精品解析：山东省菏泽市鄄城县第一中学2025-2026学年高二下学期4月阶段检测生物试题

生物试题 一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1. 以四倍体（基因型为AAaa）植株的花药为外植体经植物组织培养获得植株的过程如图所示，相关叙述正确的是（ ） A. 此过程为单倍体育种，②、③过程需要严格的无菌条件 B. 将花药换成植物的茎尖可获得能抗病毒的脱毒苗 C. 取愈伤组织进行细胞产物的工厂化生产，可提高单个细胞中次生代谢物的含量 D. ②③过程培养基中的激素比例以及光照条件均不同 【答案】D 【解析】 【分析】1、离体的植物组织或细胞，在培养一段时间后，会通过细胞分裂形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植株体。 2、由题图信息分析可知，①是外植体消毒，②是脱分化，③是再分化，④形成试管苗后进行移栽。 【详解】A、以四倍体（基因型为AAaa）植株的花药为外植体经植物组织培养获得植株，所以此过程为花药离体培养的过程，A错误； B、茎尖几乎不含病毒，因此茎尖组织可得到脱毒苗，但脱毒苗不等同于抗病毒植株，抗病毒植株一般是利用基因工程得到的，B错误； C、取愈伤组织进行细胞产物的工厂化生产时，无法提高单个细胞的次生代谢物的含量，但可以通过培养得到更多的细胞从而提高次生代谢物的总量，C错误； D、图中②过程为脱分化，不需光照，生长素与细胞分裂素比例相等；③为再分化，需光照条件下培养，诱导生芽时，细胞分裂素多于生长素，生根时，生长素多于细胞分裂素，D正确。 故选D。 2. 花椰菜（2n=18）种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，紫罗兰（2n=14）具有一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1所示。通过蛋白质电泳技术分析了亲本及待测植株中某些特异性蛋白，结果如图2所示。下列有关叙述正确的是（　　） A. 过程①可用酶解法获得原生质体，需要在无菌水中进行 B. ②过程可用电融合法或灭活病毒诱导细胞融合，杂种细胞再生出细胞壁是成功的标志 C. 新品种的产生说明花椰菜和紫罗兰之间不存在生殖隔离 D. 根据图2结果判定，最可能属于杂种植株的是4和5 【答案】D 【解析】 【分析】植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞就结束;杂种植株的特征：具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质;植物体细胞杂交克服了远缘杂交不亲和的障碍。 【详解】A、过程①用酶解法获得原生质体，由于原生质体无细胞壁保护，在无菌水中会吸水涨破，应在等渗溶液中进行，A错误； B、灭活病毒诱导是动物细胞融合特有的方法，植物体细胞杂交不能用灭活病毒诱导细胞融合，B错误； C、花椰菜和紫罗兰是不同物种，存在生殖隔离，体细胞杂交产生的新品种是通过人工手段克服了远缘杂交不亲和的障碍，C错误； D、杂种植株应含有花椰菜和紫罗兰的蛋白质，从图2看，4和5含有花椰菜和紫罗兰的蛋白质，最可能属于杂种植株，D正确。 故选D。 3. 两种远缘植物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出。若其中一个细胞的染色体在融合前由于某种原因断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中。依据该原理，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，过程如下图所示。下列说法错误的是（ ） A. 过程①需使用纤维素酶和果胶酶处理细胞 B. 过程②的目的是使中间偃麦草的染色体断裂 C. 过程③中常用灭活的病毒诱导原生质体融合 D. 耐盐小麦的染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段 【答案】C 【解析】 【分析】从图中看出①是去掉植物细胞壁，②是用紫外线诱导染色体变异，③融合形成杂种细胞。 【详解】A、过程1是获得植物细胞的原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶将细胞壁分解，A正确； B、根据题干信息“将其中一个细胞的染色体在融合前断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，”故过程②通过紫外线照射是使中间偃麦草的染色体断裂，B正确； C、灭活的病毒诱导是动物细胞融合特有的方法，诱导植物原生质体融合常用物理法、化学法，C错误； D、实验最终将不抗盐的普通小麦和抗盐的偃麦草整合形成耐盐小麦，说明耐盐小麦染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段，D正确。 故选C。 【点睛】本题的难点是对过程②的分析，考生需要结合题干中的信息作答。 4. 利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物。下列说法正确的是（ ） A. 利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物 B. 植物细胞体积小，故不能通过该技术进行其产物的工厂化生产 C. 次生代谢物是植物所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养 D. 该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量 【答案】A 【解析】 【分析】由于植物细胞的次生代谢物含量很低，从植物组织提取会大量破坏植物资源，有些产物又不能或难以通过化学合成途径得到，因此人们期望利用植物细胞培养来获得目标产物，这个过程就是细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、有些产物不能或难以通过化学合成途径得到，故可利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物，A正确； B、利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物，故可通过该技术进行植物细胞产物的工厂化生产，B错误； C、次生代谢物不是植物生长所必需的，其含量少，可以通过增加细胞的数量来增加次生代谢产物的产量，C错误； D、细胞产物的工厂化生产主要是利用促进细胞分裂的培养条件，提高了多个细胞中次生代谢物的含量，不能提高单个细胞中次生代谢物的含量，D错误。 故选A。 5. 常规动物细胞培养是将细胞在平面条件下培养，培养出的单层细胞不同于人体内的组织结构，在药物研究中具有一定的局限性。三维细胞培养技术是在体外为细胞提供类似体内的生长环境，使细胞形成立体的三维结构，更有利于药理学的研究。下列叙述错误的是（ ） A. 体外培养的细胞大部分需要贴附于基质表面才能生长繁殖 B. 使用机械方法也可将组织分散成单个细胞 C. 与常规细胞培养相比，三维细胞培养技术不存在接触抑制现象 D. 三维细胞培养技术可以用于检测药物对组织内部细胞的作用 【答案】C 【解析】 【分析】本题主要考查动物细胞培养及三维培养技术的特点，需结合接触抑制等概念进行判断。 【详解】A、体外培养的动物细胞大多需要贴附在培养器皿的基质表面才能生长增殖，称为贴壁生长，A正确； B、动物细胞培养时，可通过机械方法（如剪碎、过滤）初步分散组织，但需胰蛋白酶处理才能充分分散为单个细胞，B正确； C、接触抑制是贴壁细胞在平面培养中铺满单层后停止增殖的现象。三维培养允许细胞在立体空间生长，可能克服接触抑制，但若细胞为正常细胞，仍可能因接触而停止增殖，因此C的说法“不存在接触抑制”不严谨，C错误； D、三维培养形成的立体结构更接近体内组织，可模拟药物对内部细胞的作用，D正确。 故选C。 6. 科学家在实验室中获得多能干细胞（iPS），其过程大致是：把四种转录因子基因引入小鼠的成纤维细胞，可诱导这种细胞发生转化，产生iPS细胞，用iPS细胞治疗某些人类疾病成为可能。下图是该设想的示意图，说法正确的是（　　） A. 干细胞是从胚胎中分离提取的细胞 B. iPS细胞分化成各类细胞的实质是动物细胞核具有全能性 C. iPS细胞类似于成体干细胞，具有组织特异性 D. 我国科学家用4种小分子化合物也制备出了iPS细胞，且安全性更高 【答案】D 【解析】 【分析】由题意可知，iPS细胞在形态、基因表达、分裂能力、分化能力等方面都与胚胎干细胞相似。 【详解】A、干细胞不仅可以从胚胎中分离，也可以通过体细胞重编程获得（如iPS细胞），A错误； B、iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达，而非直接体现细胞核的全能性，B错误； C、iPS细胞属于多能干细胞，具有分化为多种细胞的潜能，不具有组织特异性，C错误； D、通过转录因子或小分子化合物诱导iPS细胞，且我国科学家确实开发了非基因整合的小分子方法，安全性更高，D正确。 故选D。 7. 一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗 p72 的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是（ ） A. 注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大 B. 单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合 C. 利用该小鼠只能制备出一种抗 p72 的单抗 D. p72 部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况 【答案】D 【解析】 【分析】根据题干信息“一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗决定簇只能刺激机体产生一种抗体”，非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 上有多个抗原决定簇，所以可以刺激机体产生多种抗体。每个抗原决定簇刺激产生的抗体是单抗。 【详解】A、单抗的制作需要筛选，而多抗不需要筛选，抗原纯度越高，产生的多抗纯度越高，因此原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响小，A错误； B、单抗制备过程中通常将经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，B错误； C、非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 上有多种抗原决定簇，一个抗决定簇只能刺激机体产生一种抗体，所以向小鼠体内注入p72 后，可以刺激小鼠产生多种抗p72的单抗，C错误； D、p72 部分结构改变只改变了部分抗原决定簇，因此由这部分抗原决定簇产生的抗体失效，但由于还存在由其他抗原决定簇刺激机体产生的抗体，所以多抗仍有效，D正确。 故选D。 8. 下列有关哺乳动物核移植技术的叙述，不正确的是（ ） A. 受体细胞常用处于减数第二次分裂中期的卵母细胞 B. 注入受体细胞的既可以是细胞核，也可以是细胞 C. 用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成减数分裂过程 D. 核移植技术的成功率很低，仍有很多问题需要研究 【答案】C 【解析】 【分析】动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体；核移植得到的动物称克隆动物，克隆动物的核基因完全来自供体动物，而细胞质基因来自受体细胞；核移植包括体细胞核移植和胚胎细胞核移植，其中体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，因为体细胞的全能性低于胚胎细胞。 【详解】A、动物细胞核移植常用的受体细胞是处于减数第二次分裂中期的卵母细胞，A正确； B、注入受体细胞的既可以是细胞核，也可以是整个供体细胞，B正确； C、用物理或化学方法激活移植后的细胞，使其完成细胞分裂（有丝分裂）和发育进程，C错误； D、目前核移植技术的成功率很低，仍有很多问题需要研究，D正确。 故选C。 9. 胚胎工程技术的应用为优良牲畜的大量繁殖提供了有效的解决办法，如奶牛活体采卵—体外胚胎生产（OPU-IVP）技术，该技术流程如图。已知雄性奶牛Y染色体上有一段雄性特异的高度重复序列，依据该重复序列设计引物，建立了用于奶牛胚胎性别鉴定的PCR体系（SRY-PCR）。下列叙述错误的是（ ） A. 体外受精后，在透明带和卵细胞膜间观察到两个极体说明受精成功 B. 活体采卵前诱导母牛超数排卵所注射的激素只能作用于特定细胞 C. 取滋养层细胞进行SRY-PCR，应选择结果为阴性的胚胎进行移植 D. 为防止受体母牛发生免疫排斥反应，胚胎移植前需要进行免疫检查 【答案】D 【解析】 【分析】体外受精主要包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。（1）卵母细胞的采集和培养：①主要方法是用促性腺激素处理，使其超数排卵，然后从输卵管中冲取卵子。②第二种方法：从已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞或直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。（2）精子的采集和获能：①收集精子的方法：假阴道法、手握法和电刺激法。②对精子进行获能处理：包括培养法和化学诱导法。（3）受精：在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。 【详解】A、在受精过程中，当在透明带和卵细胞膜间观察到两个极体时，说明卵子已经完成了受精，因为第一极体和第二极体的形成是受精过程中的重要标志，A正确； B、激素作用的特点之一是作用于靶器官和靶细胞，活体采卵前诱导母牛超数排卵所注射的激素（如促性腺激素）只能作用于特定的靶细胞（如卵巢细胞），从而促进卵泡的发育和排卵，B正确； C、已知雄性奶牛Y染色体上有一段雄性特异的高度重复序列，依据该重复序列设计引物建立的SRY - PCR体系可用于奶牛胚胎性别鉴定。雌性胚胎不含Y染色体，SRY - PCR结果为阴性；雄性胚胎含Y染色体，SRY - PCR结果为阳性，繁殖优良奶牛（雌性），所以应选择SRY - PCR结果为阴性的胚胎进行移植，C正确； D、胚胎移植时，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能，所以胚胎移植前不需要进行免疫检查，D错误。 故选D。 10. 经遗传改造的小鼠胚胎干细胞注入囊胚，通过胚胎工程的相关技术可以获得具有不同遗传特性的实验小鼠。下列说法错误的是（ ） A. 用促性腺激素处理雌鼠可以获得更多的卵子 B. 体外受精前要对小鼠的精子进行获能处理 C. 胚胎移植前要检查胚胎质量并在囊胚或原肠胚阶段移植 D. 遗传改造的小鼠胚胎干细胞可以通过转基因等技术获得 【答案】C 【解析】 【分析】1、胚胎移植的基本程序主要包括： ①对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。 ②配种或人工授精。 ③对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来（也叫冲卵）。对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段。直接向受体移植或放入-196℃的液氮中保存。 ④对胚胎进行移植。 ⑤移植后的检查。对受体母牛进行是否妊娠的检查。 2、体外受精主要包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。 【详解】A、促性腺激素可以使雌鼠超数排卵，获得更多的卵子，A正确； B、精子只有获能后才能完成受精，故体外受精前要对小鼠的精子进行获能处理，B正确； C、胚胎移植通常选择囊胚期之前的阶段，如桑椹胚或囊胚阶段，C错误； D、转基因技术可以定向改造小鼠的基因，所以遗传改造的小鼠胚胎干细胞可以通过转基因等技术获得，D正确。 故选C。 【点睛】本题考查胚胎工程的基本知识，考生需要识记基本操作，D项中需要结合基因工程的目的进行解答。 11. 下列关于胚胎工程的说法，错误的是（　　） A. 从不同动物中采集的精子可置于同一获能液中进行获能处理 B. 胚胎干细胞是一类未分化的细胞，可以从囊胚中获取 C. 胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一 D. 胚胎移植过程中可通过发情配种或人工授精对超数排卵的供体母牛进行体内受精 【答案】A 【解析】 【分析】胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。 【详解】A、不同动物精子所需获能液不同，不能将从不同动物中采集的精子置于同一获能液中进行获能处理，A错误； B、胚胎干细胞是一类未分化的细胞，具有发育的全能性，可以从早期胚胎（如囊胚的内细胞团）中获取，B正确； C、胚胎分割得到的后代遗传物质相同，可看作动物无性繁殖或克隆的方法之一，C正确； D、胚胎移植过程中，可通过发情配种或人工授精对超数排卵的供体母牛进行体内受精，以获得胚胎，D正确。 故选A。 12. 限制酶是基因工程中必需的工具之一，下图表示五种限制酶的识别序列及切割位点。下列关于限制酶的叙述，错误的是（ ） 限制酶 EcoR Ⅰ BamH Ⅰ Sau3A Ⅰ Mfe Ⅰ EcoR Ⅴ 识别序列及酶切位点 5′-G↓AATTC-3′ 3′-CTTAA↑G-5′ 5′-G↓GATCC-3′ 3′-CCTAG↑G-5′ 5′-G↓ATC-3′ 3′-CTA↑G-5′ 5′-C↓AATTG-3′ 3′-GTTAA↑C-5′ 5′-GAT↓ATC-3′ 3′-CTA↑TAG-5′ A. EcoR Ⅰ和EcoR Ⅴ切割DNA片段产生的末端分别为黏性末端和平末端 B. EcoR Ⅰ和Mfe Ⅰ切割产生的DNA片段能被E.coli DNA连接酶相连在一起 C. BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ切割产生的DNA片段，连接后一定能被BamH Ⅰ切割 D. 以上五种限制酶均能识别双链DNA的特定序列，并切开特定部位的磷酸二酯键 【答案】C 【解析】 【分析】限制性内切核酸酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。限制酶在识别序列进行交错切割，结果形成两条单链末端，这种末端的核苷酸顺序是互补的，可形成氢键，所以称为黏性末端。 【详解】A、由EcoR Ⅰ和EcoR Ⅴ的识别序列和酶切位点可知，EcoR Ⅰ和EcoR Ⅴ切割DNA片段产生的末端分别为黏性末端和平末端，A正确； B、由题可知，EcoR Ⅰ和Mfe Ⅰ切割产生的DNA片段具有相同的黏性末端，可以被E.coli DNA连接酶相连在一起，B正确； C、BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ切割产生的DNA片段黏性末端不相同，不能连接，C错误； D、由五种限制酶的识别序列和酶切位点可知，这五种限制酶均能识别双链DNA的特定序列，并切开特定部位的磷酸二酯键，D正确。 故选C。 13. 图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述错误的是（ ） A. 在构建重组质粒时，可用PstⅠ和HindⅢ切割质粒和外源DNA B. 在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因 C. 若只用PstⅠ处理质粒和外源DNA分子片段，无法避免自身环化和反向连接 D. 导入重组质粒的大肠杆菌可以在含氨苄青霉素的培养基中生长 【答案】D 【解析】 【分析】限制酶选择原则：(1)应选择切点位于目的基因两端的，不能位于目的基因内部，防止破坏目的基因，同时为避免目的基因和质粒自身环化或随意连接，可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒。(2)①保证切割的黏性末端与目的基因的相同，以便两者能够连接。②保证切割后的质粒至少保留一个标记基因，以便进行筛选；保留复制原点，以便在受体细胞中维持稳定和表达；若题图中已标出启动子、终止子和T-DNA片段的位置，则切点应位于启动子和终止子之间，或位于T-DNA片段中。 【详解】A、在构建重组质粒时，需要选择相同的限制酶切割外源基因和质粒，分析图甲和图乙，质粒和外源基因中相同的限制酶是PstⅠ和HindⅢ，且两种限制酶不会破坏目的基因，并且质粒上能够保留一个完整的标记基因，A正确； B、在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因，保证切割后的质粒至少保留一个标记基因，以便进行筛选，B正确； C、若只用一种限制酶处理质粒和外源DNA分子片段，因为产生的黏性末端相同，故无法避免自身环化和反向连接，C正确； D、用PstⅠ切割后，氨苄青霉素抗性基因被破坏了，因此导入重组质粒的大肠杆菌不可以在含氨苄青霉素的培养基中生长，D错误。 故选D。 14. 科研人员构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5；该重组质粒在受体细胞内正确表达后，用抗J蛋白抗体和抗V5抗体分别检测相应蛋白是否表达以及表达水平，结果如图乙所示。下列分析错误的是（ ） A. 作为基因表达载体，图甲中的质粒还必须具有特殊标记基因、复制原点 B. 为检测J基因是否插入到图甲所示的位置，需用引物F1和R1进行PCR C. 若J基因转录的模板链位于b链，则引物F2与图甲中a链相应部分的序列相同 D. 图乙中，条带1的出现证明重组质粒在受体细胞内表达了J-V5融合蛋白 【答案】B 【解析】 【分析】基因工程的关键步骤是构建基因表达载体，基因表达载体主要由启动子、目的基因、标记基因和终止子组成，其中标记基因用于筛选重组DNA分子，可以是四环素、氨苄青霉素等抗性基因，也可以是荧光蛋白基因或产物能显色的基因。 【详解】A、作为基因表达载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来，图甲中有启动子和终止子等，因此质粒还需具备的结构有限制酶的切割位点、标记基因、复制原点等，A正确； B、据图甲可知，引物F1能与J基因左端序列配对，引物R2能与终止子序列配对，因此推测为检测J基因是否插入到图甲所示的位置，需进行PCR检测，若仅用一对引物，应选择图甲中的引物F1和R2或F2和R1，B错误； C、b是模板链，而根据图上启动子和终止子的位置可知转录方向是图上从左向右，对应的模板链方向应该是3’-5'，非模板链（也就是a链）是5'-3'；考虑到DNA转录的方向是子链的5’-3'，引物基础上延伸的方向肯定是5'-3'，所以引物结合的单链其方向是3'-5'；图中F2是左引物，所以其配对的单链是3’-5'的b链，故其序列应该与a链相应部分的序列相同，C正确； D、据图乙可知，用抗J蛋白抗体和抗V5抗体分别检测，均出现条带1，说明条带1是J-V5融合蛋白。抗J蛋白抗体检测出现条带2，抗V5抗体检测不出现条带2，说明条带2所检出的蛋白不是由重组质粒上的融合的J基因表达的，D正确。 故选B。 15. 关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（ ） A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C. 在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来 【答案】A 【解析】 【分析】琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的原理主要基于DNA分子在电场作用下的迁移行为以及琼脂糖凝胶的特性。 【详解】A、琼脂糖凝胶的浓度会影响DNA分子在凝胶中的迁移率和分辨率，琼脂糖凝胶的浓度通常是根据所需分离的DNA片段大小来选择的。对于较大的DNA片段，比如基因组DNA或质粒DNA，通常选择较低浓度的琼脂糖凝胶，因为它们需要更大的孔径来有效迁移。而对于较小的DNA片段，比如PCR产物或酶切片段，则需要选择较高浓度的琼脂糖凝胶，以提供更好的分辨率和分离效果，A正确； B、 凝胶载样缓冲液指示剂通常是一种颜色较深的染料，可以作为电泳进度的指示分子， 当溴酚蓝到凝胶2/3处时(可看蓝色条带)，则停止电泳，B错误； C、在琼脂糖凝胶电泳中，当电场作用时，DNA片段实际上是向正极迁移的，而不是向负极迁移。同时，DNA片段的迁移速率与其大小成反比，即DNA片段越长，迁移速率越慢，C错误； D、琼脂糖凝胶中的DNA分子需染色后，才可在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，D错误。 故选A。 16. 1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉，下列关于用Bt基因培育转基因抗虫棉四个主要步骤的说法，正确的是（　　） A. 这四个步骤中均可用到碱基互补配对的原则 B. 基因表达载体中的终止密码子能够使基因停止转录 C. 若利用PCR技术检测目的基因是否转录出mRNA，则不能根据目的基因的启动子和终止子序列设计引物 D. 成功将两个Bt基因转入棉花的染色体DNA中，则自交后代一定具有抗虫特性 【答案】C 【解析】 【分析】基因工程基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导入受体细胞，④目的基因的检测与鉴定。其中核心步骤为基因表达载体的构建，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。 【详解】A、基因工程的四个步骤中不都用到碱基互补配对的原则，如将目的基因导入到受体细胞不会涉及碱基互补配对原则，A错误； B、基因表达载体中的终止子能够使基因停止转录，B错误； C、当使用PCR技术检测目的基因是否转录出mRNA时，通常是通过逆转录PCR进行的。需以mRNA为模板，通过逆转录酶合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，则引物的设计需要根据cDNA的两端设计，cDNA不包含目的基因的启动子和终止子序列，C正确； D、若两个基因插入同一条染色体上，则该转基因棉花相当于杂合子，其自交后代会出现分离，因而自交后代未必一定具有抗虫特性，D错误。 故选C。 17. 下列关于“DNA粗提取与鉴定”、“DNA片段的扩增及电泳鉴定”的实验，说法正确的是（　　） A. DNA粗提取与鉴定过程中至少要用到一次离心 B. 利用二苯胺试剂鉴定DNA时，需要在沸水加热过程中观察颜色变化 C. 电泳结束后可直接观察DNA条带的分布和粗细程度来评价扩增效果 D. 凝胶载样缓冲液中的指示剂无法用来观察PCR产物的位置 【答案】D 【解析】 【分析】DNA的粗提取和鉴定的原理：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA和蛋白质。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液中。在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。 【详解】A、在DNA粗提取过程中，可用其它方式代替离心过程，如采用4 ℃冰箱冷置获取上清液来代替离心获取上清液，A错误； B、利用二苯胺试剂鉴定DNA时，在沸水浴的条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色，需要在沸水浴冷却后再观察颜色变化，而不是在沸水加热过程中观察，B错误； C、电泳结束后，需经染色后才能观察到DNA条带的分布和粗细程度，以此来评价扩增效果，而不是直接观察，C错误； D、凝胶载样缓冲液中通常含有一种或多种荧光指示剂（如溴酚蓝、二甲苯青FF等）。这些指示剂在电场作用下会随着DNA一起迁移，但它们的迁移速度是已知的，并且通常比大多数DNA片段快。通过观察指示剂在凝胶中的位置，可以大致判断DNA片段在电泳过程中迁移了多远，从而间接了解PCR产物的迁移位置和电泳的进程，D正确。 故选D。 18. DNA探针是一段带有检测标记，且顺序已知的、与目的基因互补的DNA序列。为获得荧光标记的DNA探针，在反应体系中加入酶、缓冲液、H2O、4种脱氧核苷酸（dCTP、dTTP、dGTP和碱基被荧光标记的dATP）和适量序列为5'-TAGACCCAATTGGG-3'的单链DNA。下列说法正确的是（　　） A. 该反应体系中加入ATP为子链的延伸提供能量 B. 缓冲溶液中一般要添加Ca2+用于激活DNA聚合酶 C. 该反应体系中因缺乏引物而无法扩增出产物 D. 利用该反应体系可获得两种荧光标记的探针 【答案】C 【解析】 【分析】PCR反应体系需要耐高温的DNA聚合酶、扩增缓冲液、水等，还需要引物。 【详解】A、该反应体系中加入dCTP、dTTP、dGTP和碱基被荧光标记的dATP为子链的延伸提供能量，A错误； B、缓冲溶液中一般要添加Mg2+用于激活DNA聚合酶，B错误； C、DNA聚合酶不能从头合成DNA，必须在模板上存在引物才能启动链延伸，该反应体系中因缺乏引物而无法扩增出产物，C正确； D、反应体系中只有一个单链DNA模板（5’-TAGACCCAATTGGG-3’），只能合成一种与其互补的DNA链（序列为5’-CCCAATTGGGTCTA-3’）。使用荧光标记的dATP后，新合成的链会被荧光标记，但仅产生一种探针（即互补链）。模板本身未标记，且序列无自身互补性，不会产生第二种探针，D错误。 故选C。 19. 利用下图质粒和目的基因构建基因表达载体，为高效连接和筛选，结合表格中质粒上限制酶识别位点，推测目的基因上游和下游含有的限制酶识别位点组合可以为（　　） 限制酶 识别序列和切割位点 限制酶 识别序列和切割位点 XbaI 5'-T↓TCGAG-3' SacI 5'-C↓TCGAG-3' SmaI 5'-CCC↓GGG-3' HindIII 5'-A↓AGCTT-3' EcoRI 5'-G↓AATTC-3' BclI 5'-G↓AATTC-3' ①XbaI和SacI ②SacI和EcoRI ③XbaI和HindIII ④SmaI和SacI ⑤HindIII和EcoRI ⑥XbaI和BclI A. ③⑤ B. ①③⑤ C. ②③⑤⑥ D. ①②③⑤⑥ 【答案】C 【解析】 【分析】限制酶是可以识别附着核酸链上的特定核苷酸序列,并对每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的-类酶，又称限制性核酸内切酶，化学本质为蛋白质。 【详解】①XbaI 和 SacI，这两种酶切割产生的黏性末端相同，会导致目的基因和质粒自身环化以及目的基因与质粒反向连接，①错误； ②SacI 和 EcoRI，位于启动子和终止子之间，且不破坏标记基因和复制原点，用这两种酶切割，便于连接和筛选，②正确； ③XbaI 和 HindIII，这两种酶切割产生的黏性末端不同，可避免质粒自身环化，切割位点合适，能保证目的基因正确插入和表达，且只破坏卡那霉素抗性基因，便于筛选，③正确； ④ SmaI 限制酶会破坏复制原点，不利于目的基因稳定存在，④错误； ⑤HindIII 和 EcoRI，这两种酶切割产生的黏性末端不同，能避免质粒自身环化，切割位点在合适区域，能保证目的基因正确插入和表达，且只破坏卡那霉素抗性基因，便于筛选，⑤正确； ⑥ XbaI 和 BclI，BclI 的识别序列和切割位点与 EcoRI 切割后产生的黏性末端相同（都有 -AATT- ），所以目的基因用XbaI 和 BclI切割，质粒用XbaI 和EcoRI 切割，采用了双酶切，能保证目的基因正确连接，也便于后续筛选，⑥正确。 故选C。 20. 双脱氧链终止法主要用于DNA基因分析，是应用最多的核酸测序技术。该方法是利用PCR技术在酶、模板、引物、四种脱氧核苷酸存在的情况下，在四管反应系统中按比例分别加入四种双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP），则当双脱氧核苷三磷酸被加入到链末端时，这一链就会停止伸长，而单脱氧核苷三磷酸链末端的片段还可以继续延伸。在结束反应后，用四个泳道进行电泳，结果如下图所示，下列说法错误的是（　　） A. 每管反应系统中均需加入2种引物 B. 待测模板链的碱基序列为3'-GATGGACACTA-5' C. 反应体系中加入的酶只有耐高温的DNA聚合酶 D. 结束反应后需将产物进行变性再电泳 【答案】A 【解析】 【分析】双脱氧测序法的原理：在DNA聚合酶、引物、四种单脱氧核苷酸（dNTP）存在的情况下，如果在四管反应系统中再分别加入四种双脱氧核苷三磷酸（ ddNTP），DNA链合成反应过程中 ddNTP与dNTP处于一种竞争状态，即新合成DNA链既可能掺入正常dNTP，也可能掺入ddNTP并使新合成链终止延伸。这样在每个反应系统中形成的产物是一系列长度不等的多核苷酸片段，这些片段具有相同的起点，即引物的5'端，但有不同的ddNTP终端。 在结束反应后，用四个泳道进行电泳，分别分离各组反应体系中不同长度的DNA 片段，检测DNA片段终止末端位置的碱基种类，从自显影图谱中直接读取到与模板相匹配的新的链序。 【详解】A、利用双脱氧测序法时，PCR反应体系中加入的模板是待测的单链DNA，故只需加入一种引物，A错误； B、依据题中双脱氧测序法的原理，可以确定每个泳道中的条带（DNA片段）的3'终端的碱基，如+ddATP的泳道中出现的条带（DNA片段）的3'终端碱基就是A。另外由于每个片段的起始点相同，但终止点不同，因此可以通过比较片段的长度来确定DNA序列中每个位置上的碱基；图示电泳方向为从上→下，即对应的DNA片段为长→短，则对应的DNA测序结果为3'→5'，如对照个体的电泳结果最短的条带为+ddCTP泳道组的条带，则说明该DNA片段5'端第一个碱基为C；因此对照个体的测序结果为5'-CTACCTGTGAT-3'，根据碱基互补配对原则可知，待测模板链的碱基序列为3'-GATGGACACTA-5'，B正确； C、反应体系中加入的酶只有耐高温的DNA聚合酶，该酶能催化游离的脱氧核苷酸依次连接到引物的3’端，C正确； D、结束反应后需将产物进行变性获得单链后再电泳，D正确。 故选A。 二、选择题：本题共10小题，每小题3分，共30分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对的得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 21. 真菌细胞壁富含多种多糖类物质，已被证实具有诱导活性，可通过介导植物的防御反应来促进红豆杉合成紫杉醇。研究者在最佳诱导条件下对红豆杉进行细胞悬浮培养，结果如图所示，下列叙述正确的是（　　） A. 悬浮培养的细胞通常来自红豆杉的愈伤组织，原因是愈伤组织细胞全能性高 B. 悬浮培养中常用的碳源是蔗糖，原因是其形成的渗透压高于葡萄糖，可防止细胞脱水 C. 真菌多糖处理后红豆杉细胞鲜质量、干质量、紫杉醇总产量均在培养约21天后达到最大值 D. 真菌多糖处理后红豆杉细胞鲜质量、干质量、紫杉醇总产量中增长幅度最高的是紫杉醇总产量 【答案】CD 【解析】 【详解】A、悬浮培养的细胞通常来自愈伤组织，原因是愈伤组织细胞分裂能力强、增殖速度快，而不是细胞全能性高，细胞全能性高是植物组织培养中再分化的特点，并非悬浮培养的主要原因， A错误； B、悬浮培养中常用蔗糖作为碳源，主要原因是蔗糖能维持适宜的渗透压，防止细胞脱水，蔗糖是二糖，其渗透压低于葡萄糖，可更缓慢地被细胞利用，使营养供应更持久，B错误； C、从图中曲线可以看出，处理组的鲜质量、干质量和紫杉醇总产量，都在培养约21天后达到峰值并趋于稳定，C正确； D、对比对照组和处理组的增长幅度，鲜质量和干质量的增长幅度相对平缓，紫杉醇总产量的增长幅度最大，说明真菌多糖对紫杉醇的诱导效果最显著，D正确。 故选CD。 22. 关于动物细胞培养与植物组织培养的异同点，说法正确的是（　　） A. 均为有丝分裂，但是原理不同 B. 均为合成培养基，但是物理性质不同 C. 均需加入激素，但是激素种类和比例不同 D. 均需无菌操作，但是培养的结果不同 【答案】ABD 【解析】 【分析】动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。 【详解】A、两者均通过有丝分裂增加细胞数目，动物细胞培养基于细胞增殖理论，植物组织培养基于细胞全能性理论，A正确； B、两者均为合成培养基，动物细胞培养使用液体培养基（含葡萄糖、氨基酸等），植物组织培养使用固体或半固体培养基（含蔗糖、琼脂等），B正确； C、动物细胞培养一般不加入激素，C错误； D、二者都需要无菌操作条件，动物细胞培养得到的是细胞，植物组织培养可以得到个体，D正确。 故选ABD。 23. 培育肉是利用动物体内分离的成肌细胞或全能干细胞，采用动物细胞培养技术培养出类似于动物肌肉的肉丝，同时添加了人体所需的元素如铁、钙等，使之营养更加丰富。下列相关叙述正确的是（ ） A. 用胃蛋白酶处理肌肉组织，可以获得分裂能力强的肌肉母细胞 B. 生物反应器内应控制温度适宜，并充入一定量的CO2保证培养液pH相对稳定 C. 培养液中的支架提供了更多的细胞附着面积，有利于细胞贴壁生长 D. “人造牛肉”的培养体现了细胞的全能性 【答案】BC 【解析】 【分析】动物细胞培养：（1）原理：细胞增殖。（2）流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 【详解】A、用胰蛋白酶等处理肌肉组织，可以获得分裂能力强的肌肉母细胞，胃蛋白酶的最适pH为1.8左右，而大多数动物细胞培养的最适pH为7.2～7.4，此时胃蛋白酶失活，故不能用胃蛋白酶处理，A错误； B、生物反应器内应控制温度适宜，一般为37 ℃左右，并充入一定量的CO2，以保证培养液的pH相对稳定，B正确； C、培养液中的支架为细胞提供了更大的附着面积，贴壁生长的细胞不仅可在培养瓶壁生长，还可以在支架上生长，故有利于细胞贴壁生长，C正确； D、“人造牛肉”的培养没有体现细胞的全能性，D错误。 故选BC。 24. 某些种类的癌细胞表面高表达膜蛋白PSMA,能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。CD28是T细胞表面受体，其在痛细胞与T细胞结合部位聚集可有效激活T细胞。科研人员尝试利用单抗技术通过诱导两种杂交瘤细胞融合形成双杂交瘤细胞，构建既能结合PSMA,又能结合CD28的双特异性抗体PSMA×CD28。下列说法正确的是（ ） A. 临床上给癌症患者注射抗PSMA受体的抗体有一定的抗癌作用 B. 双杂交瘤细胞产生多种抗体的原因是其能表达出可随机组合的L链和H链 C. 同时将PSMA和CD28注射到小鼠体内，可获得同时产生两种抗体的杂交瘤细胞 D. PSMA×CD28可有效激活T细胞杀伤癌细胞 【答案】ABD 【解析】 【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。 【详解】A、某些种类的癌细胞表面高表达膜蛋白 PSMA，能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸，因此临床上给癌症患者注射抗PSMA受体的抗体使其结合PSMA之后，无法抑制T细胞的活化，有一定的抗癌作用，A正确； B、据图可知，双杂交瘤细胞有L链和H链，双杂交瘤细胞产生多种抗体的原因是融合细胞能表达出可随机组合的L链和H链，B正确； C、杂交瘤细胞是经筛选后获得的，一种杂交瘤细胞由一种B细胞和杂交瘤组成，而一种B细胞经分化后只能产生一种抗体，故同时将PSMA和CD28注射到小鼠体内，不能获得同时产生两种抗体的杂交瘤细胞，C错误； D、PSMA×CD28同时结合癌细胞表面的PSMA和T细胞表面的CD28受体，前者避免抑制T细胞活化，后者激活T细胞，从而有效激活T细胞杀伤癌细胞，D正确。 故选ABD。 25. 下图为我国科学家获得克隆猴“中中”和“华华”的具体过程。研究发现，重构胚中基因A的正常表达是克隆成功的关键；重构胚基因组中大量被甲基化的组蛋白H3会抑制核的全能性；组蛋白H3的乙酰化能使小鼠克隆成功率提高5倍以上。下列叙述正确的是（ ） A. 细胞a指的是培养到MⅡ期的卵母细胞，通过显微操作去掉的是DNA-蛋白质复合物 B. 用灭活的病毒短暂处理的目的是促进两细胞融合，也可用电融合法促融 C. Kdm4d可使H3去甲基化，TSA可使H3保持乙酰化，进而促进了基因A的正常表达 D. “中中”和“华华”培育用到了动物细胞培养及体细胞核移植等技术 【答案】BCD 【解析】 【详解】A、图中细胞a指的是卵母细胞，待其培养到MⅡ期（减数第二次分裂中期）后再通过显微操作去掉纺锤体-染色体复合物，A错误； B、用灭活的病毒短暂处理的目的是促进两细胞（体细胞和卵母细胞）融合，通过电融合法也能使两细胞融合，B正确； C、研究显示，重构胚中基因A的正常表达是克隆成功的关键，重构胚基因组中大量H3被甲基化是克隆成功的巨大阻碍，H3乙酰化能使小鼠克隆成功率提高5倍以上，因此图中将Kdm4d的mRNA注入重构胚和用TSA处理重构胚后，能激活重构胚使其完成细胞分裂和发育进程的机制可能是Kdm4d使H3去甲基化，TSA使H3保持乙酰化，进而促进了基因A的正常表达，C正确； D、从图中可以看出，“中中”和“华华”的培育过程中，有体细胞的培养（动物细胞培养）以及将体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中（体细胞核移植）等技术，D正确。 故选BCD。 26. Rag2基因缺陷导致大鼠无法产生B、T淋巴细胞。将正常大鼠的胚胎干细胞（ES细胞）注射到Rag2基因缺陷大鼠的桑葚胚中，使其产生具有正常ES细胞来源的淋巴细胞群的体细胞嵌合体，从而补充其缺失的淋巴细胞，其过程如图所示。下列分析错误的是（　　） A. 获得的嵌合大鼠的大部分细胞的Rag2基因没有缺陷 B. 胚胎发育早期，会因胚胎中细胞数目不断增加而导致胚胎总体积不断增加 C. 注入桑葚胚的ES细胞在囊胚期主要存在于内细胞团，可发育为胚胎的组织器官 D. 该实验最终获得了嵌合体大鼠证明ES细胞具有全能性 【答案】ABD 【解析】 【详解】A、嵌合大鼠的大部分细胞来源于Rag2基因缺陷的原始胚胎，仅少部分细胞来自注入的正常ES细胞，因此大部分细胞的Rag2基因仍存在缺陷，A错误； B、胚胎发育早期（卵裂期），细胞数目不断增加，但胚胎总体积并不增加或略有缩小，因为细胞体积变小，B错误； C、注入桑葚胚的ES细胞在囊胚期主要存在于内细胞团中，内细胞团细胞具有发育全能性，可分化为胚胎的各种组织器官，C正确； D、细胞全能性是指细胞发育成完整个体的能力。本实验中ES细胞仅发育成了嵌合体大鼠的部分组织，并未发育成完整个体，因此不能证明ES细胞具有全能性，D错误。 故选ABD。 27. 下列有关基因工程的工具的叙述，错误的是（　　） A. DNA 连接酶对“缝合”序列不进行特异性识别，无专一性催化特点 B. 天然质粒均可以直接作为载体将目的基因送入受体细胞 C. 噬菌体常作为动物基因工程的载体 D. 获取一个目的基因需限制酶切割2次，共产生4个游离的磷酸基团 【答案】ABC 【解析】 【详解】A、DNA连接酶对“缝合”的DNA序列没有特异性识别要求，只要两个DNA片段的末端能碱基互补配对（或为平末端），即可催化连接，酶的专一性是指酶只能催化一种或一类化学反应，DNA连接酶只能催化双链DNA片段之间磷酸二酯键的形成，不能催化RNA、单链DNA的连接，这体现了它的催化专一性，A错误； B、作为基因工程的载体，必须具备多个限制酶切割位点、标记基因、能在受体细胞中稳定复制、对受体细胞无害等条件。天然质粒往往不满足全部要求，必须经过人工改造后才能作为载体使用，不能直接用于基因工程，B错误； C、噬菌体是专门侵染细菌的病毒，其衍生物通常作为原核生物（如大肠杆菌）基因工程的载体；动物基因工程的常用载体是动物病毒（如腺病毒、逆转录病毒），噬菌体无法侵染动物细胞，不能作为动物基因工程的载体，C错误； D、DNA为双链结构，限制酶切割1次双链DNA，会断开2个磷酸二酯键，产生1个切口，释放2个游离的磷酸基团。要获取一个目的基因，需要在目的基因的两侧各切割1次（共切割2次），产生2个切口，因此共产生2×2=4个游离的磷酸基团，D正确。 28. 用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　） A. 若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 B. 若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 C. 若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D. 若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落 【答案】D 【解析】 【分析】图中质粒内，氨苄青霉素抗性基因（AmpR）内含有AcaI和PvuI的酶切位点，四环素抗性基因（TetR）内含有HindIII、SphI和SalI的酶切位点。 【详解】A、若用HindⅢ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，转录的产物可能不同，A正确。 B、若用PvuⅠ酶切，重组质粒和质粒中都有四环素抗性基因（TetR），因此在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因，B正确； C、DNA凝胶电泳技术可以分离不同大小的DNA片段，重组质粒的大小与质粒不同，能够鉴定重组质粒构建成功与否，C正确； D、SphⅠ的酶切位点位于四环素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，重组质粒中含氨苄青霉素抗性基因（AmpR），因此携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）的培养基中能形成菌落，在含Tet的培养基中不能形成菌落，D错误。 故选D。 29. 粗提取 DNA 时，向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水并搅拌，过滤后所得滤液进行下列处理后再进行过滤，在得到的滤液中加入特定试剂后容易提取出 DNA相对含量较高的白色丝状物的处理方式是（ ） A. 加入适量的木瓜蛋白酶 B. 37～40℃的水浴箱中保温 10～15 分钟 C. 加入与滤液体积相等的、体积分数为 95%的冷却的酒精 D. 加入 NaCl 调节浓度至 2mol/L→过滤→调节滤液中 NaCl 浓度至 0．14mol/L 【答案】A 【解析】 【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。 【详解】A、木瓜蛋白酶可以水解DNA中的蛋白质类杂质，由于酶具有专一性，不能水解DNA，过滤后在得到的滤液中加入特定试剂后容易提取出 DNA相对含量较高的白色丝状物，A正确； B、37～40℃的水浴箱中保温 10～15 分钟不能去除滤液中的杂质，应该放在60~75℃的水浴箱中保温 10～15 分钟，使蛋白质变性析出，B错误； C、向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水并搅拌，过滤后在得到的滤液中加入与滤液体积相等的、体积分数为 95%的冷却的酒精，此时DNA析出，不会进入滤液中，C错误； D、加入 NaCl 调节浓度至 2mol/L→过滤→调节滤液中 NaCl 浓度至 0．14mol/L，DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中溶解度小，DNA析出，不会进入滤液中，D错误。 故选A。 【点睛】 30. 融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析正确的是（　　） A. 上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对 B. 设计引物的目的是为了能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸 C. 融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物 D. 若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物 【答案】BCD 【解析】 【分析】PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。 【详解】A、上述过程中使用的引物P2和P3的碱基不需要完全互补配对，只需要部分碱基互补配对即可，A错误； B、引物为一段核苷酸，引物与DNA模板链结合后，能够从其3＇端开始连接脱氧核苷酸，开始子链的合成，B正确； C、结合图示可知，融合PCR的第一步两条链重叠部位即互补配对，可互为另一条链的引物，C正确； D、若融合PCR的第二步获得了128个融合基因，引物数目和新合成的子链数目相同，即该过程消耗了128×2-2=254个引物，D正确。 故选BCD。 三、非选择题：本题共3小题，共30分。 31. 人体心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）肌钙蛋白Ⅱ（cTnl）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnl在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnl的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。 （1）动物细胞培养时，培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的_______，以满足动物细胞培养的营养需要，将培养的细胞置于含有_______的混合气体的CO2培养箱中进行培养 （2）每隔2周用cTnl作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是________。 （3）将获得的B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，用选择培养基进行第一次筛选，核酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径（如图）。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。可用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”作为选择培养基筛选出杂交瘤细胞。融合前将部分培养细胞置于含HAT的选择培养基中培养，一段时间后培养基中_______（填“有”或“无”）骨髓瘤细胞生长，说明培养基符合实验要求。杂交瘤细胞可以在HAT培养基上大量增殖的原因是可以通过_______（填“全合成途径”或“补救合成途径”）合成DNA。 （4）甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是______，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得________。单克隆抗体的优点是________（至少写出2项）。 【答案】（1） ①. 血清 ②. 95%空气和5%CO2 （2）加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞 （3） ①. 无 ②. 补救合成途径 （4） ①. 乙和丙 ②. 能产生抗cTnI抗体的杂交瘤细胞 ③. 准确识别抗原的细微差异、与特定抗原发生特异性结合、可以大量制备 【解析】 【分析】动物细胞培养是指在体外模拟体内环境，将动物细胞从机体中取出，在无菌、适宜温度和营养等条件下，使其生长、繁殖并维持其结构和功能的技术。单克隆抗体制备是一种将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能持续分泌特异性抗体的杂交瘤细胞的技术，其核心是利用杂交瘤细胞兼具B淋巴细胞产生特异性抗体和骨髓瘤细胞无限增殖的特性。 【小问1详解】 动物细胞培养时，由于动物细胞所需营养成分复杂，一些成分尚未明确，所以培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等必要营养成分外，往往还需加入一定量的动物血清，以满足动物细胞培养的营养需要。培养细胞时，将培养的细胞置于含有95%空气和5% CO2 的混合气体的 CO2 培养箱中进行培养，其中空气提供细胞呼吸所需的O2 ，5%的CO2用于维持培养液的pH。 【小问2详解】 每隔2周用cTnl作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，这样做的目的是加强免疫，刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞。因为多次注射抗原可以使小鼠的免疫系统持续受到刺激，从而产生更多针对该抗原的B淋巴细胞，为后续的细胞融合提供更多的材料。 【小问3详解】 已知制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶，而物质A阻断全合成途径，在“ HAT培养基”中，骨髓瘤细胞由于缺乏转化酶不能进行补救合成途径，全合成途径又被阻断，所以无法合成DNA，也就不能生长。因此融合前将部分培养细胞置于含 HAT 的选择培养基中培养，一段时间后培养基中无骨髓瘤细胞生长，说明培养基符合实验要求。杂交瘤细胞含有B淋巴细胞中的补救合成途径所必需的转化酶和激酶，所以杂交瘤细胞可以在HAT 培养基上通过补救合成途径合成DNA，从而大量增殖。 【小问4详解】 甲是融合后的细胞，包含未融合的细胞、同种细胞融合的细胞和杂交瘤细胞；乙是经过第一次筛选得到的杂交瘤细胞；丙是经过多次克隆化培养和抗体阳性检测后得到的能产生抗 cTnl 抗体的杂交瘤细胞。所以只含杂交瘤细胞的是乙和丙。 ②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得能产生抗 cTnl 抗体的杂交瘤细胞。因为经过第一次筛选得到的杂交瘤细胞可能有多种，通过多次重复上述操作，可以进一步筛选出能稳定产生抗 cTnl 抗体的杂交瘤细胞。 单克隆抗体的优点是特异性强、灵敏度高、并可大量制备。特异性强是指单克隆抗体只针对一种特定的抗原决定簇起作用；灵敏度高是指它能够检测到微量的抗原；可大量制备是因为杂交瘤细胞可以在体外大量培养。 32. 下图是“三亲婴儿”产生的流程，该技术是为了避免母亲把生理缺陷遗传给孩子的一种技术手段，医生去除女性捐赠者的卵子中的细胞核，接着用母亲卵细胞中对应的遗传基因取而代之，最后再按照标准的试管婴儿技术进行培育，这样诞生的孩子将会继承一位父亲和两位母亲的遗传基因。 （1）图中“去核”和“取核”普遍使用______法，采集到的精子需要进行______处理，体外受精后还需将受精卵放入培养液中培养到一定阶段才能移植，胚胎移植的优势是______。 （2）胚胎发育到______时，细胞开始出现分化。早期胚胎的______细胞将发育成胎儿的各种组织。 （3）三亲婴儿培养过程中用到的胚胎工程技术是______，从遗传角度分析，“三亲婴儿”技术还可以避免“母亲”的______（填细胞结构）中的缺陷基因传递给孩子 【答案】（1） ①. 显微操作 ②. 获能 ③. 可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力 （2） ①. 囊胚期 ②. 内细胞团 （3） ①. 体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植等 ②. 线粒体 【解析】 【分析】胚胎移植将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。体外受精是胚胎工程的核心技术之一，指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，主要应用于试管婴儿、家畜繁育等领域。 【小问1详解】 在细胞操作中，对于“去核”和“取核”这样精细的操作，普遍使用显微操作法。因为细胞和细胞核非常微小，需要借助显微镜进行精确操作。 采集到的精子需要进行获能处理，精子获能后才具备受精能力。这是因为刚排出的精子不能立即与卵子受精，必须在雌性动物生殖道内发生相应的生理变化后，才能获得受精能力。胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。在胚胎移植中，供体的主要职能变为只产生具有优良遗传特性的胚胎，繁重而漫长的妊娠和育仔的任务由受体取代，大大缩短了供体本身的繁殖周期，同时可以充分利用供体的遗传特性，增加优良个体后代的数量。 【小问2详解】 胚胎发育到囊胚时，细胞开始出现分化。囊胚期是胚胎发育过程中的一个重要阶段，在这个时期，胚胎细胞开始出现形态、结构和功能上的差异。早期胚胎的内细胞团细胞将发育成胎儿的各种组织。内细胞团细胞具有发育的全能性，能够分化形成胎儿的各种组织和器官。 【小问3详解】 三亲婴儿培养过程中用到的胚胎工程技术是体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植等。首先通过体外受精形成受精卵，然后对受精卵进行早期胚胎培养，培养到合适阶段后进行胚胎移植到受体子宫内发育。从遗传角度分析，“三亲婴儿”技术还可以避免“母亲”的线粒体（细胞质）中的缺陷基因传递给孩子。因为在三亲婴儿的培育过程中，母亲提供的是细胞核，而线粒体存在于细胞质中，去除了母亲卵细胞的细胞质，就避免了线粒体中缺陷基因的传递。 33. 基因工程所用表达载体中的启动子，实际上包含增强子和基本启动子。基本启动子没有组织特异性，本身不足以启动基因表达。增强子是含有特定碱基序列的DNA片段，很多增强子具有组织特异的活性，作用机理如图1所示。 （1）由图可知，增强子位于基本启动子的_______（填“上游”、“下游”或“上游或下游”）。根据启动子的作用推测，增强子是影响了________，从而激活基本启动子驱动基因转录。 （2）增强子、控制特定蛋白合成基因_______（填“必须”、“非必须”）位于同一条染色体上，增强子在不同组织中的活性______（填“相同”、“不一定相同”或“不同”）。 （3）“增强子捕获”是筛选组织特异表达基因的一种有效方法。基于上述调控机理，研究者构建了由基本启动子和报告基因组成的“增强子捕获载体”（图2），并转入受精卵。捕获载体会随机插入基因组中，如果插入位点附近存在有活性的增强子，则会激活报告基因的表达（图3），若观察到报告基因只在某些特定器官特异表达，鉴定出捕获载体的插入位点后再检测即可确定是否为该器官特异表达的基因。 ①增强子捕获载体除了包含图2所述结构外，还必须有_____。用______法将构建的“增强子捕获载体”导入斑马鱼受精卵，受体细胞选用受精卵的原因是_________（至少答出两点）。 ②若观察到报告基因在某幼体的心脏中特异表达。鉴定出捕获载体的插入位点后，发现位点附近有两个基因G和H，为了确定这两个基因是否为心脏特异表达的基因，应检测__________。 【答案】（1） ①. 上游或下游 ②. RNA聚合酶与基本启动子的识别和结合 （2） ①. 非必须 ②. 不一定相同 （3） ①. 标记基因、复制原点 ②. 显微注射 ③. 体积大，易操作；全能性高，易培养成完整个体 ④. 其他器官细胞中，G和H两个基因是否转录出相应的mRNA或是否翻译出相应的蛋白质 【解析】 【分析】1、基因工程技术的基本步骤： （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。 （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。 （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。 （4）目的基因的检测与鉴定。 2、启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录。基因工程中，目的基因需要插入启动子和终止子之间。 【小问1详解】 由图1可知，增强子可位于基本启动子的上游或下游，从图中能看到增强子位置不固定，可在基本启动子两侧 。启动子是RNA聚合酶结合位点，启动转录，推测增强子是影响了RNA聚合酶与基本启动子的识别和结合，从而激活基本启动子驱动基因转录，增强子通过与特定蛋白质结合等方式，协助RNA聚合酶与基本启动子结合。 【小问2详解】 增强子、控制特定蛋白合成基因非必须位于同一条染色体上，增强子可通过空间结构等远距离调控基因表达，不一定在同一条染色体 。因为很多增强子具有组织特异的活性，所以增强子在不同组织中的活性不一定相同 ，不同组织中与增强子结合的特定蛋白质等存在差异，影响其活性。 【小问3详解】 ①基因表达载体的必备元件有启动子、目的基因、终止子、标记基因等，增强子捕获载体除图2结构外，还必须有标记基因 ，用于筛选含有载体的细胞；还需要有复制原点以便进行DNA复制。将载体导入斑马鱼受精卵常用显微注射法；选用受精卵作为受体细胞，原因是受精卵细胞全能性高，易发育成个体；受精卵体积大，便于操作；受精卵含有的营养物质丰富，利于外源基因整合和表达，保证载体能有效整合并使报告基因在个体发育中表达。 ②要确定基因G和H是否为心脏特异表达基因，应检测基因G和H在该动物心脏组织中的表达情况及在其他器官中的表达情况，即检测基因G和H其他器官细胞中，G和H两个基因是否转录出相应的mRNA或是否翻译出相应的蛋白质，若它们在心脏中表达，而在其他器官中不表达，则可能是心脏特异表达基因 。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 生物试题 一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。每小题只有一个选项符合题目要求。 1. 以四倍体（基因型为AAaa）植株的花药为外植体经植物组织培养获得植株的过程如图所示，相关叙述正确的是（ ） A. 此过程为单倍体育种，②、③过程需要严格的无菌条件 B. 将花药换成植物的茎尖可获得能抗病毒的脱毒苗 C. 取愈伤组织进行细胞产物的工厂化生产，可提高单个细胞中次生代谢物的含量 D. ②③过程培养基中的激素比例以及光照条件均不同 2. 花椰菜（2n=18）种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，紫罗兰（2n=14）具有一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1所示。通过蛋白质电泳技术分析了亲本及待测植株中某些特异性蛋白，结果如图2所示。下列有关叙述正确的是（　　） A. 过程①可用酶解法获得原生质体，需要在无菌水中进行 B. ②过程可用电融合法或灭活病毒诱导细胞融合，杂种细胞再生出细胞壁是成功的标志 C. 新品种的产生说明花椰菜和紫罗兰之间不存在生殖隔离 D. 根据图2结果判定，最可能属于杂种植株的是4和5 3. 两种远缘植物的细胞融合后会导致一方的染色体被排出。若其中一个细胞的染色体在融合前由于某种原因断裂，形成的染色体片段在细胞融合后可能不会被全部排出，未排出的染色体片段可以整合到另一个细胞的染色体上而留存在杂种细胞中。依据该原理，将普通小麦与耐盐性强的中间偃麦草进行体细胞杂交获得了耐盐小麦新品种，过程如下图所示。下列说法错误的是（ ） A. 过程①需使用纤维素酶和果胶酶处理细胞 B. 过程②的目的是使中间偃麦草的染色体断裂 C. 过程③中常用灭活的病毒诱导原生质体融合 D. 耐盐小麦的染色体上整合了中间偃麦草的染色体片段 4. 利用植物细胞培养技术在离体条件下对单个细胞或细胞团进行培养使其增殖，可获得植物细胞的某些次生代谢物。下列说法正确的是（ ） A. 利用该技术可获得某些无法通过化学合成途径得到的产物 B. 植物细胞体积小，故不能通过该技术进行其产物的工厂化生产 C. 次生代谢物是植物所必需的，但含量少，应选择产量高的细胞进行培养 D. 该技术主要利用促进细胞生长的培养条件提高单个细胞中次生代谢物的含量 5. 常规动物细胞培养是将细胞在平面条件下培养，培养出的单层细胞不同于人体内的组织结构，在药物研究中具有一定的局限性。三维细胞培养技术是在体外为细胞提供类似体内的生长环境，使细胞形成立体的三维结构，更有利于药理学的研究。下列叙述错误的是（ ） A. 体外培养的细胞大部分需要贴附于基质表面才能生长繁殖 B. 使用机械方法也可将组织分散成单个细胞 C. 与常规细胞培养相比，三维细胞培养技术不存在接触抑制现象 D. 三维细胞培养技术可以用于检测药物对组织内部细胞的作用 6. 科学家在实验室中获得多能干细胞（iPS），其过程大致是：把四种转录因子基因引入小鼠的成纤维细胞，可诱导这种细胞发生转化，产生iPS细胞，用iPS细胞治疗某些人类疾病成为可能。下图是该设想的示意图，说法正确的是（　　） A. 干细胞是从胚胎中分离提取的细胞 B. iPS细胞分化成各类细胞的实质是动物细胞核具有全能性 C. iPS细胞类似于成体干细胞，具有组织特异性 D. 我国科学家用4种小分子化合物也制备出了iPS细胞，且安全性更高 7. 一个抗原往往有多个不同的抗原决定簇，一个抗原决定簇只能刺激机体产生一种抗体，由同一抗原刺激产生的不同抗体统称为多抗。将非洲猪瘟病毒衣壳蛋白 p72 注入小鼠体内，可利用该小鼠的免疫细胞制备抗 p72 的单抗，也可以从该小鼠的血清中直接分离出多抗。下列说法正确的是（ ） A. 注入小鼠体内的抗原纯度对单抗纯度的影响比对多抗纯度的影响大 B. 单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合 C. 利用该小鼠只能制备出一种抗 p72 的单抗 D. p72 部分结构改变后会出现原单抗失效而多抗仍有效的情况 8. 下列有关哺乳动物核移植技术的叙述，不正确的是（ ） A. 受体细胞常用处于减数第二次分裂中期的卵母细胞 B. 注入受体细胞的既可以是细胞核，也可以是细胞 C. 用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成减数分裂过程 D. 核移植技术的成功率很低，仍有很多问题需要研究 9. 胚胎工程技术的应用为优良牲畜的大量繁殖提供了有效的解决办法，如奶牛活体采卵—体外胚胎生产（OPU-IVP）技术，该技术流程如图。已知雄性奶牛Y染色体上有一段雄性特异的高度重复序列，依据该重复序列设计引物，建立了用于奶牛胚胎性别鉴定的PCR体系（SRY-PCR）。下列叙述错误的是（ ） A. 体外受精后，在透明带和卵细胞膜间观察到两个极体说明受精成功 B. 活体采卵前诱导母牛超数排卵所注射的激素只能作用于特定细胞 C. 取滋养层细胞进行SRY-PCR，应选择结果为阴性的胚胎进行移植 D. 为防止受体母牛发生免疫排斥反应，胚胎移植前需要进行免疫检查 10. 经遗传改造的小鼠胚胎干细胞注入囊胚，通过胚胎工程的相关技术可以获得具有不同遗传特性的实验小鼠。下列说法错误的是（ ） A. 用促性腺激素处理雌鼠可以获得更多的卵子 B. 体外受精前要对小鼠的精子进行获能处理 C. 胚胎移植前要检查胚胎质量并在囊胚或原肠胚阶段移植 D. 遗传改造的小鼠胚胎干细胞可以通过转基因等技术获得 11. 下列关于胚胎工程的说法，错误的是（　　） A. 从不同动物中采集的精子可置于同一获能液中进行获能处理 B. 胚胎干细胞是一类未分化的细胞，可以从囊胚中获取 C. 胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一 D. 胚胎移植过程中可通过发情配种或人工授精对超数排卵的供体母牛进行体内受精 12. 限制酶是基因工程中必需的工具之一，下图表示五种限制酶的识别序列及切割位点。下列关于限制酶的叙述，错误的是（ ） 限制酶 EcoR Ⅰ BamH Ⅰ Sau3A Ⅰ Mfe Ⅰ EcoR Ⅴ 识别序列及酶切位点 5′-G↓AATTC-3′ 3′-CTTAA↑G-5′ 5′-G↓GATCC-3′ 3′-CCTAG↑G-5′ 5′-G↓ATC-3′ 3′-CTA↑G-5′ 5′-C↓AATTG-3′ 3′-GTTAA↑C-5′ 5′-GAT↓ATC-3′ 3′-CTA↑TAG-5′ A. EcoR Ⅰ和EcoR Ⅴ切割DNA片段产生的末端分别为黏性末端和平末端 B. EcoR Ⅰ和Mfe Ⅰ切割产生的DNA片段能被E.coli DNA连接酶相连在一起 C. BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ切割产生的DNA片段，连接后一定能被BamH Ⅰ切割 D. 以上五种限制酶均能识别双链DNA的特定序列，并切开特定部位的磷酸二酯键 13. 图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述错误的是（ ） A. 在构建重组质粒时，可用PstⅠ和HindⅢ切割质粒和外源DNA B. 在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因 C. 若只用PstⅠ处理质粒和外源DNA分子片段，无法避免自身环化和反向连接 D. 导入重组质粒的大肠杆菌可以在含氨苄青霉素的培养基中生长 14. 科研人员构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5；该重组质粒在受体细胞内正确表达后，用抗J蛋白抗体和抗V5抗体分别检测相应蛋白是否表达以及表达水平，结果如图乙所示。下列分析错误的是（ ） A. 作为基因表达载体，图甲中的质粒还必须具有特殊标记基因、复制原点 B. 为检测J基因是否插入到图甲所示的位置，需用引物F1和R1进行PCR C. 若J基因转录的模板链位于b链，则引物F2与图甲中a链相应部分的序列相同 D. 图乙中，条带1的出现证明重组质粒在受体细胞内表达了J-V5融合蛋白 15. 关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（ ） A. 琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B. 凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C. 在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 D. 琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来 16. 1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉，下列关于用Bt基因培育转基因抗虫棉四个主要步骤的说法，正确的是（　　） A. 这四个步骤中均可用到碱基互补配对的原则 B. 基因表达载体中的终止密码子能够使基因停止转录 C. 若利用PCR技术检测目的基因是否转录出mRNA，则不能根据目的基因的启动子和终止子序列设计引物 D. 成功将两个Bt基因转入棉花的染色体DNA中，则自交后代一定具有抗虫特性 17. 下列关于“DNA粗提取与鉴定”、“DNA片段的扩增及电泳鉴定”的实验，说法正确的是（　　） A. DNA粗提取与鉴定过程中至少要用到一次离心 B. 利用二苯胺试剂鉴定DNA时，需要在沸水加热过程中观察颜色变化 C. 电泳结束后可直接观察DNA条带的分布和粗细程度来评价扩增效果 D. 凝胶载样缓冲液中的指示剂无法用来观察PCR产物的位置 18. DNA探针是一段带有检测标记，且顺序已知的、与目的基因互补的DNA序列。为获得荧光标记的DNA探针，在反应体系中加入酶、缓冲液、H2O、4种脱氧核苷酸（dCTP、dTTP、dGTP和碱基被荧光标记的dATP）和适量序列为5'-TAGACCCAATTGGG-3'的单链DNA。下列说法正确的是（　　） A. 该反应体系中加入ATP为子链的延伸提供能量 B. 缓冲溶液中一般要添加Ca2+用于激活DNA聚合酶 C. 该反应体系中因缺乏引物而无法扩增出产物 D. 利用该反应体系可获得两种荧光标记的探针 19. 利用下图质粒和目的基因构建基因表达载体，为高效连接和筛选，结合表格中质粒上限制酶识别位点，推测目的基因上游和下游含有的限制酶识别位点组合可以为（　　） 限制酶 识别序列和切割位点 限制酶 识别序列和切割位点 XbaI 5'-T↓TCGAG-3' SacI 5'-C↓TCGAG-3' SmaI 5'-CCC↓GGG-3' HindIII 5'-A↓AGCTT-3' EcoRI 5'-G↓AATTC-3' BclI 5'-G↓AATTC-3' ①XbaI和SacI ②SacI和EcoRI ③XbaI和HindIII ④SmaI和SacI ⑤HindIII和EcoRI ⑥XbaI和BclI A. ③⑤ B. ①③⑤ C. ②③⑤⑥ D. ①②③⑤⑥ 20. 双脱氧链终止法主要用于DNA基因分析，是应用最多的核酸测序技术。该方法是利用PCR技术在酶、模板、引物、四种脱氧核苷酸存在的情况下，在四管反应系统中按比例分别加入四种双脱氧核苷三磷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP），则当双脱氧核苷三磷酸被加入到链末端时，这一链就会停止伸长，而单脱氧核苷三磷酸链末端的片段还可以继续延伸。在结束反应后，用四个泳道进行电泳，结果如下图所示，下列说法错误的是（　　） A. 每管反应系统中均需加入2种引物 B. 待测模板链的碱基序列为3'-GATGGACACTA-5' C. 反应体系中加入的酶只有耐高温的DNA聚合酶 D. 结束反应后需将产物进行变性再电泳 二、选择题：本题共10小题，每小题3分，共30分。每小题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对的得3分，选对但不全的得1分，有选错的得0分。 21. 真菌细胞壁富含多种多糖类物质，已被证实具有诱导活性，可通过介导植物的防御反应来促进红豆杉合成紫杉醇。研究者在最佳诱导条件下对红豆杉进行细胞悬浮培养，结果如图所示，下列叙述正确的是（　　） A. 悬浮培养的细胞通常来自红豆杉的愈伤组织，原因是愈伤组织细胞全能性高 B. 悬浮培养中常用的碳源是蔗糖，原因是其形成的渗透压高于葡萄糖，可防止细胞脱水 C. 真菌多糖处理后红豆杉细胞鲜质量、干质量、紫杉醇总产量均在培养约21天后达到最大值 D. 真菌多糖处理后红豆杉细胞鲜质量、干质量、紫杉醇总产量中增长幅度最高的是紫杉醇总产量 22. 关于动物细胞培养与植物组织培养的异同点，说法正确的是（　　） A. 均为有丝分裂，但是原理不同 B. 均为合成培养基，但是物理性质不同 C. 均需加入激素，但是激素种类和比例不同 D. 均需无菌操作，但是培养的结果不同 23. 培育肉是利用动物体内分离的成肌细胞或全能干细胞，采用动物细胞培养技术培养出类似于动物肌肉的肉丝，同时添加了人体所需的元素如铁、钙等，使之营养更加丰富。下列相关叙述正确的是（ ） A. 用胃蛋白酶处理肌肉组织，可以获得分裂能力强的肌肉母细胞 B. 生物反应器内应控制温度适宜，并充入一定量的CO2保证培养液pH相对稳定 C. 培养液中的支架提供了更多的细胞附着面积，有利于细胞贴壁生长 D. “人造牛肉”的培养体现了细胞的全能性 24. 某些种类的癌细胞表面高表达膜蛋白PSMA,能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。CD28是T细胞表面受体，其在痛细胞与T细胞结合部位聚集可有效激活T细胞。科研人员尝试利用单抗技术通过诱导两种杂交瘤细胞融合形成双杂交瘤细胞，构建既能结合PSMA,又能结合CD28的双特异性抗体PSMA×CD28。下列说法正确的是（ ） A. 临床上给癌症患者注射抗PSMA受体的抗体有一定的抗癌作用 B. 双杂交瘤细胞产生多种抗体的原因是其能表达出可随机组合的L链和H链 C. 同时将PSMA和CD28注射到小鼠体内，可获得同时产生两种抗体的杂交瘤细胞 D. PSMA×CD28可有效激活T细胞杀伤癌细胞 25. 下图为我国科学家获得克隆猴“中中”和“华华”的具体过程。研究发现，重构胚中基因A的正常表达是克隆成功的关键；重构胚基因组中大量被甲基化的组蛋白H3会抑制核的全能性；组蛋白H3的乙酰化能使小鼠克隆成功率提高5倍以上。下列叙述正确的是（ ） A. 细胞a指的是培养到MⅡ期的卵母细胞，通过显微操作去掉的是DNA-蛋白质复合物 B. 用灭活的病毒短暂处理的目的是促进两细胞融合，也可用电融合法促融 C. Kdm4d可使H3去甲基化，TSA可使H3保持乙酰化，进而促进了基因A的正常表达 D. “中中”和“华华”培育用到了动物细胞培养及体细胞核移植等技术 26. Rag2基因缺陷导致大鼠无法产生B、T淋巴细胞。将正常大鼠的胚胎干细胞（ES细胞）注射到Rag2基因缺陷大鼠的桑葚胚中，使其产生具有正常ES细胞来源的淋巴细胞群的体细胞嵌合体，从而补充其缺失的淋巴细胞，其过程如图所示。下列分析错误的是（　　） A. 获得的嵌合大鼠的大部分细胞的Rag2基因没有缺陷 B. 胚胎发育早期，会因胚胎中细胞数目不断增加而导致胚胎总体积不断增加 C. 注入桑葚胚的ES细胞在囊胚期主要存在于内细胞团，可发育为胚胎的组织器官 D. 该实验最终获得了嵌合体大鼠证明ES细胞具有全能性 27. 下列有关基因工程的工具的叙述，错误的是（　　） A. DNA 连接酶对“缝合”序列不进行特异性识别，无专一性催化特点 B. 天然质粒均可以直接作为载体将目的基因送入受体细胞 C. 噬菌体常作为动物基因工程的载体 D. 获取一个目的基因需限制酶切割2次，共产生4个游离的磷酸基团 28. 用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　） A. 若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同 B. 若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因 C. 若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D. 若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落 29. 粗提取 DNA 时，向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水并搅拌，过滤后所得滤液进行下列处理后再进行过滤，在得到的滤液中加入特定试剂后容易提取出 DNA相对含量较高的白色丝状物的处理方式是（ ） A. 加入适量的木瓜蛋白酶 B. 37～40℃的水浴箱中保温 10～15 分钟 C. 加入与滤液体积相等的、体积分数为 95%的冷却的酒精 D. 加入 NaCl 调节浓度至 2mol/L→过滤→调节滤液中 NaCl 浓度至 0．14mol/L 30. 融合PCR技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。其原理如图所示，据图分析正确的是（　　） A. 上述过程中使用的引物P2和P3的碱基需要完全互补配对 B. 设计引物的目的是为了能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸 C. 融合PCR的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物 D. 若融合PCR的第二步获得128个融合基因，理论上该过程消耗了254个引物 三、非选择题：本题共3小题，共30分。 31. 人体心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）肌钙蛋白Ⅱ（cTnl）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnl在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnl的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。 （1）动物细胞培养时，培养基除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的_______，以满足动物细胞培养的营养需要，将培养的细胞置于含有_______的混合气体的CO2培养箱中进行培养 （2）每隔2周用cTnl作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是________。 （3）将获得的B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，用选择培养基进行第一次筛选，核酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径（如图）。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。可用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”作为选择培养基筛选出杂交瘤细胞。融合前将部分培养细胞置于含HAT的选择培养基中培养，一段时间后培养基中_______（填“有”或“无”）骨髓瘤细胞生长，说明培养基符合实验要求。杂交瘤细胞可以在HAT培养基上大量增殖的原因是可以通过_______（填“全合成途径”或“补救合成途径”）合成DNA。 （4）甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是______，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得________。单克隆抗体的优点是________（至少写出2项）。 32. 下图是“三亲婴儿”产生的流程，该技术是为了避免母亲把生理缺陷遗传给孩子的一种技术手段，医生去除女性捐赠者的卵子中的细胞核，接着用母亲卵细胞中对应的遗传基因取而代之，最后再按照标准的试管婴儿技术进行培育，这样诞生的孩子将会继承一位父亲和两位母亲的遗传基因。 （1）图中“去核”和“取核”普遍使用______法，采集到的精子需要进行______处理，体外受精后还需将受精卵放入培养液中培养到一定阶段才能移植，胚胎移植的优势是______。 （2）胚胎发育到______时，细胞开始出现分化。早期胚胎的______细胞将发育成胎儿的各种组织。 （3）三亲婴儿培养过程中用到的胚胎工程技术是______，从遗传角度分析，“三亲婴儿”技术还可以避免“母亲”的______（填细胞结构）中的缺陷基因传递给孩子 33. 基因工程所用表达载体中的启动子，实际上包含增强子和基本启动子。基本启动子没有组织特异性，本身不足以启动基因表达。增强子是含有特定碱基序列的DNA片段，很多增强子具有组织特异的活性，作用机理如图1所示。 （1）由图可知，增强子位于基本启动子的_______（填“上游”、“下游”或“上游或下游”）。根据启动子的作用推测，增强子是影响了________，从而激活基本启动子驱动基因转录。 （2）增强子、控制特定蛋白合成基因_______（填“必须”、“非必须”）位于同一条染色体上，增强子在不同组织中的活性______（填“相同”、“不一定相同”或“不同”）。 （3）“增强子捕获”是筛选组织特异表达基因的一种有效方法。基于上述调控机理，研究者构建了由基本启动子和报告基因组成的“增强子捕获载体”（图2），并转入受精卵。捕获载体会随机插入基因组中，如果插入位点附近存在有活性的增强子，则会激活报告基因的表达（图3），若观察到报告基因只在某些特定器官特异表达，鉴定出捕获载体的插入位点后再检测即可确定是否为该器官特异表达的基因。 ①增强子捕获载体除了包含图2所述结构外，还必须有_____。用______法将构建的“增强子捕获载体”导入斑马鱼受精卵，受体细胞选用受精卵的原因是_________（至少答出两点）。 ②若观察到报告基因在某幼体的心脏中特异表达。鉴定出捕获载体的插入位点后，发现位点附近有两个基因G和H，为了确定这两个基因是否为心脏特异表达的基因，应检测__________。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $