第4章 第1节 课时2 基因工程的基本操作-【学霸黑白题】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程（浙科版）

了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用 BamH I和HindⅢ两种限制酶同时处理，C正确；从题图1可以看出， 质粒上只含有一个EcoR I的酶切位点，因此被该酶切割后，质粒变 为线性双链DNA分子，因每条单链上含有一个游离的磷酸基团，因 此题图1所示的质粒分子切割后含有两个游离的磷酸基团，D正确。 故选B。 6.D解析：等位基因是指同源染色体相同位置控制相对性状的基因， 题图质粒无染色体结构，且amp'和tet'在同一个DNA分子上，不是 等位基因，A错误：质粒指细菌细胞中或酵母菌细胞中能自我复制的 小型环状的DNA,病毒的DNA不属于质粒，B错误：限制酶的作用部 位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，C错误；重 组质粒4中，氨苄青霉素抗性基因完好，四环素抗性基因被破坏，因 此用质粒4将目的基因导入大肠杆菌，该菌不能在含四环素的培养 基上生长，D正确。故选D。 7.B解析：多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接 得到环状DNA,其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有 3种，即片段乙自身连接、片段丁自身连接，片段乙和片段丁连接， A正确，B错误：切割DNA的工具是限制酶，限制酶是基因工程必需 的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别DNA上特定的核苷酸序 列，C正确；根据题图中黏性末端可知，酶M和酶N识别的片段可能 是AGCGCT成crccAc TCGCGA CACGTG,由题干已知酶M特异性剪切的DNM片段是 AGCGCT TCGCCA ,所以酶N特异性剪切的DNA片段是CC,D正确。 压轴挑战 8.(1)磷酸二酯键黏性末端、平末端(2)②②(3)E.coli DNA 连接酶T4DNA连接酶(4)限制酶DNA连接酶DNA解旋 酶DNA聚合酶 解析：(1)限制性内切核酸酶作用的化学键是磷酸二酯键，限制酶切 割DNA分子后形成平末端或黏性末端。(2)题图1中显示，限制酶 ②的识别序列和切点是-GATC-,目的基因两端均有限制酶②的识 别序列，因此用限制酶②切割目的基因所在的DNA:限制酶②切割质 粒会把两个标记基因都破坏，不能选择限制酶②切割质粒。(3)常见 的DNA连接酶有E.coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。(4)根据题 图2可知，①是对DNA的切割，使用的酶为限制酶：②是对DNA片段 的连接，使用的酶为DNA连接酶：③是对DNA双链的解旋，使用的 酶为DNA解旋酶：④是DNA链的复制，使用的酶是DNA聚合酶。 课时2基因工程的基本操作 白题基础过关练 1,D解析：用甲图所示方法获取的是该细菌的全部DNA分子，因此用 限制酶切割后可用于构建基因组文库，A错误；乙图表示用逆转录法 获得的DNA分子，只包含该细菌的部分基因，因此可建立该细菌 的©DNA文库，B错误；甲图所示方法中，只要利用限制性内切核酸酶 将细菌原有的DNA切断即可，不需要以脱氧核苷三磷酸为原料合成 DNA,C错误；乙图所示方法中c为逆转录过程，需要逆转录酶参与 D正确。 2.B解析：通过PCR技术扩增目的基因时，需要用耐高温的Tag DNA 聚合酶催化单个脱氧核苷酸聚合形成DNA子链，A正确；在复制时， 引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶从引物的3' 端开始延伸DNA链，因此DNA合成方向总是从子链的5'端向3'端 延伸，B错误：PCR技术的原理是DNA双链复制，DNA复制时两条链 均作为复制的模板，C正确：DNA合成的原料是四种脱氧核苷三磷 正本参考答案 酸，同时两个核苷酸连接时可释放能量，D正确。 3.C解析：若该DNA分子为线性DNA分子，经限制性内切核酸酶 (EcoR I)完全酶切后得到4.0kb、1.5kb、1.0kb和0.5kb四种长度 的DNA片段，只能说明至少有3个限制酶(EcoR I)酶切位点，A错 误：DNA条带在凝胶中的位置与DNA相对分子质量有关，在凝胶中 长度4kb和1.5kb的DNA片段相邻，并不代表在这个DNA中两个 片段相邻，B错误：相对分子质量小的DNA移动速度快，故A端为加 样口，样品带负电荷，在电场中将向正极泳动，所以B端接正极，C正 确；电泳后一般加人EB溶液中进行染色，D错误。故选C。 4,B解析：基因表达载体的构建是基因工程的核心内容，基因表达载 体是载体的一种，除了目的基因外，它还有启动子、终止子和标记基 因等，①错误；启动子是RNA聚合酶的结合位点，有了启动子才能驱 动基因转录出mRNA,②正确；终止子控制着转录的结束，③正确；由 于受体细胞有植物、动物以及微生物之分，以及目的基因导入受体细 胞的方法不同，因此基因表达载体的构建不是完全相同的，④错误； 基因表达载体的构建一般在细胞外进行，⑤错误。②③正确，①④⑤ 错误。故选B。 5.C解析：胰岛素基因只在胰岛β细胞中才表达，因此胰岛素基因不 可通过胰岛a细胞的mRNA反转录获得，A错误：表达载体的复制启 动于复制原点，而胰岛素基因的表达启动于启动子，B错误：抗生素 抗性基因常作为基因工程的标记基因，借助标记基因可将含胰岛素 基因的受体细胞筛选出来，C正确：启动子启动转录过程，其在转录 中起作用，而终止密码子终止翻译过程，其在翻译过程中起作用， D错误。故选C。 6.B解析：由于受体细胞有植物、动物和微生物之分，以及目的基因导 入受体细胞的方式不同，所以基因表达载体的构建也会有所差别，不 可能千篇一律。 7.(1)不同的限制酶识别并剪切不同的碱基序列T4DNA连接酶 (2)编码所需蛋白质的基因启动子RNA聚合酶(3)Ca2+(或 CaCl2溶液)用于鉴定和筛选导入了基因表达载体的农杆菌 (4)PCR 解析：(1)T质粒具多种限制酶切割位点，不同的限制酶识别并切割 不同的碱基序列。连接平末端应选用T4DNA连接酶。(2)目的基 因主要是指编码所需蛋白质的基因。目的基因的上游具有启动子， 以便于RNA聚合酶识别和结合。(3)过程③常采用Ca2+(或CaCl2溶 液)处理农杆菌，使其处于易于吸收外源DNA分子的状态。抗生素 抗性基因T用于检测受体细胞中是否含有基因表达载体。(4)检测 农杆菌和愈伤组织细胞中是否有目的基因常采用PCR技术。 8.C解析：检测到受体细胞含有目的基因的表达产物才标志着基因工 程操作的成功，A错误；目的基因是否转录和翻译成功的检测方法依 次是分子杂交技术、抗原-抗体杂交技术，B错误：可从转基因生物中 提取蛋白质来检测目的基因是否翻译成相应蛋白质，C正确：抗虫 抗病鉴定可用于确定转基因生物是否具备相关性状，属于个体水平 的检测，D错误。故选C。 重难聚焦 9.(1)限制性内切核酸（或限制）核苷酸序列(2)磷酸二酯键 DNA单链以DNA为模板的DNA链的延伸(3)②④(4)B 解析：(1)根据题图可知，步骤I获取目的DNA片段，所用的EcoR I是 一种限制酶，能识别特定的核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的 两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(2)步骤Ⅱ是将目的DNA片段 连接成环状，其中DNA连接酶的作用是催化相邻核苷酸之间的3'羟基 和5'磷酸间形成磷酸二酯键。PCR循环中，升高温度到95℃是为了 打开氢键使双链解旋，获得DNA单链，Tag DNA聚合酶的作用是催化 游离的脱氧核苷酸连接到引物3'端，合成DNA子链。(3)引物的作用 黑白题21 是使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始延伸DNA子链，因为DNA的 合成方向总是从子链的5'端向3'端延伸，故为扩增未知序列，选择的与 模板链相结合的引物应为5'-TCATGAGCGCATAGTT-3'(引物④)和 5'-GCAATGCGTAGCCTCT-3'(引物②)。(4)分析题意可知，片段F的 两端为限制酶EcoR I切割后产生的黏性末端，因此其5'端序列应为 AATT,B正确。 黑题应用提优练 1.B解析：若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，DNA每条链上 会破坏2个磷酸二酯键，共破坏4个磷酸二酯键，A正确。由于DNA 聚合酶只能从5'→3延伸子链，图中的磷酸基团为5'端，羟基为3'端， 由引物3'端延伸子链，子链和模板链反向平行，因此根据引物的延伸 方向可知题图中与引物结合的部位是2、3，B错误。自然条件下，细 菌的转化效率很低，通过化学和物理方法的处理可以使细菌成为感 受态细胞，增强捕获外源DNA的能力。因Ca2+能促进细菌摄取外源 的DNA,科学家常使用CaCL2溶液制备感受态细胞，进而转人外源 DNA。若受体细胞为大肠杆菌，大肠杆菌常用的转化方法是：先用 Ca2+处理细胞，再将载体DNA分子溶于缓冲液中与此种细胞混合， 在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，C正确。如图所示， 设X基因为目的基因。经过第一轮复制以亲代DNA的两条链作模 板，可以得到①和②两种DNA;经过第二轮复制可以得到①和③、② 和④：经过第三轮复制可以得到①和③、③和⑤、②和④、④和⑤；第 四轮复制得到16个DNA分子，即①和③、2个③和2个⑤、②和④ 2个④和2个⑤、第三轮的2个⑤得到4个⑤（统计为①、②、3个③、 3个④、8个⑤)；第五轮复制得到32个DNA分子，即①和③、②和 ④、3个③和3个⑤、3个④和3个⑤、第四轮的8个⑤得16个⑤（统 计为①、②、4个③、4个④、22个⑤，其中⑤为目的基因，即还未获得 32个目的基因)，第六轮复制得64个DNA分子，即①和③、②和④、 4个③和4个⑤、4个④和4个⑤、第五轮的22个⑤得44个⑤（统计 为①、②、5个③、5个④、52个⑤，其中⑤为目的基因，即此时获得 32个符合要求的目的基因)，综上所述，需要至少6次循环可获得 32个符合要求的目的基因，D正确。故选B。 2.C解析：建立噬菌体展示库第一步是将目标基因和噬菌体DNA重 组，需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶，A正确；抗原-抗体杂交 可以检测特定蛋白质，B正确；噬菌体是病毒，不能直接在培养基中 培养，C错误；在第一次筛选后进行了诱变处理，并进行多轮筛选，不 断筛选与抗原亲和力更强的抗体和基因，D正确。故选C。 3.B解析：将基因表达载体导入细菌B之前，一般要先用C2+处理细 胞，使其处于感受态，而农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的 常用方法，A错误；由于重组质粒构建过程中四环素抗性基因被破 坏，所以能在含有四环素的培养基上生长的是导入普通质粒A的细 菌，B正确；PCR引物的设计是获得大量高纯度目的基因的关键，引 物中碱基数量越多，则引物的特异性越高，为防止特异性引物的特异 性差，PCR获取人生长邀素基因设计的特异性引物不宜过短，C错 误；基因表达的产物是蛋白质，目的基因成功表达的标志是受体细胞 中表达出相应的蛋白质，D错误。故选B。 4.(1)Ⅱ和Ⅲ使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷 酸(2)可以让H$A具有信号肽，有利于其进入内质网中进行加 工(3)氨苄青霉素不含组氨酸该基因表达载体上既有原核生 物复制原点，又有真核生物复制原点(4)可以通过控制培养液中甲 醇的有无来控制HSA基因的表达 解析：(1)PCR的原理是DNA双链复制，由于DNA聚合酶不能从头 合成，所以在PCR中需要加入引物，引物的作用是在合成子链时，使 DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，引物需要与模 选择性必修三·ZK 板的3'端结合，结合题图可知，要扩增出SA基因并用于表达载体的 构建，应选择的引物是Ⅱ和Ⅲ。(2)分析题意可知，基因S控制合成 信号肽，能引导后续合成的肽链进入内质网腔，故将HSA基因连接 S基因上形成融合基因，目的是让HSA具有信号肽，有利于其进入 内质网中进行加工。(3)据题意，HSA基因导人生产菌X需要经过 两次筛选：第一次筛选得到含HSA基因表达载体的大肠杆菌，大肠 杆菌是原核细胞，其生命活动被抗生素（如氨苄青雾素）抑制，而基因 表达载体中含有氨苄青霉素抗性基因，在含有氨苄青霉素的培养基 中，含HSA基因表达载体的大肠杆菌能生存：第二次筛选时，在此培 养基上生长的生产菌X含有HSA基因表达载体，生产菌X(一种组 氨酸缺陷型酵母菌)在不含组氨酸的培养基上不能生存，而基因表达 载体中含有HS4基因，控制合成组氨酸，在缺乏组氨酸的基本培养 基上培养，可在此培养基上生长的生产菌X含有HSA基因表达载 体；该基因表达载体上既有原核生物复制原点，又有真核生物复制原 点，故SA基因表达载体既可在大肠杆菌中又可在生产菌X中稳定 遗传。(4)A0X1为甲醇氧化酶的启动子，以其作为rHSA基因的启 动子时，在以甲醇为碳源的培养基中HSA基因正常表达，无甲醇时 该基因不表达，可以通过控制培养液中甲醇的有无来控制HSA基因 的表达。 压轴挑战 5.(1)415'端(2)CaCl2溶液转化卡那霉素导入LTP基因 (含重组质粒)(3)消毒脱分化去除根癌农杆菌(4)未变蓝 (或白)抗脂质转移蛋白的抗体探针（带标记的抗脂质转移蛋白的 抗体)将火龙果再生植株进行低温处理，观察其是否能在低温条件 下正常生长以确定其是否获得了新性状 解析：(1)DNA两条链是反向平行的，由于DNA复制时，子链是沿着 引物的5'→3方向延伸的，为保证目的基因的扩增以及切割后的目 的基因能与质粒准确相连（题图1箭头表示目的基因的转录方向，且 目的基因要插入在启动子和终止子之间)，故需要将NcoI和BstEⅡ 两种限制酶的识别序列分别添加在引物4、引物1的5'端。(2)将构 建的表达载体与经CaCL,处理获得的感受态根癌农杆菌混合，通过液 体悬浮培养完成转化（即将目的基因导入细胞）和细胞复苏，由于质 粒上含有标记基因一一卡那霉素抗性基因，因此可将菌液涂布在含 卡那霉素的培养基上培养，挑取单菌落进行PCR鉴定，以获得导入 LTP基因（含重组质粒）的根癌农杆菌。(3)从田间取得的火龙果茎 段属于外植体，需经消毒处理后，诱导其脱分化形成愈伤组织，加人 (2)中获得的根癌农杆菌共同培养，再转入含抗生素的培养基，此时 添加抗生素的主要目的是杀死根癌农杆菌，以保证后面筛选的能抗 卡那霉素的细胞是导入了重组质粒的受体细胞。(4)GUS基因编码 产生的B-葡萄糖苷酸酶能将无色物质X-G1uc分解，使植物组织呈 蓝色，否则为白色，目的基因的插入会破坏GUS基因，因此导入重组 质粒的细胞不能合成B-葡萄糖苷酸酶，不能将无色物质X-Guc分 解，故形成白色，因此选取白色的愈伤组织，继续培养得到幼苗。检 测目的基因是否成功表达，可用抗原-抗体杂交技术，即让待测蛋白 质与抗脂质转移蛋白的抗体探针发生抗原-抗体杂交。除分子水平 的检测方法外，还可以将火龙果再生植株进行低温处理，规察其是否 能在低温条件下正常生长以确定其是否获得了新性状。 第二节基因工程及其延伸技术应用广泛 白题 基础过关练 1.B解析：为增加器官的来源，可利用基因工程方法对猪的器官进行 改造：将器官供体基因组导入某种调节因子，抑制或除去抗原决定基 因，再通过诱导技术克隆猪器官代替人器官进行移植，A错误：将肠 黑白题22课时2基因] 白题基础过关练 题型1获取目的基因 1.甲、乙两图表示从某细菌细胞中获取目的基因 的两种方法，以下说法正确的是 ( 某细菌的DNA 某细菌的DNA mRNA 一目的基因 甲 A.甲图所示方法可建立该细菌的cDNA文库 B.乙图所示方法可建立该细菌的基因组文库 C.甲图所示方法要以脱氧核苷三磷酸为原料 D.乙图所示方法需要逆转录酶参与 题型2PCR技术与电泳 2.下列关于PCR反应体系中所加物质作用的叙 述，错误的是 ()》 A.耐高温的Tag DNA聚合酶用于催化DNA 子链的合成 B.引物使Tag DNA聚合酶能从引物的5'端延 伸DNA链 C.目标DNA母链用作子链DNA复制的模板 D.四种脱氧核苷三磷酸为PCR提供能量和原料 3.如图甲表示某DNA分子经限制酶(EcoR I) 完全酶切后的片段电泳结果，若改变条件使其 酶切不充分（但至少切割了一个识别序列）， 就有可能获得如图乙所示的电泳结果(kb即 千个碱基对)。下列叙述正确的是 A.该DNA是线性DNA, 其中有3个限制酶 4.0kb 40.5 (EcoR I)酶切位点 B.在这个DNA中长度 熙 0305 0 b 05 kh 4kb和1.5kb片段 B 相邻 C.在电泳时，A端为加样口，B端接正极 D.电泳后一定要用亚甲基蓝染色才能看到 条带 第四章 程的基本操作 限时：25min 题型3基因表达载体的构建 4.在基因表达载体的构建中，下列说法错误的是 ①一个基因表达载体的组成只包括目的基因、 启动子、终止子②有了启动子才能驱动基因 转录出mRNA③终止子的作用是使转录在 所需要的地方停止 ④所有基因表达载体的 构建是完全相同的⑤必须在细胞内进行 A.②③⑤ B.①④⑤ c.①②⑤ D.③④ 5.下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确 的是 A.表达载体中的胰岛素基因可通过人胰岛 细胞的mRNA反转录获得 B.表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启 动于复制原点 C.借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的 受体细胞筛选出来 D.启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转 录中起作用 6.如图为基因表达载体的模式图，下列有关基因 工程中载体的说法，错误的是 ( A.基因表达载体的构建 启动子) 插 是在生物体外完成的 基因 B.任何基因表达载体的 抗生素抗 止子 复制 性基因 构建都是一样的，没有原点 差别 表达载体 C.图中启动子位于基因的首端，是RNA聚合 酶识别和结合的部位 D.抗生素抗性基因的作用是作为标记基因， 用于鉴别受体细胞中是否导人了目的基因 题型4将目的基因导入受体细胞 7.农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的 T-DNA插入植物基因组中。图示为利用农杆 黑白题55 菌培育转基因植物的基本流程，请据图回答 问题： 目的基因 载体 5 回回④，⊙⊙ 9 农杆茵培养翻 Ti质粒 可。 愈伤组织试管苗 植物细胞 原生质体 (1)剪除T质粒的某些片段、替换复制原点0 与添加抗生素的抗性基因T的过程①中， 需用多种限制酶处理，原因是 ,需用 “缝合”双链DNA片段的平末端。 (2)目的基因是指 由过 程②形成的基因表达载体中，目的基因的 上游具有 ,它是 识别和 结合的部位。 (3)过程③常用 处理使农杆菌成 为感受态细胞。抗生素抗性基因T的 作用是 (4)可通过 技术检测试管苗的染色 体DNA上是否插入了目的基因 题型5目的基因及其表达产物的检测与鉴定 8.下列关于目的基因的检测与鉴定的叙述，正确 的是 ( ) A.目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关 键是能否转录出mRNA B.可采用PCR检测目的基因是否转录和翻译 成功 C.可从转基因生物中提取蛋白质来检测目的 基因是否翻译成相应蛋白质 D.抗虫、抗病检验可用于确定转基因生物是 否具备相关性状属于分子水平的检测 重难聚焦 9.如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR 的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序 列，具体流程如图（以EcoR I酶切为例）。 请据图回答问题： 选择性必修三·ZK 来色体DNA I酶切JECOR IGAATTC C TTAAG 混合的DNA片段 5' 未知序列 已知序列 未知序列 L片段F Ⅱ连接DNA连接酶 已知序列 PCR引物 环状DNA ∠EcoR I Ⅲ扩增Taq DNA聚合酶 ☐PCR产物 Ⅳ测序、分析 -一------一-3′、 (1)步骤I用的EcoR I是一种 酶，它能识 别DNA上特定的 ,切割特定位点。 (2)步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸 之间的3羟基与5磷酸间形成 PCR循环中，升温到95℃是为了获 得 ;Tag DNA聚合酶的作用是催化 0 (3)下表为已知的DNA序列和设计的一些 PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是 (填编号)。 DNA序列（中间处省略了部分核 苷酸序列) 已知 5-AACTATGCGCTCATGA-GCAATGCGTAGCCTCT-3 1111日1101日 序列 3-TTGATACGCGAGTACT-CGTTACGCATCGGAGA-5 D5'-AACTATGCGCTCATGA-3' PCR 25'-GCAATGCGTAGCCTCT-3' 引物 35'-AGAGGCTACGCATTGC-3' 45'-TCATGAGCGCATAGTT-3 (4)对PCR产物测序，经分析得到了片段F的 完整序列。下列DNA单链序列中（中间处 省略了部分核苷酸序列)，结果正确 的是 A.5'-AACTATGCG...AGCCCTT-3 B.5'-AATTCCATG...CTGAATT-3' C.5-GCAATGCGT...TCGGGAA-3' D.5'-TTGATACGC...CGAGTAC-3' 黑白题56 黑题应用提优练 1.(2023·福建厦门月考)蜘蛛丝（丝蛋白）被称 为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛 丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其 中1~4表示DNA上引物可能结合的位置，目 前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。 下列有关叙述错误的是 ( ① 一OH HO 蛛丝蛋台基因 ① A.若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基 因，会破坏4个磷酸二酯键 B.若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、 4分别是2种引物结合的位置 C.若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca+处 理，更利于实现转化 D.在PCR仪中根据选定的引物至少需经过 6次循环才可获得32个符合要求的目的 基因 2.噬菌体展示技术（如图）可将某些蛋白质呈递 至噬菌体表面，便于对目标蛋白进行筛选、鉴 定。以下对该技术的分析错误的是( ) P目标蛋白 巴目标基因 诱变 扩大 多轮 一→筛选一培养一筛选 噬菌体 噬菌体载体 LA 建立噬菌体展示库 A.建立噬菌体展示库需限制性内切核酸酶和 DNA连接酶 B.可利用抗原-抗体杂交技术筛选目标蛋白 C.用含有碳源、氮源等营养物质的液体培养 基扩大培养噬菌体 D.该技术可用于获得与抗原亲和力更强的抗 体及其基因 3.(2023·江苏常州期中)如图是将人的生长激 素基因导入细菌细胞B内制备“工程菌”的示 意图。已知细菌细胞B内不含质粒A,也不含 质粒A上的基因。下列说法正确的是() 第四章 限时：35min 人的生长 质粒A 激素基因 注： ■四环素抗性基因 结合 22☑氨苄青霉素抗性基因 a,点为目的基因与质粒A的结合位，点 重组 质粒 入细商B一转化的细菌检测工程蔺 筛选 A.将重组质粒导入细菌细胞B常用的方法是 农杆菌转化法 B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环 素的培养基上，能生长的只是导入了普通 质粒的细菌 C.为防止特异性引物的特异性差，PCR获取 人生长激素基因设计的特异性引物不宜 过长 D.目的基因成功表达的标志是受体细胞中含 有人的生长激素基因 4.(2023·山东青岛期末)人血清白蛋白(HSA) 是血浆蛋白的主要成分，具有维持血浆渗透压 和进行物质运输的功能。利用基因工程生产 重组人血清白蛋白(HSA)可解决HSA短缺 问题。科研人员依据基因组中HSA基因的碱 基序列，同时考虑生产菌X(一种组氨酸缺陷 型酵母菌)的生理特点，人工设计了HSA基 因。图1表示HSA基因，图2为基因工程所用 质粒及相关元件（基因S控制合成信号肽，能 引导后续合成的肽链进入内质网腔；HIS4控 制合成组氨酸)。请回答下列问题： ① 引物IHSA基因引物Ⅱ _0H HO 引物Ⅲ 引物Ⅳ ① 图1 Sn2B I EroR I Aur II Nat I AOX1 S基因 终止子 原核 真核 生物 生物 复制 复制 原点 原点 氨苄青霉素 HIS4 抗性基因 图2 黑白题57 (1)若要扩增出HSA基因并用于表达载体的 构建，应选择的引物是 ,其作 用是 (2)将rHSA基因连接到S基因上形成融合基 因，目的是 (3)rHSA基因导入生产菌X需要经过两次筛 选：第一次在含有 的培养 基中筛选得到含rHSA基因表达载体的大 肠杆菌；第二次筛选时，将上述大肠杆菌 与生产菌X混合，然后在 的 基本培养基上培养，可在此培养基上生长 的生产菌X含有rHSA基因表达载 体。HSA基因表达载体既可在大肠杆菌 中又可在生产菌X中稳定遗传的原因是 (4)A0X1为甲醇氧化酶的启动子，其作为 rHSA基因的启动子时，在以甲醇为碳源 的培养基中rHSA基因正常表达，无甲醇 时该基因不表达。从生产控制的角度分 析，选用AOX1作为SA基因的启动子 的优点是 压轴挑战 5.(2023·浙江舟山期末)火龙果在低温下幼 嫩茎段会部分受到伤害，脂质转移蛋白 (LTPs)被证实在植物抵抗低温胁迫中有重 要作用，控制该蛋白合成的基因结构如图1 所示。某课题研究组将LTP基因导人火龙 果愈伤组织，以获得抗寒能力强的火龙果。 回答下列问题： 选择性必修三·ZK 引物1LTP基因引物2 3 5' 3 引物3 引物4 图1 启动子 -Neo I GUS基因 -BstE II T-DNA 终止子 卡那霉 素抗性 基因 复制起点 图2 注：图1箭头表示目的基因的转录方向；图2Nc0oI和BstEⅡ为 不同限制酶的识别位点；T-DNA中标出的启动子属于真核细 胞表达系统；GUS基因编码产生的B-葡萄糖苷酸酶能将无色 物质X-Guc分解，使植物组织呈蓝色，否则为白色 (1)采用PCR技术克隆LTP基因时，为使目的 基因能与图2所示的载体准确连接，将NcoI 和BsEⅡ两种限制酶的识别序列分别添加 在引物 、引物 (填引物编 号)的 (填“3'端”或“5端”)。 (2)将构建的表达载体与经 处理获 得的感受态根癌农杆菌混合，通过液体悬 浮培养完成 和细胞复苏，再将 菌液涂布在含 的培养基上培 养，挑取单菌落进行PCR鉴定，以获得 的根癌农杆菌。 (3)从田间取得的火龙果茎段经 处 理后，诱导其 形成愈伤组织，加 入(2)中获得的根癌农杆菌共同培养，再转 入含抗生素的培养基，此时添加抗生素的 主要目的是 (4)经上述处理后的愈伤组织放入含X-Gluc 的选择培养基中培养，选取 色的 愈伤组织，继续培养得到幼苗。为进一步 确定该幼苗中的LTP基因是否表达，从转 基因细胞中提取蛋白质，经处理固定在硝 酸纤维素膜上，让待测蛋白质与 发生抗原-抗体杂交。除分子水平的检测 方法外，还可以用 的方法。 进阶突破拔高练P11 黑白题58