后，将条形码粘贴在答题卡指定位置上。 2.选择题和非选择题均须在答题卡上作答，在本试卷和草稿纸上作答无效。考生在答题卡上按如下要求答题： (1)选择题部分请按对应题号用2B铅笔规范填涂方框，如需修改，请用橡皮擦除干净，不要留有痕迹。 (2)非选择题部分请用0.5毫米黑色签字笔在对应区域作答。 (3)请勿折叠答题卡。答题时保持字体工整、笔迹清晰、卡面清洁。 3.考试结束后，将本试题卷和答题卡一并交回。 4.本试题卷共10页，如有缺页，考生须及时报告监考老师，否则后果自负。 2025-2026学年度第二学期阶段性学情反馈 高二生物学试题 (考试时间：75分钟 满分：100分) 注意事项： 1.答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。 2.答选择题时，选出每一小题答案后，用铅笔把答题卡对应题目的答案标号涂黑。如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上。写在本试卷上无效。 3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。 第Ⅰ卷 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共计30分。每小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的。 1. 大豆异黄酮是腐乳毛坯发酵产生的次生代谢物，其合成由异黄酮合酶基因调控，具有降血压、缓解更年期综合征等功效，被称为“植物雌激素”。下列叙述错误的是（　　） A. 腐乳的制作需要多种微生物的参与，起主要作用的是毛霉 B. 腐乳制作过程中，有机物的种类和含量都在不断减少 C. 基因可以通过控制酶的合成，间接控制大豆异黄酮的合成 D. 大豆异黄酮的产生需要在一定的环境和时间条件下才进行 【答案】B 【解析】 【详解】A、腐乳制作过程有毛霉、酵母菌、曲霉等多种微生物参与，其中起主要作用的是毛霉，毛霉分泌的蛋白酶、脂肪酶可分解豆腐中的大分子有机物，A正确； B、腐乳制作过程中，微生物呼吸消耗有机物，因此有机物总含量减少；但大分子有机物会被分解为多肽、氨基酸、甘油、脂肪酸等多种小分子有机物，有机物种类增加，B错误； C、由题干可知大豆异黄酮的合成由异黄酮合酶基因调控，即基因通过控制异黄酮合酶的合成控制代谢过程，间接控制大豆异黄酮的合成，C正确； D、大豆异黄酮是发酵产生的次生代谢物，次生代谢物需要微生物生长到特定阶段，且在适宜的温度、pH等环境条件下才能合成，D正确。 2. 某科研小组从土壤中分离出一种解脂菌，它能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，而脂肪不能。下列叙述正确的是（　　） A. 加入了脂肪为唯一碳源的醇溶青琼脂培养基只能起到鉴别作用 B. 配制好固体培养基后依次进行灭菌、调节pH和倒平板等操作 C. 可采用稀释涂布平板法对土壤中的解脂菌进行分离与计数 D. 纯培养物指的是在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体 【答案】C 【解析】 【详解】A、以脂肪为唯一碳源的培养基能筛选出可利用脂肪的微生物，具备选择作用，同时醇溶青琼脂可通过颜色变化鉴别解脂菌，因此该培养基兼具选择和鉴别功能，A错误； B、配制固体培养基的应该先调节pH再灭菌、倒平板，若先灭菌再调pH会导致培养基被杂菌污染，B错误； C、稀释涂布平板法可将菌液梯度稀释后涂布获得单菌落，既能实现解脂菌的分离，也可通过统计菌落数对样品中的活菌进行计数，C正确； D、纯培养物是由单个微生物个体繁殖得到的、仅含单一物种微生物的群体，D错误。 3. 我国科学家利用如下图所示的液态厌氧发酵工艺，实现了高效产出乙醇和乙醇梭菌蛋白。下列叙述错误的是（　　） A. 乙醇梭菌以CO、CO2为主要的碳源，具有较强的固碳潜力 B. 乙醇梭菌在发酵罐中的厌氧发酵，是该发酵工程的中心环节 C. 通过该工艺高效生产清洁能源乙醇，对解决资源短缺有重要意义 D. 发酵完成后，可通过提取、分离和纯化等方法获得单细胞蛋白 【答案】D 【解析】 【详解】A、乙醇梭菌可利用工业尾气中的CO、CO2（无机碳）作为主要碳源，将无机碳转化为乙醇、菌体蛋白等有机碳化合物，实现了无机碳的固定，因此具有较强的固碳潜力，A正确； B、发酵工程的核心（中心）环节是发酵罐内的发酵过程，即通过控制发酵条件，让微生物在发酵罐中大量繁殖并代谢产生目标产物。本题中乙醇梭菌的厌氧发酵过程，正是该发酵工程的中心环节，B正确； C、乙醇是清洁的可再生能源，该工艺利用工业尾气低成本、高效生产乙醇，实现了工业废气的资源化利用，对缓解化石资源短缺、减少环境污染有重要意义，C正确； D、单细胞蛋白指的是发酵获得的微生物菌体本身（本题中即乙醇梭菌菌体），而非微生物的代谢产物。发酵完成后，获得单细胞蛋白的核心步骤是通过过滤、离心、沉淀等方法分离收集菌体，D错误。 4. 关于植物组织培养，下列叙述错误的是（　　） A. 通常可以选择植物的幼嫩茎段作为外植体进行培养 B. 培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 C. 培养过程中应给予适当光照以促进愈伤组织的光合作用 D. 接种外植体到培养基时，需要注意形态学方向，不可倒插 【答案】C 【解析】 【详解】A、植物幼嫩茎段细胞分化程度低、分裂能力强，全能性更容易表达，是植物组织培养常用的外植体材料，A正确； B、培养基中的蔗糖可作为碳源为外植体提供营养，同时能调节培养基渗透压，维持细胞正常的吸水状态和生理功能，B正确； C、愈伤组织是无定形状态的薄壁细胞团，不含叶绿体，无法进行光合作用，且脱分化形成愈伤组织的过程通常需要避光处理，C错误； D、生长素为极性运输，只能从形态学上端运输到形态学下端，外植体倒插会导致生根、生芽异常，因此接种时需注意形态学方向不可倒插，D正确。 5. 植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用，并取得了显著的社会效益和经济效益。关于植物细胞工程的应用，下列叙述正确的是（　　） 选项 应用技术 原理或取材原因 优势 A 快速繁殖 植物细胞的全能性 繁殖快、保持亲本遗传特性 B 作物脱毒 植物顶端分生区几乎不含病毒 提高作物抵抗病毒的能力 C 突变体的利用 为适应培养条件发生新的突变 加快育种进程，培育新品种 D 生产细胞产物 提高单个细胞中产物的产量 不受季节、天气等限制 A. A B. B C. C D. D 【答案】A 【解析】 【详解】A、快速繁殖技术的本质是植物组织培养，原理为植物细胞的全能性，该繁殖方式属于无性繁殖，既可以实现快速繁殖，也能保持亲本的优良遗传特性，A正确； B、作物脱毒取材于植物顶端分生区的原因是该部位几乎不含病毒，培育得到的脱毒苗本身不携带病毒，但并未提高作物抵抗病毒的能力，B错误； C、突变体利用过程中，突变是不定向的，并非是细胞为适应培养条件主动发生的新突变，而是对培养过程中产生的有利突变进行筛选后加以利用，C错误； D、生产细胞产物的原理是植物细胞代谢可以合成所需的目标产物，D错误。 6. 科学家利用成纤维细胞，借助载体将特定基因导入细胞，来制备诱导多能干细胞(iPS细胞)，并通过诱导iPS细胞定向分化，可培育出所需器官进行自体移植。下列叙述正确的是（　　） A. 成纤维细胞和iPS细胞中所含基因相同，但表达的基因不完全相同 B. iPS细胞体外增殖方式为有丝分裂，体外分化过程与细胞内基因表达的调控有关 C. 将iPS细胞分化形成的特定组织移植回患者后，患者需要使用免疫抑制剂 D. iPS细胞应用前景优于胚胎干细胞，用于临床治疗时不存在导致肿瘤发生的风险 【答案】B 【解析】 【详解】A、制备iPS细胞时向成纤维细胞中导入了特定外源基因，因此二者所含基因并不完全相同，A错误； B、iPS细胞属于多能干细胞，体外通过有丝分裂完成增殖，细胞分化的实质是基因的选择性表达，因此体外分化过程受细胞内基因表达的调控，B正确； C、本题中iPS细胞由患者自体的成纤维细胞诱导获得，分化出的组织细胞抗原与患者自身匹配，移植后不会发生免疫排斥，无需使用免疫抑制剂，C错误； D、iPS细胞临床应用时，若分化调控不当存在细胞癌变、诱发肿瘤的风险，并非完全安全，D错误。 7. 通过支架培养生成的人工肌肉组织，可用于创伤或手术后的肌肉修复。科研人员利用大鼠骨骼肌细胞生成三维肌束结构的培养流程如下图所示。培养过程中非成肌细胞贴壁速度快(0.5～2小时)，而成肌细胞(目标细胞)贴壁较慢(数小时)，三维培养阶段需加入胶原支架使细胞贴附，同时促进细胞三维排列。下列叙述错误的是（　　） 新生大鼠 腿部肌肉 原代培养 与纯化 传代培养 3代以内 三维培养 与分化 三维肌束 结构 A. 用机械的方法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理肌肉组织将其分散成单个细胞 B. 原代培养2小时左右可倒掉培养液，然后轻柔收集贴壁细胞用于传代培养 C. 传代培养时通过无菌操作和定期更换培养液等维持无菌、无毒的环境 D. 三维培养阶段胶原支架为细胞提供更大附着面积，有利于细胞贴壁生长 【答案】B 【解析】 【详解】A、动物细胞培养过程中，可以用机械的方法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理肌肉组织将其分散成单个细胞，A正确； B、传代培养需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞，再用离心法收集细胞，而不是直接倒掉培养液，B错误； C、动物细胞培养过程中，通过无菌操作避免杂菌污染，定期更换培养液可清除细胞代谢废物，避免代谢产物积累对细胞造成毒害，二者均可维持无菌、无毒的培养环境，C正确； D、胶原支架具有多孔结构，可为细胞提供更大的附着面积，结合题干信息“加入胶原支架使细胞贴附”可知，其有利于细胞贴壁生长，D正确。 8. 牛的自然生育率比较低，可通过现代生物科技提高其繁殖能力，下列叙述正确的是（　　） A. 促使牛超数排卵是通过应用性激素，诱发卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子 B. 核移植技术得到的牛胚胎，移植前需取滋养层细胞进行性别鉴定才能确定胚胎性别 C. 试管牛与克隆牛都是无性繁殖，培育过程中均用到动物细胞培养、胚胎移植技术 D. 胚胎移植是胚胎工程的最终技术环节，移植前不需要对供体和受体进行免疫检查 【答案】D 【解析】 【详解】A、促使牛超数排卵需使用促性腺激素，诱发卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子，A错误； B、核移植技术得到的胚胎，性别与提供细胞核的亲本一致，无需额外取滋养层细胞进行性别鉴定，B错误； C、试管牛的培育经过了体外受精过程，属于有性繁殖，C错误； D、胚胎移植是胚胎工程获得子代个体的最终技术环节，受体子宫对移入的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，因此移植前不需要对供体和受体进行免疫检查，D正确。 9. 目前发现的双胞胎有同卵双胞胎、异卵双胞胎和“半同卵双胞胎”。1对“半同卵小姐弟双胞胎”形成过程如图所示，下列叙述错误的是（　　） A. 半同卵双胞胎极其罕见的主要原因是过程1有透明带反应和卵细胞膜反应 B. 动物排出的卵子成熟程度不同，图1中的卵子已彻底完成减数分裂II C. 过程2所示的P1、P2和M包括了两个雄原核和一个雌原核 D. 这对姐弟来源于母亲的染色体相同，来源于父亲的常染色体可能不同 【答案】B 【解析】 【详解】A、透明带反应、卵细胞膜反应会阻止多精入卵，因此两个精子入卵概率极低，半同卵双胞胎罕见，A正确； B、参与受精的卵子处于减数第二次分裂中期，精子入卵后才完成减数分裂 II，并非已彻底完成，B错误； C、P1、P2 分别来自两个精子，对应两个雄原核；M 来自卵子，对应雌原核，三者共同构成了受精卵内的 3 套染色体，C正确； D、两个个体来自同一卵子，母源染色体相同；来自不同精子，父源常染色体可能不同，D正确。 10. 研究表明，DNA连接酶能够封闭DNA双螺旋骨架上的切口(图a)，却无法封闭缺口(图b)，下列叙述正确的是（　　） A. DNA连接酶封闭切口时，需要识别DNA片段特定的核苷酸序列 B. DNA连接酶的封闭是指催化核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成 C. 用限制酶产生磷酸二酯键切口时，还必须与解旋酶配合使用 D. 修复缺失的核苷酸缺口，可用DNA聚合酶沿缺口5＇→3＇方向进行 【答案】D 【解析】 【详解】A、DNA连接酶封闭切口时，不需要识别DNA片段特定的核苷酸序列，A错误； B、DNA连接酶的封闭是指催化脱氧核糖核苷酸之间磷酸二酯键的形成，B错误； C、限制酶切割DNA断裂磷酸二酯键即可产生切口，不需要解旋酶配合，C错误； D、修复缺失的核苷酸缺口，在DNA聚合酶作用下沿缺口5'→3'方向修复，D正确。 11. 下图为“DNA的粗提取和鉴定”实验中几个重要步骤的示意图，下列叙述错误的是（　　） A. 实验的操作顺序是③②①④，图②中的纱布不能用滤纸代替 B. 图①的原理是DNA不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精 C. 图③中的鸡血细胞不可以用哺乳动物成熟的红细胞代替 D. 图④操作后加入二苯胺试剂充分振荡，可观察到颜色变蓝 【答案】D 【解析】 【详解】A、图中“DNA的粗提取和鉴定”的正确的实验操作顺序是③破碎细胞→②获取含DNA的滤液→①DNA析出→④DNA的再溶解，②中的纱布不能用滤纸代替，否则DNA会被吸附，A正确； B、图①的原理是DNA不溶于酒精，而某些蛋白质可溶于酒精，这样可以进一步纯化DNA，B正确； C、图③中的鸡血细胞含有细胞核，富含DNA，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，几乎不含DNA，因此图③中的鸡血细胞不可以用哺乳动物成熟的红细胞代替，C正确； D、图④操作后加入二苯胺试剂充分振荡，通过水浴加热而后冷却后可观察到颜色变蓝，D错误。 12. 某同学将质粒DNA进行限制酶酶切时，发现DNA完全没有被酶切，分析可能的原因并提出解决方法。下列叙述错误的是（　　） A. 限制酶放置时间过久导致活性丧失，更换新的限制酶 B. 限制酶的用量过少或酶切时间过短，调整反应条件 C. 该质粒上没有所用限制酶的酶切位点，重新选择限制酶 D. 质粒的酶切位点被甲基化，更换对DNA甲基化不敏感的限制酶 【答案】B 【解析】 【详解】A、限制酶本质为蛋白质，放置时间过久会导致其活性丧失，无法切割质粒DNA，更换新的限制酶可解决该问题，A正确； B、限制酶用量过少或酶切时间过短会导致酶切不充分，即出现部分DNA被切割、部分未被切割的结果，不会出现DNA完全未被酶切的情况，B错误； C、限制酶具有专一性，只能识别特定核苷酸序列并切割特定位点，若质粒上无对应限制酶的酶切位点，则无法切割质粒，重新选择含对应酶切位点的限制酶可解决问题，C正确； D、限制酶识别的序列若被甲基化，会导致限制酶无法识别结合进而不能切割DNA，更换对DNA甲基化不敏感的限制酶可解决该问题，D正确。 13. 现有一长度为3000个碱基对(bp)的线性DNA分子，用限制酶切割后进行凝胶电泳，使降解产物分开。用酶H单独酶切，结果如图l；用酶B单独酶切，结果如图2；用酶H和酶B同时酶切，结果如图3。下列相关叙述正确的是（ ） A. 酶H在该DNA分子上有2个识别并切割的位点 B. 酶B和酶H同时切割时，有3个识别并切割的位点 C. 酶B和酶H同时切割后，能产生完全相同的DNA片段 D. 酶B和酶H有相同的识别并切割位点 【答案】B 【解析】 【分析】根据题意，线性DNA分子总长度为3000bp，用限制酶H单独酶切，可产生2000bp和1000bp的两个片段，说明酶H在这个DNA分子上只有1个识别并切割的位点，如图： 用酶B单独酶切，可产生2000bp、600bp和400bp的三个片段，说明酶B在这个DNA分子上有2个识别并切割的位点；但三个片段的位置关系可能性有三种，如图： ② ③ 但用酶H和酶B同时酶切时，仍然只有三个长度的片段，若酶B与酶H有相同的识别并切割位点，则酶B的切割只能是①②两种情况，则产生的三个片段长度应为2000bp、600bp和400bp，与题意不合；说明应为第③种情况，故酶H的识别和切割位点应在两个酶B识别位点的中间，将中间的2000bp长度的片段切成了1400bp和600bp长度的两段，如图： 因此具有了1400bp、600bp（两种）、400bp三种长度的片段。 【详解】A、根据分析，酶H在该DNA分子上有1个识别并切割的位点，A错误； B、酶B和酶H同时切割时，有3个识别并切割的位点，B正确； C、酶B和酶H同时切割后，产生三种长度，四种类型的DNA片段，C错误； D、酶B和酶H的识别并切割位点都是不同的，D错误。 故选B。 14. 研究者欲将X基因导入到大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、LacZ基因(表达产物可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈蓝色；否则菌落为白色)，其结构如图所示。下列叙述错误的是（　　） A. 电泳时，X基因和重组质粒在琼脂糖凝胶中的迁移速率不同 B. 导入重组质粒前通常需要用适宜浓度的Ca2+溶液处理大肠杆菌 C. 成功导入X基因的细菌在含X-gal的培养基上的菌落呈蓝色 D. X基因在筛选出的细菌中是否稳定维持与表达仍需检测与鉴定 【答案】C 【解析】 【详解】A、DNA的分子量越大，琼脂糖电泳中的迁移速率越慢，X基因分子量远小于重组质粒，二者迁移速率不同，A正确； B、将目的基因导入大肠杆菌前，常用适宜浓度Ca2+处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，利于吸收外源DNA，B正确； C、X基因成功插入后，LacZ基因被插入失活，无法表达出分解X-gal的产物，不能产生蓝色物质，菌落应为白色，不是蓝色，C错误； D、初步筛选得到的菌落，还需要进一步检测鉴定，确认X基因能否稳定维持和表达，D正确。 15. 番茄在低温下运输、储存的过程中，容易出现冻伤，影响番茄的品质。科学家利用基因工程技术将AFPs抗冻基因转入番茄植株，培育抗冻番茄。下列叙述错误的是（　　） A. 筛选与获取AFPs抗冻基因是培育抗冻番茄的首要及核心工作 B. 获得的AFPs基因应插入在质粒的启动子与终止子之间 C. AFPs抗冻基因可通过农杆菌转化法转移至番茄植物的细胞中 D. 分子水平上抗冻番茄细胞中应含有AFPs基因及其表达产物 【答案】A 【解析】 【详解】A、基因工程的核心工作是基因表达载体的构建，A错误； B、启动子是RNA聚合酶识别结合的位点，可启动目的基因的转录，终止子可终止转录过程，将AFPs基因插入质粒的启动子与终止子之间，才能保证目的基因正常表达，B正确； C、农杆菌可侵染双子叶植物，番茄属于双子叶植物，因此可通过农杆菌转化法将AFPs抗冻基因导入番茄细胞中，C正确； D、分子水平检测抗冻番茄培育是否成功，需要检测细胞内是否插入AFPs基因、是否转录出对应mRNA、是否翻译出对应蛋白质，因此培育成功的抗冻番茄细胞中应含有AFPs基因及其表达产物，D正确。 二、选择题：本题共5小题，每小题3分，共15分。在每小题给出的四个选项中，有一项或多项是符合题目要求的。全部选对得3分，选对但选不全得1分，有选错得0分。 16. 青梅果实中含有大量的活性物质，常制作成具有保健功能的青梅饮品，其中青梅酒和青梅醋深受人们喜爱，其制作流程如下图。下列叙述正确的是（　　） A. 常用纤维素酶和果胶酶处理细胞破碎物，来提高果汁出汁率 B. 生物A和C的细胞结构不同，但都能进行无氧呼吸并产生CO2 C. 反应①和②的代谢过程不同，但反应后溶液的pH均表现为下降 D. 后发酵要在低温、密闭的环境下储存，以使青梅酒澄清、成熟 【答案】ACD 【解析】 【详解】A、植物细胞壁的成分是纤维素酶和果胶酶，可以采用纤维素酶和果胶酶分解为纤维素和果胶破坏细胞壁，使细胞内的果汁跟容易流出，提高出汁率，A正确； B、生物A是酵母菌，生物C是醋酸菌，前者属于真核生物，异养兼性厌氧型，后者属于原核生物，异养需氧型，即生物A和生物C的细胞结构和代谢类型均不同，B错误； C、反应①（酒精发酵），酵母菌产生CO2，CO2溶于水形成碳酸，会使pH下降；反应②（醋酸发酵）：醋酸菌产生醋酸，醋酸是酸，会导致溶液pH显著下降；C正确； D、后发酵阶段，低温可抑制微生物的活动，防止酒变质，同时有利于酒精悬浮物沉淀，使酒体澄清；密闭环境可以防止酒精被氧化成醋酸，并保持酒的香气；D正确。 17. 藿香长期种植会出现种质退化、易感染病虫害等问题。为解决这些问题，研究者对组织培养过程中不同阶段的藿香进行了辐射处理(如下图)，以期获得性状优良的突变株。下列叙述错误的是（　　） A. 过程①中的外植体依次经过次氯酸钠和70%的酒精溶液进行消毒 B. 选择藿香的不同部位细胞经培养获得的愈伤组织基因型可能不同 C. 过程③～④经过再分化使细胞表达基因的种类和水平产生差异 D. 筛选出目标突变株后可利用植物组织培养技术生产藿香药用成分 【答案】AD 【解析】 【详解】A、过程①为外植体消毒，外植体依次使用70%酒精溶液消毒、无菌水冲洗和次氯酸钠消毒，再用无菌水冲洗，A错误； B、若选取的藿香不同部位细胞基因型不同，比如体细胞和花粉配子细胞，基因型本身存在差异，培养获得的愈伤组织基因型也会不同，B正确； C、过程③~④属于再分化过程，再分化的实质是基因的选择性表达，会使不同细胞表达基因的种类和水平产生差异，C正确； D、筛选出目标突变株后可利用植物细胞培养进行细胞产物的工厂化生产，培养生产藿香药用成分，D错误。 18. 科学家通过如图流程成功克隆出“中中”和“华华”，攻克了当时技术无法通过体细胞克隆非人灵长类动物的世界难题，为建立人类疾病的动物模型、研究疾病机理、研发诊治药物等带来光明前景。下列叙述正确的是（　　） A. 将乙猕猴的卵母细胞培养至MII期，具备支持细胞核全能性表达的物质和环境 B. 对代孕猕猴丙进行同期发情处理，可为供体胚胎移入受体提供相同的生活环境 C. 可用电刺激、蛋白酶合成抑制剂等激活重构胚，使其完成细胞分化和发育进程 D. 过程③还可以通过将囊胚的内细胞团均等分割，从而提高胚胎的数量与成活率 【答案】ABC 【解析】 【详解】A、体细胞核移植技术中，需将乙猕猴的卵母细胞培养至减数第二次分裂中期（MⅡ 期），此时卵母细胞的细胞质中含有支持体细胞核全能性表达的物质和环境，A正确； B、胚胎移植前，对代孕猕猴丙进行同期发情处理，可使受体与供体的生理状态保持一致，为供体胚胎移入受体提供相同的生活环境，保证胚胎正常着床，B正确； C、核移植获得的重构胚需人工激活才能启动发育，常用电刺激、蛋白酶合成抑制剂等方法激活重构胚，使其完成细胞分裂、分化和发育进程，C正确； D、过程③为胚胎移植，将囊胚的内细胞团均等分割属于胚胎分割技术，可提高胚胎的数量，但会降低胚胎的成活率，D错误。 19. 关于PCR技术，下列叙述正确的是（　　） A. 用PCR技术扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 B. 温度超过90℃时，双链DNA解聚为单链不需要解旋酶 C. 引物可使DNA聚合酶从引物的5’端开始连接脱氧核苷酸 D. 一个目的基因(双链DNA片段)在PCR仪中经n次循环可得到2n个目的基因 【答案】ABD 【解析】 【详解】A、PCR扩增目的基因时，只需知道目的基因两端的序列来设计引物，无需知道基因的全部序列，即可特异性扩增中间的目的片段，A正确； B、PCR 的变性阶段（温度超过 90℃），高温会使双链 DNA 的氢键断裂，解聚为单链，不需要解旋酶（细胞内 DNA 复制才需要解旋酶），B正确； C、DNA 聚合酶的延伸方向是从引物的 3' 端开始连接脱氧核苷酸，而非 5' 端，C错误； D、PCR以半保留复制的方式扩增，1个双链DNA片段经n次循环，理论上可得到2n个目的基因，D正确。 20. 双向启动子可同时结合两个RNA聚合酶来驱动下游基因的表达，降低了基因工程的成本与复杂性，研究人员利用双向启动子构建了下图所示表达载体，下列叙述错误的是（　　） A. 为正确连入目的基因，可在其两端添加能产生相同黏性末端的不同限制酶的识别序列 B. 表达载体中的GUS基因和LUC基因进行转录时，会使用DNA的不同单链作为模板 C. 壮观霉素抗性基因可用于鉴定目的基因是否插入受体细胞染色体上 D. 可通过观察是否出现荧光和蓝色物质检测双向启动子作用效果 【答案】AC 【解析】 【详解】A、在构建基因表达载体时，在目的基因两端添加不同限制酶的识别序列，酶切后会产生不同的黏性末端，可以避免目的基因反向连接、载体自连，保证目的基因正确方向插入载体，A错误； B、由图可知，双向启动子向两个相反方向驱动转录，GUS基因转录方向向左、LUC基因转录方向向右，说明两个基因的模板链是T-DNA的两条不同DNA链，B正确； C、由图可知，壮观霉素抗性基因位于T-DNA区域外；农杆菌转化法中，只有T-DNA会整合到受体细胞的染色体DNA上，因此壮观霉素抗性基因不会进入受体细胞染色体，无法用于鉴定目的基因是否插入染色体，C错误； D、根据题干信息，LUC基因表达的荧光素酶可催化产生荧光，GUS基因表达的酶可催化产生蓝色物质；若双向启动子能正常发挥功能，两个基因都会表达，可通过观察是否出现荧光和蓝色物质，检测双向启动子的作用效果，D正确。 第Ⅱ卷 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 21. 合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。 （1）配制培养基后需进行灭菌处理，常用的灭菌工具是___________。倒平板后等待培养基冷却凝固后，将培养皿___________放置。 （2）该同学在用稀释涂布平板法进行活细胞数量统计时，其结果往往小于实际值，主要原因是___________。统计菌落数目时，选取菌落数稳定时记录作为结果，原因是___________。 （3）初步估算细菌原液中细胞数为3×107个/mL，若在每个平板上涂布0.1mL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过300个，则至少应该将细菌原液稀释___________倍。 （4）据图可知杀菌效果最好的消毒液是___________，判断依据是___________。(答出2点即可) （5）为进一步探究该消毒液对不同细菌的杀菌效果，首先可以对细菌原液中的细菌进行筛选。用___________的选择培养基筛选分解尿素的细菌，再用___________指示剂进行初步鉴定。而在加入___________染料的纤维素培养基上，纤维素分解菌的菌落会形成透明圈。 【答案】（1） ①. 高压蒸汽灭菌锅 ②. 倒过来##倒置 （2） ①. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 ②. 防止因培养时间不足而造成菌落的遗漏 （3） （4） ①. A ②. 相同处理时间下，使用A消毒液后活菌数减少量最多，活菌数减少量相同时，使用A消毒液处理的时间最短，效率最高 （5） ①. 以尿素为唯一氮源 ②. 酚红 ③. 刚果红 【解析】 【小问1详解】 培养基常规灭菌方法为高压蒸汽灭菌法，使用的灭菌工具是高压蒸汽灭菌锅。倒平板冷却凝固后需倒置放置，防止冷凝水污染培养基，同时避免水分过快挥发。 【小问2详解】 稀释涂布平板法计数时，若当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计结果小于实际值。培养时需等菌落数目稳定后再统计，防止因培养时间不足而造成菌落的遗漏，导致统计结果偏小。 【小问3详解】 根据计数公式，菌落数=平板菌落数​÷涂布体积×稀释倍数=3×107=300÷0.1​×X，解得X=104，即至少稀释104倍。 【小问4详解】 纵坐标为活细胞减少量，减少量越大说明被杀灭的细菌越多，杀菌效果越好。由图可知，相同处理时间下，使用A消毒液后活菌数减少量最多，活菌数减少量相同时，使用A消毒液处理的时间最短，效率最高，因此杀菌效果最好。 【小问5详解】 筛选分解尿素的细菌需使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，尿素分解产生氨会使培养基pH升高，可用酚红指示剂初步鉴定。筛选纤维素分解菌时，刚果红可与纤维素结合形成红色复合物，纤维素被分解后会产生透明圈，因此使用刚果红染料。 22. 紫罗兰（2n=14）花色丰富、抗虫性强、种子油富含亚麻酸。为了让油菜（2n=38）具有紫罗兰的诸多优良性状，科研工作者进行了下图所示实验，请分析回答： （1）因“紫罗兰”和“油菜”之间存在__________，所以用有性杂交方法很难得到可育后代，上述培育“紫罗兰一油菜植株”过程所应用的是__________技术。该技术的原理是__________。 （2）用酶解法制备原生质体时，需先用较__________（填“高”或“低”）渗透压的溶液处理植物细胞，使细胞处于微弱的__________状态，然后用酶消化去除细胞壁，获得原生质体。 （3）培养出的“紫罗兰一油菜植株”细胞中的染色体组数目为_________。该植株是_______（可育/不可育）植株。 【答案】（1） ①. 生殖隔离 ②. 植物体细胞杂交 ③. 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 （2） ①. 高 ②. 质壁分离（或失水） （3） ①. 4 ②. 可育 【解析】 【分析】图为植物体细胞杂交过程，首先去壁获得原生质体，其次诱导原生质体融合形成杂种细胞，最后再由植物组织培养技术将杂种细胞培育成杂种植株。 【小问1详解】 “紫罗兰”和“油菜”属于两个不同的物种，两者之间存在生殖隔离。上述培育“紫罗兰一油菜植株”过程所应用的是植物体细胞杂交技术，存在原生质体融合和植物细胞发育成完整个体的过程，该技术依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。 【小问2详解】 用酶解法制备原生质体时，需先用较高渗透压的溶液处理植物细胞，使细胞失水，处于微弱的质壁分离状态，然后用纤维素酶和果胶酶消化去除细胞壁，获得原生质体。 【小问3详解】 紫罗兰为二倍体，含有2个染色体组，油菜为二倍体，含有2个染色体组，培养出的“紫罗兰一油菜植株”细胞中的染色体组数目为4个。该植株在减数分裂过程中同源染色体正常联会，因此是可育的。 23. CD47是一种跨膜蛋白，可抑制巨噬细胞的吞噬作用。多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高，导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。为验证抗CD47的单克隆抗体可以解除CD47对巨噬细胞的抑制作用，某实验室按照如图所示流程进行了实验。请回答下列问题： （1）抗CD47的单克隆抗体制备过程中，运用的动物细胞工程技术有___________和动物细胞融合，涉及的原理包括___________。 （2）与植物体细胞杂交技术相比，诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的特有方法是___________。若只考虑两两融合的细胞类型，则细胞①最多有___________种，用___________将杂交瘤细胞筛选出来，并进行多次克隆化培养和抗体检测，获得的细胞具有___________的特点。 （3）根据图中的实验组设置进行分析，对照组的设置应该是___________。若要验证实验目的，则实验结果应该是___________。 （4）由上述过程生产出的单克隆抗体___________(填“能”或“不能”)直接用于人体，理由是___________。 【答案】（1） ①. 动物细胞培养 ②. 细胞增殖、细胞膜具有一定的流动性 （2） ①. 灭活病毒诱导法 ②. 3 ③. (特定的)选择培养基 ④. 既能迅速大量繁殖，又能产生抗CD47的抗体 （3） ①. 不加抗CD47的抗体(单克隆抗体)的巨噬细胞和肿瘤细胞共培养体系 ②. 实验组的吞噬指数显著高于对照组的 （4） ①. 不能 ②. 小鼠形成的抗体与人体抗体不同，在人体内可引起免疫反应(意思合理即可) 【解析】 【小问1详解】 单克隆抗体制备核心技术是动物细胞培养和动物细胞融合；原理上，细胞融合依赖细胞膜的流动性，细胞培养扩增依赖细胞增殖。 【小问2详解】 和植物体细胞杂交相比，动物细胞融合特有的诱导方法是灭活病毒诱导法；只考虑两两融合，会得到B淋巴细胞-B淋巴细胞、骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞、B淋巴细胞-骨髓瘤细胞共3种融合细胞；用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，在该培养基上未融合的以及融合后具有同种核的细胞会死亡，最终获得的杂交瘤细胞，并进行多次克隆化培养和抗体检测，最终获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞，其特点是：既能迅速大量繁殖，又能产生抗CD47的抗体。 【小问3详解】 本实验自变量是是否加入抗CD47单克隆抗体，对照组遵循单一变量原则，设置不加抗CD47的抗体(单克隆抗体)的巨噬细胞和肿瘤细胞共培养体系；若抗体能解除抑制，实验组巨噬细胞吞噬作用更强，因此吞噬指数显著高于对照组。 【小问4详解】 小鼠形成的抗体与人体抗体不同，在人体内可引起免疫反应，因此不能直接用于人体。 24. 研究人员欲用质粒构建胰岛素基因的表达载体，培养能产生人胰岛素的大肠杆菌。请回答下列相关问题： （1）人工构建基因表达载体时，载体中启动子的作用是___________，而标记基因的作用是___________。 （2）采用PCR技术对胰岛素基因进行扩增时，每一循环包括___________三步，除了向反应体系中加入相应模板和引物外，还需要加入___________(至少答出2点)。 （3）若利用酵母菌作为受体细胞生产胰岛素等分泌蛋白，与大肠杆菌相比，酵母菌的优势有___________。若要检测酵母菌是否表达出胰岛素，常用___________技术。 【答案】（1） ①. RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 ②. 便于重组DNA分子的筛选 （2） ①. 变性、复性和延伸 ②. 4种脱氧核苷酸(dNTP)、耐高温的DNA聚合酶(Taq酶 ) （3） ①. 酵母菌为真核细胞，含有内质网和高尔基体，可对核糖体合成的蛋白质进行加工 ②. 抗原-抗体杂交 【解析】 【小问1详解】 启动子是基因表达载体的核心调控元件，功能是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录；标记基因的作用是便于重组DNA分子的筛选。 【小问2详解】 PCR扩增目的基因的每一循环分为三步：高温使模板DNA变性解旋、降温让引物与模板复性结合、中温让Taq酶催化延伸合成子链，即变性、复性和延伸三步；PCR体系除模板和引物外，还需要耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）、四种脱氧核苷酸原料、缓冲液等。 【小问3详解】 大肠杆菌是原核生物，没有内质网、高尔基体等细胞器，无法对胰岛素等真核分泌蛋白进行加工，得到的蛋白无活性；酵母菌是真核生物，可完成蛋白质的加工修饰，更适合生产真核来源的功能蛋白，即酵母菌为真核细胞，含有内质网和高尔基体，可对核糖体合成的蛋白质进行加工；检测目的基因是否翻译产生蛋白质，标准方法是抗原-抗体杂交技术。 25. 水稻的TCP2基因表达产物能显著促进分蘖(从主茎基部的节上长出的侧枝)的萌发与生长，水稻分蘖过多会造成主茎养分过度分散，导致籽粒灌浆不足、产量降低。科研人员采用反义RNA技术，将TCP2基因的序列反向插入表达载体，经农杆菌转化法导入水稻细胞。该载体在水稻细胞内可转录出与TCP2基因的正常mRNA互补的反义RNA，以此实现对靶基因表达的精准调控，如图为TCP2基因、Ti质粒的结构示意图，如表为相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）构建反义基因表达载体时，需将TCP2基因序列反向插入Ti质粒的___________中，该结构的作用是___________。 （2）构建表达载体有两种方法： 方法一：选用图中的限制酶___________对TCP2基因进行酶切，选择限制酶___________对Ti质粒进行完全酶切，再用DNA聚合酶将产生的黏性末端补平，然后用限制酶___________再次酶切Ti质粒，用DNA连接酶进行连接，构建表达载体； 方法二：如图位置，在TCP2基因的___________(填“左”或“右”)侧引物的5’端添加限制酶___________的识别序列，以便和切割后的载体连接。 （3）若完全抑制了TCP2基因的表达，则转基因水稻可能表现出___________(答出1点)等不良性状。 【答案】（1） ①. T-DNA ②. 将目的基因转移到水稻细胞并整合到水稻细胞的染色体DNA上 （2） ①. SmaⅠ和BglⅡ ②. XbaⅠ ③. BamHⅠ ④. 左 ⑤. XbaⅠ或PstⅠ(答出1个即可) （3）主茎生长过旺，植株过高、易倒伏(意思合理即可) 【解析】 【小问1详解】 构建反义基因表达载体时，需将TCP2基因序列反向插入Ti质粒的T-DNA中，进而T-DNA可将目的基因序列转移到水稻细胞并整合到水稻细胞的染色体DNA上。 【小问2详解】 构建表达载体有两种方法，方法一：根据目的基因中限制酶识别切割序列，目的基因中部存在BamHⅠ识别酶切序列，只能选用图中的限制酶SmaⅠ、BglⅡ对TCP2基因进行酶切，SmaⅠ酶切后得到平末端，选择限制酶XbaⅠ对Ti质粒进行完全酶切，DNA聚合酶可将产生的黏性末端补平，得到平末端，反向插入目的基因，模板链的5'端应与启动子接近，BglⅡ和BamHⅠ酶切后可得到相同的黏性末端，需用限制酶BamHⅠ再次酶切Ti质粒，进而可以获得与目的基因一端相同的黏性末端，再用DNA连接酶进行连接，构建表达载体。PstⅠ酶切后，由于突出的末端为3'端，无法用DNA聚合酶将产生的黏性末端补平，故不能选。 方法二：在TCP2基因的“左”侧引物的5'端添加限制酶XbaⅠ或PstⅠ的识别序列，用XbaⅠ或PstⅠ和BglⅡ对目的基因进行酶切，BglⅡ和BamHⅠ酶切后可得到相同的黏性末端，用XbaⅠ或PstⅠ和BamHⅠ对质粒进行酶切，即可保证目的基因和质粒的反向连接。 【小问3详解】 欲从分子水平检测反义RNA技术是否成功抑制TCP2基因的表达，可分别提取转基因水稻和野生型水稻的总蛋白，采用抗原—抗体杂交技术进行检测。若完全抑制了TCP2基因的表达，野生型水稻中的蛋白质可以杂交，转基因水稻中的蛋白质不能杂交，且转基因水稻可能表现出主茎生长过旺，植株过高、易倒伏等不良性状。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $