2026届高三生物专项复习：PCR学习任务单

微专题 破解PCR两大难点：引物设计与电泳图谱应用 一、引物的选取和设计 1.（2025四川.T19）用PCR技术从杆菌M2基因组中扩增lrcA-lrcF´目的基因时，应选用________引物。 注：①F1、F2、F3和F4为与相应位置的DNA配对的单链引物，“→”指引物5-3方向。 2.（2025湖南.T21）为确定基因A已连接到质粒中且插入方向正确，应选用图中的一对引物______对待测质粒进行PCR扩增，预期扩增产物的片段大小为______bp。 引物选取总结： 只扩增目的基因用：_____________ 检测目的基因是否正向插入载体用：_____________ 3.（2025陕西.T21）为将S基因正确插入载体，PCR扩增S基因时需在引物的______（填“5'端”或“3'端”）添加限制酶识别序列，结合上表分析，上游引物应添加的碱基序列是5'-____________-3'。 引物设计总结： 4.（2025浙江.T24）3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酵母细胞中甘油合成的关键酶。某假丝酵母菌株具有高活性的GPD，目前已测得其基因部分序列如图，而两侧的序列完全未知，能否利用图中给定的引物，把两侧未知的序列也大量扩增出来呢？请提出你的思路。 未知序列 未知序列 GPD基因已知序列 5＇ 3＇ 3＇ 5＇ 3＇ 引物1 5＇ 引物3 3＇ 5＇ 引物4 引物2 3＇ 5＇ 5＇ 3＇ 引物3 二、电泳图谱应用 1.（2024江西.T19） （1）图中的M所起的作用是？ （2）能否根据图中的条带判断出电泳的方向？ 2.（2024T8联考T21）突变体水稻a基因（位于9号染色体上）是野生稻A基因内部插入654bp片段形成，且该序列在野生型3 号染色体上亦存在。为探究原因，在3号与9号染色体上该654bp序列外侧各设计一对引物，对野生型及突变体基因组DNA进行PCR，产物电泳结果如图所示。 据图分析突变体水稻N产生的原因？ 注：H2为野生型水稻，N为突变体水稻 3.（2025江西.T21）引物对1和引物对2分别可扩增A/a、B/b全部序列。下图是对纯合亲本甲、乙、丙和F2某个体PCR后电泳的结果。已知图中①为甲（双显性），②为乙（单显性），④为丙（双隐性）。 （1）可判断a基因由A基因发生___________突变形成。 （2）B基因突变为b基因的过程中了发生碱基对的_______。 [双脱氧测序法] 实验原理：在DNA聚合酶、引物、四种单脱氧核苷酸（dNTP）存在的情况下，通过引入少量双脱氧核苷三磷酸（ddNTP），这些ddNTP的3'端缺少羟基，不能与下一个dNTP结合，导致DNA合成在遇到ddNTP时停止。这样，在每个反应系统中，都会合成一系列长度不等的核酸片段，通过电泳分离后，可以根据片段3'端的双脱氧碱基顺序读取合成片段的碱基序列，从而确定DNA的序列。 4.（2025安徽.T19）科研小组采用双脱氧测序法，扩增出野生稻和栽培稻Bh/bh基因的片段，电泳结果见图。 请根据电泳条带写出野生稻Bh基因的部分序列： 野生稻Bh基因部分序列测序图 栽培稻1bh基因部分序列测序图 电泳图谱应用总结 三、巩固提升 （2025吉林.T25）香树脂醇具有抗炎等功效，从植物中提取难度大、产率低。通过在酵母菌中表达外源香树脂醇合酶基因N，可高效生产香树脂醇。回答下列问题。 （1）可从___________中查询基因N的编码序列，设计特定引物。如图1所示，a链为转录模板链，为保证基因N与质粒pYL正确连接，需在引物1和引物2的5'端分别引入_________和________限制酶识别序列。PCR扩增基因N，特异性酶切后，利用______________连接DNA片段，构建重组质粒，大小约9.5kb（kb为千碱基对），假设构建重组质粒前后，质粒pYL对应部分大小基本不变。 （2）进一步筛选构建的质粒，以1-4号菌株中提取的质粒为模板，使用引物1和引物2进行PCR扩增，电泳PCR产物，结果如图2。在第5组的PCR反应中，使用无菌水代替实验组的模板DNA，目的是检验PCR反应中是否有____________的污染。初步判断实验组________（从“1~4”中选填）的质粒中成功插入了基因N，理由是________________________________________________。 学科网（北京）股份有限公司 $