精品解析：山东青岛市平度九中2025-2026学年高二4月月考生物试题

高二第二学期生物四月月考试题 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合。 1. 我国的酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。《齐民要术》记载：“世人云：米过酒甜，此乃不解法候。酒冷沸止，米有不消者，便是曲势尽。”下列有关叙述正确的是（ ） A. “米过酒甜”是因为米中糖类物质过量，发酵停止时仍未被完全消耗 B. “酒冷沸止”说明微生物的代谢产热和释放CO2逐渐停止 C. “曲势尽”的原因可能是米酒中pH或酒精含量升高 D. 酿制米酒所用的酒曲中，微生物的呼吸类型为兼性厌氧型 【答案】ABD 【解析】 【分析】利用酵母菌发酵产生酒精的原理酿酒，利用其发酵产生二氧化碳的原理制作面包、 馒头；参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。 【详解】A、酿造米酒的原料富含糖类，米过酒甜是因为米中有糖类物质未被完全消耗，A正确； B、由于微生物呼吸作用消耗糖类等有机物，会释放能量，且释放的能量绝大多数以热能的形式散失，导致酒液温度产生变化，“酒冷沸止”说明酵母菌的代谢产热和释放CO2逐渐停止，B正确； C、微生物无氧呼吸，会产生的CO2， 导致液体pH降低，“曲势尽'的原因可能是发酵过程pH降低或酒液中酒精含量升高使发酵停止，C错误； D、酿制米酒所用的酒曲中主要微生物是酵母菌，酵母菌的呼吸类型为兼性厌氧型，D正确。 故选ABD。 2. 瘤胃是牛、羊等反刍动物具有的特殊的器官，其中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。已知刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员对瘤胃中的纤维素分解菌进行了分离、鉴定，过程如下图所示。下列有关说法正确的是（　　） A. 实验时，盛有水或者培养基的摇瓶通常采用巴氏消毒法进行除菌处理 B. 为分离出纤维素分解菌，甲、乙、丙培养基应以纤维素为唯一营养成分 C. 通过向乙和丁培养基中加入刚果红，可对纤维素分解菌进行鉴定和计数 D. 在甲、乙、丙、丁的培养基表面加入一层无菌石蜡能有效获得目标菌落 【答案】D 【解析】 【分析】牛、羊等反刍动物具有特殊的瘤胃，在瘤胃中生活着多种厌氧微生物，其中许多微生物能分解纤维素。在筛选和分离降解纤维素的微生物时，确保能够分离得到目的微生物，一般先将样液进行选择培养，以增大样液中目的微生物的数量。然后用固体培养基培养，分离得到单个菌落。刚果红是一种染色剂，可与纤维素等多糖形成红色复合物。如果培养基中唯一的碳源纤维素被降解了，那么菌落周边就会出现没有红色的透明圈。且透明圈越大，说明微生物降解纤维素的能力越强。 【详解】A、实验时，盛有水或者培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行除菌处理，A错误 ； B、为分离出纤维素分解菌，甲、乙、丙培养基应以纤维素为唯一碳源，还需要添加氮源等营养成分，B错误； C、由图可知，将菌液接种到乙上所用的方法是平板划线法，不能用于计数，C错误； D、牛、羊等反刍动物具有特殊的瘤胃，在瘤胃中生活着多种厌氧微生物，在甲、乙、丙、丁的培养基表面加入一层无菌石蜡能有效获得目标菌落，D正确。 故选D。 3. 我国科学家从北极分离、鉴定出了一种耐冷细菌，过程如下：①接种在人造海水中，15℃条件下振荡培养3h；②梯度稀释后将样品涂布在TYS培养基中，15℃条件下培养7d；③挑取生长菌落，进行划线，15℃条件下培养；④选择不同形态的菌落进行培养、鉴定和保藏。下列叙述错误的是（ ） A. 过程①中的振荡培养可以提高培养液中的溶氧量 B. 过程②中的TYS培养基灭菌前需将pH调至酸性 C. 过程②③使用的接种器具均需灼烧并冷却后接种 D. 涂布后再次划线培养的目的是进一步纯化所得菌种 【答案】B 【解析】 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐；在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。 【详解】A、过程①中的振荡培养，能使人造海水与氧气充分接触，提高溶解氧的供应量，A正确； B、过程②中的TYS培养基灭菌前需将pH调至酸性，会破坏该细菌的细胞结构，应将pH调至中性或弱碱性，B错误； C、过程②③使用的接种器具均需灼烧，是防止杂菌污染，冷却后操作是避免接种器具因温度太高杀死菌种，C正确； D、涂布平板法获得单菌落，但为避免杂菌污染，保证培养物的纯度，会在涂布后再次划线培养，以保证可以进一步得到纯化的菌种，D正确。 故选B。 4. 野生型菌株在基本培养基和完全培养基上均可繁殖，而营养缺陷型菌株只能在完全培养基上繁殖。筛选营养缺陷型菌株时，可将含菌株的一层基本培养基置于两层基本培养基中先进行培养，待出现菌落后，再向上层倾倒一层完全培养基继续培养，该方法称为夹层平板法，如图1所示。研究人员对大肠杆菌的菌种进行诱变后，利用该方法筛选其中的营养缺陷型菌株，结果如图2所示。下列说法正确的是（ ） A. 完全培养基应在灭菌后立即倒入夹层平板中 B. 该实验无需设置未接种的夹层平板作为对照 C. 经培养后，对首次出现的菌落用记号笔标在皿盖 D. 图2中的小型菌落可能为营养缺陷型菌株形成的新生菌落 【答案】D 【解析】 【分析】由题意知，营养缺陷型是指野生型菌株由于基因突变，致使细胞合成途径出现某些缺陷，丧失合成某些物质的能力，如氨基酸、维生素、碱基等的合成能力出现缺陷，必须在基本培养基（野生型菌株最低营养要求）中添加缺陷的营养物质（补充培养基）才能正常生长的一类突变株。 【详解】A、如果完全培养基在灭菌后立即倒入夹层平板中，可能导致基本培养基上的菌落被高温杀死，A错误； B、为排除实验操作过程及培养基的配制等方面的影响，所以需要设置未接种的夹层平板作为对照 ，B错误； C、由于平板需要倒置放置，故对首次出现的菌落做标记时需要标记在培养皿底上，C错误； D、营养缺陷型菌株只能在完全培养基上生长，而野生型菌株在基本培养基和完全培养基上均可繁殖，小型菌落的形成是由于繁殖速度慢造成的，所以图2中的小型菌落可能为营养缺陷型菌株形成的新生菌落，D正确。 故选D。 5. γ-聚谷氨酸（γ-PGA）是由枯草芽孢杆菌分泌的一种多肽分子，可广泛用于医药、食品等领域。科学家利用芦苇水解液对枯草芽孢杆菌进行有氧发酵生产γ-PGA，添加谷氨酸钠会提高γ-PGA的产量，但会造成发酵液黏度增大，溶氧量降低。下列有关说法中错误的是（　　） A. 发酵过程中可根据发酵进程适时补充芦苇水解液 B. 芦苇水解液加入发酵罐中之前可采用高压蒸汽灭菌 C. 添加谷氨酸钠后因菌体生长速率加快而产生更多γ-PGA D. 筛选的性状优良的枯草芽孢杆菌在发酵生产前应进行扩大培养 【答案】C 【解析】 【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。 【详解】A、根据题意，芦苇水解液作为液体培养基可以为枯草芽孢杆菌进行有氧发酵提高营养物质，因此，发酵过程中可根据发酵进程适时补充芦苇水解液，A正确； B、为了防止杂菌污染，可以在芦苇水解液加入发酵罐中之前，采用高压蒸汽灭菌，B正确； C、根据题意，添加谷氨酸钠会提高γ-PGA的产量，但会造成发酵液黏度增大，溶氧量降低，进而影响枯草芽孢杆菌的繁殖，因此不会因体生长速率加快而产生更多γ-PGA，C错误； D、为了更快获得更多的γ-PGA，因此筛选的性状优良的枯草芽孢杆菌在发酵生产前应进行扩大培养，D正确。 故选C。 6. 基因组印记(通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达)阻碍了哺乳动物孤雌生殖的实现。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞(类似受精作用)，最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如下图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 体外培养卵母细胞时，为防止污染，需将培养皿置于二氧化碳培养箱中进行培养 B. 甲基化可能会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化处理有利于其表达 C. “孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同 D. 移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来 【答案】B 【解析】 【分析】从卵泡中取出卵母细胞，再将经过甲基化处理的卵母细胞进行早期胚胎培养、胚胎移植等获得孤雌小鼠。 【详解】A、动物细胞培养时加入抗生素，防止培养过程中的污染，A错误； B、由题干可知，基因组印记是通过甲基化使一个基因不表达，对某些基因进行去甲基化处理有利于其表达，然后促进了细胞的全能性的表现，获得孤雌小鼠，B正确； C、“孤雌小鼠”是由两个生殖细胞（修饰后的次级卵细胞和另一个卵子的极体）结合后发育形成，同时由于配子在形成过程中会经历减数分裂的基因重组，或发生基因突变，将导致两个生殖细胞结合后的“孤雌小鼠”其基因型不一定与提供卵母细胞的雌鼠相同，C错误； D、囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫做孵化，D错误。 故选B。 7. 人凝血酶Ⅲ是一种分泌蛋白，可预防和治疗急慢性血栓。重组人凝血酶Ⅲ是世界上首个上市的动物乳腺生物反应器生产的重组蛋白药物，下列说法错误的是（ ） A. 可从人细胞中提取RNA后利用逆转录方法获取目的基因 B. 利用乳腺生物反应器生产人凝血酶Ⅲ属于基因工程的应用 C. 用显微注射技术将表达载体导入乳腺细胞来获得转基因动物 D. 只在动物乳腺细胞中检测到人抗凝血酶Ⅲ基因，不能说明该技术已获得成功 【答案】C 【解析】 【分析】利用基因工程技术，还可以让哺乳动物批量生产药物。科学家将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起，通过显微注射的方法导入哺乳动物的受精卵中，由这个受精卵发育成的转基因动物在进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产所需要的药物，这称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。 【详解】A、可从人细胞中提取RNA后利用逆转录PCR技术获取目的基因，此时获得的目的基因没有启动子、终止子等，A正确； B、利用乳腺生物反应器生产药物，这属于动物基因工程的应用，B正确； C、动物受精卵全能性最高，应用显微注射技术将表达载体导入受精卵来获得转基因动物，C错误； D、只在动物乳腺细胞中检测到人抗凝血酶Ⅲ基因，不能说明该技术已获得成功，还需要检测分泌的乳汁中是否含有人凝血酶Ⅲ，D正确。 故选C。 8. 2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如下技术路线。 据图分析下列叙述错误的是（ ） A. 可用梯度离心、紫外线短时间照射等方法在没有穿透卵母细胞透明带的情况下实现去核或使其中DNA 变性失活的目的 B. 为获得较多的卵母细胞，可对捐献者和母亲注射性激素，诱发其卵巢排出更多的成熟卵子 C. “三亲婴儿”和试管婴儿都是通过有性生殖得到的 D. “三亲婴儿”的体细胞中有小于1/2 的 DNA 来自母亲卵母细胞 【答案】B 【解析】 【分析】分析题图：图示表示“三亲婴儿”的培育过程，该过程中采用了核移植技术、体外受精技术、早期胚胎培养技术及胚胎移植技术。 【详解】A、卵母细胞去核或使其中DNA失活的方法有梯度离心、紫外线短时间照射等，A正确； B、为获得较多的卵母细胞，可对捐献者和母亲注射促性腺激素，而不是性激素，B错误； C、“三亲婴儿”和试管婴儿采用体外受精技术，属于有性生殖，C正确； D、“三亲婴儿”的遗传物质来自捐献者、母亲及提供精子的男子，其中细胞质中的遗传物质来自捐献者，故体细胞中有小于1/2 的 DNA 来自母亲卵母细胞，D正确。 故选B。 9. 骆驼蓬主要分布在干旱和半干旱地区，能防风固沙。骆驼蓬合成的多种生物碱具有抗肿瘤作用。科研人员利用骆驼蓬下胚轴进行育苗和生物碱提取，过程如下图。下列说法正确的是（　　） A. 下胚轴切段需用酒精和次氯酸钠进行灭菌处理 B. 过程①和过程②分别发生了细胞的脱分化和再分化 C. 由无毒下胚轴经组织培养获得的骆驼蓬无毒幼苗可抵抗病毒的侵染 D. 由工厂化细胞培养提取生物碱可减少对自然资源的破坏 【答案】D 【解析】 【分析】植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（包括微型繁殖、作物脱毒、人工种子等）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。 【详解】A、下胚轴切段需用酒精和次氯酸钠进行灭菌处理，外植体需要消毒而非灭菌处理，A错误； B、过程①发生的是细胞的脱分化，过程②是愈伤组织的扩大培养，不是再分化过程，B错误； C、由无毒下胚轴经组织培养获得的骆驼蓬无毒幼苗只是不带病毒，并不是能抵抗病毒的侵染，C错误； D、由工厂化细胞培养提取生物碱的过程不需要考虑土地资源的消耗，同时也不需要考虑季节、时间的限制，因而可减少对自然资源的破坏，D正确。 故选D。 10. 小胶质细胞参与一系列神经退行性疾病的发生过程，包括阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈症、肌萎缩侧索硬化等。科研人员制备了抗小胶质细胞表面标志蛋白 CD22的单克隆抗体，具体方法如图所示。下列对抗CD22单克隆抗体的制备的分析，不合理的是（ ） A. 步骤①和步骤⑤向小鼠注射的都是CD22 B. 步骤②所用的 SP2/0细胞具有无限增殖的特点 C. 吸取③中的上清液到④的培养孔中后须加入 CD22 进行检测 D. 步骤⑥提取的抗CD22 抗体，可抑制神经退行性疾病的发生 【答案】A 【解析】 【分析】单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的效应B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能产生抗体，又能无限增殖。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原的特异性抗体即单克隆抗体。 【详解】A、要获得抗 CD22单克隆抗体，步骤①应该注射 CD22蛋白（CD22抗原），步骤⑤是将分泌抗 CD22抗体的杂交瘤细胞注入小鼠体内培养，以获得大量单克隆抗体，A错误； B、步骤②所用的 SP2/0细胞是骨髓瘤细胞，特点是能在体外无限增殖，B正确； C、根据抗原—抗体杂交原理，应该用CD22蛋白检测其中是否含抗 CD22蛋白的抗体，因此，步骤④中需加入CD22蛋白进行专一抗体检测，C正确； D、步骤⑥提取的抗CD22 抗体，能与抗小胶质细胞表面标志蛋白 CD22特异性结合，可抑制神经退行性疾病的发生，D正确。 故选A。 11. 抗原检测阴性但临床仍然高度怀疑新冠病毒感染的患者，医生会建议做核酸检测。该检测实际采用的技术是 RT-PCR，病毒刺突蛋白编码序列如下图所示，科研人员为该PCR 分 别设计了引物 A ( 5’-CCCTGTATGGGGTTCTAA - 3') 和 引物B(5'-ACG…ACT①TTA②CTGGTGCAG-3'),已知引物 A 中 ATG 对应起始密码子，引物B中 TTA 对应终止密码子，标记基因可以插入刺突蛋白编码序列的首端或末端。下列叙述正确的是（ ） A. 获取新冠病毒的遗传物质后直接进行 PCR 扩增以节省出报告时间 B. 若标记基因需要插入引物B的①或②位置中，则应选择②位置 C. 用琼脂糖凝胶电泳来鉴定 PCR 后的产物，电泳结束后可在凝胶上直接观察到相应条带 D. 为避免杂菌污染，PCR 实验过程中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行干热灭菌 【答案】B 【解析】 【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。PCR反应过程是：变性→复性→延伸。 【详解】A、新冠病毒是 RNA 病毒，需要先逆转录为DNA 后再进行扩增，A错误； B、引物B中TTA对应终止密码子，标记基因可以插入刺突蛋白编码序列的首端或末端，所以标记基因需要插入引物B的②位置，B正确； C、PCR后需要将凝胶放在紫外灯下才可看到相应条带，C错误； D、为避免外源 DNA 等因素的污染，PCR实验过程中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水必须进行高压灭菌，D错误。 故选B。 12. 胰岛素可用于治疗糖尿病，但胰岛素注射后易在皮下堆积，需较长时间才能进入血液，进入血液后又易被分解，因此治疗效果受到影响。下图是新的速效胰岛素的生产过程，有关叙述错误的是（ ） A. 新的胰岛素的预期功能是构建新胰岛素模型的主要依据 B. 新的胰岛素生产过程中不涉及中心法则 C. 若用大肠杆菌生产新的胰岛素，常用处理大肠杆菌 D. 新的胰岛素功能的发挥必须依赖于蛋白质正确的高级结构 【答案】B 【解析】 【分析】分析题图：图示是利用蛋白质工程设计速效胰岛素的生产过程。蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。蛋白质工程得到的蛋白质一般不是天然存在的蛋白质。 【详解】A、构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键，因此图中合成出新的胰岛素基因最关键的一步是构建新的胰岛素模型，A正确； B、新的胰岛素生产过程中涉及中心法则，B错误； C、若要利用大肠杆菌生产新的胰岛素，常用感受态细胞法提高导入的成功率，常用 Ca2+ 处理大肠杆菌，C正确； D、根据结构与功能相适应的原理分析，新的胰岛素功能的发挥必须依赖于蛋白质正确的高级结构，D正确。 故选B。 【点睛】 13. 野生大豆的SAMS基因具有提高抗逆性的作用。水稻是一种盐敏感型作物，为提高水稻的抗盐碱胁迫能力，研究者将野生大豆的SAMS基因转入水稻细胞内，从而培养出转基因水稻株系，具体过程如图。下列说法错误的是（ ） A. 图示过程中发生了两次转化 B. Ⅰ和Ⅲ都需使用固体培养基 C. Ⅰ中的筛选可使用PCR技术 D. 获得的转基因水稻苗都具备抗盐碱能力 【答案】D 【解析】 【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。 【详解】A、转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，图示过程需要两次转化，分别为，一是将目的基因（SAMS基因）转化质粒的T-DNA分子上，二是指被插入目的基因的T-DNA转化到受体细胞的染色体DNA分子上，A正确； B、Ⅰ筛选含目的基因的农杆菌，需使用固体培养基，Ⅲ为植物组织培养的再分化过程，需要使用固体培养基，B正确； C、PCR技术可用于目的基因和基因表达载体的筛选，C正确； D、SAMS基因具有提高抗逆性的作用，获得的转基因水稻幼苗不一定都具有抗盐碱的能力，所以需要将转基因水稻置于盐碱的环境中，进行筛选与鉴定，D错误。 故选D。 14. 通过引物设计运用PCR技术可以实现目的基因的定点突变如图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5'端分别设计增加限制性内切酶a和限制性内切酶b的识别位点。有关叙述不正确的是（ ） A. 两种引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因的定向插入 B. 一个DNA分子在第2轮PCR后，得到的四个DNA分子各不相同 C. 第2轮PCR，引物1与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因 D. 在第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA占1/4 【答案】C 【解析】 【分析】PCR的原理是DNA双链复制，步骤包括高温变性、复性、延伸。该过程需要耐高温的DNA聚合酶催化，需要四种游离的脱氧核苷酸做原料。根据图中可得，由于引物的一个碱基在不影响与模板链整体配对的前提下不与目的基因配对，再利用PCR技术实现了目的基因的定点诱变，其技术原理是碱基互补配对原则。 【详解】A、引物中设计两种限制酶识别位点，可以配合载体的限制酶识别位点，帮助目的基因定向定点插入运载体，避免发生自身环化，A正确； B、第一、二轮循环合成的子链长度均不同，根据半保留复制特点可知，前两轮循环产生的四个DNA分子的两条链均不等长，一个DNA分子在第2轮PCR后，得到的四个DNA分子各不相同，B正确； C、在第3轮PCR中，物质②是引物2以引物1拓展得到的DNA链为模板进行复制得到的，故引物1能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因，C错误； D、在第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA有2个，总DNA分子共8个，所以比例为1/4，D正确。 故选C。 二、选择题：（每题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选不全对得1分，有选错的得0分） 15. 发酵工程能生产各种酶制剂，如通过黑曲霉发酵能生产淀粉酶。下列说法正确的是（ ） A. 深层通气液体发酵可提高淀粉酶的产量 B. 利用黑曲霉的发酵过程也能生产酱油和柠檬酸 C. 平板划线法分离到的单菌落可直接接种到发酵罐发酵 D. 用过滤、沉淀等方法获得产品是发酵工程的中心环节 【答案】AB 【解析】 【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。具体包括：菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等环节。 【详解】A、黑曲霉属于好氧菌，深层通气液体发酵通过提供充足的氧气和无菌环境，能够促进其代谢活动，从而显著提高淀粉酶的产量，A正确； B、黑曲霉在发酵过程中可以生产柠檬酸（其代谢产物），而酱油的生产虽以米曲霉为主，但黑曲霉也可能参与部分酱油发酵（如辅助分解原料），B正确； C、平板划线法分离到的单菌落需进行扩大培养，再接种到发酵罐中进行发酵生产，C错误； D、发酵过程是发酵工程的中心环节，发酵过程中需要随时取样检测培养液中的细菌数目、产物浓度等，还要及时添加必需的培养基组分，以满足菌种的营养需要。同时还要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件，D错误。 故选AB。 16. 某种物质A（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。图中③将M中的菌液稀释一定倍数后，取0.1mL涂布到平板上，初步估测摇瓶M中1mL菌液中细菌数为2.4×108个。下列说法错误的是（ ） A. 实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌 B. ③接种方法为稀释涂布平板法，涂布时用涂布器蘸取菌液均匀涂布于平板上 C. 乙平板中大小不同的菌落一定是分解菌分解能力不同导致的 D. 若乙平板上菌落数平均为240个，则菌液稀释倍数为105 【答案】ABC 【解析】 【分析】微生物的培养与灭菌：培养基等常用高压蒸汽灭菌法灭菌，但取样的淤泥不能灭菌，否则会杀死目标菌种。  ​ 选择培养基：以物质A为唯一碳源和氮源的培养基，可筛选出能降解A的细菌。固体培养基需添加琼脂等凝固剂。  【详解】A、要从淤泥中分离能高效降解 A 的细菌菌株，图①是淤泥取样稀释，淤泥本身含有菌种，若对其进行灭菌处理，就会杀死其中的目标菌种，所以淤泥不能灭菌；而盛有培养基的摇瓶为了避免杂菌污染，通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，A 错误； B、稀释涂布平板法中，先将涂布器灼烧灭菌，冷却后，取0.1mL稀释后的菌液滴在培养基表面，再用涂布器均匀涂布，不是用涂布器蘸取菌液，B错误； C、乙平板中大小不同的菌落说明分解菌对物质A的分解能力不同，但是乙平板中可能还存在其他分解菌，也可能是不同分解菌所形成的菌落大小不同，C错误； D、已知乙平板上长出的菌落数平均为240个，设稀释倍数为a。摇瓶M中1mL 菌液中细菌数为2.4×108个，每个平板上涂布的是0.1mL 稀释后的菌液。根据公式：每毫升原液中的细菌数 =（平均菌落数×稀释倍数）÷涂布的菌液体积，可列出等式 240×a÷0.1=2.4×108， a=105，D正确。 故选ABC。 17. 提取细菌中质粒时常通过调节pH使DNA先变性再复性，拟核DNA分子因为无法复性与其他较大的分子沉淀下来，质粒可以复性与其他小的核酸分子留在上清液中。下列说法错误的是（ ） A. DNA变性过程中会发生氢键的断裂 B. 提取液中应加入一定量的核糖核酸水解酶 C. 将提取液中的质粒加乙醇析出后，可以再溶于2mol/L的NaCl溶液中 D. 通过电泳分离质粒时，待分离的质粒越大，配置的琼脂糖溶液浓度越高 【答案】D 【解析】 【分析】DNA的鉴定：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。DNA不容易酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离。 【详解】A、DNA 变性是指 DNA 双链解开成为单链的过程，此过程中氢键会断裂，A正确； B、提取细菌中质粒时，为防止 RNA 对实验的干扰，提取液中应加入一定量的核糖核酸水解酶来水解 RNA，B正确； C、DNA不容易酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，将提取液中的质粒加乙醇可溶解一些蛋白质（杂质），DNA在适宜浓度的氯化钠溶液（如2mol/L）中溶解度大，因此将质粒析出后可以再溶于2mol/L的NaCl溶液中，C正确； D、通过电泳分离质粒时，待分离的质粒越大，配置的琼脂糖溶液浓度应较低，这样大质粒才更容易在凝胶中迁移，D错误。 故选D。 18. “黑寡妇”蜘蛛吐出的丝强过钢丝，用其吐出的丝织成的布比制造防弹背心所用纤维的强度高很多。科学家把“黑寡妇”蜘蛛体内蜘蛛丝蛋白基因，导入到山羊细胞内，培育出转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器，获得了坚韧程度极强的蜘蛛丝蛋白，取名为“生物钢”，操作过程如下。下列说法错误的是（　　） A. 要在蜘蛛丝蛋白基因序列上游加上能在乳腺中特异性表达的基因的启动子 B. 显微注射将含有蜘蛛丝蛋白基因的表达载体导入山羊的受精卵中，进而发育成“蜘蛛羊” C. “蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产的“生物钢”会造成环境污染 D. 乳腺生物反应器具有产量高、成本低、产品质量好和易提取等优点 【答案】C 【解析】 【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。 【详解】A、启动子具有特异性，在构建基因表达载体时，要在蜘蛛丝蛋白基因序列上游加上能在乳腺中特异性表达的基因的启动子，A正确； B、受精卵的全能性较高，通过显微注射的方法将含有蜘蛛丝蛋白基因的表达载体导入山羊的受精卵中，进而发育成“蜘蛛羊”，B正确； C、“蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产的“生物钢”，可以被生物降解，不会造成环境污染，C错误； D、乳腺生物反应器具有产量高、成本低、产品质量好和易提取等优点，D正确。 故选C。 19. 科研人员构建了可表达J-V5 融合蛋白的重组质粒并进行了检测，其中 V5 编码序列表达标签短肽V5。图乙表示重组质粒正确表达后用抗J蛋白抗体和抗 V5 抗体分别检测相应蛋白的结果。下列说法正确的是（ ） A. 用PCR 法确定J基因是否正确连接到质粒中，图甲中可供选择的引物组合有2种 B. 若b链是J基因转录的模板链，则可推知引物F1与图甲中J基因a 链相应部分的序列相同 C. 若导入受体细胞的启动子发生甲基化修饰，则可以抑制 DNA 聚合酶对启动子的识别和结合 D. 图乙条带 1 表明细胞内表达了 J-V5 融合蛋白，条带 2 所检出的蛋白不是由重组质粒上的J基因表达的 【答案】ABD 【解析】 【分析】 基因表达载体的结构：启动子：是RNA聚合酶识别和结合的位点，用于驱动RNA转录；终止子：使转录停止的“信号灯”；标记基因：便于重组DNA分子的筛选；目的基因；复制原点。 【详解】A、用PCR 法确定J基因是否正确连接到质粒中，需使用相应的引物，如果出现J基因相关的PCR产物，则说明成功连接，图甲中可供选择的引物组合有2种：F1、R2或F2、R1，A正确； B、b是模板链，而根据图上启动子和终止子的位置可知转录方向是图上从左向右，对应的模板链方向应该是3’-5'，非模板链（也就是a链）是5'-3'；考虑到DNA复制的方向是子链的5’-3'，引物基础上延伸的方向肯定是5'-3'，所以引物结合的单链其方向是3'-5'；图中F1是前引物，在左侧，所以其配对的单链是3’-5'的b链，故其序列应该与a链相应部分的序列相同，B正确； C、启动子是转录时RNA聚合酶的结合位点，若导入受体细胞的启动子发生甲基化修饰，则可以抑制 RNA 聚合酶对启动子的识别和结合，C错误； D、图乙条带 1 表明细胞内表达了 J-V5 融合蛋白，条带 2 检测不出短肽V5，说明条带 2 所检出的蛋白不是由重组质粒上的J基因表达的，D正确。 故选ABD。 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 20. 饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。 （1）培养基中除了添加____、____以外，应含有碳源、氮源、水、无机盐等基本营养物质。 （2）接种前进行的一系列操作，目的是____。统计平板上的菌落数，就能大致推测出样品中的活菌数。通常每种稀释液需涂布3个平板，取其平均值，若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1mL涂布培养后获得平均值是28，则1g土壤中含有此菌的菌株数是____。该方法统计获得的菌落数比实际的活菌数____，原因是____。 （3）若要对上述菌株进行进一步纯化，通常使用的划线工具是____；接种时，在第一区域划线后须将该工具____后再划线。 （4）产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示A—E五种菌株中，____是产植酸酶最理想的菌株。 【答案】（1） ①. 植酸钙 ②. 琼脂 （2） ①. 在固体培养基表面形成单菌落 ②. 2.8×107 ③. 低 ④. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 （3） ①. 接种环 ②. 灼烧、冷却 （4）E 【解析】 【分析】平板划线法：①将接种环放到火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。②在火焰旁冷却接种环。同时，拔出试管的棉塞。③将试管口通过火焰。④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞。⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线，注意不要将最后一次划线与第一次的相连。 稀释涂布平板法：①将土样放进盛有无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。②取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。③将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。④将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。⑤用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 【小问1详解】 科研人员要从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株，所以培养基要添加植酸钙，按照图示，选用培养基应为固体培养基，应该加入琼脂。 【小问2详解】 由于土壤中细菌数量庞大，必须要对土样进行充分稀释，再将菌液涂布到制备好的选择培养基上，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，统计平板上的菌落数，就能大致推测出样品中的活菌数。将1g土壤放进99mL的无菌水，再经过3次10倍的稀释，最后取0.1mL进行涂布，获得平均值是28，则培养基上的活菌数已经经过105倍稀释，1g土壤中含有此菌的菌株数是28×105÷0.1=2.8×107。该方法统计获得的菌落数比实际的活菌数低，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 【小问3详解】 若要对上述菌株进行进一步纯化，通常使用的方法是平板划线法，使用的划线工具是接种环；接种时，在第一区域划线后，为了避免被接种环上的菌影响，需要将接种环灼烧、冷却后再划线。 【小问4详解】 产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶，在五种菌株中，E的透明区域最大，说明产植酸酶最多，是产植酸酶最理想的菌株｡ 21. 为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物（ADC），过程如图1所示。 （1）本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自_________。 （2）步骤①常用方法包括_________融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。其中灭活病毒诱导融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与_________发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质和脂质分子重新排布，_________，细胞发生融合。 （3）步骤②的细胞必须经过步骤③克隆化培养和_________才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，符合要求的杂交瘤细胞的特点是________。杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行______培养的方式进行扩大培养。 （4）研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。 ①单克隆抗体除可以运载药物外，还有_________等作用。（答出2点即可） ②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致_________。 （5）与直接使用抗肿瘤药物相比，构建抗体—药物偶联物（ADC），对人体的副作用更小，原因是_________。 【答案】（1）人的乳腺癌细胞 （2） ①. PEG ②. 细胞膜上的糖蛋白 ③. 细胞膜打开 （3） ①. 抗体检测 ②. 既能大量增殖，又能产生特定抗体 ③. 体外 （4） ①. 作为诊断试剂、治疗疾病 ②. 癌细胞凋亡 （5）将药物送到肿瘤部位，对肿瘤进行特异性杀伤 【解析】 【分析】由图1可知，①表示动物细胞的融合，②表示筛选杂交瘤细胞，③表示克隆化培养和专一抗体检测。由图2可知，ADC不识别正常细胞，识别并结合乳腺癌细胞。 【小问1详解】 要生产乳腺癌的单克隆抗体，应该选择乳腺癌细胞作为抗原对小鼠进行免疫处理。 【小问2详解】 ①表示动物细胞的融合，常用化学药物PEG处理，诱导细胞融合；病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 【小问3详解】 ②表示筛选杂交瘤细胞，杂交瘤细胞产生的抗体不一定是需要的，故需要进行③克隆化培养和抗体检测；杂交瘤细胞具有无限增殖，且能产生特定抗体的特点；杂交瘤细胞可以在体外或小鼠腹腔内培养。 【小问4详解】 ①ADC中的单克隆抗体能精确地定位乳腺癌细胞，让药物作用于乳腺癌细胞，而不是正常的细胞，可以降低乳腺癌治疗药物的副作用，这个过程依赖于特异性的抗原与抗体反应，可以有效地治疗疾病；单克隆抗体还可以作为诊断试剂，如检测相关基因有没有表达成蛋白质，或检测抗原的有无。 ②由图可知，ADC进入乳腺癌细胞，溶酶体可以将ADC水解，释放出的药物进入细胞质基质，最终作用于细胞核，引起乳腺癌细胞的凋亡。 【小问5详解】 因为将药物送到肿瘤部位，对肿瘤进行特异性杀伤（靶点清楚，毒副作用小），故与直接使用抗肿瘤药物相比，构建抗体—药物偶联物（ADC），对人体的副作用更小。 22. 某植物的A基因是一个受低温等因素诱导表达的基因，其表达产物A蛋白是该种植物获得耐寒性不可或缺的一种防冷冻蛋白。科研小组欲利用A基因培育转基因抗冻番茄新品种。A基因上的两个限制酶切割位点及载体结构如图所示，回答下列问题： （1）研究人员用限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为，用限制酶SmaⅠ切出的末端Ⅱ为，请依次写出这两种限制酶的识别序列，并用箭头标出切割位点______、_______。 （2）利用PCR扩增目的基因时，需加入两种引物，引物的作用是_______图中启动子的作用是______。 （3）A基因转录时以图一中α链为模板链，mRNA自身的延伸方向为5'→3'。A基因应插入图二中_____（填“启动子甲”或“启动子乙”）的下游，并且酶切位点______（填“1”或“2”）离该启动子更近些。 （4）为使甘蓝具有抗除草剂能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。回答下列问题： a.草甘膦抗性基因一条链的两端序列如图1所示，采用PCR 技术获取和扩增草甘膦抗性基因时应选用的2种引物序列是______（标出5'端和  3'端）。若初始加入1个草甘膦抗性基因，则历经 4 次 PCR 循环需要消耗引物数量为______个。 b.图2中步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加______以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。添加此抗生素而不选用添加另一种抗生素筛选的原因______。 c.若要检测转基因甘蓝植株是否产生抗除草剂蛋白，所用的方法是______。 【答案】（1） ①. ②. （2） ①. 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 ②. RNA 聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 （3） ①. 启动子乙 ②. 2 （4） ①. 5′-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3' ②. 30 ③. 潮霉素 ④. 由图可知潮霉素抗性基因在T-DNA片段中，卡那霉素抗性基因不在T-DNA片段中，所以潮霉素抗性基因可随T-DNA转移到被侵染的细胞，并且随其整合到该细胞的染色体DNA上，从而使含目的基因的甘蓝植株有抗潮霉素的抗性，所以能在含潮霉素的培养基上筛选含目的基因的甘蓝植株 ⑤. 抗原-抗体杂交 【解析】 【小问1详解】 由题干可知，限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为 ，可推知该酶的切割位点位于碱基G和碱基A之间，与之对应形成的另一黏性末端为； 两末端重新连接成，即为限制酶EcoRⅠ的识别序列；限制酶SmaⅠ切出的末端Ⅱ为平末端，可推知该酶在识别序列的中心轴线两侧进行切割，因此其识别序列为。 【小问2详解】 进行PCR时所用引物是根据一段已知目的基因的碱基序列设计的，它可以使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。图中启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录。 【小问3详解】 图二中启动子乙是受低温等因素诱导表达的启动子，因此A基因应插入启动子乙下游。由于A基因转录时以图一中α链为模板链（其左侧是5'端，右侧是3'端），且mRNA自身的延伸方向为5'→3'，因此可判断A基因转录时从基因A的右侧（即酶切位点2）开始转录的，因此右侧即酶切位点2应该离启动子较近。 【小问4详解】 a.图所示碱基序列磷酸端为5'端，羟基端为3'端，在进行PCR操作时，引物应分别与基因两条链的3'端结合，根据图中两端序列可推知选用的2种引物序列是5'-CTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTAAT-3'，若初始加入1个草甘膦抗性基因，则历经4次PCR循环可形成16个DNA分子，其中原有2条母链的没有引物，其余子链都有引物，故需要消耗引物数量为15×2=30个。 b.图2中步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加潮霉素以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。由图可知潮霉素抗性基因在T-DNA片段中，卡那霉素抗性基因不在T-DNA片段中，所以潮霉素抗性基因可随T-DNA转移到被侵染的细胞，并且随其整合到该细胞的染色体DNA上，从而使含目的基因的甘蓝植株有抗潮霉素的抗性，所以能在含潮霉素的培养基上筛选含目的基因的甘蓝植株。 c.对草甘膦抗性基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到蛋白质工程。检测转基因甘蓝植株是否产生抗除草剂蛋白，可以用抗原-抗体杂交的方法。 23. 人参和西洋参是五加科人参属的药用植物，它们含有的人参皂苷具有抗肿瘤等作用。科研人员选用人参和西洋参有性杂交获得的杂种胚细胞以及人参种子胚、西洋参种子胚的愈伤组织进行悬浮细胞培养，建立其单细胞株系并对三者的部分特性进行比较研究，下图1是主要流程： （1）过程④优化悬浮细胞培养体系，最重要的条件是蔗糖浓度的筛选，蔗糖浓度过低和过高均不利于悬浮细胞的培养，原因是____。 （2）科研人员研究了三种愈伤组织中的人参皂苷Re、Rg3、Rb1和M-Rb1含量，结果见图2，其中Re具有治疗心肌缺血的功能，Rg3具有抗癌作用。若要获得具有抗癌作用的药物应优先选择____的愈伤组织。 （3）科研人员继续研究了Rg3和常见的化疗药物5-FU对肿瘤的抑制效果： ①首先培养胃癌细胞，培养液中加入胎牛血清的目的是____。培养条件中5%CO2的作用是____，温度为37℃。将准备好的胃癌细胞悬浊液皮下接种小鼠裸鼠，每只裸鼠接种0.1mL细胞悬浊液。接种后2周可见背部长出肿块，证明接种成功。 ②将上述40只裸鼠随机分为四组，生理盐水组对照组、5-FU组、Rg3组和5-FU+Rg3组（联合给药组）。各组均采用腹腔注射给药，给药前测定肿瘤的体积，给药后每2日测量1次肿瘤体积。请根据图3写出计算肿瘤体积变化的公式：____。根据实验结果可以得出的结论有____。 【答案】（1）蔗糖浓度过低不能给细胞提供足够的碳源和能源，过高会造成渗透压过高细胞失水死亡 （2）人参（种子胚） （3） ①. 补充未知的营养物质 ②. 维持培养液的pH  ③. 给药后肿瘤体积/给药前肿瘤的体积 ④. 5-FU和Rg3均能抑制肿瘤生长，5-FU和Rg3联合给药效果更好  【解析】 【分析】植物的组织培养指的是在无菌的条件下，将植物的茎尖、茎段或是叶片等切成小块，培养在特制的培养基上，通过细胞的增殖和分化，使它逐渐发育成完整的植物体。 【小问1详解】 过程④优化悬浮细胞培养体系，最重要的条件是蔗糖浓度的筛选，蔗糖浓度过低不能给细胞提供足够的碳源和能源，过高会造成渗透压过高细胞失水死亡； 【小问2详解】 由图可知，Rg3具有抗癌作用，若要获得具有抗癌作用的药物应优先选择人参（种子胚）的愈伤组织； 【小问3详解】 ①首先培养胃癌细胞，培养液中加入胎牛血清的目的是补充未知的营养物质。培养条件为5%CO2，作用是维持培养液的pH； ②将上述40只裸鼠随机分为四组，生理盐水组对照组、5-FU组、Rg3组和5-FU+Rg3组（联合给药组）。各组均采用腹腔注射给药，给药前测定肿瘤的体积，给药后每2日测量1次肿瘤体积。根据图3计算肿瘤体积变化的公式：给药后肿瘤体积/给药前肿瘤的体积。根据实验结果，分析图像，可以得出的结论有5-FU和Rg3均能抑制肿瘤生长，5-FU和Rg3联合给药效果更好。 24. 水体中的雌激素能使斑马鱼细胞产生E蛋白，激活卵黄蛋白原（vtg）基因的表达，因此斑马鱼可用于监测环境雌激素污染程度。为了实现可视化监测，科学家将图1中的vtg基因与图2中Luc基因载体连接，形成vtg-Luc基因重组载体，成功培育了转基因斑马鱼，当极微量雌激素污染水体，斑马鱼的肝脏就发出荧光。Luc表示荧光素酶基因（无启动子），Kanr为卡那霉素抗性基因，ori为复制起点，BamHI、BclI、HindIII、BsrGI为限制酶，→表示转录方向。 注：图1DNA片段不含有图2所示限制酶的识别序列 （1）为使vtg基因与Luc基因载体形成重组载体，选用限制酶_________切割Luc基因载体可降低“空载”概率。通过PCR技术获取vtg基因时，需设计合适的引物。依据图示信息，推测引物1包含的碱基序列为5′_________3′。（写出已知的所有碱基序列） （2）将“vtg-Luc基因重组载体”导入大肠杆菌中进行扩增，为便于筛选，应将大肠杆菌接种在含_________的培养基中，转基因成功的斑马鱼只在肝脏中发出荧光指示污染，其原因是_________。 （3）Luc基因载体上有一段P2A序列，其功能如图所示，据此推测P2A的作用______。 （4）进一步研究发现，E蛋白能与vtg基因启动子的特定序列结合，启动该基因的表达。已知vtg基因启动子含区域1和区域2，为研究E蛋白的结合位点，设计如下实验：用限制酶将启动子切割成含区域1和区域2的两个片段，将两个酶切片段分别与Luc基因载体连接，连接位点位于Luc基因的上游，形成两种重组载体。将重组载体分别导入斑马鱼的_______，待发育成熟后，往水体中添加________进行检测。 【答案】（1） ①. Bcl I和Hind Ⅲ ②. 5'-TGATCAAACTAT-3' （2） ①. 卡那霉素 ②. vtg基因在肝脏中特异性表达 （3）有助于序列两侧的基因表达成独立的蛋白质 （4） ①. 受精卵 ②. 雌激素和荧光素 【解析】 【分析】基因工程的步骤： （1）提取目的基因：基因组文库中获取、cDNA文库中获取。 （2）目的基因与运载体结合：将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体，首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。 （3）将目的基因导入受体细胞：将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。目的基因的片段与运载体在生物体外连接形成重组DNA分子后，下一步是将重组DNA分子引入受体细胞中进行扩增。 （4）目的基因的检测和表达。 【小问1详解】 由图可知，限制酶BsrGI会破坏Luc，因此不能选择BsrGI，Luc基因载体上存在两个BamHI识别位点，因此不能选择BamHI，为防止目的基因和载体的自身环化和反向连接，因此需选用两种限制酶，即选择BelI、HindIII切割Luc基因载体可降低“空载”概率。根据启动子的位置和基因载体上限制酶的位置，因此需要在引物1上添加限制酶BelI识别序列，因此引物1包含的碱基序列为5′TGATCAAACTAT3′。 【小问2详解】 Kanr为卡那霉素抗性基因做为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，因此为便于筛选，应将大肠杆菌接种在含卡那霉素的培养基中；转基因成功的斑马鱼只在肝脏中发出荧光指示污染，说明vtg基因只在肝脏中特异性表达。 【小问3详解】 由图可知2A肽的作用可使两侧基因形成完整蛋白，即P2A有助于序列两侧的基因表达成独立的蛋白质。 【小问4详解】 可利用显微注射法将目的基因导入动物的受精卵中。由题意可知，在含有雌激素的污水中，转基因斑马鱼可发出荧光，因此可在斑马鱼发育成熟后，往水体中添加雌激素和荧光素检测是否发荧光。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $ 高二第二学期生物四月月考试题 一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。每小题只有一个选项符合。 1. 我国的酿酒技术历史悠久，古人在实际生产中积累了很多经验。《齐民要术》记载：“世人云：米过酒甜，此乃不解法候。酒冷沸止，米有不消者，便是曲势尽。”下列有关叙述正确的是（ ） A. “米过酒甜”是因为米中糖类物质过量，发酵停止时仍未被完全消耗 B. “酒冷沸止”说明微生物的代谢产热和释放CO2逐渐停止 C. “曲势尽”的原因可能是米酒中pH或酒精含量升高 D. 酿制米酒所用的酒曲中，微生物的呼吸类型为兼性厌氧型 2. 瘤胃是牛、羊等反刍动物具有的特殊的器官，其中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。已知刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员对瘤胃中的纤维素分解菌进行了分离、鉴定，过程如下图所示。下列有关说法正确的是（　　） A. 实验时，盛有水或者培养基的摇瓶通常采用巴氏消毒法进行除菌处理 B. 为分离出纤维素分解菌，甲、乙、丙培养基应以纤维素为唯一营养成分 C. 通过向乙和丁培养基中加入刚果红，可对纤维素分解菌进行鉴定和计数 D. 在甲、乙、丙、丁的培养基表面加入一层无菌石蜡能有效获得目标菌落 3. 我国科学家从北极分离、鉴定出了一种耐冷细菌，过程如下：①接种在人造海水中，15℃条件下振荡培养3h；②梯度稀释后将样品涂布在TYS培养基中，15℃条件下培养7d；③挑取生长菌落，进行划线，15℃条件下培养；④选择不同形态的菌落进行培养、鉴定和保藏。下列叙述错误的是（ ） A. 过程①中的振荡培养可以提高培养液中的溶氧量 B. 过程②中的TYS培养基灭菌前需将pH调至酸性 C. 过程②③使用的接种器具均需灼烧并冷却后接种 D. 涂布后再次划线培养的目的是进一步纯化所得菌种 4. 野生型菌株在基本培养基和完全培养基上均可繁殖，而营养缺陷型菌株只能在完全培养基上繁殖。筛选营养缺陷型菌株时，可将含菌株的一层基本培养基置于两层基本培养基中先进行培养，待出现菌落后，再向上层倾倒一层完全培养基继续培养，该方法称为夹层平板法，如图1所示。研究人员对大肠杆菌的菌种进行诱变后，利用该方法筛选其中的营养缺陷型菌株，结果如图2所示。下列说法正确的是（ ） A. 完全培养基应在灭菌后立即倒入夹层平板中 B. 该实验无需设置未接种的夹层平板作为对照 C. 经培养后，对首次出现的菌落用记号笔标在皿盖 D. 图2中的小型菌落可能为营养缺陷型菌株形成的新生菌落 5. γ-聚谷氨酸（γ-PGA）是由枯草芽孢杆菌分泌的一种多肽分子，可广泛用于医药、食品等领域。科学家利用芦苇水解液对枯草芽孢杆菌进行有氧发酵生产γ-PGA，添加谷氨酸钠会提高γ-PGA的产量，但会造成发酵液黏度增大，溶氧量降低。下列有关说法中错误的是（　　） A. 发酵过程中可根据发酵进程适时补充芦苇水解液 B. 芦苇水解液加入发酵罐中之前可采用高压蒸汽灭菌 C. 添加谷氨酸钠后因菌体生长速率加快而产生更多γ-PGA D. 筛选的性状优良的枯草芽孢杆菌在发酵生产前应进行扩大培养 6. 基因组印记(通过甲基化实现受精卵中来自双亲的两个等位基因一个表达另一个不表达)阻碍了哺乳动物孤雌生殖的实现。某研究团队利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”，然后将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞(类似受精作用)，最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如下图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 体外培养卵母细胞时，为防止污染，需将培养皿置于二氧化碳培养箱中进行培养 B. 甲基化可能会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化处理有利于其表达 C. “孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同 D. 移植后的囊胚进一步扩大，会导致滋养层破裂，胚胎从其中伸展出来 7. 人凝血酶Ⅲ是一种分泌蛋白，可预防和治疗急慢性血栓。重组人凝血酶Ⅲ是世界上首个上市的动物乳腺生物反应器生产的重组蛋白药物，下列说法错误的是（ ） A. 可从人细胞中提取RNA后利用逆转录方法获取目的基因 B. 利用乳腺生物反应器生产人凝血酶Ⅲ属于基因工程的应用 C. 用显微注射技术将表达载体导入乳腺细胞来获得转基因动物 D. 只在动物乳腺细胞中检测到人抗凝血酶Ⅲ基因，不能说明该技术已获得成功 8. 2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如下技术路线。 据图分析下列叙述错误的是（ ） A. 可用梯度离心、紫外线短时间照射等方法在没有穿透卵母细胞透明带的情况下实现去核或使其中DNA 变性失活的目的 B. 为获得较多的卵母细胞，可对捐献者和母亲注射性激素，诱发其卵巢排出更多的成熟卵子 C. “三亲婴儿”和试管婴儿都是通过有性生殖得到的 D. “三亲婴儿”的体细胞中有小于1/2 的 DNA 来自母亲卵母细胞 9. 骆驼蓬主要分布在干旱和半干旱地区，能防风固沙。骆驼蓬合成的多种生物碱具有抗肿瘤作用。科研人员利用骆驼蓬下胚轴进行育苗和生物碱提取，过程如下图。下列说法正确的是（　　） A. 下胚轴切段需用酒精和次氯酸钠进行灭菌处理 B. 过程①和过程②分别发生了细胞的脱分化和再分化 C. 由无毒下胚轴经组织培养获得的骆驼蓬无毒幼苗可抵抗病毒的侵染 D. 由工厂化细胞培养提取生物碱可减少对自然资源的破坏 10. 小胶质细胞参与一系列神经退行性疾病的发生过程，包括阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈症、肌萎缩侧索硬化等。科研人员制备了抗小胶质细胞表面标志蛋白 CD22的单克隆抗体，具体方法如图所示。下列对抗CD22单克隆抗体的制备的分析，不合理的是（ ） A. 步骤①和步骤⑤向小鼠注射的都是CD22 B. 步骤②所用的 SP2/0细胞具有无限增殖的特点 C. 吸取③中的上清液到④的培养孔中后须加入 CD22 进行检测 D. 步骤⑥提取的抗CD22 抗体，可抑制神经退行性疾病的发生 11. 抗原检测阴性但临床仍然高度怀疑新冠病毒感染的患者，医生会建议做核酸检测。该检测实际采用的技术是 RT-PCR，病毒刺突蛋白编码序列如下图所示，科研人员为该PCR 分 别设计了引物 A ( 5’-CCCTGTATGGGGTTCTAA - 3') 和 引物B(5'-ACG…ACT①TTA②CTGGTGCAG-3'),已知引物 A 中 ATG 对应起始密码子，引物B中 TTA 对应终止密码子，标记基因可以插入刺突蛋白编码序列的首端或末端。下列叙述正确的是（ ） A. 获取新冠病毒的遗传物质后直接进行 PCR 扩增以节省出报告时间 B. 若标记基因需要插入引物B的①或②位置中，则应选择②位置 C. 用琼脂糖凝胶电泳来鉴定 PCR 后的产物，电泳结束后可在凝胶上直接观察到相应条带 D. 为避免杂菌污染，PCR 实验过程中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行干热灭菌 12. 胰岛素可用于治疗糖尿病，但胰岛素注射后易在皮下堆积，需较长时间才能进入血液，进入血液后又易被分解，因此治疗效果受到影响。下图是新的速效胰岛素的生产过程，有关叙述错误的是（ ） A. 新的胰岛素的预期功能是构建新胰岛素模型的主要依据 B. 新的胰岛素生产过程中不涉及中心法则 C. 若用大肠杆菌生产新的胰岛素，常用处理大肠杆菌 D. 新的胰岛素功能的发挥必须依赖于蛋白质正确的高级结构 13. 野生大豆的SAMS基因具有提高抗逆性的作用。水稻是一种盐敏感型作物，为提高水稻的抗盐碱胁迫能力，研究者将野生大豆的SAMS基因转入水稻细胞内，从而培养出转基因水稻株系，具体过程如图。下列说法错误的是（ ） A. 图示过程中发生了两次转化 B. Ⅰ和Ⅲ都需使用固体培养基 C. Ⅰ中的筛选可使用PCR技术 D. 获得的转基因水稻苗都具备抗盐碱能力 14. 通过引物设计运用PCR技术可以实现目的基因的定点突变如图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5'端分别设计增加限制性内切酶a和限制性内切酶b的识别位点。有关叙述不正确的是（ ） A. 两种引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因的定向插入 B. 一个DNA分子在第2轮PCR后，得到的四个DNA分子各不相同 C. 第2轮PCR，引物1与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因 D. 在第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA占1/4 二、选择题：（每题有一个或多个选项符合题目要求，全部选对得3分，选不全对得1分，有选错的得0分） 15. 发酵工程能生产各种酶制剂，如通过黑曲霉发酵能生产淀粉酶。下列说法正确的是（ ） A. 深层通气液体发酵可提高淀粉酶的产量 B. 利用黑曲霉的发酵过程也能生产酱油和柠檬酸 C. 平板划线法分离到的单菌落可直接接种到发酵罐发酵 D. 用过滤、沉淀等方法获得产品是发酵工程的中心环节 16. 某种物质A（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解A。研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解A的细菌菌株。图中③将M中的菌液稀释一定倍数后，取0.1mL涂布到平板上，初步估测摇瓶M中1mL菌液中细菌数为2.4×108个。下列说法错误的是（ ） A. 实验时，淤泥及盛有培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌 B. ③接种方法为稀释涂布平板法，涂布时用涂布器蘸取菌液均匀涂布于平板上 C. 乙平板中大小不同的菌落一定是分解菌分解能力不同导致的 D. 若乙平板上菌落数平均为240个，则菌液稀释倍数为105 17. 提取细菌中质粒时常通过调节pH使DNA先变性再复性，拟核DNA分子因为无法复性与其他较大的分子沉淀下来，质粒可以复性与其他小的核酸分子留在上清液中。下列说法错误的是（ ） A. DNA变性过程中会发生氢键的断裂 B. 提取液中应加入一定量的核糖核酸水解酶 C. 将提取液中的质粒加乙醇析出后，可以再溶于2mol/L的NaCl溶液中 D. 通过电泳分离质粒时，待分离的质粒越大，配置的琼脂糖溶液浓度越高 18. “黑寡妇”蜘蛛吐出的丝强过钢丝，用其吐出的丝织成的布比制造防弹背心所用纤维的强度高很多。科学家把“黑寡妇”蜘蛛体内蜘蛛丝蛋白基因，导入到山羊细胞内，培育出转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器，获得了坚韧程度极强的蜘蛛丝蛋白，取名为“生物钢”，操作过程如下。下列说法错误的是（　　） A. 要在蜘蛛丝蛋白基因序列上游加上能在乳腺中特异性表达的基因的启动子 B. 显微注射将含有蜘蛛丝蛋白基因的表达载体导入山羊的受精卵中，进而发育成“蜘蛛羊” C. “蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产的“生物钢”会造成环境污染 D. 乳腺生物反应器具有产量高、成本低、产品质量好和易提取等优点 19. 科研人员构建了可表达J-V5 融合蛋白的重组质粒并进行了检测，其中 V5 编码序列表达标签短肽V5。图乙表示重组质粒正确表达后用抗J蛋白抗体和抗 V5 抗体分别检测相应蛋白的结果。下列说法正确的是（ ） A. 用PCR 法确定J基因是否正确连接到质粒中，图甲中可供选择的引物组合有2种 B. 若b链是J基因转录的模板链，则可推知引物F1与图甲中J基因a 链相应部分的序列相同 C. 若导入受体细胞的启动子发生甲基化修饰，则可以抑制 DNA 聚合酶对启动子的识别和结合 D. 图乙条带 1 表明细胞内表达了 J-V5 融合蛋白，条带 2 所检出的蛋白不是由重组质粒上的J基因表达的 三、非选择题：本题共5小题，共55分。 20. 饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。 （1）培养基中除了添加____、____以外，应含有碳源、氮源、水、无机盐等基本营养物质。 （2）接种前进行的一系列操作，目的是____。统计平板上的菌落数，就能大致推测出样品中的活菌数。通常每种稀释液需涂布3个平板，取其平均值，若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1mL涂布培养后获得平均值是28，则1g土壤中含有此菌的菌株数是____。该方法统计获得的菌落数比实际的活菌数____，原因是____。 （3）若要对上述菌株进行进一步纯化，通常使用的划线工具是____；接种时，在第一区域划线后须将该工具____后再划线。 （4）产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示A—E五种菌株中，____是产植酸酶最理想的菌株。 21. 为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体—药物偶联物（ADC），过程如图1所示。 （1）本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自_________。 （2）步骤①常用方法包括_________融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。其中灭活病毒诱导融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与_________发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质和脂质分子重新排布，_________，细胞发生融合。 （3）步骤②的细胞必须经过步骤③克隆化培养和_________才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，符合要求的杂交瘤细胞的特点是________。杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行______培养的方式进行扩大培养。 （4）研究发现，ADC在患者体内的作用如图2所示。 ①单克隆抗体除可以运载药物外，还有_________等作用。（答出2点即可） ②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致_________。 （5）与直接使用抗肿瘤药物相比，构建抗体—药物偶联物（ADC），对人体的副作用更小，原因是_________。 22. 某植物的A基因是一个受低温等因素诱导表达的基因，其表达产物A蛋白是该种植物获得耐寒性不可或缺的一种防冷冻蛋白。科研小组欲利用A基因培育转基因抗冻番茄新品种。A基因上的两个限制酶切割位点及载体结构如图所示，回答下列问题： （1）研究人员用限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为，用限制酶SmaⅠ切出的末端Ⅱ为，请依次写出这两种限制酶的识别序列，并用箭头标出切割位点______、_______。 （2）利用PCR扩增目的基因时，需加入两种引物，引物的作用是_______图中启动子的作用是______。 （3）A基因转录时以图一中α链为模板链，mRNA自身的延伸方向为5'→3'。A基因应插入图二中_____（填“启动子甲”或“启动子乙”）的下游，并且酶切位点______（填“1”或“2”）离该启动子更近些。 （4）为使甘蓝具有抗除草剂能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。回答下列问题： a.草甘膦抗性基因一条链的两端序列如图1所示，采用PCR 技术获取和扩增草甘膦抗性基因时应选用的2种引物序列是______（标出5'端和  3'端）。若初始加入1个草甘膦抗性基因，则历经 4 次 PCR 循环需要消耗引物数量为______个。 b.图2中步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加______以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。添加此抗生素而不选用添加另一种抗生素筛选的原因______。 c.若要检测转基因甘蓝植株是否产生抗除草剂蛋白，所用的方法是______。 23. 人参和西洋参是五加科人参属的药用植物，它们含有的人参皂苷具有抗肿瘤等作用。科研人员选用人参和西洋参有性杂交获得的杂种胚细胞以及人参种子胚、西洋参种子胚的愈伤组织进行悬浮细胞培养，建立其单细胞株系并对三者的部分特性进行比较研究，下图1是主要流程： （1）过程④优化悬浮细胞培养体系，最重要的条件是蔗糖浓度的筛选，蔗糖浓度过低和过高均不利于悬浮细胞的培养，原因是____。 （2）科研人员研究了三种愈伤组织中的人参皂苷Re、Rg3、Rb1和M-Rb1含量，结果见图2，其中Re具有治疗心肌缺血的功能，Rg3具有抗癌作用。若要获得具有抗癌作用的药物应优先选择____的愈伤组织。 （3）科研人员继续研究了Rg3和常见的化疗药物5-FU对肿瘤的抑制效果： ①首先培养胃癌细胞，培养液中加入胎牛血清的目的是____。培养条件中5%CO2的作用是____，温度为37℃。将准备好的胃癌细胞悬浊液皮下接种小鼠裸鼠，每只裸鼠接种0.1mL细胞悬浊液。接种后2周可见背部长出肿块，证明接种成功。 ②将上述40只裸鼠随机分为四组，生理盐水组对照组、5-FU组、Rg3组和5-FU+Rg3组（联合给药组）。各组均采用腹腔注射给药，给药前测定肿瘤的体积，给药后每2日测量1次肿瘤体积。请根据图3写出计算肿瘤体积变化的公式：____。根据实验结果可以得出的结论有____。 24. 水体中的雌激素能使斑马鱼细胞产生E蛋白，激活卵黄蛋白原（vtg）基因的表达，因此斑马鱼可用于监测环境雌激素污染程度。为了实现可视化监测，科学家将图1中的vtg基因与图2中Luc基因载体连接，形成vtg-Luc基因重组载体，成功培育了转基因斑马鱼，当极微量雌激素污染水体，斑马鱼的肝脏就发出荧光。Luc表示荧光素酶基因（无启动子），Kanr为卡那霉素抗性基因，ori为复制起点，BamHI、BclI、HindIII、BsrGI为限制酶，→表示转录方向。 注：图1DNA片段不含有图2所示限制酶的识别序列 （1）为使vtg基因与Luc基因载体形成重组载体，选用限制酶_________切割Luc基因载体可降低“空载”概率。通过PCR技术获取vtg基因时，需设计合适的引物。依据图示信息，推测引物1包含的碱基序列为5′_________3′。（写出已知的所有碱基序列） （2）将“vtg-Luc基因重组载体”导入大肠杆菌中进行扩增，为便于筛选，应将大肠杆菌接种在含_________的培养基中，转基因成功的斑马鱼只在肝脏中发出荧光指示污染，其原因是_________。 （3）Luc基因载体上有一段P2A序列，其功能如图所示，据此推测P2A的作用______。 （4）进一步研究发现，E蛋白能与vtg基因启动子的特定序列结合，启动该基因的表达。已知vtg基因启动子含区域1和区域2，为研究E蛋白的结合位点，设计如下实验：用限制酶将启动子切割成含区域1和区域2的两个片段，将两个酶切片段分别与Luc基因载体连接，连接位点位于Luc基因的上游，形成两种重组载体。将重组载体分别导入斑马鱼的_______，待发育成熟后，往水体中添加________进行检测。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $