第3章 微专题一 限制酶的选择原则(教用Word)-【优学精讲】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程（人教版）

微专题一　限制酶的选择原则

　　限制酶的发现为DNA的切割和功能基因的获得创造了条件。构建基因表达载体中限制酶的选择技巧如下：

1.根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类

（1）选择限制酶应遵循不破坏目的基因的原则

①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。

②不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。

（2）为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择PstⅠ和EcoR Ⅰ两种限制酶（但要确保质粒上也有这两种酶的切位点，如图乙）。

2.根据质粒的特点确定限制酶的种类

选择限制酶应遵循保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择Sma Ⅰ，通常选择与切割目的基因相同的限制酶切割质粒，如图中PstⅠ。质粒中限制酶的选择具体情况如下图：

1.图甲、乙中标注了相关限制酶的酶切位点。下列关于培育转基因大肠杆菌的叙述错误的是（　　）