第九单元 第1课时 微生物的培养和利用（教师用书word）-【步步高】2025年高考生物大一轮复习讲义（浙科版 浙江、桂（梧州））

第1课时　微生物的培养和利用 课标要求　1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。2.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。3.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。4.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。5.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。6.活动：接种、培养并分离酵母菌。7.活动：能分解尿素的微生物的分离与计数。 考点一　酵母菌的培养和分离 1．培养基 2．无菌操作 (1)实验器具与培养基灭菌 (2)较高温度下会分解的有机化合物的灭菌和使用过的器皿、废弃物的处理 ①尿素、葡萄糖的灭菌：采用已高压蒸汽灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗进行过滤除菌。 ②对含葡萄糖的培养基，可采用适当降低温度、压力以及延长时间的高压灭菌方法灭菌。 ③所有使用过的器皿、废弃物等都必须先经过高压灭菌后再洗涤或倾倒。 (3)接种过程中的灭菌和无菌操作 ①接种环和涂布器的灭菌 a．接种环：接种前在明火上灼烧，待冷却后再接种。 b．涂布器：使用前浸泡在75%的酒精中，接种前将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，冷却后涂布。 ②瓶口或试管口的灭菌：接种过程中，在酒精灯火焰上灼烧灭菌。 ③接种时要靠近酒精灯的火焰，原因是防止空气中微生物落入培养基。 3．对目标微生物的分离和纯化 (1)马铃薯蔗糖培养基 ①制备斜面培养基时的注意事项：a.注意控制好温度，防止培养基提前凝固。b.不要让培养基粘在试管口。c.试管中的液体量约为试管长度的1/4。 ②制作棉塞应该使用普通棉花，而不能使用脱脂棉的原因是脱脂棉吸水后容易引起污染。 (2)纯种和接种 ①利用微生物需要使用纯种的原因：保证实验的可重复性和结果的可靠性。 ②人为接种：挑取目标微生物的纯种将其转移到液体培养基培养；在斜面培养基上连续划线用于保存菌种；在固体培养基上采用划线或稀释涂布的方法接种。 (3)两种纯化方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 主要步骤 用接种环在固体培养基表面进行连续平行划线、扇形划线和多次连续平行划线 系列梯度稀释操作和涂布平板操作 接种工具 接种环 涂布器 能否用于计数 不能计数 可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板 培养结果 共同点 都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征 4.活动：接种、培养并分离酵母菌 (1)目的要求 ①用平板划线法或稀释涂布平板法接种酵母菌。 ②用液体培养基大量扩增酵母菌。 (2)方法步骤 (3)实验结果的分析 ①培养未接种的培养基的目的是检查培养基制备是否合格。未接种的培养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。 ②在接种酵母菌的固体培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑，多呈乳白色。 ③若在固体培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯，混入其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。 1．培养基可为目标微生物提供适宜的生长环境，下列叙述错误的是(　　) A．在LB培养基中加入甘露醇可为醋化醋杆菌提供碳源 B．在LB培养基中加入较高浓度氯化钠可筛选嗜盐细菌 C．将蔗糖豆芽汁培养基的pH调成碱性有利于霉菌生长 D．尿素固体培养基的尿素可为目标微生物提供氮源 答案　C 解析　醋化醋杆菌培养基中的甘露醇的主要作用是提供碳源，同时也可以调节培养基的渗透压，A正确；在LB培养基中加入较高浓度的氯化钠，只有耐受高氯化钠浓度的嗜盐微生物才能够生存，从而可筛选嗜盐细菌，B正确；培养霉菌的培养基pH要调至中性偏酸，C错误；尿素是常见的提供氮源的物质，可为目标微生物提供氮源，D正确。 2．防止杂菌污染和获得微生物纯净培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。下列关于无菌操作技术的叙述，正确的是(　　) A．将培养基转移到试管中时必须使用玻璃漏斗 B．接种环在划线前后都要进行灼烧并立即划线以免灭菌失效 C．无菌技术只能用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染 D．高压灭菌时，灭菌时间应从高压灭菌锅开始加热时计时 答案　A 解析　为防止培养基黏附在试管口上，将培养基转移到试管中时必须使用玻璃漏斗，A正确；接种环在划线前后都要进行灼烧，但要在冷却后划线，以免杀灭菌种，B错误；无菌技术能用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，还能有效避免操作者自身被微生物感染，C错误；高压灭菌时，灭菌时间应从高压灭菌锅达到要求温度时开始计时，直至灭菌完成为止，D错误。 3．稀释涂布平板法和平板划线法是分离和纯化微生物的两种重要方法，关于二者的比较，下列说法错误的是(　　) A．稀释涂布平板法易形成单菌落并可对微生物进行计数 B．利用稀释涂布平板法进行统计数据时应选择相同稀释度下的培养基 C．平板划线中用蘸有菌液的接种环划一条线后，再次蘸取菌液继续划线 D．二者接种菌液时分别需要用到的工具是涂布器和接种环 答案　C 解析　平板划线时接种环只蘸取一次菌液，C错误。 考点二　显微镜计数法与选择培养 1．稀释涂布平板法测定微生物数量 (1)在保证能准确计数的前提下减小稀释度。 (2)将相同稀释度下的多组数值取平均值后再进行计算。即：每毫升菌液中微生物细胞的数量＝某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数。 2．血细胞计数板计数法 (1)计数板：红细胞计数区又用双线分成25(或16)个中方格，每个中方格再用单线分为16(或25)个小方格。 (2)计数 ①先将专用的盖玻片盖在计数板上，再用吸管在中央平台盖玻片边缘滴加摇匀的酵母菌悬液，让菌液渗入盖玻片下直至充满计数区。 ②在显微镜下，酵母细胞计数可在红细胞计数区进行。对有25个中方格的红细胞计数区可选取四个角和正中央的五个中方格(总计80个小方格)进行细胞计数。 ③为了避免重复计数压在小方格边缘线上细胞的数目，应只计数每一小方格上方和左侧线条上的细胞数，即“数上不数下”“数左不数右”。 ④计算公式为：酵母细胞个数/mL＝80个小方格细胞总数/80×400×10 000×稀释倍数。 某同学在三种稀释倍数下吸取0.1 mL的稀释菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计算1 mL菌液中活菌数(一般选择菌落数30～300的平板进行计数)。 平板 菌落数 稀释倍数 平板1 平板2 平板3 104 320 360 356 105 212 234 287 106 21 23 18 提示　105的稀释倍数下三个平板上的菌落数在30～300之间，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以计算出1 mL菌液中活菌数为(244÷0.1)×105＝2.44×108(个)。 3．影响微生物生长的因素 培养基中营养物质的浓度和比例 营养物质浓度 过高 过低 抑制微生物生长 不能满足微生物生长的需要 营养物质比例 微生物发酵生产谷氨酸时，培养基中C/N为4∶1降为为3∶1时，菌体由大量繁殖变为繁殖减缓 N/P为4.5时，微囊藻生长最好；N/P为0.45时，颤藻生长最好 生长条件 光能自养型 只提供水和无机盐，不需提供有机物，但必须提供光照 需氧型微生物 应该进行振荡培养以保证氧气供应 厌氧型微生物 静置或在培养基表面添加用于隔绝空气的液体石蜡 4.选择培养基 (1)概念：在培养基中添加(或减去)某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其他微生物均不能生长。 (2)作用：能从混杂的微生物群体中快速筛选出所需种类的目标微生物，也可以从已知种类的混杂的细胞群体中筛选出特定的细胞。 (3)几种选择培养基的举例 特性 主要用途 设计原理 加入青霉素 分离酵母菌等真菌 青霉素能抑制非抗性细菌生长，对真菌无作用 不加氮源 分离固氮微生物 固氮微生物能利用空气中的氮气 不加碳源 分离自养型微生物 自养型微生物能利用无机碳源 5.活动：能分解尿素的微生物的分离与计数 (1)实验原理 (2)方法步骤 (1)从功能上看尿素固体培养基属于选择培养基。 (2)尿素固体培养基如何实现对能分解尿素的细菌的筛选？ 提示　该培养基中唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能够分解尿素获得氮源，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，会因缺乏氮源而无法生长繁殖，所以用该培养基能够筛选出能分解尿素的细菌。 4．下列关于微生物数量测定的叙述，正确的是(　　) A．通过稀释涂布平板法统计的活菌数一般低于实际的活菌数 B．利用显微镜进行计数时，可使用普通的载玻片完成计数 C．平板划线法除可以用于分离微生物外，也常用于统计细菌数目 D．应尽量选菌落数少的平板来统计，以确保一个菌落来自单个细菌 答案　A 解析　利用稀释涂布平板法统计活菌数时，当两个或多个细胞连在一起时，会形成一个菌落，导致计数低于实际的活菌数，A正确；利用显微镜进行计数时，需要使用血细胞计数板，B错误；平板划线法只适用于分离微生物，不能用于统计细菌数目，C错误；利用平板计数时，应选择菌落数在30～300之间的平板计数，若菌落数过于少，可能存在较大的随机误差，D错误。 5．下列关于“能分解尿素的微生物的分离与计数活动”的叙述，正确的是(　　) A．尿素固体培养基中以尿素为唯一有机物 B．尿素固体培养基的灭菌方式为过滤灭菌 C．用平板划线法也能分离出含脲酶的单菌落 D．同一稀释度下，尿素培养基中的菌落数比LB培养基中多 答案　C 解析　尿素固体培养基以尿素作为唯一氮源，A错误；尿素溶液用无菌的G6玻璃砂漏斗过滤除菌，B错误；尿素培养基为选择培养基，同一稀释度下，尿素培养基中的菌落数比LB培养基中少，D错误。 1．(2023·山东，15)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是(　　) A．不含氮源的平板不能用于微生物培养 B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒 C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃 D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物 答案　D 解析　不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；平板涂布时涂布器使用前必须先浸泡在75%的酒精中，然后在火焰上灼烧，这种操作属于灭菌，B错误；使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素进行生长繁殖，D正确。 2．(2023·江苏，7)下列关于细菌和酵母菌实验的叙述，正确的是(　　) A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比 B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大 C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌 D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定 答案　A 解析　培养酵母菌可用马铃薯培养基，细菌培养基中一般要加肉汤等，故酵母菌培养基通常比细菌培养基有更高的碳氮比，A正确；通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落小，B错误；细菌和酵母菌的培养基都可以用高压蒸汽灭菌法灭菌，C错误；血细胞计数板适用于真菌的计数，细菌计数板用于细菌的数量测定等，D错误。 3．(2023·浙江1月选考，19)某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是(　　) A．培养基pH需偏碱性 B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种 C．需在无氧条件下培养 D．分离得到的微生物均为乳酸菌 答案　C 解析　因为乳酸菌经过厌氧呼吸产生乳酸，故其生活的环境是酸性，培养基pH需偏酸性，A错误；平板划线接种时不需要稀释，B错误；乳酸菌是厌氧型微生物，所以需在无氧条件下培养，C正确；参与泡菜发酵的微生物有植物乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等，所以分离得到的微生物除了乳酸菌，还会有其他耐高盐的微生物，D错误。 4．(2021·浙江6月选考，17)下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是(　　) A．测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板 B．红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数 C．稀释涂布平板法和平板划线法均能得到单菌落，都可用于细胞计数 D．酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度 答案　C 解析　活细胞的细胞膜具有选择透过性，红墨水中的色素分子不能透过细胞膜，当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，红墨水中的色素分子能进入细胞，所以可用红墨水检测细胞的存活状态并计数，B正确；平板划线法不能用于细胞计数，C错误；酵母细胞的密度与浑浊度指标存在一定的数量关系，所以酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度，D正确。 5．(2023·北京，16)自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。 (1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供________________和维生素等。 (2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊(如图)，表明_______________________。 (3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样________后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现__________。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。 (4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证(主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱)。________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 答案　(1)氮源、碳源　(2)A菌能在培养平板中生长繁殖　(3)稀释　溶菌圈　(4)假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂 解析　(1)蛋白胨主要为细菌提供氮源、碳源和维生素等。(2)将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊，表明A菌能在培养平板中生长繁殖。(3)将含菌量较高的湖泊水样稀释后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现溶菌圈。(4)根据实验材料和设备可知，圆形滤纸小片可用于吸收某种物质，离心机可用于分离菌体和细菌分泌物，为探究P菌溶解破坏A菌的方式，可假设P菌通过分泌某种化学物质使A菌溶解破裂。 课时精练 一、选择题 1．微生物的培养需要适宜的条件。下列相关叙述正确的是(　　) A．培养基中必须添加水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等 B．培养基制备过程中需要将pH调至中性，然后灭菌 C．利用微生物发酵生产谷氨酸时，培养基中的C/N为4∶1时更有利于菌体繁殖 D．为便于接种，培养基中都要添加琼脂或其他的凝固剂 答案　C 解析　培养基中不一定都要添加碳源、氮源等，比如培养能利用CO2的自养型微生物，培养基中可以不添加碳源，A错误；培养基制备过程中需要先调节pH然后灭菌，但要依据微生物的生长需求调节，B错误；利用微生物发酵生产谷氨酸时，培养基中的C/N为4∶1时更有利于菌体繁殖，当C/N为3∶1时，菌体繁殖减缓，C正确；需要将菌种接种到固体培养基时才要在培养基中添加琼脂或其他的凝固剂，D错误。 2．(2023·杭州高三期末)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸汁。在马铃薯浸汁中加入一定量的蔗糖和琼脂，用蒸馏水定容后灭菌，得到M培养基。下列有关叙述不正确的是(　　) A．向培养皿中转移已灭菌的M培养基时，要注意不要黏附在壁上 B．培养细菌时，需要将培养基调至中性偏酸 C．M培养基中的马铃薯浸汁可为微生物提供无机盐 D．将M培养基分装到试管后可以做成斜面培养基，以用于菌种的保存 答案　B 解析　向培养皿中转移已灭菌的M培养基时，要注意不要黏附在壁上，以免引起杂菌污染，A正确；细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，B错误。 3．(2023·温州高三检测)稀释涂布平板法是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是(　　) A．固体培养基灭菌后，应冷却至50 ℃左右时倒平板 B．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长 C．利用稀释涂布平板法分离的单菌落需进一步划线纯化 D．稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数 答案　B 解析　倒好的平板需要冷却后使用，且不宜久存，以免表面干燥，影响接种后微生物的生长，B符合题意。 4．为统计葡萄酒发酵过程中酵母菌数量变化并对菌种进行耐酸性检测，取适当时间的发酵样品经梯度稀释后再分别接种到不同pH的培养基中进行培养。下列叙述正确的是(　　) A．应在酸性范围设置培养基pH梯度 B．应采用平板划线法进行样品接种 C．需要使用恒温摇床进行振荡培养 D．培养过程应保持无菌和无氧条件 答案　A 解析　由题干可知，检测的是菌种的耐酸性，所以应在酸性范围设置培养基pH梯度，A正确；平板划线法不能用于微生物计数，B错误；平板培养一般是静置(倒置)培养，不需要振荡，C错误；培养过程中为促进酵母菌繁殖形成菌落，需要保持有氧条件，D错误。 5．(2024·绍兴高三联考)获取纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。下列叙述错误的是(　　) A．获取纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染 B．稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法 C．平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法 D．接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为纯培养物 答案　D 解析　纯培养物是由单一个体繁殖所获得的微生物群体，特定种类微生物的群体不一定是由单一个体繁殖而来，D错误。 6．酵母菌的培养与分离实验中，下列相关操作正确的是(　　) A．用于制备斜面培养基后剩余的部分可用于制备液体培养基 B．使用医用的脱脂棉制作棉塞可以很好地防止杂菌污染 C．给液体培养基接种、用划线法给平板和斜面培养基接种都要用到接种环 D．培养和分离酵母菌的培养基也可以用来培养和分离大肠杆菌 答案　C 解析　斜面培养基中含有凝固剂，不能再被用于制备液体培养基，A错误；脱脂棉吸水后容易引起杂菌污染，B错误；给液体培养基接种、用划线法给平板和斜面培养基接种都要用到接种环，C正确；培养和分离酵母菌的培养基不能用来培养和分离大肠杆菌，培养大肠杆菌用LB培养基，D错误。 7．(2023·台州高三模拟)尿酸氧化酶能分解尿酸(C5H4N4O3)，为获取尿酸氧化酶高产菌株用以研制治疗高尿酸血症的酶类药物，科研人员从海洋泥土中取样后富集培养，3天后吸取培养液梯度稀释到1×10－6，然后接种到固体培养基上分离培养。挑取单菌落检测尿酸氧化酶的酶活性(用每分钟转化1 μmol尿酸所需要的酶量表示)，结果如表所示。下列分析错误的是(　　) 菌株 1 2 3 4 酶活性 100 50 14 20 A.从海洋泥土中取的样品需在无菌条件下富集培养 B．需要在以尿酸为唯一氮源的固体培养基上分离培养 C．菌株3的酶活性最高，可为实验所需的目的菌 D．分离培养时采用了平板划线法进行接种 答案　D 解析　为避免杂菌污染，应在无菌条件下富集培养样品，A正确；实验目的是获取尿酸氧化酶高产菌株，故需要在以尿酸作为唯一氮源的固体培养基上分离培养，B正确；酶活性用每分钟转化1 μmol尿酸所需要的酶量表示，故所需酶量越少说明酶活性越高，由表可知，菌株3的酶活性最高，故其可作为实验所需的目的菌，C正确；分离培养时采用了稀释涂布平板法进行接种，D错误。 8．(2024·金华高三月考)某兴趣小组对土壤中细菌进行分离并计数，利用选择培养基筛选某种细菌，下列叙述正确的是(　　) A．可配制以(NH4)2SO4为唯一氮源的培养基用于筛选硝化细菌 B．所有培养基的成分均需进行高压蒸汽灭菌 C．脲酶将尿素分解成氨，使培养基的pH降低，加入酚红指示剂后变红 D．本实验可采用稀释涂布平板法或平板划线法进行接种 答案　A 解析　以无机氮源(NH4)2SO4为唯一氮源的培养基属于选择培养基，可用于筛选硝化细菌，A正确；对于维生素等热稳定性不强的成分，不能进行高压蒸汽灭菌，可以进行过滤除菌，B错误；脲酶将尿素分解成氨，氨呈碱性，使培养基的pH升高，加入酚红指示剂后变红，C错误；若本实验需要计数，只能采用稀释涂布平板法进行接种，D错误。 9．(2024·杭州高三联考)如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析，下列说法错误的是(　　) A．某一稀释度下至少涂3个平板，该实验方法统计得到的结果常会比实际活菌数目少 B．3号试管中的样品溶液稀释倍数为104倍 C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×108个 D．该实验需设置牛肉膏蛋白胨培养基作对照，用以判断选择培养基是否有选择作用 答案　C 解析　设置重复组，可以增强实验的说服力与准确性，故某一稀释度下至少涂3个平板；稀释涂布平板法得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落的情况，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目少，A正确；据图可知，将10 g土样用无菌水定容至100 mL后，此时土样稀释倍数为10倍，再经3次10倍稀释得到3号试管中的样品，故3号试管中样品的稀释倍数是104倍，B正确；由5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果可知，每克土壤中的菌株数约为(168＋175＋167)÷3×106÷0.1＝1.7×109(个)，C错误；要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置接种了的牛肉膏蛋白胨培养基作对照，若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落种类数目多于选择培养基上的，则说明起到了选择作用，D正确。 10．对酵母菌活菌进行计数时，下列做法可导致统计的活菌数高于实际值的是(　　) A．用同一支移液管配制一系列一定浓度梯度的稀释液 B．用显微镜计数法对台盼蓝染色后的活酵母菌进行计数 C．用稀释涂布平板法计数时，酵母菌的培养时间不足 D．接种酵母菌时，培养基的温度过高 答案　A 解析　若用同一支移液管配制一系列一定浓度梯度的稀释液，由于每次吸液后移液管中都有菌液残留，这种做法会导致统计的活菌数高于实际值，A符合题意；显微镜计数法计数酵母菌活菌数量时，可用台盼蓝对酵母菌进行染色，能被染色的是死酵母菌，不能被染色的是活酵母菌，不会导致统计结果高于实际值，B不符合题意；用稀释涂布平板法计数时，计数的结果通常都会比实际值低，若酵母菌的培养时间不足，统计的活菌数会比实际值更低，C不符合题意；接种酵母菌时，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～25 ℃，若培养基的温度过高，会杀死酵母菌，导致统计的活菌数低于实际值，D不符合题意。 11．(2024·嘉兴高三模拟)将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌(菌株a和b)进行如图所示的实验。 下列叙述正确的是(　　) A．基本培养基中包含菌株a和b的生长因子 B．菌株a和b需要的生长因子一定有所不同 C．接种至基本培养基时宜用平板划线法 D．基本培养基出现的少量菌落皆为单菌落 答案　B 解析　单独培养菌株a和b时，培养基中均无法生长菌落，而当菌株a和b共同培养时，培养基中有少量菌落产生，因此培养基无法提供它们各自单独生长所需的生长因子，也说明它们能够相互提供对方所需的生长因子，因此它们所需要的生长因子一定有所不同，A错误，B正确；根据菌株a和b混合培养后菌落的分布情况可知，接种至基本培养基时宜用稀释涂布平板法，C错误；基本培养基中出现的少量菌落不一定都为单菌落，也有可能是重叠的菌落，D错误。 12．(2024·绍兴鲁迅中学高三质检)野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，赖氨酸营养缺陷型突变菌由于发生基因突变，只能在添加了赖氨酸的培养基上生长。如图为以野生型菌株为材料，诱变、纯化赖氨酸营养缺陷突变株的部分流程图，数字代表培养基，A、B、C表示操作步骤。下列有关说法正确的是(　　) A．野生型大肠杆菌能够合成所需的全部氨基酸，因此培养基中无需提供氮源 B．①②④培养基中需添加赖氨酸，而③培养基中不能添加赖氨酸 C．需将①中的菌液适当稀释后，用接种环蘸取菌液在②上进行划线接种 D．从④培养基中挑取乙菌落进行纯化培养即可获得所需突变株 答案　B 解析　野生型大肠杆菌菌株需要利用培养基提供的氮源合成所需的全部氨基酸，A错误；图中①②④为完全培养基，需添加赖氨酸，③为基本培养基，不能添加赖氨酸，B正确；需将①中的菌液适当稀释后，用涂布器将菌液均匀地涂布在②表面，C错误；甲在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明甲是赖氨酸营养缺陷型菌落，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取甲菌落进行纯化培养获得所需突变株，D错误。 二、非选择题 13．请回答从土壤中分离产脲酶细菌实验的有关问题： (1)LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加适量的__________，灭菌备用。 (2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用__________灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗________________，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入已经灭菌的含有________指示剂的培养基中，备用。 (3)取0.1 mL的10－4、10－5两种土壤稀释液，分别用________________法接种到LB固体全营养培养基和尿素固体培养基上，培养48 h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是________(填字母)。 A．10－5稀释液＋尿素固体培养基 B．10－5稀释液＋LB固体培养基 C．10－4稀释液＋尿素固体培养基 D．10－4稀释液＋LB固体培养基 在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现______________。 (4)统计10－4稀释液接种培养后的菌落数分别是59、57、61，则样品中菌落的数量为________个/mL，该方法测得的数值比实际值偏低的原因：________________________________ ___________________________________________________________________________。 答案　(1)琼脂　(2)高压蒸汽　孔径小，细菌不能滤过　酚红　(3)稀释涂布平板　A　红色透明圈　(4)5.9×106　当两个或多个菌体连在一起生长时，平板上计数的是一个菌落 14．营养缺陷型突变株在基本培养基(不添加特殊营养物)上不能正常生长，只能在完全培养基(能满足微生物的各种营养缺陷型的生长)上才能正常生长。现将诱变处理后的菌液稀释后接种于某培养基上培养，用灭菌牙签逐个挑取待测菌，先后点接于A、B培养基上，前后位置及号码相对应，培养后菌落生长情况如图所示。请回答相关问题： (1)进行诱变处理时，菌液中的细胞必须处于均匀分散、悬浮状态，目的是_______________________________________________________________________________ _________________________________________________________________(答出2点即可)。 (2)过程①的接种方法为________________，A、B培养基应分别为______________________________(填“基本培养基”或“完全培养基”)。 (3)为进一步确定缺陷型菌株属于何种氨基酸缺陷型，实验人员进行了如下操作： ①用接种针挑取培养基__________(填“A”或“B”)中的__________号菌落分别接种于盛有完全培养液的离心管中，28 ℃振荡培养1～2天后，离心，取沉淀用__________洗涤菌体3次并制备成菌悬液。 ②用______________吸取1 mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注约15 mL熔化并冷却至50 ℃左右的基本琼脂培养基，冷凝后用记号笔在培养皿的皿底划分五个区域，做好标记。 ③在划分五个区域上放入少量分组的氨基酸结晶或粉末(五组混合氨基酸如表所示)，制作选择培养基。经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。 组别 所含氨基酸 A 组氨酸 苏氨酸 谷氨酸 天冬酰胺 亮氨酸 B 精氨酸 苏氨酸 赖氨酸 甲硫氨酸 苯丙氨酸 C 酪氨酸 谷氨酸 赖氨酸 色氨酸 丙氨酸 D 甘氨酸 天冬氨酸 甲硫氨酸 组氨酸 丝氨酸 E 半胱氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 丙氨酸 丝氨酸 在上述鉴定实验中，发现在培养基的A、D区域出现生长圈，则说明该缺陷型属于________________________________________________________________________。 答案　(1)分散、悬浮状态的细胞可以均匀地接触诱变剂，并防止长出不纯菌落　(2)稀释涂布平板法　基本培养基、完全培养基　(3)①B　6、8　无菌水　②无菌移液器　③组氨酸缺陷型 解析　(2)据题图分析可知，过程①所得的菌落均匀分布，所用方法是稀释涂布平板法；A中菌落少于B中菌落，说明A为基本培养基，B培养基中添加了某种缺陷型菌种所不能合成的物质，即为完全培养基。(3)①B中含有突变的缺陷型菌株(6、8)，因此应用接种针挑取培养基B中的6、8号菌落分别接种于盛有完全培养液的离心管中，28 ℃振荡培养1～2天后，离心，取沉淀用无菌水洗涤菌体3次并制备成菌悬液。②用无菌移液器吸取1 mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注约15 mL熔化并冷却至50 ℃左右的基本琼脂培养基，冷凝后用记号笔在培养皿的皿底划分五个区域，做好标记。③根据题意可知，在培养基的A、D区域出现生长圈，说明A和D两种培养基中存在缺陷的氨基酸，比较A和D的相同点，可知二者都含有组氨酸，因此可说明该缺陷型属于组氨酸缺陷型。 谢谢！ 学科网（北京）股份有限公司 $