内容正文:
第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.A 动物细胞融合和植物体细胞杂交都可以跨越种属间的生殖隔离,突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能,A正确;植物体细胞杂交技术不能使用灭活病毒的方法诱导细胞融合,B错误;动物细胞融合技术未体现细胞的全能性,C错误;目前动物细胞融合不能发育成完整个体,D错误。
2.C 动物细胞融合与植物原生质体融合的原理都是细胞膜的流动性,C错误。
3.B M病毒必须寄生在活细胞中才能完成生命活动,故不能用动物细胞培养液培养M病毒,A错误;可用M病毒膜蛋白(抗原)多次免疫小鼠,以获得更多的能产生特异性抗体的浆细胞,B正确;S细胞不是杂交瘤细胞,具有无限繁殖的特点,不具有产生抗体的特点,C错误;体外培养单个杂交瘤细胞由于没有发育成完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能,因此不能体现细胞的全能性,D错误。
4.C 细胞A是从注射NP蛋白的小鼠体内提取的浆细胞,不一定都能够分泌抗NP蛋白的抗体,A错误;制备单克隆抗体需要两次筛选,筛选①是用特殊的培养基筛选杂交瘤细胞,筛选②是用抗原与抗体特异性结合的方法筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞,顺序不能互换,B错误;筛选②应反复多次进行抗体检测和克隆化培养,才能得到大量单克隆抗体,C正确;杂交瘤细胞有癌细胞的特性,不会贴壁生长和接触抑制,D错误。
5.C 选择培养基只能让特定的符合条件的细胞存活下来,在题目给定的选择培养基上,只有杂交瘤细胞才能够存活,C错误。
6.A 由于细胞融合是随机的,因此B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合过程中可能形成同种细胞融合产生的细胞,故还需要筛选才能获得杂交瘤细胞,A错误;杂交瘤细胞具备骨髓瘤细胞和浆细胞的特点,既能无限增殖,也能分泌特定的抗体,B正确;杂交瘤细胞体外培养利用的是动物细胞培养的技术,需要无菌、无毒、充足的营养、适宜的温度和pH等环境,C正确;单克隆抗体具有能准确识别抗原的细微差异、与特定抗原发生特异性结合,并可以大量制备的优点,D正确。
7.B 曲妥珠单抗作用的对象是HER-2,只能抑制由HER-2过量表达而引起的乳腺癌细胞增殖,不能抑制由其他因素引起的乳腺癌细胞增殖,A错误;由于抗体和受体的结合具有竞争性,因此曲妥珠单抗对乳腺癌的治疗效果与抗体的浓度密切相关,B正确;制备曲妥珠单抗时应将骨髓瘤细胞和已免疫的B淋巴细胞融合,C错误;选择培养基上能筛选出杂交瘤细胞,但是筛选的杂交瘤细胞不一定能产生抗HER-2抗体,D错误。
8.C 据图可知,固相抗体与抗原发生特异性结合后可固定抗原,酶标抗体是抗体和酶的结合,抗体与固定的抗原发生特异性结合,因此酶联免疫吸附双抗体夹心法的原理是抗原和抗体反应的特异性,A正确;根据抗原—抗体特异性结合的特点,酶联免疫吸附双抗体夹心法可以用于检测某些特定蛋白质,B正确;酶标抗体与固相抗体二者不会结合,二者均可与抗原结合,C错误;分析图中过程可知,两种抗体与检测的抗原均能结合,但结合部位是不同的;该检测方法中,酶标抗体与固定的抗原结合,抗原数量越多,被结合的酶标抗体越多,酶催化特定底物反应形成的产物量也越多,因此可通过测定产物量来判断待测抗原量,D正确。
9.C 多克隆抗体是通过向动物体内注射特定抗原,然后从动物血清中收集得到的抗体混合物,其中包含多种针对该抗原不同结合位点的抗体;而单克隆抗体是由单个B淋巴细胞克隆形成的细胞群所产生的,只作用于某一特定抗原的一个结合位点,只有一种抗体,A、B正确。多克隆抗体的获得是直接从注射特定抗原后的动物血清中收集纯化得到,需要特定抗原筛选;单克隆抗体的制备过程中至少经历了两次筛选,一次是筛选出杂交瘤细胞,另一次是筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,C错误。多克隆抗体药物的制备相对简单,生产周期短,生产成本低;而单克隆抗体药物的制备过程复杂,生产周期长,成本高,D正确。
10.A 三特异性抗体指的是一种抗体,通过蛋白质工程构建三特异性抗体的基因表达载体,然后获得相应的杂交瘤细胞,最终获得三特异性抗体,不是三种单抗组成的,A错误;小鼠多发性骨髓瘤(MM)细胞是癌细胞,其基因发生突变后会合成CD38,正常小鼠的组织细胞中不表达,B正确;从图中看出,三特异性抗体能促进T细胞活化产生并释放细胞因子,细胞因子会促进T淋巴细胞的活化,从而提高机体对MM细胞的杀伤力,C正确;从图中看出,一方面三特异性抗体与T细胞膜上的CD28结合,抑制T细胞死亡,从而使T细胞维持一定数量,另一方面特异性抗体与T细胞膜上的TCR结合,促进T细胞活化,所以三特异性抗体与TCR和CD28结合可保持较高的T细胞数量和活性,D正确。
11.AB 由图可知,ADC通过胞吞作用进入肿瘤细胞,需要消耗能量,不需要载体蛋白,但需要膜上蛋白质的参与,A错误;ADC能对肿瘤细胞进行选择性杀伤是因为抗体能特异性识别肿瘤细胞表面的抗原,B错误;制备单克隆抗体时,第二次筛选是进行克隆化培养和抗体检测,是从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞,C正确;同位素标记可用于示踪物质的运行和变化规律,且ADC中的单克隆抗体能特异性识别肿瘤细胞表面的抗原,因此可将ADC中的药物换成放射性同位素标记单克隆抗体用于定位诊断肿瘤细胞,进行靶向治疗,D正确。
12.ACD ①向小鼠注射A抗原获得能产生相应抗体的B淋巴细胞,A正确;分析题意,EBV转化细胞能够在选择培养基X中存活,骨髓瘤细胞在选择培养基X中不能存活,故③用选择培养基X筛选出EBV转化细胞和骨髓瘤细胞融合的细胞,B错误;分析题意,用EBV(一种病毒颗粒)感染,获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞,由此可知,用EBV感染a细胞,⑤过程中可持续获得抗A抗原的单克隆抗体,C正确;杂交瘤细胞在传代培养时,来自B淋巴细胞的染色体往往会随机丢失,从而导致得到的杂交瘤细胞不能产生抗体,故若未用EBV感染a细胞,通过研究g中的细胞可对抗体基因初步定位,D正确。
13.(1)B淋巴 抗原 既能产生专一抗体,也能无限增殖 (2)液体培养基 动物血清 (3)特异性强、灵敏度高、能大量制备
解析:(1)单克隆抗体制备的过程:对小动物注射抗原,从该动物的脾脏中获取B淋巴细胞,将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞,克隆化培养杂交瘤细胞(体内培养和体外培养),最后获取单克隆抗体,图中A过程从小鼠的脾脏中取得的是已经免疫的B淋巴细胞,提取之前注射的物质相当于抗原;杂交瘤细胞具有既能产生专一抗体,也能无限增殖的特点。(2)体外培养杂交瘤细胞的培养基是液体培养基,而用于植物组织培养的培养基是固体培养基;前者还需要加入动物血清等,以保证动物细胞的正常生长。
14.(1)获得更多分泌抗CD47抗体的B淋巴细胞 (2)95%空气加5%CO2 清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害 (3)特定的选择培养基 (专一)抗体检测 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的 能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并且可以大量制备 (4)动物细胞培养、动物细胞融合 (5)不加单克隆抗体的巨噬细胞+肿瘤细胞共培养体系 实验组中吞噬细胞的吞噬指数显著高于对照组
解析:(1)步骤①是向小鼠体内注射特定的抗原,多次向免疫动物注射抗原CD47的目的是获得更多分泌抗CD47抗体的B淋巴细胞。(2)动物细胞培养时通常采用培养皿或松盖培养瓶,将其置于含有95%空气加5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。动物细胞培养的过程中,要保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境中,为防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害,培养液需定期更换。(3)图中②使用特定的选择培养基筛选融合的杂交瘤细胞,未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞死亡,③用(专一)抗体检测(抗原—抗体杂交)的方法筛选出能产生抗CD47抗体的杂交瘤细胞。得到的杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的优点是能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并且可以大量制备。(4)杂交瘤细胞需通过动物细胞培养技术,在合适的培养体系中大量增殖,才能持续产生足够的单克隆抗体;通过动物细胞融合技术,使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,让其兼具产生抗体和无限增殖的能力,从而为单克隆抗体的制备提供了可行的细胞来源,即制备单克隆抗体涉及的细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合。(5)该实验的自变量为是否含有单克隆抗体,故实验组为加单克隆抗体的巨噬细胞+肿瘤细胞共培养体系,对照组应设置为不加单克隆抗体的巨噬细胞+肿瘤细胞共培养体系,由于实验组中加入了单克隆抗体,抗体与肿瘤细胞表面的CD47发生特异性结合,从而解除CD47对巨噬细胞的抑制作用,而对照组中没有加入单克隆抗体,不能与肿瘤细胞表面的CD47结合,因而无法解除CD47对巨噬细胞的抑制作用,因此若实验组中吞噬细胞的吞噬指数显著高于对照组可验证题述推测。
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第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体
知识点一 动物细胞融合技术
1.(2025·湖南永州开学考试)对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术,下列相关叙述正确的是( )
A.两者都可以跨越种属间的生殖隔离
B.均可使用PEG、电激或灭活病毒的方法诱导细胞融合
C.两者都可以体现细胞的全能性
D.在适宜的条件下,均可发育成完整个体
2.(2025·河北保定期中)下列关于动物细胞融合技术的叙述,错误的是( )
A.细胞融合技术能应用于细胞遗传、细胞免疫等研究
B.动物细胞融合的成功是细胞膜具有流动性的有力证据
C.动物细胞融合的基本原理与植物原生质体融合的基本原理不同
D.除了化学法和物理法外,动物细胞融合还可以用灭活病毒诱导法
知识点二 单克隆抗体及其应用
3.研究者将M病毒膜蛋白注射小鼠,分离小鼠脾细胞并将其与S细胞融合,通过筛选获得单个稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。下列相关叙述正确的是( )
A.用完全培养液培养M病毒,通过离心可获得膜蛋白作为抗原
B.可用M病毒膜蛋白多次免疫小鼠,以获得更多的浆细胞
C.S细胞应具备产生抗体和无限增殖的能力
D.体外培养单个杂交瘤细胞获得大量抗体体现了细胞的全能性
4.(2025·黑龙江哈尔滨期末)埃博拉病毒(EBOV)是一种能导致人类等脊椎动物出血热的致死性病毒,对公共卫生具有较严重的危害。EBOV的NP蛋白在病毒复制中具有重要作用。实验小组用NP蛋白免疫小鼠,获得了一株小鼠抗EBOV-NP的单克隆抗体,其过程如图所示。下列相关说法正确的是( )
A.细胞A是浆细胞,都能分泌抗NP蛋白的抗体
B.制备单克隆抗体时筛选①和筛选②可互换顺序
C.筛选②应反复多次进行抗体检测和克隆化培养
D.杂交瘤细胞培养过程中会出现明显的接触抑制
5.如图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程,下列有关叙述不正确的是( )
A.图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原
B.利用PEG融合法、灭活病毒诱导法和电融合法等均可诱导细胞融合获得乙
C.用特定的选择培养基对乙筛选,融合细胞均能生长,未融合细胞均不能生长
D.丙需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体的丁
6.单克隆抗体在疾病诊断治疗和病原体鉴定中发挥重要作用。下列叙述错误的是( )
A.B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后就获得了杂交瘤细胞
B.杂交瘤细胞能无限增殖,也能分泌特定的抗体
C.杂交瘤细胞体外培养需要无菌、无毒的环境
D.单克隆抗体能准确地识别抗原并与其特异性结合
7.(2025·河南安阳期末)曲妥珠单抗是抗人表皮生长因子受体-2(HER-2)的单克隆抗体,它与人表皮生长因子竞争性结合乳腺癌细胞膜表面的HER-2,从而阻断癌细胞的生长。下列有关说法正确的是( )
A.曲妥珠单抗能抑制各种因素引起的乳腺癌细胞增殖
B.曲妥珠单抗对乳腺癌的治疗效果与抗体浓度密切相关
C.制备曲妥珠单抗时应将骨髓瘤细胞和记忆B细胞融合
D.选择培养基可筛选出产生抗HER-2抗体的杂交瘤细胞
8.(2025·辽宁七校联考)酶联免疫吸附双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法,具体原理如图所示,下列说法错误的是( )
A.酶联免疫吸附双抗体夹心法的原理是抗原和抗体反应的特异性
B.酶联免疫吸附双抗体夹心法可以用于检测某些特定蛋白质
C.当待测液中存在抗原时,酶标抗体才能与固相抗体特异性结合
D.可通过测定产物的量来判断待测抗原量
9.图示多克隆抗体的制备流程。下列有关多克隆抗体与单克隆抗体的比较,错误的是( )
A.多克隆抗体是从动物血清中获得的抗体混合物,单抗只有一种抗体
B.多克隆抗体可以识别同一抗原的不同结合位点,单抗只识别抗原的一个结合位点
C.多克隆抗体的获得无须筛选,单抗制备的过程中至少经历两次筛选
D.与单抗药物的制备相比,制备多克隆抗体药物的生产周期短,生产成本低
10.(2025·吉林长春期中)研究发现三特异性抗体可实现对小鼠多发性骨髓瘤(MM)细胞的选择性杀伤,作用机理如图所示。下列叙述错误的是( )
A.同时给小鼠注射三种抗原,可刺激小鼠浆细胞分泌三特异性抗体
B.正常小鼠的组织细胞中不会大量表达CD38
C.三特异性抗体通过T细胞的活化并释放细胞因子提高对MM的杀伤力
D.三特异性抗体与CD28结合抑制T细胞的死亡,从而使T细胞维持一定数量
11.〔多选〕(2025·河北保定期末)抗体—药物偶联物(ADC)能对肿瘤细胞进行选择性杀伤,该物质由抗体、药物(如细胞毒素)和接头三部分组成,其作用机制如图所示。下列叙述错误的是( )
A.ADC通过胞吞进入肿瘤细胞,需要消耗ATP但不需要蛋白质的参与
B.ADC中药物的特异性是ADC能选择性作用于肿瘤细胞的关键
C.制备ADC中的单克隆抗体时,第2次筛选是从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞
D.可以将ADC中的药物换成放射性同位素标记单克隆抗体,进行靶向放疗
12.〔多选〕(2025·辽宁大连期末)在制备抗A抗原的单克隆抗体过程中,杂交瘤细胞在传代培养时,来自B淋巴细胞的染色体往往会随机丢失。为解决此问题,研究者将经A抗原刺激后的B淋巴细胞,用EBV(一种病毒颗粒)感染,获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞。EBV转化细胞能够在选择培养基X中存活,但对乌本苷(Oua)敏感,骨髓瘤细胞在选择培养基X中不能存活,对Oua不敏感。下图表示部分操作过程,①~⑤代表相关过程,a~g代表相关细胞。不考虑基因互作和其他变异。下列叙述正确的是( )
A.①向小鼠注射A抗原获得a细胞
B.③用选择培养基X筛选融合的杂交瘤细胞
C.用EBV感染a细胞,⑤过程中可持续获得抗A抗原的单克隆抗体
D.若未用EBV感染a细胞,通过研究g中的细胞可对抗体基因初步定位
13.(2025·湖南岳阳颐华高级中学月考)“生物导弹”是免疫导向药物的形象称呼,由单克隆抗体与药物结合而成。单克隆抗体能自动导向,在生物体内与特定细胞或组织结合,并由其携带的药物产生治疗作用。单克隆抗体的制备过程如图所示,分析回答下列问题:
(1)图中A过程是从小鼠的脾脏中取得的 细胞,提取该细胞之前,给小鼠注射的特定物质相当于 ;B过程最终得到的杂交瘤细胞的特点是
。
(2)体外培养杂交瘤细胞的培养基与用于植物组织培养的培养基在物理性质上的主要区别是前者要用 ,从培养基的成分来看,前
者培养基中除了添加必要的营养物质外还需要加入一些天然成分,如 。
(3)特异性抗体也可以通过常规方法来制备:向动物体内反复注射某种抗原,使动物产生抗体,然后从动物的血清中分离所需抗体。与这种常规方法相比,单克隆抗体具有 等优点。
14.(2025·山东夏津一中月考)CD47是一种跨膜糖蛋白,它可与巨噬细胞表面的信号调节蛋白结合,从而抑制巨噬细胞的吞噬作用。肺癌、结肠癌等多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6~5倍,导致吞噬细胞对肿瘤细胞的清除效果减弱。科学家推测,抗CD47的单克隆抗体可以解除CD47对巨噬细胞的抑制作用,为此他们按照如下流程进行了实验。
(1)多次进行步骤①的处理目的是
。
(2)实验组中巨噬细胞和肿瘤细胞的共培养体系需置于含有 混合气体的CO2培养箱中,另外培养液需定期更换,原因是 。
(3)图中②、③使用的筛选方法分别是 、 ,第一次筛选淘汰 细胞。得到的杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的优点是
。
(4)制备单克隆抗体涉及的细胞工程技术有 (答出2点)。
(5)对照组应设置为 ,实验结果为 可验证上述推测。
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