专题03 动物细胞工程（期中真题汇编，黑吉辽蒙专用）高二生物下学期

专题03 动物细胞工程 3大模块高频考点概览 考点01 动物细胞培养 考点02 动物细胞融合技术与单克隆抗体 考点03 动物体细胞核移植技术和克隆动物 地 城 考点01 动物细胞培养 1、 单选题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)在治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。下图为用患者的自体皮肤细胞培养供移植的皮肤过程示意图。下列叙述错误的是（ ） A. 用机械法或用酶解法处理皮肤组织可得到单个细胞 B. 细胞培养时应向合成培养基中加入血清等天然成分 C. 该过程中传代培养获得的细胞可直接用离心法收集 D. 接触抑制是导致原代培养细胞分裂受阻的重要原因 2.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)人成体细胞结构和功能专门化的实质是基因的选择性表达。科学家将人成体细胞在特定的化学小分子组合的作用下经过“重编程”形成了多能干细胞，这种细胞称为人CiPS细胞。下列说法错误的是（　　） A. 特定的化学小分子组合可以诱发成体细胞基因突变实现“重编程” B. 与从早期胚胎中获取的干细胞相比，该方法规避了伦理争议 C. 人CiPS细胞再经诱导后产生特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用 D. 利用病人自身的体细胞形成的CiPS细胞诱导后治疗疾病，可以避免免疫排斥反应 3.(24-25高二下·吉林省松原市吉林油田高级中学·期中)已知某动物细胞培养过程中会发生细胞贴壁现象。下列相关叙述正确的是（ ） A. 对贴壁细胞进行收集时，可直接采用离心法 B. 悬浮培养的细胞会因细胞密度大等因素使细胞分裂受阻 C. 动物细胞培养一般采用固体培养基，并维持一定的气体环境 D. 只有原代培养一传代培养过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 4.(24-25高二下·辽宁省抚顺市六校协作体·期中)取自某动物的组织细胞的培养过程如图所示。下列相关分析错误的是（ ） A. ①过程往往需要用胰蛋白酶或机械法处理切取的组织 B. ②过程所用的培养液中通常要加入动物血清 C. ③过程中的细胞大多数贴附于瓶壁生长 D. ④过程培养的细胞都具有无限增殖的特点 5.(24-25高二下·辽宁省七校协作体·期中)实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 所需培养基是按细胞所需的营养物质种类和量严格配制的 B. 培养细胞1是原代培养，往往会因为细胞密度过大、有害物质积累而分裂受阻 C. 体外培养的细胞既能贴壁生长又能悬浮生长，都会发生接触抑制现象 D. 传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集，无须再用酶处理 6.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布市衡水卓远中学·期中)人脐带间充质干细胞在特定诱导条件下，可分化为脂肪、肝、神经等多种组织细胞。下图表示培养人脐带间充质干细胞的大致过程。下列叙述错误的是（ ） A. 人脐带间充质干细胞属于一种iPS细胞 B. ①过程需要加入胰蛋白酶，将人脐带组织碎块分散成单个细胞 C. ②过程利用离心法收集存在于试管底部的单个细胞 D. ③过程加入的培养液中通常含有血清等天然成分 7.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布北京八中乌兰察布分校·期中)研究人员将大熊猫皮肤成纤维细胞重编程为诱导多能干细胞（iPSCs），这些iPSCs在体外培养下能够分化成各种不同类型的细胞。下列叙述错误的是（　　） A. 大熊猫体内已分化的T细胞也有可能被诱导为iPSCs B. 用皮肤成纤维细胞重编程为iPSCs时可能需借助载体将特定基因导入皮肤成纤维细胞中 C. iPSCs体外分化的过程与细胞内基因表达的调控有关 D. 利用自体iPSCs治疗疾病时，理论上需要注射免疫抑制剂来抑制免疫排斥反应 8.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布北京八中乌兰察布分校·期中)科研人员将取自某遗传性肝病患者的肝细胞通过体外培养、基因修复，获得了基因编辑肝细胞，并将其移植到该患者体内，以治疗遗传性肝病，过程如图所示（CRISPR/Cas9是一种新型的基因编辑工具，能对动物和植物的DNA进行特异性改变，该技术类似于一种特殊的分子剪刀）。下列叙述正确的是（　　） A. 体外培养肝细胞时可用胃蛋白酶处理所取肝组织，将组织分散成单细胞 B. 图中原代肝细胞培养过程中会出现细胞贴壁现象，但不会出现接触抑制现象 C. 需将原代肝细胞置于含有95%氧气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中培养 D. CRISPR/Cas9基因编辑工具可能是将致病基因剪切掉以便替换为正常基因 9.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布市集宁区第二中学·期中)海拉细胞是一种人工培养的具有无限增殖能力的细胞，广泛应用于科学研究，极大程度地推动了医学发展。如图是海拉细胞培养部分过程，下列说法正确的是（ ） A. 培养动物细胞的合成培养基通常需要加入血清等天然成分 B. 甲→乙过程需要用胃蛋白酶或胶原蛋白酶等处理 C. 丙、丁过程中通常会通入O2和CO2的混合气体刺激细胞呼吸 D. 为避免培养过程中的杂菌污染，丙、丁过程中培养瓶盖必须旋紧不漏气 10.(24-25高二下·黑龙江省大庆市铁人中学·期中) 为避免免疫排斥反应、科研人员取供体动物胚胎干细胞，利用基因编辑技术获得重构胚胎干细胞，再经过培养、检测和筛选后，移入受体动物的子宫内进行培养，培养出能提供异体移植器官的供体动物。下列相关说法正确的是（　　） A. 进行动物细胞培养时，需置于含有95%空气和5%氧气混合气体的培养箱中培养 B. 重构胚胎干细胞体外培养时，需要在培养液中加入血清等物质 C. 重构胚胎移入受体之后，对受体进行同期发情处理 D. 经过基因编辑技术改造后的供体器官移植到人体后，一定不会发生免疫排斥反应 11.(24-25高二下·黑龙江省大庆市铁人中学·期中) “细胞培养肉”是一种人造动物蛋白，其培养过程是获取哺乳动物肌肉干细胞，将其培养成肌肉细胞。这意味着人类有望摆脱对传统养殖业的依赖。下列叙述正确的是（　　） A. 获取肌肉干细胞时，用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离 B. 组织块可以用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理一段时间 C. 贴壁细胞在生长繁殖时，会发生接触抑制现象 D. 肌肉干细胞具有与胚胎干细胞相同的全能性 2、 多选题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)如图表示植株A（杂合子Aa）和植株B培育植株①②③④⑤的过程，下列说法错误的是（ ） A. 培育植株①②的过程为单倍体育种，获得的植株都为纯合子 B. 诱变处理获得的植株③与植株A相比性状一定发生改变 C. 图中植株①③④⑤的获得过程都需要应用植物组织培养技术 D. 一定与植株A基因型相同的为植株④（不考虑突变） 2.(24-25高二下·辽宁省抚顺市六校协作体·期中)图1表示我国科学家利用胚胎干细胞建立体外胚胎和研究胚胎发育潜能的流程。人胚胎干细胞存在两种不同状态，即原始态和始发态。原始态干细胞具有最高的发育潜能，始发态干细胞的全能性相对较低。图2是OGT、OGA以及细胞骨架蛋白在胚胎干细胞中表达情况的电泳图谱，OGT是负责在蛋白质上加糖基的酶，OGA是负责将糖基从蛋白质上去除的酶。下列叙述错误的是（ ） A. 过程①类似于愈伤组织再分化过程，即将始发态干细胞转化为原始态干细胞 B. 原始态干细胞只能分化成特定的细胞或组织，需要在其培养基中添加促进胚胎发育的物质 C. 图1中的猴子芽体是桑葚胚，将其导入受体母猴时，无须对受体母猴进行任何处理 D. 根据图2结果推测，原始态干细胞发育潜能高的原因是细胞中的糖基化程度低 地 城 考点02 动物细胞融合技术与单克隆抗体 一、单选题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)下列有关植物体细胞杂交与动物细胞融合的叙述，正确的是（ ） A. 应用的原理都涉及细胞膜具有选择透过性 B. 都需要使用CO2培养箱 C. 都需要对融合后的细胞进行筛选 D. 成功标志都是得到具有双亲优良性状的杂种个体 2.(24-25高二下·辽宁省七校协作体·期中)某病毒颗粒表面的特征性的大分子蛋白S（含有多个不同的抗原决定基团，每一个抗原决足基团都能够刺激机体产生一种抗体），为建立一种灵敏且高效检测S蛋白的方法，研究人员采用杂交瘤技术制备了抗-S单克隆抗体，如图所示。下列说法正确的是（　　） A. 给小鼠注射抗原后应立即从小鼠脾脏中提取B淋巴细胞培养 B. 图中的单克隆抗体A和单克隆抗体B都能够特异性识别S蛋白 C. 制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B是相同的单克隆抗体 D. 多孔培养板筛选杂交瘤细胞时先检测抗体再有限稀释后克隆化培养 3.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布北京八中乌兰察布分校·期中)临床研究发现，抗硫氧还蛋白—1（TRX—1）可作为癌症治疗的靶点。研究人员制备抗TRX—1的单克隆抗体（mAb）并进行特性鉴定。将筛选获得的3株（甲、乙、丙）杂交瘤细胞注入小鼠体内，利用ELISA法（让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来定量检测液体中微量物质的测定方法）检测腹水中的mAb效价（表示抗体浓度）及亲和常数［抗体与抗原结合的紧密程度，单位为摩尔浓度（M）的倒数，即1/M]，结果如表所示。下列叙述正确的是（　　） 细胞株 腹水中mAb效价（相对值） 亲和常数（1/M） 甲 2×105 3.712×101° 乙 9×105 3.278×101° 丙 4×105 1.758×101° A. 杂交瘤细胞甲、乙、丙株都能大量增殖并产生多种抗体 B. mAb的亲和常数（1/M）越大，其腹水中mAb效价越高 C. 杂交瘤细胞乙株是制备mAb较为理想细胞株 D. ELISA法检测利用了杂交瘤细胞具有无限增殖的特点和酶的催化作用 4.(24-25高二下·黑龙江省大庆市铁人中学·期中)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列相关说法正确的是（ ） A. 诱导已免疫的B细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，主要是利用细胞膜的功能特点 B. 与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的 B细胞不需要通过原代培养扩大细胞数量 C. 在杂交瘤细胞筛选过程中，发生融合的细胞都可以在选择培养基上正常增殖 D. 将待筛选抗体与该病毒基因A 进行杂交，呈阳性的就是所需的抗体 二、非选择题 1.(24-25高二下·吉林省松原市吉林油田高级中学·期中)埃博拉病毒（EBoV）衣壳外有包膜，包膜上有多种棘突蛋白，其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞识别。如图为制备抗埃博拉病毒单克隆抗体的过程。回答下列问题： （1）制备抗埃博拉病毒单克隆抗体时，需要用灭活的EBoV对小鼠进行多次注射的目的是_______。 （2）细胞融合的原理是_________。诱导动物细胞融合常用的方法除了电融合和________外，还可以用灭活的病毒进行诱导。 （3）单克隆抗体制备过程中要经过两次筛选。第一次筛选出杂交瘤细胞，再对杂交瘤细胞进行_______，经多次筛选后可获得足够数量的单克隆抗体。筛选后的杂交瘤细胞具备的特点是_______。 （4）体外培养杂交瘤细胞的培养液中营养物质种类要齐全，比例要合适，此外为补充细胞生长所需的未知营养物质还需要添加_________。获得的单克隆抗体最终可以从________中提取。 2.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布市衡水卓远中学·期中)双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子（细胞）之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应，可以通过重组DNA技术或细胞融合技术人工制备实现，现已成为抗体工程领域的热点，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。图1表示科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用示意图。已知长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。回答下列问题： （1）经过程①处理过的小鼠产生的B淋巴细胞群能合成并分泌______（填“一种”或“多种”）抗体。过程②诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的方法有______（答出2点）。 （2）过程③在HAT培养基上进行，______都会死亡。过程④一般在多孔细胞培养板上进行：先将细胞悬浮液稀释到7～10个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1mL细胞稀释液，这是为了______。过程⑤⑥的操作目的是获取能分泌可同时识别______的双特异性单克隆抗体的单克隆杂交一杂交瘤细胞。 （3）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用______（填“小”“大”或“基本不变”）。 3.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布北京八中乌兰察布分校·期中)感染柯萨奇病毒A组2型（CV—A2）可引起手足口病。科学家以小鼠为实验材料成功制备了抗CV—A2单克隆抗体用于检测和治疗手足口病。回答下列问题： （1）制备抗CV—A2单克隆抗体时，一般需要在一定时间内用灭活的________对小鼠进行间隔注射3次，一段时间后，从小鼠的脾脏中获得能产生抗CV—A2抗体的_______细胞，该细胞在体外培养的特点是_____（写出2点）。 （2）诱导收集的细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞的常用方法有________（写出两种）和灭活病毒诱导法等。灭活病毒诱导法中病毒的灭活是用________手段使病毒失去感染能力，但不能破坏病毒的________。将杂交瘤细胞进行体外培养时，通常需要加入血清，其作用是________。将选择培养得到的杂交瘤细胞进行________，筛选获得13株杂交瘤细胞。 （3）科学家从上述获得的13株杂交瘤细胞中进一步筛选，测定抗CV—A2单克隆抗体的特异性，结果如图所示（单克隆抗体的特异性越强，吸光度越大）。据图分析，应选择第________株杂交瘤细胞进行大规模培养获取大量的单克隆抗体，判断的理由是________。 地 城 考点03 动物体细胞核移植技术和克隆动物 一、单选题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中) 下列有关核移植的说法，错误的是（ ） A. 可以通过显微操作法去掉卵母细胞的核 B. 该技术涉及动物细胞培养、细胞核移植等操作 C. 通常采用受精卵作为供体细胞 D. 利用体细胞核移植技术可加速家畜遗传改良进程 2.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)动物体细胞核移植技术需选择MⅡ期去核卵母细胞作为受体细胞的原因不包括（ ） A. 卵母细胞的体积较大，适于体外操作 B. 卵母细胞的营养物质丰富，便于提供营养 C. MⅡ期卵母细胞数量多，容易获得 D. MⅡ期卵母细胞质中存在激发细胞核表达全能性的物质 3.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中) 研究人员成功将郊狼的体细胞移植到家犬的去核卵母细胞中构建了重组细胞，形成了重构胚，并最终获得了健康的克隆郊狼，该研究可应用于濒危动物和珍稀动物的保护。下列相关叙述错误的是（　　） A. 重构胚可以用Ca2+载体激活，使其可以顺利完成细胞分裂和发育的进程 B. 对受体雌家犬进行同期发情和免疫抑制处理，以保证新胚胎在其子宫内成活 C. 去核的方法有显微操作法、梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等 D. 选择郊狼的胚胎干细胞作为核供体进行核移植，可以提高克隆郊狼的成功率 二、多选题 1.(24-25高二下·辽宁省抚顺市六校协作体·期中)抗体—药物偶联物（ADC）由单克隆抗体、接头和药物三部分构成，是兼具靶向特异性与化疗药物杀伤性的新型抗肿瘤药物。ADC在治疗乳腺癌、胃癌和肺癌等多个领域卓有成效。ADC的作用机制如图所示。下列相关说法正确的是（ ） A. 经选择培养基筛选的杂交瘤细胞可直接用于生产单克隆抗体 B. 单克隆抗体的制备过程中利用了细胞膜的流动性 C. 利用荧光标记的单克隆抗体可定位诊断肿瘤 D. ADC发挥作用后，引起癌细胞中某些基因的表达增强 2.(24-25高二下·辽宁省抚顺市六校协作体·期中)线粒体遗传病是指由线粒体DNA（mtDNA）或核DNA（nDNA）突变导致线粒体内的蛋白质异常，使细胞出现功能损伤的疾病。为治疗mtDNA突变导致的线粒体遗传病，某科研团队通过第一极体移植得到了“三亲小猴”，过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 需要对雌性猴注射促性腺激素进行超数排卵处理，以获得更多的次级卵母细胞 B. 图中过程②常用显微操作法去除纺锤体和染色体的复合物 C. 获得“三亲小猴”的过程中运用了第一极体移植，属于无性生殖 D. 过程⑥应优先选择雌性胚胎移入子宫中发育，可进一步避免线粒体遗传病遗传给后代 3.(24-25高二下·辽宁省七校协作体·期中) 下图为我国科学家获得克隆猴“中中”和“华华”的具体过程。研究发现，重构胚中基因A的正常表达是克隆成功的关键；重构胚基因组中大量被甲基化的组蛋白H3会抑制核的全能性；组蛋白H3的乙酰化能使小鼠克隆成功率提高5倍以上。下列叙述正确的是（ ） A. 细胞a指的是培养到MⅡ期的卵母细胞，通过显微操作去掉的是DNA-蛋白质复合物 B. 用灭活的病毒短暂处理的目的是促进两细胞融合，也可用电融合法促融 C. Kdm4d可使H3去甲基化，TSA可使H3保持乙酰化，进而促进了基因A的正常表达 D. “中中”和“华华”培育用到了动物细胞培养及体细胞核移植等技术 4.(24-25高二下·黑龙江省大庆市铁人中学·期中)下图是利用体细胞核移植来克隆高产奶牛的大致流程示意图，下列相关叙述正确的是（　　） A. 图中过程①常用显微操作法去除纺锤体和染色体的复合物 B. 进行过程②前可用机械方法将动物组织分散成单个细胞 C. 犊牛遗传物质与供体奶牛完全相同 D. 非人灵长类动物的体细胞核移植困难的原因之一是供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态 三、非选择题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)猴痘是由猴痘病毒（MPXV）引起的人畜共患病。A29L蛋白是MPXV的囊膜蛋白，参与识别宿主细胞，促使病毒与宿主细胞融合。研究员为制备抗MPXVA29L单克隆抗体，进行了如下实验。请回答下列问题： （1）图中过程①是给小鼠注射______，从而获得已免疫的B淋巴细胞；与诱导植物原生质体融合相比，诱导该细胞与骨髓瘤细胞融合特有的方法是_________。 （2）在培养皿B中加入了特定的选择培养基，其目的是_______。将从B中获得的细胞在96孔板上进行______，经多次筛选，就可在C中获得足够数量的能产生抗MPXVA29L的杂交瘤细胞。 （3）本研究得到的抗MPXVA29L单克隆抗体的用途有_________。 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题03 动物细胞工程 3大模块高频考点概览 考点01 动物细胞培养 考点02 动物细胞融合技术与单克隆抗体 考点03 动物体细胞核移植技术和克隆动物 地 城 考点01 动物细胞培养 1、 单选题 1.C 2.A 3.B 4.D 5.C 6.A 7.D 8.D 9.A 10.B 11.C 二、多选题 1.AB 2.ABC 地 城 考点02 动物细胞融合技术与单克隆抗体 一、单选题 1.C 2.B 3.C 4.B 二、非选择题 1.【答案】（1）刺激小鼠机体产生更多已免疫的B淋巴细胞（细胞A） （2） ①. 细胞膜具有（一定的）流动性 ②. 聚乙二醇（PEG）诱导法 （3） ①. 克隆化培养和抗体检测 ②. 既能无限增殖又能产生（抗埃博拉病毒的）单一抗体 （4） ①. 血清 ②. 小鼠腹水或培养液 2.【答案】（1） ①. 多种 ②. PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法 （2） ①. 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 ②. 使每个孔内不多于一个细胞，达到克隆化培养的目的 ③. 癌胚抗原和长春碱 （3）小 3.【答案】（1） ①. CV−A2 ②. B淋巴细胞 ③. 不能无限增殖；能产生特异性抗体 （2） ①. 物理法（如电激等）、化学法（如聚乙二醇诱导） ②. 物理或化学 ③. 抗原结构 ④. 补充未知成分，利于细胞生长 ⑤. 克隆化培养和抗体检测 （3） ①. 4 ②. 第 4株杂交瘤细胞进行大规模培养获取大量的单克隆抗体 地 城 考点03 动物体细胞核移植技术和克隆动物 一、单选题 1.C 2.C 3.B 二、多选题 1.BCD 2.AB 3.BCD 4.ABD 三、非选择题 1. 【答案】（1） ①. MPXV的A29L ②. 灭活病毒诱导法 （2） ①. 筛选出杂交瘤细胞 ②. 克隆化培养和抗体检测 （3）作为诊断试剂、运载药物、治疗疾病 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $ 专题03 动物细胞工程 3大模块高频考点概览 考点01 动物细胞培养 考点02 动物细胞融合技术与单克隆抗体 考点03 动物体细胞核移植技术和克隆动物 地 城 考点01 动物细胞培养 1、 单选题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)在治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。下图为用患者的自体皮肤细胞培养供移植的皮肤过程示意图。下列叙述错误的是（ ） A. 用机械法或用酶解法处理皮肤组织可得到单个细胞 B. 细胞培养时应向合成培养基中加入血清等天然成分 C. 该过程中传代培养获得的细胞可直接用离心法收集 D. 接触抑制是导致原代培养细胞分裂受阻的重要原因 【答案】C 【解析】A、培养动物细胞时用机械法和酶解法处理组织分散成单个细胞，A正确； B、动物细胞的培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素，除此以外还需要添加动物血清或血浆等天然成分，B正确； C、进行传代培养时，悬浮培养的细胞可直接用离心法收集后制成细胞悬液，然后分瓶培养，贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，是指分散成单个细胞，再用离心法收集，C错误； D、细胞在贴壁生长的过程中会出现接触抑制的现象，即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖，D正确。 故选C。 2.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)人成体细胞结构和功能专门化的实质是基因的选择性表达。科学家将人成体细胞在特定的化学小分子组合的作用下经过“重编程”形成了多能干细胞，这种细胞称为人CiPS细胞。下列说法错误的是（　　） A. 特定的化学小分子组合可以诱发成体细胞基因突变实现“重编程” B. 与从早期胚胎中获取的干细胞相比，该方法规避了伦理争议 C. 人CiPS细胞再经诱导后产生特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用 D. 利用病人自身的体细胞形成的CiPS细胞诱导后治疗疾病，可以避免免疫排斥反应 【答案】A 【解析】A、人成体细胞诱发形成人CiPS细胞不是通过诱发基因突变实现的，A错误； B、该方法利用人成体细胞获取多能干细胞，与从早期胚胎中获取干细胞相比，规避了伦理争议，B正确； C、人CiPS细胞是多能干细胞，可诱导形成特定细胞，在新药的测试中发挥重要作用，C正确； D、自体移植不会引起免疫排斥问题，即利用病人自身的体细胞形成的CiPS细胞诱导后治疗疾病，可以避免免疫排斥反应，D正确。 故选A。 3.(24-25高二下·吉林省松原市吉林油田高级中学·期中)已知某动物细胞培养过程中会发生细胞贴壁现象。下列相关叙述正确的是（ ） A. 对贴壁细胞进行收集时，可直接采用离心法 B. 悬浮培养的细胞会因细胞密度大等因素使细胞分裂受阻 C. 动物细胞培养一般采用固体培养基，并维持一定的气体环境 D. 只有原代培养一传代培养过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 【答案】B 【解析】A、贴壁细胞需先用胰蛋白酶等处理，分散成单个细胞后，再进行离心收集，A错误； B、悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻，B正确； C、动物细胞培养一般采用液体培养基，并维持一定的气体环境，C错误； D、该动物细胞有贴壁生长和接触抑制现象，每一次传代培养均需加入胰蛋白酶或胶原蛋白酶分散成单个细胞，D错误。 故选B。 4.(24-25高二下·辽宁省抚顺市六校协作体·期中)取自某动物的组织细胞的培养过程如图所示。下列相关分析错误的是（ ） A. ①过程往往需要用胰蛋白酶或机械法处理切取的组织 B. ②过程所用的培养液中通常要加入动物血清 C. ③过程中的细胞大多数贴附于瓶壁生长 D. ④过程培养的细胞都具有无限增殖的特点 【答案】D 【解析】A、①过程通常是指从组织中分离细胞的过程，常用胰蛋白酶处理组织或使用机械法将组织切碎，A正确； B、②过程是指细胞培养的过程，在动物细胞培养中，培养液中通常需要加入动物血清，以提供细胞生长所需的营养物质，B正确； C、③过程是指细胞在培养瓶中的生长过程，大多数动物细胞在培养过程中会贴附于瓶壁生长，这种现象称为贴壁生长，C正确； D、④过程培养大多数正常细胞在培养过程中会经历有限次数的分裂，最终进入衰老状态，D错误。 故选D。 5.(24-25高二下·辽宁省七校协作体·期中)实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程如图所示。下列叙述错误的是（ ） A. 所需培养基是按细胞所需的营养物质种类和量严格配制的 B. 培养细胞1是原代培养，往往会因为细胞密度过大、有害物质积累而分裂受阻 C. 体外培养的细胞既能贴壁生长又能悬浮生长，都会发生接触抑制现象 D. 传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集，无须再用酶处理 【答案】C 【解析】A、在配制动物细胞培养液时，除了需要添加一定的营养物质（如糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等）外，往往还需加入动物的血清和血浆等天然成分，同时所需培养基一般是按细胞所需的营养物质种类和量严格配制的，A正确； B、培养细胞1是原代培养，该过程是获得组织细胞中进行的初次培养，往往会因为细胞密度过大、有害物质积累等分裂受阻，B正确； C、体外培养的细胞既能贴壁生长又能悬浮生长，前者会发生接触抑制现象，后者不会，C错误； D、传代培养时，悬浮培养的细胞没有体现贴壁生长的现象，因而可以直接用离心法收集，无须再用酶处理，D正确。 故选C。 6.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布市衡水卓远中学·期中)人脐带间充质干细胞在特定诱导条件下，可分化为脂肪、肝、神经等多种组织细胞。下图表示培养人脐带间充质干细胞的大致过程。下列叙述错误的是（ ） A. 人脐带间充质干细胞属于一种iPS细胞 B. ①过程需要加入胰蛋白酶，将人脐带组织碎块分散成单个细胞 C. ②过程利用离心法收集存在于试管底部的单个细胞 D. ③过程加入的培养液中通常含有血清等天然成分 【答案】A 【解析】A、根据题意可知，人脐带间充质干细胞可以分化成脂肪、肝、神经等多种组织细胞，故属于多能干细胞，A错误； B、胰蛋白酶可以降解细胞之间的胶原蛋白及其它成分，因此①过程需要加入胰蛋白酶，将人脐带组织碎块分散成单个细胞，B正确； C、②过程利用离心法将细胞和细胞培养液等其它成分分离，从而收集存在于试管底部的单个细胞，C正确； D、动物细胞培养过程中通常含有血清等天然成分，为动物细胞的增殖提供营养物质等，D正确。 故选A。 7.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布北京八中乌兰察布分校·期中)研究人员将大熊猫皮肤成纤维细胞重编程为诱导多能干细胞（iPSCs），这些iPSCs在体外培养下能够分化成各种不同类型的细胞。下列叙述错误的是（　　） A. 大熊猫体内已分化的T细胞也有可能被诱导为iPSCs B. 用皮肤成纤维细胞重编程为iPSCs时可能需借助载体将特定基因导入皮肤成纤维细胞中 C. iPSCs体外分化的过程与细胞内基因表达的调控有关 D. 利用自体iPSCs治疗疾病时，理论上需要注射免疫抑制剂来抑制免疫排斥反应 【答案】D 【解析】A、脱分化是指已分化的细胞失去特有的结构和功能，恢复到未分化状态的过程。大熊猫体内已分化的T细胞也有可能被诱导为iPSCs，A正确； B、大熊猫皮肤成纤维细胞重编程为诱导多能干细胞（iPSCs），用皮肤成纤维细胞重编程为iPSCs时可能需借助载体将特定基因导入皮肤成纤维细胞中，B正确； C、分化的实质是基因的选择性表达，iPSCs体外分化的过程与细胞内基因表达的调控有关，C正确； D、利用诱导多能干细胞治疗疾病，由于是自身细胞诱导形成的，其遗传物质与自身细胞相同，理论上可避免发生免疫排斥反应，D错误。 故选D。 8.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布北京八中乌兰察布分校·期中)科研人员将取自某遗传性肝病患者的肝细胞通过体外培养、基因修复，获得了基因编辑肝细胞，并将其移植到该患者体内，以治疗遗传性肝病，过程如图所示（CRISPR/Cas9是一种新型的基因编辑工具，能对动物和植物的DNA进行特异性改变，该技术类似于一种特殊的分子剪刀）。下列叙述正确的是（　　） A. 体外培养肝细胞时可用胃蛋白酶处理所取肝组织，将组织分散成单细胞 B. 图中原代肝细胞培养过程中会出现细胞贴壁现象，但不会出现接触抑制现象 C. 需将原代肝细胞置于含有95%氧气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中培养 D. CRISPR/Cas9基因编辑工具可能是将致病基因剪切掉以便替换为正常基因 【答案】D 【解析】A、在动物细胞培养中，常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理组织，将其分散成单细胞，而胃蛋白酶的最适pH约为1.5-2.2，在动物细胞培养液的pH（7.2-7.4）下，胃蛋白酶会失活，不能用于处理肝组织，A错误； B、原代肝细胞培养过程中，细胞会出现贴壁生长现象，当细胞贴壁生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，即会出现接触抑制现象，B错误； C、动物细胞培养时，需将细胞置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中培养，而不是95%O2，C错误； D、因为CRISPR/Cas9是一种能对DNA进行特异性改变的基因编辑工具，类似于特殊的分子剪刀，所以可能是将致病基因剪切掉以便替换为正常基因，D正确。 故选D。 9.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布市集宁区第二中学·期中)海拉细胞是一种人工培养的具有无限增殖能力的细胞，广泛应用于科学研究，极大程度地推动了医学发展。如图是海拉细胞培养部分过程，下列说法正确的是（ ） A. 培养动物细胞的合成培养基通常需要加入血清等天然成分 B. 甲→乙过程需要用胃蛋白酶或胶原蛋白酶等处理 C. 丙、丁过程中通常会通入O2和CO2的混合气体刺激细胞呼吸 D. 为避免培养过程中的杂菌污染，丙、丁过程中培养瓶盖必须旋紧不漏气 【答案】A 【解析】A、动物细胞培养的合成培养基中需要加入血清等天然成分，以提供细胞生长所需的生长因子、维生素等，A正确； B、甲→乙过程需要用胶原蛋白酶处理，而不能用胃蛋白酶，原因是在多数动物细胞培养液适宜的pH范围内，胃蛋白酶已失去活性，B错误； C、丙、丁过程中通常会通入空气和CO2的混合气体，空气中O2的主要作用是维持细胞进行有氧呼吸，而CO2的主要作用是维持培养液适宜的pH，C错误； D、为避免培养过程中的杂菌污染，且需保证其气体需要，丙、丁过程中需松动培养瓶盖，不能旋紧，D错误。 故选A。 10.(24-25高二下·黑龙江省大庆市铁人中学·期中) 为避免免疫排斥反应、科研人员取供体动物胚胎干细胞，利用基因编辑技术获得重构胚胎干细胞，再经过培养、检测和筛选后，移入受体动物的子宫内进行培养，培养出能提供异体移植器官的供体动物。下列相关说法正确的是（　　） A. 进行动物细胞培养时，需置于含有95%空气和5%氧气混合气体的培养箱中培养 B. 重构胚胎干细胞体外培养时，需要在培养液中加入血清等物质 C. 重构胚胎移入受体之后，对受体进行同期发情处理 D. 经过基因编辑技术改造后的供体器官移植到人体后，一定不会发生免疫排斥反应 【答案】B 【解析】A、进行动物细胞培养时，需置于含有95%空气和5%CO2混合气体培养箱中培养，A错误； B、在动物胚胎干细胞体外培养时，还需在培养液中加入血清、血浆等天然成分，B正确； C、胚胎移植前，需要对受体动物进行同期发情处理，使受体动物处于能受孕的生理状态，以便于接受胚胎,，故需要用孕激素处理，而促性腺激素是促进排卵的，C错误； D、经过基因编辑技术改造后的供体器官移植到人体后，还有可能发生免疫排斥反应，因为引起免疫反应的物质很多，只改变部分基因不能排除免疫反应发生的可能，D错误。 故选B。 11.(24-25高二下·黑龙江省大庆市铁人中学·期中) “细胞培养肉”是一种人造动物蛋白，其培养过程是获取哺乳动物肌肉干细胞，将其培养成肌肉细胞。这意味着人类有望摆脱对传统养殖业的依赖。下列叙述正确的是（　　） A. 获取肌肉干细胞时，用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离 B. 组织块可以用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理一段时间 C. 贴壁细胞在生长繁殖时，会发生接触抑制现象 D. 肌肉干细胞具有与胚胎干细胞相同的全能性 【答案】C 【解析】A、动物细胞培养过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，分散成单个细胞，制成细胞悬液，A错误； B、胰蛋白酶是细胞培养中常用的消化酶，胃蛋白酶最适pH为酸性，在标准细胞培养条件下其活性低，一般不用于组织块处理，B错误； C、当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触 时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制现象，C正确；  D、胚胎干细胞的全能性要大于肌肉干细胞，D错误。 故选C。 2、 多选题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)如图表示植株A（杂合子Aa）和植株B培育植株①②③④⑤的过程，下列说法错误的是（ ） A. 培育植株①②的过程为单倍体育种，获得的植株都为纯合子 B. 诱变处理获得的植株③与植株A相比性状一定发生改变 C. 图中植株①③④⑤的获得过程都需要应用植物组织培养技术 D. 一定与植株A基因型相同的为植株④（不考虑突变） 【答案】AB 【解析】A、培育植株①是花药离体培养，A错误； B、植株③的获得采用了植物组织培养技术，该植株的获得利用了诱变育种方法，性状不一定发生改变，B错误； C、图中需要通过植物组织培养技术获得的植株是①③④⑤，该过程中利用了细胞的全能性，C正确； D、植株①是通过花药离体培养获得的单倍体植株，其基因型为A和a两种，植株②是秋水仙素处理得到，其基因型有AA和aa两种，植株③经诱变处理，基因型不一定是Aa，④是通过植物组织培养获得的，其基因型为Aa，与亲本植株A相同，植株⑤是通过植物体细胞杂交的方法获得的，其遗传物质是由植株A和植株B组成的，与植株A的基因型不同，因此植株①②③④⑤中一定与植株A基因型相同的是④，D正确。 故选AB。 2.(24-25高二下·辽宁省抚顺市六校协作体·期中)图1表示我国科学家利用胚胎干细胞建立体外胚胎和研究胚胎发育潜能的流程。人胚胎干细胞存在两种不同状态，即原始态和始发态。原始态干细胞具有最高的发育潜能，始发态干细胞的全能性相对较低。图2是OGT、OGA以及细胞骨架蛋白在胚胎干细胞中表达情况的电泳图谱，OGT是负责在蛋白质上加糖基的酶，OGA是负责将糖基从蛋白质上去除的酶。下列叙述错误的是（ ） A. 过程①类似于愈伤组织再分化过程，即将始发态干细胞转化为原始态干细胞 B. 原始态干细胞只能分化成特定的细胞或组织，需要在其培养基中添加促进胚胎发育的物质 C. 图1中的猴子芽体是桑葚胚，将其导入受体母猴时，无须对受体母猴进行任何处理 D. 根据图2结果推测，原始态干细胞发育潜能高的原因是细胞中的糖基化程度低 【答案】ABC 【解析】A、过程①将始发态干细胞转化为原始态干细胞，提高了胚胎干细胞的全能性，不是再分化过程，A错误； B、原始态干细胞具有发育为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能，B错误； C、图1中的猴子芽体是囊胚，将其导入受体母猴时，需要对受体母猴进行同期发情处理，C错误； D、根据图2结果推测，与始发态干细胞相比，原始态干细胞中OGA的含量较高，而OGA是负责将糖基从蛋白质上去除的酶，因此推测原始态干细胞发育潜能高的原因是细胞中的糖基化程度低，D正确。 故选ABC。 地 城 考点02 动物细胞融合技术与单克隆抗体 一、单选题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)下列有关植物体细胞杂交与动物细胞融合的叙述，正确的是（ ） A. 应用的原理都涉及细胞膜具有选择透过性 B. 都需要使用CO2培养箱 C. 都需要对融合后的细胞进行筛选 D. 成功标志都是得到具有双亲优良性状的杂种个体 【答案】C 【解析】A、动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，应用的原理都涉及细胞膜具有流动性，A错误； B、动物细胞融合后需要在CO2培养箱维持培养环境的pH，而植物体细胞杂交后的细胞培养通常不需要使用CO2培养箱，B错误； C、细胞融合具有随机性，且融合率不是100%，因此动物细胞融合和植物体细胞杂交的操作过程中都需要对得到的杂种（或杂交）细胞进行筛选，以获得两种不同细胞的融合体，C正确； D、植物体细胞杂交的成功标志是形成杂种植株，而动物细胞融合的成功标志是获得具有特定功能的融合细胞，并不形成新个体，D错误。 故选C。 2.(24-25高二下·辽宁省七校协作体·期中)某病毒颗粒表面的特征性的大分子蛋白S（含有多个不同的抗原决定基团，每一个抗原决足基团都能够刺激机体产生一种抗体），为建立一种灵敏且高效检测S蛋白的方法，研究人员采用杂交瘤技术制备了抗-S单克隆抗体，如图所示。下列说法正确的是（　　） A. 给小鼠注射抗原后应立即从小鼠脾脏中提取B淋巴细胞培养 B. 图中的单克隆抗体A和单克隆抗体B都能够特异性识别S蛋白 C. 制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B是相同的单克隆抗体 D. 多孔培养板筛选杂交瘤细胞时先检测抗体再有限稀释后克隆化培养 【答案】B 【解析】A、给小鼠注射抗原的目的是获取已经免疫的B淋巴细胞，而抗原刺激产生已免疫的B淋巴细胞需要时间，所以给小鼠注射抗原后不能立即从小鼠脾脏中提取B淋巴细胞，A错误； B、单克隆抗体A和单克隆抗体B 都来自筛选出的杂交瘤细胞，因此都能够特异性识别S蛋白上的抗原，B正确； C、由于蛋白S含有多个不同的抗原决定基团，每一个抗原决定基团都能够刺激机体产生一种抗体，单克隆抗体A和单克隆抗体B来自不同的杂交瘤细胞，因此制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B不是相同的单克隆抗体，C错误； D、第二次筛选应先进行有限稀释，必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群，由这样的细胞群产生的抗体才是真正意义的单克隆抗体，再将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下克隆培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，再从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体，D错误。 故选B。 3.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布北京八中乌兰察布分校·期中)临床研究发现，抗硫氧还蛋白—1（TRX—1）可作为癌症治疗的靶点。研究人员制备抗TRX—1的单克隆抗体（mAb）并进行特性鉴定。将筛选获得的3株（甲、乙、丙）杂交瘤细胞注入小鼠体内，利用ELISA法（让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来定量检测液体中微量物质的测定方法）检测腹水中的mAb效价（表示抗体浓度）及亲和常数［抗体与抗原结合的紧密程度，单位为摩尔浓度（M）的倒数，即1/M]，结果如表所示。下列叙述正确的是（　　） 细胞株 腹水中mAb效价（相对值） 亲和常数（1/M） 甲 2×105 3.712×101° 乙 9×105 3.278×101° 丙 4×105 1.758×101° A. 杂交瘤细胞甲、乙、丙株都能大量增殖并产生多种抗体 B. mAb的亲和常数（1/M）越大，其腹水中mAb效价越高 C. 杂交瘤细胞乙株是制备mAb较为理想细胞株 D. ELISA法检测利用了杂交瘤细胞具有无限增殖的特点和酶的催化作用 【答案】C 【解析】A、杂交瘤细胞甲、乙、丙株都能大量增殖并分别产生一种抗体，A错误； B、mAb效价表示抗体浓度，亲和常数表示抗体与抗原结合的紧密程度，亲和常数高不代表效价高，B错误； C、杂交瘤细胞乙株抗体效价最高，是制备mAb较为理想的细胞株，C正确； D、ELISA法检测利用了抗体与酶复合物结合，没有用到杂交瘤细胞具有无限增殖的特点，D错误。 故选C。 4.(24-25高二下·黑龙江省大庆市铁人中学·期中)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。下列相关说法正确的是（ ） A. 诱导已免疫的B细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，主要是利用细胞膜的功能特点 B. 与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的 B细胞不需要通过原代培养扩大细胞数量 C. 在杂交瘤细胞筛选过程中，发生融合的细胞都可以在选择培养基上正常增殖 D. 将待筛选抗体与该病毒基因A 进行杂交，呈阳性的就是所需的抗体 【答案】B 【解析】A、诱导已免疫的B细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，主要利用的是细胞膜的流动性，即细胞膜的结构特点，A错误； B、已免疫的B细胞是高度分化的细胞，不能分裂，故不需要进行原代培养，B正确； C、诱导细胞融合时，同种核型融合的细胞（即B细胞相互融合、骨髓瘤细胞相互融合）不能在选择培养基上正常增殖，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的细胞才能在选择培养基上正常增殖，C错误； D、待筛选的抗体是蛋白质，无法与基因A 进行杂交，应与蛋白A进行杂交，D错误。 故选B。 二、非选择题 1.(24-25高二下·吉林省松原市吉林油田高级中学·期中)埃博拉病毒（EBoV）衣壳外有包膜，包膜上有多种棘突蛋白，其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞识别。如图为制备抗埃博拉病毒单克隆抗体的过程。回答下列问题： （1）制备抗埃博拉病毒单克隆抗体时，需要用灭活的EBoV对小鼠进行多次注射的目的是_______。 （2）细胞融合的原理是_________。诱导动物细胞融合常用的方法除了电融合和________外，还可以用灭活的病毒进行诱导。 （3）单克隆抗体制备过程中要经过两次筛选。第一次筛选出杂交瘤细胞，再对杂交瘤细胞进行_______，经多次筛选后可获得足够数量的单克隆抗体。筛选后的杂交瘤细胞具备的特点是_______。 （4）体外培养杂交瘤细胞的培养液中营养物质种类要齐全，比例要合适，此外为补充细胞生长所需的未知营养物质还需要添加_________。获得的单克隆抗体最终可以从________中提取。 【答案】（1）刺激小鼠机体产生更多已免疫的B淋巴细胞（细胞A） （2） ①. 细胞膜具有（一定的）流动性 ②. 聚乙二醇（PEG）诱导法 （3） ①. 克隆化培养和抗体检测 ②. 既能无限增殖又能产生（抗埃博拉病毒的）单一抗体 （4） ①. 血清 ②. 小鼠腹水或培养液 【解析】 【小问1详解】 制备单克隆抗体时，用抗原对小鼠进行免疫，使小鼠产生免疫的 B淋巴细胞，此过程需要多次免疫 小鼠以便获得更多免疫的B淋巴细胞。 【小问2详解】 诱导 B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的过程体现了细胞膜具有一 定的流动性；在体外融合时需要诱导，动物细胞融合可以用电融合法、聚乙二醇(PEG)融合法、灭活病毒诱导法。 【小问3详解】 单克隆抗体制备过程中要经过两次筛选，第一次用选择培养基筛选，目的是获得杂交瘤细胞，再对杂交瘤细胞进行克隆化培养和 抗体检测；多次筛选后最终得到的杂交瘤细胞既能无限增殖又能产生（抗埃博拉病毒的）单一抗体。 【小问4详解】 补充细胞生长所 需的未知营养物质，需要在培养液中添加血清；获得的单克隆抗体最终可以从小鼠腹水或培养液中提取。 2.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布市衡水卓远中学·期中)双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子（细胞）之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应，可以通过重组DNA技术或细胞融合技术人工制备实现，现已成为抗体工程领域的热点，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。图1表示科研人员通过免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术生产双特异性抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用示意图。已知长春花所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。回答下列问题： （1）经过程①处理过的小鼠产生的B淋巴细胞群能合成并分泌______（填“一种”或“多种”）抗体。过程②诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的方法有______（答出2点）。 （2）过程③在HAT培养基上进行，______都会死亡。过程④一般在多孔细胞培养板上进行：先将细胞悬浮液稀释到7～10个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1mL细胞稀释液，这是为了______。过程⑤⑥的操作目的是获取能分泌可同时识别______的双特异性单克隆抗体的单克隆杂交一杂交瘤细胞。 （3）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用______（填“小”“大”或“基本不变”）。 【答案】（1） ①. 多种 ②. PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法 （2） ①. 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞 ②. 使每个孔内不多于一个细胞，达到克隆化培养的目的 ③. 癌胚抗原和长春碱 （3）小 【解析】 【小问1详解】 经过程①注射癌胚抗原处理后小鼠在此前可能还接受过其他抗原，故产生的B淋巴细胞群能合成并分泌多种抗体；过程②诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的方法有PEG融合法、电融合法和灭活的病毒诱导法。 【小问2详解】 过程③在HAT培养基上进行，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞（如B淋巴细胞-B淋巴细胞、骨髓瘤-骨髓瘤）都会死亡；先将细胞悬浮液稀释到7～10个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1mL细胞稀释液，这是为了使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的；结合图示可知，该制备过程中分别注射了癌胚抗原和长春碱，故过程⑤⑥的操作目的是获取能分泌可同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的单克隆杂交一杂交瘤细胞。 【小问3详解】 与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，由于单克隆抗体的导向作用，不会杀伤正常细胞，故对人体的副作用小。 3.(24-25高二下·内蒙古省乌兰察布北京八中乌兰察布分校·期中)感染柯萨奇病毒A组2型（CV—A2）可引起手足口病。科学家以小鼠为实验材料成功制备了抗CV—A2单克隆抗体用于检测和治疗手足口病。回答下列问题： （1）制备抗CV—A2单克隆抗体时，一般需要在一定时间内用灭活的________对小鼠进行间隔注射3次，一段时间后，从小鼠的脾脏中获得能产生抗CV—A2抗体的_______细胞，该细胞在体外培养的特点是_____（写出2点）。 （2）诱导收集的细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞的常用方法有________（写出两种）和灭活病毒诱导法等。灭活病毒诱导法中病毒的灭活是用________手段使病毒失去感染能力，但不能破坏病毒的________。将杂交瘤细胞进行体外培养时，通常需要加入血清，其作用是________。将选择培养得到的杂交瘤细胞进行________，筛选获得13株杂交瘤细胞。 （3）科学家从上述获得的13株杂交瘤细胞中进一步筛选，测定抗CV—A2单克隆抗体的特异性，结果如图所示（单克隆抗体的特异性越强，吸光度越大）。据图分析，应选择第________株杂交瘤细胞进行大规模培养获取大量的单克隆抗体，判断的理由是________。 【答案】（1） ①. CV−A2 ②. B淋巴细胞 ③. 不能无限增殖；能产生特异性抗体 （2） ①. 物理法（如电激等）、化学法（如聚乙二醇诱导） ②. 物理或化学 ③. 抗原结构 ④. 补充未知成分，利于细胞生长 ⑤. 克隆化培养和抗体检测 （3） ①. 4 ②. 第 4株杂交瘤细胞进行大规模培养获取大量的单克隆抗体 【解析】 【小问1详解】 制备抗CV−A2单克隆抗体时，一般需要在一定时间内用灭活的CV−A2对小鼠进行间隔注射3次，目的是刺激小鼠产生能分泌抗CV−A2抗体的淋巴细胞。一段时间后，从小鼠的脾脏中获得能产生对应的B淋巴细胞，该B淋巴细胞不能无限增殖；能产生特异性抗体。 【小问2详解】 诱导收集的细胞（B淋巴细胞）与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞的常用方法有物理法（如电激等）、化学法（如聚乙二醇诱导）和灭活病毒诱导法等。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构，通常需要加入血清，其作用是补充未知成分，利于细胞生长，选择培养得到杂交瘤细胞。再经克隆化培养和抗体检测，初次筛选获得13株杂交瘤细胞。 【小问3详解】 分析图可知，纵坐标吸光度大小反应与抗原结合单抗含量高低，所以第4株杂交瘤细胞产生的单克隆抗体特异性强且含量最高，应选择第 4株杂交瘤细胞进行大规模培养获取大量的单克隆抗体。 地 城 考点03 动物体细胞核移植技术和克隆动物 一、单选题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中) 下列有关核移植的说法，错误的是（ ） A. 可以通过显微操作法去掉卵母细胞的核 B. 该技术涉及动物细胞培养、细胞核移植等操作 C. 通常采用受精卵作为供体细胞 D. 利用体细胞核移植技术可加速家畜遗传改良进程 【答案】C 【解析】A、核移植技术中，卵母细胞的去核通常采用显微操作法（如显微注射或吸出法），A正确； B、核移植技术需要以下步骤：供体细胞的培养（如体细胞培养）、卵母细胞的去核、供体细胞核的移植、重组胚胎的培养，B正确； C、核移植的供体细胞通常是体细胞（如皮肤细胞）或胚胎细胞，而非受精卵，C错误； D、体细胞核移植技术可以快速复制优良性状的家畜（如高产奶牛、优质肉牛），避免传统育种的时间成本，加速家畜遗传改良进程，D正确。 故选C。 2.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)动物体细胞核移植技术需选择MⅡ期去核卵母细胞作为受体细胞的原因不包括（ ） A. 卵母细胞的体积较大，适于体外操作 B. 卵母细胞的营养物质丰富，便于提供营养 C. MⅡ期卵母细胞数量多，容易获得 D. MⅡ期卵母细胞质中存在激发细胞核表达全能性的物质 【答案】C 【解析】卵母细胞因具有体积大易操作、营养物质丰富、含有促进细胞核全能性表达的物质等特点，常被用作细胞核移植时的受体细胞。 故选C。 3.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中) 研究人员成功将郊狼的体细胞移植到家犬的去核卵母细胞中构建了重组细胞，形成了重构胚，并最终获得了健康的克隆郊狼，该研究可应用于濒危动物和珍稀动物的保护。下列相关叙述错误的是（　　） A. 重构胚可以用Ca2+载体激活，使其可以顺利完成细胞分裂和发育的进程 B. 对受体雌家犬进行同期发情和免疫抑制处理，以保证新胚胎在其子宫内成活 C. 去核的方法有显微操作法、梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等 D. 选择郊狼的胚胎干细胞作为核供体进行核移植，可以提高克隆郊狼的成功率 【答案】B 【解析】A、可以用Ca2+载体、乙醇和蛋白酶合成抑制剂等化学方法激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，A正确； B、需要对受体雌家犬进行同期发情处理，提供同等的生理基础，以保证新胚胎在其子宫内成活，但不用进行免疫抑制处理，因为子宫对外来的胚胎通常不会发生免疫排斥，B错误； C、对卵母细胞去核的方法有显微操作法、梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等，通常采用显微操作法，C正确； D、由于动物胚胎干细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难，因此选择胚胎干细胞作为核供体进行核移植可提高克隆动物的成功率，D正确。 故选B。 二、多选题 1.(24-25高二下·辽宁省抚顺市六校协作体·期中)抗体—药物偶联物（ADC）由单克隆抗体、接头和药物三部分构成，是兼具靶向特异性与化疗药物杀伤性的新型抗肿瘤药物。ADC在治疗乳腺癌、胃癌和肺癌等多个领域卓有成效。ADC的作用机制如图所示。下列相关说法正确的是（ ） A. 经选择培养基筛选的杂交瘤细胞可直接用于生产单克隆抗体 B. 单克隆抗体的制备过程中利用了细胞膜的流动性 C. 利用荧光标记的单克隆抗体可定位诊断肿瘤 D. ADC发挥作用后，引起癌细胞中某些基因的表达增强 【答案】BCD 【解析】A、经选择培养基筛选的杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养和抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞后，才能用于生产单克隆抗体，而不是可直接用于生产单克隆抗体，A错误； B、单克隆抗体制备过程中，将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞，细胞融合的原理是细胞膜的流动性，B正确； C、由于单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，利用荧光标记的单克隆抗体，根据抗原-抗体特异性结合的特性，可定位诊断肿瘤，C正确； D、从图中可知，ADC发挥作用后，引起癌细胞凋亡，细胞凋亡是由基因决定的细胞自动结束生命的过程，所以ADC发挥作用后会引起癌细胞中某些基因的表达增强，D正确。 故选BCD。 2.(24-25高二下·辽宁省抚顺市六校协作体·期中)线粒体遗传病是指由线粒体DNA（mtDNA）或核DNA（nDNA）突变导致线粒体内的蛋白质异常，使细胞出现功能损伤的疾病。为治疗mtDNA突变导致的线粒体遗传病，某科研团队通过第一极体移植得到了“三亲小猴”，过程如图所示。下列相关叙述正确的是（ ） A. 需要对雌性猴注射促性腺激素进行超数排卵处理，以获得更多的次级卵母细胞 B. 图中过程②常用显微操作法去除纺锤体和染色体的复合物 C. 获得“三亲小猴”的过程中运用了第一极体移植，属于无性生殖 D. 过程⑥应优先选择雌性胚胎移入子宫中发育，可进一步避免线粒体遗传病遗传给后代 【答案】AB 【解析】A、需要对雌性猴注射促性腺激素进行超数排卵处理，以获得更多的次级卵母细胞，A正确； B、次级卵母细胞处于减数第二次分裂中期，没有细胞核，只有纺锤体—染色体的复合物，图中过程②常用显微操作法去除纺锤体和染色体的复合物，B正确； C、获得“三亲小猴”的过程中运用了第一极体移植，将第一极体与去核卵母细胞融合，但整个过程中受精阶段涉及两性细胞的结合，属于有性生殖，C错误； D、过程⑥应优先选择雄性胚胎移入子宫中发育，雄性猴的线粒体不会遗传给后代，D错误。 故选AB。 3.(24-25高二下·辽宁省七校协作体·期中) 下图为我国科学家获得克隆猴“中中”和“华华”的具体过程。研究发现，重构胚中基因A的正常表达是克隆成功的关键；重构胚基因组中大量被甲基化的组蛋白H3会抑制核的全能性；组蛋白H3的乙酰化能使小鼠克隆成功率提高5倍以上。下列叙述正确的是（ ） A. 细胞a指的是培养到MⅡ期的卵母细胞，通过显微操作去掉的是DNA-蛋白质复合物 B. 用灭活的病毒短暂处理的目的是促进两细胞融合，也可用电融合法促融 C. Kdm4d可使H3去甲基化，TSA可使H3保持乙酰化，进而促进了基因A的正常表达 D. “中中”和“华华”培育用到了动物细胞培养及体细胞核移植等技术 【答案】BCD 【解析】 【详解】A、图中细胞a指的是卵母细胞，待其培养到MⅡ期（减数第二次分裂中期）后再通过显微操作去掉纺锤体-染色体复合物，A错误； B、用灭活的病毒短暂处理的目的是促进两细胞（体细胞和卵母细胞）融合，通过电融合法也能使两细胞融合，B正确； C、研究显示，重构胚中基因A的正常表达是克隆成功的关键，重构胚基因组中大量H3被甲基化是克隆成功的巨大阻碍，H3乙酰化能使小鼠克隆成功率提高5倍以上，因此图中将Kdm4d的mRNA注入重构胚和用TSA处理重构胚后，能激活重构胚使其完成细胞分裂和发育进程的机制可能是Kdm4d使H3去甲基化，TSA使H3保持乙酰化，进而促进了基因A的正常表达，C正确； D、从图中可以看出，“中中”和“华华”的培育过程中，有体细胞的培养（动物细胞培养）以及将体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中（体细胞核移植）等技术，D正确。 故选BCD。 4.(24-25高二下·黑龙江省大庆市铁人中学·期中)下图是利用体细胞核移植来克隆高产奶牛的大致流程示意图，下列相关叙述正确的是（　　） A. 图中过程①常用显微操作法去除纺锤体和染色体的复合物 B. 进行过程②前可用机械方法将动物组织分散成单个细胞 C. 犊牛遗传物质与供体奶牛完全相同 D. 非人灵长类动物的体细胞核移植困难的原因之一是供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态 【答案】ABD 【解析】A、在体细胞核移植过程中，去核实质上是去除纺锤体—染色体复合物，图中过程①常用显微操作法去除纺锤体和染色体的复合物，A正确； B、进行过程②前，可以采用机械方法将动物组织分散成单个细胞，获取供体细胞，B正确； C、将供体细胞注入去核卵母细胞中，构成重构核，图中的重构胚中含有卵母细胞和供体细胞的细胞质，因此，犊牛遗传物质与供体奶牛不完全相同，C错误； D、非人灵长类动物的体细胞核移植困难的原因分化程度高，全能性低，因此，供体细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态，D正确。 故选ABD。 三、非选择题 1.(24-25高二下·黑龙江省大庆中学·期中)猴痘是由猴痘病毒（MPXV）引起的人畜共患病。A29L蛋白是MPXV的囊膜蛋白，参与识别宿主细胞，促使病毒与宿主细胞融合。研究员为制备抗MPXVA29L单克隆抗体，进行了如下实验。请回答下列问题： （1）图中过程①是给小鼠注射______，从而获得已免疫的B淋巴细胞；与诱导植物原生质体融合相比，诱导该细胞与骨髓瘤细胞融合特有的方法是_________。 （2）在培养皿B中加入了特定的选择培养基，其目的是_______。将从B中获得的细胞在96孔板上进行______，经多次筛选，就可在C中获得足够数量的能产生抗MPXVA29L的杂交瘤细胞。 （3）本研究得到的抗MPXVA29L单克隆抗体的用途有_________。 【答案】（1） ①. MPXV的A29L ②. 灭活病毒诱导法 （2） ①. 筛选出杂交瘤细胞 ②. 克隆化培养和抗体检测 （3）作为诊断试剂、运载药物、治疗疾病 【解析】 【小问1详解】 图中过程①是给小鼠注射抗原，即MPXV病毒的A29L蛋白，从而获得已免疫的B淋巴细胞；与诱导植物原生质体融合相比较，诱导该细胞与骨髓瘤细胞融合特有的方法是灭活病毒诱导法。 【小问2详解】 在培养皿B中加入了特定的选择培养基（HAT培养基），其目的是筛选出杂交瘤细胞（未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞均无法生存）。将从B中获得的细胞在96孔板上进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可在C中获得足够数量的能产生抗MPXVA29L的杂交瘤细胞。 【小问3详解】 本研究得到的抗MPXVA29L单克隆抗体的用途有作为诊断试剂、运载药物、治疗疾病。 学科网（北京）股份有限公司 学科网（北京）股份有限公司 $