内容正文:
解析:(1)在微生物学中将接种于培养基内,在合适条件下形成的含
特定种类微生物的群体称为纯培养物。即由单一个体繁殖所获得的
微生物群体。对于本实验来说就是根瘤菌繁殖得到的单菌落。
(2)植物组织培养的过程先是脱分化形成愈伤组织,后再分化形成试
管苗。细胞全能性是指细胞经分裂和分化后,仍具有产生完整有机
体或分化成其他各种细胞的潜能和特性。(3)因为甲组和乙组的区
别是固氨菌,所以要保证培养液中没有氮源,探究的是接种到试管菌
上的根瘤菌是否具有固氮能力,如果甲长得好,说明接种到试管菌上
的根瘤菌具有固氮能力。(4)微生物肥料除了能够促进植物生长,起
到肥沃土壤的作用之外,还能够减少化肥的使用,改良土壤,保护
环境。
5.(1)遗传间种(2)DNA聚合酶愈伤组织(3)继代杀灭发根
农杆菌转速营养元素以及生长调节剂的种类和浓度
第三章
动
第一节细胞培养是动物细胞工程的基础
白题基础过关练
1.D解析:动物细胞培养需要无菌、无毒的环境,①②正确;用于动物
细胞培养的合成培养基需加入糖类、氨基酸、无机盐、维生素等,还需
加入动物血清、血浆等天然成分,③正确:动物细胞培养需要适宜的
温度和pH,其中温度要与动物体温相近,④⑥正确;动物细胞培养需
要一定的气体环境(95%空气和5%C02),⑤错误。故选D。
2.A解析:动物细胞培养过程中,在培养液中加人一定量的抗生素,主
要是为了防止细菌和真菌的污染,A错误:动物血清中含有很多营养
物质,因此血清能补充培养基中缺乏的物质,B正确:细胞进行需氧
呼吸需要氧气,因此氧气能满足细胞代谢的需要,C正确;二氧化碳
能维持培养液的pH,D正确。故选A。
3.C解析:动物细胞培养液中,除了要添加糖类、氨基酸、无机盐、维生
素等细胞生长必需的营养成分,一般还需要添加动物血清等,A正
确;培养液需要定期更换,以排出代谢废物,防止细胞代谢产生的有
毒物质危害细胞,B正确:大多数细胞适宜的pH为7.2~7.4,偏离此
范围会对细胞造成损害,C错误;动物细胞培养时,培养液中还可以
加入一定量的抗生素,来抑制可能造成污染的细菌和真菌生长,D正
确。故选C。
4,B解析:用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组织,
因为这些细胞生命力旺盛,分裂能力强,A正确;动物细胞培养的适
宜pH为7.2~7.4,这样的环境会使胃蛋白酶变性失活,因此在动物细
胞培养过程中,应将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理,使其分散
成单个细胞,B错误;在细胞培养过程中,当出现接触抑制后,常常需
要分瓶继续培养,这时需要用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)将贴壁细
胞分离开,制成细胞悬液,C正确:培养的动物细胞可以用于检测有
毒物质,判断某种物质的毒性,若用含被检测物质的培养基培养细
胞,发生变异的细胞数目所占比例比对照组大,则说明该物质具有一
定的毒性,D正确。故选B。
5.D解析:甲→乙是组织细胞的分离,用胰蛋白酶或胶原蛋白酶分解
细胞间蛋白质,制备细胞悬液,A正确:丙过程还未分瓶,属于原代培
养,培养基中需要添加动物血清等天然成分,B正确:在动物细胞培
养过程中会出现细胞贴壁和接触抑制的现象,C正确;丁过程已经分
瓶培养,属于传代培养,丁过程并没有体现动物细胞的全能性,
D错误。
6.B解析:由题图可知,在B点时更换了培养基,因此A点时为原代
选择性必修三·ZK
解析:(1)生物多样性包括遗传多样性、物种多样性和生态系统多样
性,三叶青的林下种植可保护三叶青的遗传多样性和保证药材的品
质;三叶青的林下种植,利用了间种技术。(2)分析题意可知,从质粒
上复制并切割出一段可转移的DNA片段(T-DNA),DNA复制需要
DNA聚合酶,由分析可知,酚类化合物诱导发根农杆菌质粒上i系
列基因表达,形成DNA聚合酶和限制性内切核酸酶等。根据植物组
织培养技术过程可知,相应植物激素可以促使叶片细胞脱分化形成
愈伤组织,再分化形成毛状根。(3)剪取毛状根,转入含头孢类抗生
素的固体培养基上进行多次继代培养,培养基中添加抗生素的主要
目的是杀灭发根农杆菌。最后取毛状根转入液体培养基,置于摇床
上进行悬浮培养,通过控制摇床的转速和温度,调节培养基成分中的
营养元素以及生长调节剂的种类和浓度,获得大量毛状根,用于提取
药用成分。
物细胞工程
培养,A正确:B点时更换培养基,需要将原培养瓶内的细胞分离,因
此需要用胰蛋白酶等处理,B错误;BC段增殖代数较多,显然进行了
多次传代培养,C正确;由题图可知,D点后可无限增殖,故CD段细
胞可能是保留了无限细胞系,D正确。故选B。
7.C解析:二倍体动物细胞通常为有限细胞系,不能连续分裂,A正
确;原代培养物在首次传代时就成了细胞系,能连续培养下去的细胞
系称为连续细胞系,有的连续细胞系是恶性细胞系,具有异体致癌
性,连续细胞系的遗传物质发生了改变,获得了不死性,但保留接触
抑制现象,不致癌,B正确:良性无限细胞系具有不死性,但保留接触
抑制现象,不致癌,C错误;细胞株是具有特殊性质的细胞系,其中每
个细胞的遗传物质均未改变,每个细胞的遗传性状相同,D正确。故
选C。
8.(1)相互接触接触抑制单层(或一层)胰蛋白酶或胶原蛋白
酶(2)衰老(甚至死亡)不死性降低减少(3)活细胞的细
胞膜具有选择透过性,大分子染料不能进入活细胞内,故活细胞不能
着色(或死细胞的细胞膜丧失了选择透过性,大分子染料能够进入死
细胞内而着色)(4)有丝分裂中(5)冷冻(或超低温、液氨)
酶新陈代谢
解析:动物细胞在体外培养时,当贴壁细胞分裂生长到相互接触时,
细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制,需用胰蛋白
酶或胶原蛋白酶处理后再分瓶培养。在细胞培养过程中,随传代次
数增多,大部分细胞停止分裂,进而出现衰老甚至死亡现象,少部分
细胞会克服细胞寿命的自然极限,获得不死性,这些细胞已经发生了
突变,正在朝着等同于癌细胞的方向发展。癌细胞细胞膜表面的糖
蛋白减少,黏着性降低。活细胞的细胞膜具有选择透过性,大分子染
料无法进入细胞内,因此不会着色。
9.A解析:植物组织培养的原理是植物细胞的全能性,动物细胞培养
的原理是细胞增殖,A错误;动物细胞培养使用液体培养基,制成细
胞悬液;植物组织培养一般使用固体培养基,B正确;动物细胞培养
的主要过程是原代培养和传代培养,植物组织培养的主要过程是
脱分化、再分化、形成完整植株,C正确;动物细胞培养的目的是获得
大量细胞或细胞产物,植物组织培养主要用于植物快速繁殖、获得脱
毒苗、制备人工种子等,D正确。故选A。
重难聚焦
10,(1)胰蛋白酶、胶原蛋白酶细胞分裂能力强(2)有利于抑制细
菌的生长和繁殖(3)不适合因为原代培养的细胞数量少,不利
于实验得出准确的结论(4)可将肝肿瘤细胞(甲)均分为A、B两
组,A组细胞培养液中加入药物Y,B组细胞培养液中加入无菌生理
黑白题12
盐水;培养一定时间后,从A、B两组收集等量细胞;检测X基因
在A、B两组细胞中表达的mRNA或蛋白质的水平,以确定药物Y
的药效
解析:(1)从小鼠体内取出的成块肝组织中,细胞与细胞靠在一起,
彼此限制了生长和增殖,因此,在进行细胞培养时,首先要对所取的
新鲜小鼠肝组织进行处理,或用机械的方法,或用胰蛋白酶、胶原蛋
白酶等处理一段时间,将组织分散成单个细胞,然后制成细胞悬液
进行培养;由于小鼠肝组织细胞有细胞增殖能力,且幼龄小鼠的肝
组织细胞的分裂能力强,因此,用于实验的肝组织块一般应从幼龄
小鼠获取。(2)由于培养细胞的培养基也适于细菌生长,为避免细
菌的侵害,在进行细胞培养时,除营养、温度、pH、渗透压、气体环境
等要符合条件外,培养液中应再添加一定量的抗生素,其可起到抑
制细菌生长和繁殖的作用,从而保证所需动物细胞的培养。(3)如
果要选取一定量的肝组织细胞检测药物Y对小鼠正常肝细胞(乙)
的毒性,选用原代培养的细胞是不适合的,因为原代培养的细胞数
量少,不利于实验得出准确的结果。(4)由于肝细胞中的X基因的
过量表达与肝肿瘤的发生密切相关,因此如果要检测药物Y的疗
效,实验的主要思路为将肝肿瘤细胞(甲)均分为A、B两组,A组细
胞培养液中加入药物Y,B组细胞培养液中加入无菌生理盐水;培
养一定时间后,从A、B两组收集等量细胞,检测X基因在A、B两组
细胞中表达的mRNA或蛋白质的水平,以确定药物Y的药效。若
A组细胞中表达的mRNA或蛋白质的水平低于B组,说明药物Y的
疗效好;若A组细胞中表达的mRNA或蛋白质的水平与B组的无
明显差异,说明药物Y无效。
黑题应用提优练
1.C解析:为防止细菌污染,可往培养液中加入一定的抗生素,瓶口密
封不可有效地防止污染,A错误:瓶口密封不会影响细胞接触抑制现
象,B错误:培养瓶瓶口密封会使培养液中缺氧,皮肤细胞厌氧呼吸
产生乳酸增多,使培养基呈弱酸性,使细胞生存环境恶劣且能量供应
不足等,可能使细胞生长缓慢,C正确,D错误。故选C。
2.D解析:动物细胞培养都需要培养液,因此,乙种细胞、甲种细胞培
养时都需要培养液,A错误:细胞培养时需要在培养基中添加胰岛
素,以促进细胞对葡萄糖的摄取利用,B错误;细胞克隆最基本的要
求就是保证分离出来的细胞是一个而不是多个,但是单细胞悬液中
含有多种类型的细胞,必须经过纯化,对一个细胞进行培养获得的后
代才称为细胞克隆,C错误:甲细胞为肝肿瘤细胞,可以无限增殖,乙
细胞为正常肝细胞,会出现增殖停止现象,所以说甲细胞传代的次数
更多,D正确。故选D。
3.B解析:动物细胞不能用稀释涂布平板法计数,A错误;传代培养
时,常用胰蛋白酶处理使原培养瓶内细胞分散为单个细胞,B正确;
随着细胞传代次数不断增加,细胞逐渐衰老,细胞分裂速度变慢,传
代间隔的时长越来越长,C错误:动物细胞培养过程中的良性无限细
胞系会出现接触抑制现象,D错误。故选B。
4.B解析:成块的组织中细胞与细胞靠在一起,在培养前需用胰蛋白
酶或胶原蛋白酶处理将组织块分散成单个细胞后才能进行培养,
A正确:细胞培养过程需要对培养液、培养用具进行灭菌,细胞培养
过程需要对培养液添加抗生素防止细菌污染,定期更换培养液以防
止细胞代谢产物造成毒害,B错误;动物细胞在培养过程中会出现细
胞贴壁和接触抑制的现象,由此推测第二种细胞会贴壁到无细胞区,
当两种细胞分裂生长到表面相互接触时停止分裂,C正确;细胞膜表
面上可能存在接受邻近细胞信号的受体,以完成细胞间的信息交流,
通过检测混合培养液中是否存在信息类物质可初步推测两种细胞间
的信息交流方式,D正确。故选B。
正本参考答案
压轴挑战
5.B解析:动物细胞培养时应在培养液中加入动物血清等,因此培养
胃癌细胞,需将含动物血清的培养基置于恒温培养箱中,A正确:癌
细胞的糖蛋白减少,黏着性显著降低,不会出现接触抑制,B错误;
EV0能通过诱导胃癌细胞中p53蛋白的表达,使其细胞周期阻滞在
间期和分裂期之间,说明其可能是一种细胞周期抑制蛋白,抑制细胞
增殖,C正确;EV0还能影响细胞调亡蛋白Caspase3的表达,因此患
者服用EV0后,胃癌细胞中Caspase3的含量会增加,促进细胞凋亡,
D正确。故选B。
四解题指导
癌细胞具有无限增殖的能力,EV0不仅能通过诱导胃癌细胞中
p53蛋白的表达,使其细胞周期阻滞在G,/M期,使鈿胞停止分
裂,还能影响细胞调亡蛋白Caspase3的表达,促进细胞调亡,最终
起到治疗胃癌的作用。
第二节通过细胞核移植克隆动物
白题基础过关练
1.B解析:首次将核移植技术应用于鱼类的是我国实验胚胎学主要创
始人童第周先生。
2.D解析:生物的性状主要由细胞核中的遗传物质控制,由于细胞核
基因完全来自甲羊,克隆羊的主要性状与甲羊基本一致,A正确:克
隆羊“多莉”的培育过程中用到了胚胎移植技术、细胞核移植技术和
动物细胞培养等技术,B正确:卵母细胞的细胞质中含有促进核基因
表达的物质,能调控细胞核基因的表达,因此通常将细胞核移植到去
核的卵母细胞中,C正确;此实验只能说明高度分化的动物细胞的细
胞核具有全能性,D错误。故选D。
3.(1)细胞核去核重组胚胎子宫(2)动物体细胞核A两
雌不同
解析:(1)依据题意可知要获得由A细胞核和B细胞质组成的重组
细胞,需要提取A细胞核,然后与去掉B细胞核的B细胞质进行重
组,得到重组细胞,进一步培养得到重组胚胎,再进行胚胎移植,移植
到代孕母牛的子宫里进行培育。(2)克隆动物利用动物细胞细胞核
的全能性,得到的新个体的性状主要由细胞核决定,与供核母牛的性
状基本一致,杂交牛是由精子和卵细胞融合得到的受精卵发育来的,
细胞核来自两个亲本,由于精子含有很少的细胞质,受精卵的细胞质
主要来自卵细胞,所以杂交牛和克隆牛的遗传物质不同。
4.D解析:利用体细胞克隆技术可加速家畜遗传改良进程,促进优良
畜群繁育,A正确:转基因克隆动物的组织和器官可以作为移植治疗
的供体,B正确;利用体细胞核移植技术可增加动物数量,在保护颜
危物种方面具有重要作用,C正确:动物体细胞核移植技术体现出动
物体细胞核具有全能性,D错误。故选D。
黑题应用提优练
1,A解析:细胞核是遗传物质贮存和复制的场所,是细胞遗传和代谢
的控制中心。克隆鼠的细胞核来自雄棕鼠体细胞,细胞质来自雕黑
鼠卵细胞,在白鼠的子宫内发育,所以性状主要由雄棕鼠的细胞核决
定,则克隆鼠的体色、性别和雄棕鼠相同。A正确。
2.A解析:动物体细胞核移植技术,体现了动物细胞核的全能性。
3.B解析:在体细胞核移植过程中,采集的卵母细胞需培养到减数第
二次分裂时期,用显微操作法去除卵母细胞的核,A正确:用体细胞
核移植技术克隆大熊猫,体现了动物细胞的细胞核具有全能性,不能
体现动物细胞具有全能性,B错误:相对于胚胎细胞,体细胞分化程
度高,全能性不容易表达,因此利用体细胞进行核移植的难度明显大
黑白题13第一节
细胞培养是
白题
基础过关练
题型1动物细胞培养的条件
1.一般来说,动物细胞体外培养需要满足以下
条件
()
①无毒的环境②无菌的环境③使用合成培
养基,但通常需加动物血浆、血清等天然成分
④温度与动物的体温相近⑤因在C0,培养
箱中培养,故不需要0,⑥适宜的pH
A.①②③④⑤6
B.①②③④
C.①②④⑤⑥
D.①②③④⑥
2.下列有关动物细胞培养时所提供的物质及其
作用的叙述,不正确的是
(
选项提供物质
作用
主要防止培养过程中被病
A
抗生素
毒感染
补充合成培养基中缺乏的
B
动物血清
物质
C
氧气
满足细胞代谢的需要
D
二氧化碳
调节培养液pH的相对稳定
3.动物体内的细胞之所以能够维持正常的生命
活动,是因为机体给这些细胞提供了适宜的条
件,包括充足的营养、稳定的内环境等。下列
有关动物细胞培养所需条件的叙述,错误的是
()
A.培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、
维生素和动物血清等
B.培养液需要定期更换,防止细胞代谢产生
的有毒物质危害细胞
C.培养时需要的适宜温度为37℃,适宜的pH
为7.0
D.培养液中通常需添加一定量的抗生素以抑
制细菌和真菌的生长
第三章
动物细胞工程
动物细胞工程的基础
限时:25min
题型2动物细胞培养的过程
4.下列关于动物细胞培养的叙述,错误的是(
A.用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物
的器官或组织
B.将所取的组织先用胃蛋白酶等进行处理,
使其分散成单个细胞
C.当培养装置中的细胞出现接触抑制时,需
要分瓶来传代培养
D.培养的动物细胞可以用于检测有毒物质,
判断某种物质的毒性
5.如图为肾脏上皮细胞培养过程示意图,下列叙
述不正确的是
肾脏组织块
翩0
翩0
公
入
A.甲→乙过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶
处理
B.丙过程指细胞在添加动物血清的合成培养
基中进行原代培养
C.丙和丁过程均会出现细胞贴壁和接触抑制
现象
D.丁过程是传代培养的细胞,该过程体现了
动物细胞的全能性
6.右图为动物细胞培养过程中细胞的增殖曲线。
下列叙述错误的是
(
A.图中A点进行的是细
↑增殖代数
80F
胞的原代培养
60
B.B点无需使用胰蛋白酶
404
20A
A
处理细胞
B
培养过程
C.B点到C点过程中进行
了多次传代培养
D.CD段细胞系可能为无限细胞系
黑白题31
7.下列关于细胞株和细胞系的叙述,错误的是
(
A.二倍体动物细胞通常为有限细胞系,不能
连续培养下去
B.连续细胞系的遗传物质发生了改变,具有
不死性
C.良性无限细胞系不存在接触抑制现象,且
不致癌
D.细胞株是具有特殊性质的细胞系,遗传性
状均一
8.回答下列有关动物细胞培养的问题。
(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂
生长到细胞表面
时,细胞会停
止分裂增殖,这种现象称为细胞的
此时,瓶壁上形成的细胞层数是
要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来,需要
用酶处理,可用的酶是
(2)随着细胞传代次数的增多,绝大部分细胞分
裂停止,进而出现
的现象;但极少数
细胞可以连续增殖,其中有些细胞会因遗传
物质发生改变而获得
,该种细胞的
黏着性
,细胞膜表面蛋白质(或糖
蛋白)的量
(3)现用某种大分子染料,对细胞进行染色,
观察到死细胞能着色,而活细胞不能着
色,原因是
(4)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的
数目,最好选用细胞分裂到
期
的细胞用显微镜进行观察。
(5)在细胞培养过程中,通常在
条件
下保存细胞。因为在这种条件下,细胞中
的活性降低,细胞
的速
率降低。
题型3动物细胞培养和植物组织培养的比较
9.下表为有关动物细胞培养与植物组织培养的
比较,其中错误的是
(
选择性必修三·ZK
选
比较
动物细胞培养
植物组织培养
项
项目
动物细胞核的
植物细胞的全
A
原理
全能性
能性
B
培养基
液体培养基
固体培养基
主要
原代培养,传代
脱分化、再分化,
C
过程
培养
形成植株
主要
获得大量细胞
植物快速繁殖
用途
或细胞产物
获得脱毒苗等
重难聚焦
10.(2023·甘肃庆阳期中)新型抗肿瘤药物Y
具有见效快、机体不易对该药产生耐药性
等优点。某研究小组以小鼠肝肿瘤细胞
(甲)和正常肝细胞(乙)为材料进行了相关
实验。请回答下列问题,
(1)实验时,需先将小鼠的肝组织切碎,然
后利用
处理肝组织块,使
其分散成单个细胞,然后制成细胞悬液
进行培养。用于实验的肝组织块一般
应从幼龄小鼠获取,原因是幼龄小鼠肝
组织的
易于培养。
(2)在进行细胞培养时,除营养、温度、pH、
渗透压、气体环境等要符合条件外,培
养液中还应添加一定量的抗生素,其目
的是
避免培养的动物细胞被细菌侵害。
(3)若要选取一定量的肝组织细胞检测药
物Y对小鼠正常肝细胞(乙)的毒性,
是否适合选用原代培养的细胞?
请要解释原因:
(4)已知肝细胞中X基因的过量表达与肝
肿瘤的发生密切相关,若要检测药物Y
的疗效,应该如何设计实验?请写出实
验的主要思路:
黑白题32
黑题应用提优练
1.某兴趣小组在进行人体皮肤细胞原代培养过
程中,将培养瓶瓶口密封后置于二氧化碳培养
箱中培养。下列叙述正确的是
A.瓶口密封可有效地防止污染
B.瓶口密封可有效地防止接触抑制
C.瓶口密封会导致培养基呈弱酸性
D.瓶口密封会导致培养的原代细胞生长过快
2.某研究小组欲培养甲、乙两种细胞用于药物试
验,甲细胞为肝肿瘤细胞,乙细胞为正常肝细
胞。下列叙述正确的是
A.乙种细胞培养时需要培养液,甲种细胞则
不需要培养液
B.细胞培养时在培养基中添加胰岛素的作用
是为了调节血糖浓度
C.将正常肝组织用胰蛋白酶处理制成单细胞
悬浮液后,直接培养就可获得细胞克隆
D.药物试验需要大量细胞,两种细胞频繁传
代,甲细胞比乙细胞可以传代的次数更多
3.动物细胞培养时,培养细胞的生命期如下图所
示。下列叙述正确的是
初代
培养有限细胞系无限细胞系
州20
秀
转化
12
老化
10代
81
传代间隔
一传代
死亡
6
0246810121416时间/周
A.可以使用稀释涂布平板法或显微镜计数法
对细胞进行计数
B.传代培养时,常用胰蛋白酶处理使原培养
瓶内细胞分散
C.随着细胞传代次数不断增加,传代间隔的
时长越来越小
D.有限细胞系培养过程中会出现接触抑制现
象,而无限细胞系不会
第三章}
限时:l5min
4.细胞直接共培养是指将2种或2种以上的细
胞接种在同一孔中进行培养,以达到模拟体内
不同种类的细胞直接接触来探究它们信息交
流方式的目的,具体操作如图。下列分析错误
的是
)
a%68
移除插板
以暴露孔
将第一种细胞
无细胞区
将第二科
中心的无
悬液加入含有
细胞区
细胞悬液
插板的孔中
加入孔中
A.成块的组织中细胞与细胞靠在一起,在培
养前需先将组织块分散成单个细胞
B.细胞培养过程需要对培养液进行灭菌,对
所有培养用具进行消毒,以保证无菌无毒
的培养环境
C.推测第二种细胞会贴壁到无细胞区,当两
种细胞分裂生长到表面相互接触时停
止分裂
D.通过检测混合培养液中是否存在信息类物
质可初步推测两种细胞间的信息交流方式
压轴挑战
5.(2023·浙江期中)吴茱萸是一种中药,其主
要成分为吴茱萸碱(EVO)。研究发现,EVO0
不仅能通过诱导胃癌细胞中p53蛋白的表
达,使其细胞周期阻滞在间期和分裂期之
间,还能影响细胞凋亡蛋白Caspase.3的表
达,促进胃癌细胞的凋亡,最终起到治疗胃
癌的作用。下列说法错误的是
A.培养胃癌细胞,需将含动物血清的培养基
置于恒温培养箱中
B.加入胰蛋白酶,制备的胃癌单细胞悬液会
出现接触抑制现象
C.p53蛋白可能是一种细胞周期抑制蛋白,
EVO能够抑制胃癌细胞的增殖
D.患者服用EV0后,胃癌细胞中Caspase3.
的含量会增加
进阶突破拔高练PO6
黑白题33