第3章 第2节 基因工程的基本操作程序-【学霸黑白题】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程（人教版）

DNA的滤液中加入体积分数为95%的冷酒精后，用玻璃棒轻缓搅 拌，可以进一步纯化DNA,不会使DNA的提取量增加，C错误：将白 色丝状物溶解在NC1溶液中，加入二苯胺试剂后，需要水浴加热观 察颜色变化，D错误。 重难聚焦 11.B解析：限制酶EcoR I和PstI切割形成的是黏性末端，限制 酶SmaI和EcoR V切割形成的是平未端，E.coli DNA连接酶只能连 接黏性末端，而T4DNA连接酶可连接黏性末端和平末端，但连接 平末端效率较低，A错误。DNA连接酶是在两个DNA片段之间形 成磷酸二酯键：DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核 苷酸片段上，形成磷酸二酯键：NA聚合酶将单个核糖核苷酸加到 已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯键，B正确。一种限制酶切割一 次，使DNA双链断开，会有两个磷酸二酯键断裂，形成2个黏性末 端或平末端，形成2个游离的5'末端，C错误。若两种限制酶的识 别序列相同，但由于识别的位点不同，切割形成的末端不同，故不 定能通过DNA连接酶相互连接，D错误。故选B。 黑题应用提优练 1.A解析：已知同时用酶I和酶V切割题图中质粒A,产生1.8kb和 8.2kb的两种片段(1kb=1000碱基对)，说明质粒上有10000个碱 基对；如用四种酶同时切割质粒A,则产生0.6kb和8.2kb两种片 段，则说明酶I和酶Ⅱ、酶Ⅱ和酶Ⅲ、酶Ⅲ和酶Ⅳ切割位点间都含有 600个碱基对，那么同时用酶Ⅱ和酶V切割质粒A,则产生的片段有 600+600=1200对减基（酶Ⅱ、酶Ⅲ和酶V之间的碱基）和8200+ 600=8800对碱基（酶V、酶I和酶Ⅱ之间的碱基），故产生的片段有 1.2kb和8.8kb。故选A。 2.C解析：限制酶能识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并且使 每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，A正确； BglⅡ和MboI两种限制酶切割后可形成相同的黏性末端，均为 GATC,B正确；SmaI切割DNA后形成的末端为平末端，而E.coli DNA连接酶只能连接黏性末端，C错误：Hind I限制酶的识别序列为 GTYRAC,其中Y=C或T,R=A或G,说明其识别序列不止一种，则 一种限制酶可能识别多种核苷酸序列，D正确。故选C。 3.D解析：结合题意可知，Cas9蛋白可对特定的DNA序列进行切割， 具有限制酶的特性，A正确：向导RNA对目标DNA进行序列识别，从 而实现Cas9蛋白对DNA分子的定位，这依赖于碱基对间遵循碱基 互补配对原则，B正确；RNA引导Cs9蛋白到一个特定的基因位点 对特定的DNA序列进行切割，不同的目的基因中可能含有相同的碱 基序列能被该复合物识别，故对不同目标基因进行编辑时可能使用 相同的Cas9蛋白和向导RNA,C正确：Cas9蛋白相当于限制酶，其切 割的位点是磷酸二酯键，D错误。故选D。 4.A解析：①细菌能在含氨苄青霉素和四环素的培养基上生长，说明 氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因没有被破坏，所以插入点 是c;②细菌能在含氨苄青霉素的培养基上生长，而不能在含四环素 的培养基上生长，说明其氨苄青霉素抗性基因正常而四环素抗性基 因被破坏，故插入点为b:③细菌不能在含氨苄青霉素的培养基上生 长，能在含四环素的培养基上生长，说明其氨苄青霉素抗性基因被破 坏而四环素抗性基因正常，故插人点为a。 5.D解析：DNA的粗提取和鉴定步骤是：加入蒸馏水，破碎细胞→过 滤，获取含DNA的滤液→去除滤液中杂质→DNA的析出→鉴定，因 此题图中正确的实验操作顺序是③→②→①→④+⑤，A错误；猪血 红细胞中没有细胞核，提取不到DNA,用同样方法从等体积猪血和鸡 血中提取的DNA量不相同，B错误；⑤表示要鉴定步骤①中所得的 白色丝状物主要成分为DNA,可使用二苯胺试剂，沸水浴冷却后，出 现蓝色的试管组别是实验组，C错误：步骤①的目的是析出并获得 DNA,步骤④中在2mol/L的NaCI溶液中，DNA的溶解度较大，D正 确。故选D。 6.C解析：由题干可知，CTAB-核酸复合物溶于2mo/L NaCl溶液即 高盐溶液中，DNA不溶于酒精，因此可通过加乙醇使核酸沉淀并去除 CTAB,A正确：由题干“上清液中加入氯仿、异戊醇混合液”可知，氯 仿和异戊醇抽提可除去蛋白质、多糖等杂质：由题干“充分混匀，离心 取上清液，加入异丙醇于-20℃沉淀，再用RNA酶、95%的乙醇沉淀 DNA”可知，异丙醇或乙醇可将DNA沉淀分离，B正确：叶绿体DNA 和质粒DNA不与核蛋白结合，因此CTAB不能通过加速解聚核蛋白 正本参考答案 来提取这两种DNA,C错误；DNA在一定温度（水浴条件）下，与二苯 胺反应呈蓝色，因此可利用二苯胺溶液鉴定，D正确。故选C。 压轴挑战 7.(1)一条链上相邻两个核苷酸的磷酸基团与脱氧核糖之间(2)ABC (3)661790(4)4 解析：(1)限制性内切核酸酶切断的化学键所处的具体部位是一条链 上相邻两个核苷酸的磷酸基团与脱氧核糖之间。(2)限制酶能够识 别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部 位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，即催化的是一种水解反应， A正确；限制酶的活性受温度、pH的影响，在最适宜的温度和pH条 件下，酶的活性最高：温度和H偏高或偏低，酶的活性都会明显降 低；在过酸、过碱或温度过高条件下酶会变性失活，而在低温条件下 酶的活性降低，但不会失活，B正确；一种限制酶只能识别双链DNA 中某种特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点切割磷酸二酯键，说 明酶具有专一性，C正确：限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中 出现的概率就越大，D错误。故选ABC。(3)若用限制酶SmaI完全 切割题图中所示DNA片段，产生长度为534+3=537bp,796-3-3 790bp,658+3=661bp的三种DNA。(4)由题图可知目的基因D有 2个酶切位点，杂合子D可以切成3种不同长度的DNA,突变后的只 有1个酶切位点可以切成2种不同的DNA,其中有1种和D相同，故 共产生4种不同长度的片段。 四名师点睛 题图中DNA片段含有2个限制酶SmaI切割位，点，可被限制 酶SmaI切割产生长度为534+3=537bp,796-3-3=790bp,658+ 3=661bp的三种DNA片段。质粒含有CCGG序列、GGATCC序 列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspI切割， GGATCC序列和GATC序列可被限制酶MboI切割。 第2节基因工程的基本操作程序 白题基础过关练 1.D解析：如果引物A和引物B发生碱基互补配对则不能与相应模 板链结合，无法完成子链的延伸，故引物A、B的碱基不能进行互补 配对，A正确：复性的目的是让引物通过碱基互补配对与单链DNA 结合，B正确：延伸时，在DNA聚合酶的作用下，将4种脱氧核苷酸加 到引物的3'端，C正确：DNA复制为半保留复制，第二轮循环即DNA 复制2次，共形成22=4个DNA分子，其中含有最初模板链的2个 DNA分子含有引物A或引物B,其余2个DNA分子均含有引物A和 引物B,所以第二轮循环产物中同时含有引物A、B的DNA片段所占 的比例为50%，D错误。故选D。 2.B解析：在基因表达载体中，启动子位于目的基因的首端，终止子应 位于目的基因的尾端，这样的基因才能表达。题图中甲和丙均不符 合，所以不能在宿主细胞中表达目的基因产物，A正确；启动子是 段有特殊结构的DNA片段，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了 它才能驱动基因转录出mRNA,B错误：载体上的标记基因便于重组 DNA分子的筛选，常用的标记基因是抗生素抗性基因，C正确：复制 原点是DNA聚合酶识别和结合的部位，可以让重组表达载体拥有自 主复制的能力，不会随细胞分裂被稀释而最终消失，D正确。故 选B。 3.D解析：目的基因导入受体细胞前必须进行基因表达载体的构建， 不能直接将目的基因通过显微注射导入受体细胞，A错误；酵母菌细 胞中有多种细胞器，作为受体细胞生产胰岛素（分泌蛋白）比大肠杆 菌更有优势，B错误；大肠杆菌作为受体细胞时应使用Ca2进行处 理，C错误；可以利用部分病毒将自身DNA整合到宿主细胞染色体 上的特点构建病毒表达载体，并通过病毒的侵染将目的基因导入相 关受体细胞，D正确。 4.C解析：根据题干信息“抗PG基因合成的mRNA与PG基因合成 的mRNA相结合”可以推测，PG基因和抗PG基因转录形成互补 的mRNA,转录时模板链不同，所以会互补，A正确：抗PG基因合成 的mRNA与PG基因合成的mRNA相结合，从而阻止了PG基因 的mRNA和核糖体结合，不能进行翻译过程，使细胞不能合成PG, B正确：目的基因导入植物细胞的最常用方法是农杆菌转化法，显微 注射法通常是将日的基因导人动物细胞，C错误：精子中几乎不含有 细胞质，所以如果将抗PG基因整合到叶绿体DNA上，则花粉中不含 黑白题17 有抗PG基因，可避免基因污染，D正确。故选C。 5.D解析：抗原和抗体能特异性结合，可提取细胞中的蛋白质，采用抗 原一抗体分子杂交技术进行检测，若能检测到B抗虫蛋白，说明抗 虫基因能表达。但棉花植株并无抗病性状，则可能是抗虫基因表达 效率低，合成的Bt抗虫蛋白太少，A正确。核酸分子杂交技术的原 理是碱基互补配对，可据此检测细胞中的RNA,若测到B1抗虫蛋白 的mRNA,说明抗虫基因能转录。而细胞中无Bt抗虫蛋白，说明抗虫 基因不能正常翻译，导致棉花植株并无抗病性状，B正确。采用核 酸分子杂交技术检测细胞中的DNA,若能检测到抗虫基因，而抗虫基 因又不能表达，则可能是抗虫基因反向插入载体DNA分子中，C正 确。由题干信息可知，“鉴定后，将含抗虫基因的受体细胞组织培养 获得棉花植株”，说明导入受体细胞的DNA分子含有目的基因，D错 误。故选D。 6.B解析：DNA的两条链反向平行，如果杂合双链区的一条链的碱基序列 是5'-GATACC-3',那么另一条链的碱基序列是3'-CTATGG-5',A错误； 该技术可以比较不同种生物DNA分子的差异程度，杂交带越多，说 明两个物种的DNA相似性越高，亲缘关系越近，B正确；要扩增出目 的基因，需要根据DNA的两条链分别设计引物，即需要设计两种引 物，C错误；通过设计含有目的基因片段的DNA探针，可检测特定细 胞中是否含有目的基因，并不能确定是否表达出相应的蛋白质，D错 误。故选B。 7.C解析：题图中DNA片段a、b只有一种引物，是由原始DNA链为 模板复制而来的，其长度比DNA片段c长，A错误。由于原始模板在 每次循环中均可作为模板，故每次循环都能产生题图中DNA片段a、 b,B错误。由于第一次循环的产物只含有一种引物，而题图中DNA 片段c有两种引物，则DNA片段c最早出现在第二次循环的产物中 C正确。经过30次循环后，得到的DNA片段总数为20，这包括题图 中的DNA片段a、b,故D错误。 重难聚焦 8.(1)从DNA文库中获取与基因D两端的部分核苷酸序列碱基互补 配对(2)HindⅢ和BamH I双酶切产生不同的黏性末端，防止 自身环化和反向连接，保证了目的基因准确插入T-DNA内部氨苄 青霉素(3)酚类化合物减少化学农药的用量，减少环境污染和对 人类的危害，对保护环境有益 解析：(1)获取目的基因的方法有从基因文库中获取、人工合成和 PCR技术扩增等，但要获得碱基序列未知的基因D,需要从DNA文 库中获取。设计引物序列的主要依据是与基因D两端的部分核苷酸 序列碱基互补配对。(2)为了保证目的基因能够插人T-DNA中，T- DNA中没有BclI的酶切位点，所以不选BclI,T-DNA中有HindⅢ 和BamH I的酶切位点，同时基因D两端也分别含有HimdⅢ和 BamH I的酶切位点，由于双酶切可产生不同的黏性末端，能防止自 身环化和反向连接，并保证目的基因准确插入T-DNA内部，故选择 限制酶HimdⅢ和BamH I。四环素抗性基因被BamH I破坏，质粒 中的氨苄青霉素抗性基因能表现出氨苄青霉素抗性，因而可在培养 基中加入氨苄青霉素，仅含有重组质粒的农杆菌能生存。(3)农杆菌 能够感染棉花的愈伤组织细胞，与这些细胞可以分泌大量的酚类化 合物吸引农杆菌有关。种植抗黄萎病棉花在环境保护方面的意义主 要表现在减少化学农药的用量，减少环境污染和对人类的危害，对保 护环境有益。 黑题应用提优练 1.B解析：根据题图信息，将sacB基因插入pAH162上需要利用 BamH I、EcoR I将质粒切割，利用DNA连接酶将质粒和目的基因连 接，A正确：具有双重选择系统的大肠杆菌应同时满足在含四环素的 培养基中生长、在含蔗糖的培养基中不生长的特点，而不是仅仅能在 含四环素的培养基中生长，B错误：根据题图箭头方向，箭头位置是 目的基因的上游，为保证正向连接，PCR前应在sacB基因上游引物 添加BamH I识别序列，C正确；导入重组质粒前，需用Ca2+处理大肠 杆菌细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 使重组质粒容易进入受体细胞，D正确。故选B。 2.A解析：质粒P1经“酶处理”后由平末端转变成黏性末端，能提高 目的基因片段和质粒的连接效率，A正确：质粒P2和目的基因片段 可在DNA连接酶的作用下形成重组质粒，这里不需要DNA聚合酶， B错误：题图的质粒均含有氨苄青霉素抗性基因，因此，若受体微生 物能在含有氨苄青霉素的培养基上生长，不能说明成功导入了重组 选择性必修第三册·RJ 质粒P3,C错误：用PCR鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目 的基因的重组质粒，选择引物乙和丙即可，因为PCR扩增的DNA片 段是引物之间的序列，扩增乙和丙之间的序列就包含了目的基因，因 而没有必要扩增更长的序列，D错误。故选A。 3.A解析：据题图可知，该技术需要使用四种引物，即引物1~4，而非 四条引物（引物的数量随PCR扩增次数增加而增加），A错误；引物2 和3中若存在互补配对片段，置于同一反应系统时它们会相互结合 而失去作用，引物2和3的突起处代表与模板链不能互补的突变位 点，B正确；利用引物1和2需要进行三次PCR才可得到DNA片段 A(两端等长的DNA片段)：经过1次循环后产生的两个DNA分子都 不等长，在第2次循环后形成的子链中出现固定长度的DNA链，但 是形成的4个DNA分子都不等长，在第3轮循环产物中开始出现两 条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，C正确；该技术是设计含有非特 异性配对碱基的引物，再通过PC将突变位点引入产物中，该技术 具有突变回收率高、可在任何位点引入突变的优点，D正确。故 选A。 解题指导 PCR技术的全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定 DNA的核酸合成技术。PCR技术的原理是DNA复制；条件包括： 模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、耐高温的DNA聚合酶 (Tag DNA聚合酶)。 4.B解析：分析题图可知，启动子在左侧，GFP基因整合Gaa3基因的 右侧，启动子启动转录后，可以使GFP基因转录，Gata3基因的启动 子能控制GFP基因的表达，A错误：因启动子在左侧，转录的方向向 右，合成mRNA的方向从左向右为5'→3'，刚好是翻译的方向，所以 翻译时先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白，B正确：整合CFP基因 后，核酸片段变长，2号个体只有大片段，所以是Gata3-GFP基因纯 合子，4号个体只有小片段，是野生型，C错误；用引物1和引物3进 行PCR扩增，扩增出的片段大小差异不明显，无法较好的区分片段， D错误。故选B。 压轴挑战 5.A解析：t-PA改良基因的黏性末端如题图所示，那么需选用限制酶 XmaI和BglⅡ切开质粒pCLY11,才能与t-PA改良基因高效连接，A 错误；-PA能高效降解因血浆纤维蛋白凝聚而成的血栓，成功转人 重组质粒的受体细胞在培养基上会出现具有抗性的白色菌落，B正 确：该技术通过改造基因，生产出优异的改良t-PA蛋白，因此该技术 为蛋白质工程，C正确：改良t-PA基因的表达产物改良t-PA蛋白能 显著降低其诱发出血的副作用，可在一定程度上降低颅内出血的概 率，D正确。故选A。 第3节基因工程的应用 白题基础过关练 1.C解析：将b7基因导入小麦可用农杆菌转化法、基因枪法和花粉 管通道法，A正确：将Fhb7基因导入小麦，产生的效应可减轻赤霉菌 对小麦的感染，所以影响了赤霉菌对小麦的寄生能力，B正确；要想 达到生物防治的目的不一定要将目的基因导人防治对象，如可将目 的基因导入能寄生在多种害虫体内的绿僵菌中，这种方法同样可以 达到生物防治的目的，C错误；生物的种间关系是生物协同进化的结 果，通过绿僵菌工程菌减少虫害，不改变绿僵菌与害虫的种间关系， D正确。 2.A解析：分析题意可知，科学家将目的基因导入了菊花细胞，故受体 细胞可以选择菊花叶片细胞，但不能选择桃蚜细胞，A错误；基因工 程中构建基因表达载体时，由于T-DNA可以转移到受体细胞内，可 以将目的基因GWA插入Ti质粒的T-DNA上，B正确：菊花外植体产 生的酚类化合物能吸引农杆菌移向受体细胞，有利于目的基因成功 导入，C正确：已知雪花莲凝集素基因GNA的表达产物能有效抑制桃 蚜生长，故应用抗虫接种实验，检测转基因菊花对桃蚜的抗性及抗性 程度，D正确。 3.A解析：重组质粒在细胞中表达后分泌到细胞外，表达产生的蛋白 质在内环境中作为抗原会引起机体免疫反应，A错误：病毒抗原基因 在体内表达的转录过程中需要RNA聚合酶，B正确：病毒抗原基因 与质粒重组时需要DNA连接酶，C正确；注射DNA疫苗后抗原基因 黑白题18第2节基因工程的基本操作程序 白题基础过关丝 限时：25min 题型1目的基因的筛选与获取 题型3将目的基因导入受体细胞 1.利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞 3.下列关于目的基因导入受体细胞的叙述，正确 内DNA复制类似，过程如图所示。图中引物 的是 ( 为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。 A.可以通过显微注射法直接将目的基因导入 下列叙述错误的是 ( 动物的受精卵中 B.通过基因工程大量获得胰岛素时，受体细 即变性 0复性 胞选择大肠杆菌比酵母菌更有优势 第一轮循环 一一物 C.可以用PEG处理大肠杆菌将目的基因导入 几延伸 mrrmmmmimmmg, 其细胞内 1变性 wwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwwww. D.可以使用病毒将目的基因导入受体细胞 A.引物A、B的碱基不能进行互补配对 4,普通番茄细胞中含有控制多聚半乳糖醛酸酶 B.复性的目的是让引物与单链DNA相结合 的基因(PG基因)，多聚半乳糖醛酸酶能使番 C.延伸时，DNA聚合酶从引物的3'端连接脱 茄细胞壁破坏而不耐贮藏。科学家将抗PG 氧核苷酸 基因导入番茄细胞，使抗PG基因合成的 D.第二轮循环后，同时含有引物A、B的DNA mRNA与PG基因合成的mRNA相结合，从而 占100% 培育出抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。下 题型2基因表达载体的构建 列叙述错误的是 2.某人利用下图中所示的表达载体获得了甲、 A.PG基因与抗PG基因的区别是模板链的碱 乙、丙三种含有目的基因的重组表达载体。下 基序列不同 列有关叙述错误的是 ( B.抗PG基因能阻止PG基因表达的翻译过 目的 目的 程，使细胞不能合成PG 启动子EcoR I Sau3A I 其因 C.常用显微注射法将抗PG基因表达载体导 目的 入番茄体细胞 抗生素抗性基因 基因 D.为了避免转基因植物花粉污染周围植物， A.这三种重组表达载体中，不能在宿主细胞 可将抗PG基因整合到叶绿体DNA上 中表达目的基因产物的是甲、丙 题型4目的基因的检测与鉴定 B.启动子是DNA片段，是RNA连接酶识别和 5.科学家将苏云金杆菌中的Bt抗虫蛋白基因 结合的部位 (抗虫基因)导入棉花的愈伤组织细胞，鉴定 C.抗生素抗性基因便于重组DNA分子的 后，将含抗虫基因的受体细胞组织培养获得棉 筛选 花植株。经棉铃虫饲喂实验，发现棉花植株并 D.复制原点可以让重组表达载体拥有自主复 无抗虫性状，科学家提取棉花叶片细胞中的有 制的能力，不会随细胞分裂被稀释而最终 关成分进行了如下操作，下列分析错误的是 消失 ( 选择性必修第三册·RJ黑白题56 A.提取细胞中的蛋白质，采用抗原一抗体杂 题型5DNA片段的扩增与电泳鉴定 交技术进行检测，若能检测到Bt抗虫蛋 7.如图a、b、c均为PCR扩增的DNA片段，下列 白，则可能是抗虫基因表达效率低 有关说法正确的是 ( B.若经A检测确定细胞中无Bt抗虫蛋白，可 引物Ⅲ 引物Ⅱ 多红mg,江mΠg:江mg, 采用PCR等技术检测细胞中的RNA,若检 引物I 引物I 测到Bt抗虫蛋白的mRNA,则可能是抗虫 A.DNA片段a、b、c的长度均相同 基因能转录，但不能正常翻译 B.DNA片段a、b只是第一次循环的产物 C.若经B检测确定细胞中无Bt抗虫蛋白 C.DNA片段c最早出现在第二次循环的产物中 的mRNA,可采用PCR等技术检测细胞中 D.经过30次循环后，DNA片段c的数量为2 的DNA,若能检测到抗虫基因，则可能是抗 重难聚焦 虫基因反向插入载体DNA分子中 8.黄萎病是危害棉花种植的常见疾病，图中 D.若经C检测确定细胞中无抗虫基因，则可 能是将没有目的基因的载体DNA分子导 AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，TetR表示四 入受体细胞 环素抗性基因，BclI、HindⅢ和BamH I为 6.(2023·福建泉州阶段练习)DNA分子杂交技 限制酶。请回答下列问题： 术的原理是当两种生物的DNA单链具有互补 Bcl HindⅢ 的碱基序列时，互补的碱基序列就会结合在一 T-DNA 起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的 Bam H 重组 一农杆菌染 愈伤 Ti质粒 组织 植株 Hind Ill BamH 部位，仍然是两条游离的单链，如图所示。关 于DNA分子杂交技术的应用，下列相关叙述 BI基因D 正确的是 (1)获得碱基序列未知的基因D的方法一般 为 。 利用PCR技 NNNN 游离的单链 术扩增基因D时，设计引物序列的主要 物种A的DNA NyNN 依据是 NNNN 杂合双链区 物种B的DNA (2)将目的基因D和Ti质粒连接构建重组 A.如果杂合双链区的一条链的碱基序列是 质粒时，切割Ti质粒应选用的限制酶 5'-GATACC-3',那么另一条链的碱基序列 是 ,原因是 是5'-CTATGG-3' B.该技术可用来比较不同物种DNA分子的 可利用含 的培养基对导人 差异，以分析生物亲缘关系的远近 重组质粒的农杆菌进行筛选。 C.通过设计一种DNA引物与DNA的其中一 (3)农杆菌能够感染棉花的愈伤组织细胞， 条链结合，经PCR技术可大量扩增目的 与这些细胞可以分泌大量的 有 基因 关。种植抗黄萎病棉花在环境保护方面 D.通过设计含有目的基因片段的DNA探针， 的意义主要表现在 可检测特定细胞中是否合成了目的蛋白 第3章黑白题57 黑题应用提优场 限时：35min 1.（2023·江西开学考试)研究人员通过PCR扩 Amp mn 增质粒pDNR-LIB中的sacB基因，该基因的 EcoR V- EcoR V P3 产物对蔗糖敏感，是一种常见的反选择标记基 一种酶切割 后的基因片段 因。Te是四环素抗性基因，利用基因工程 将sacB基因插入到质粒pAH162上，构建含有 50 bp Tet-sacB双重选择系统的重组质粒，即 300bp pAH162-sacB,具体过程如图所示。将 100bp 图2 pAH162-sacB导入大肠杆菌验证其双重选择 作用。下列分析错误的是 A.质粒P1经“酶处理”后平末端转变成黏性 末端，有利于与目的基因片段的连接 B.质粒P2和目的基因片段可在DNA聚合酶 pDNR-LIB Cla I BamH I sacB 或DNA连接酶的作用下形成重组质粒 pAH162- -EcoR I Cla BamH I sacB C.若受体微生物能在含有氨苄青霉素的培养 EcoR Tet PAH162 HindⅢ 基上生长，说明成功导入了重组质粒P3 D.用PCR鉴定筛选出的菌落中是否含有正确 HindⅢ A.将saCB基因插人pAHI62上需要用到的酶 插入目的基因的重组质粒，应选择引物甲 有BamH I、EcoR I和DNA连接酶 和丙 B.大肠杆菌能在含四环素的培养基中生长说 3.(2023·山西吕梁期末)PCR定点突变技术是 明双重选择系统的重组质粒构建成功 最常用的基因定点突变技术，通过设计含有非 C.为保证正向连接，进行PCR前，应在saCB 特异性配对碱基的引物，再通过PCR将突变 基因上游引物添加BamH I识别序列 位点引入产物中。如图是PCR定点突变技术 D.需用Ca+处理大肠杆菌细胞使其处于一种 流程图，下列分析错误的是 能吸收周围环境中的DNA分子的生理 拟突变位点 状态 引物4 2.(2023·江苏苏州期中)如图1是某基因工程 5 -51 使用引物1和 勿 引物3使用引物3和 中构建重组质粒的过程示意图，其中TetR是四 2进行PCR 4进行PCR 5' 3 B 环素抗性基因、AmpR是氨苄青霉素抗性基因。 】混合、变性后，杂交 A-3' 3- 图2所示为重组质粒，甲、乙、丙为3种引物所 首先使用DNA聚合酶延 伸，然后使用引物1和4 在的相应位置。下列有关叙述正确的是 进行PCR ( 选择性必修第三册·RJ黑白题58 A.该技术需要使用四条引物 压轴挑战 B.引物2和3的突起处代表与模板链不能互 5.(2023·广东校联考阶段练习)一种天然蛋 补的突变位点 白t-PA能高效降解因血浆纤维蛋白凝聚而 C.利用引物1和2需要进行三次PCR才可得 成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药，但是 到DNA片段A 心梗患者注射大剂量的t-PA极易诱发颅内 D.该技术具有突变回收率高、可在任何位点 出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨 引入突变的优点 酸换成丝氨酸，能显著降低其诱发出血的副 4.某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白 作用。据此，先对天然t-PA基因的碱基序 基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因 列进行改造，然后再采取基因工程方法表达 端，如图甲所示。实验得到能正常表达两种蛋 该改造后的基因，可制造出性能优异的改良 白质的杂合子雌雄小鼠各1只，交配以期获得 t-PA蛋白（注：下图表示相关的目的基因、 Gata3-GFP基因纯合子小鼠。为了鉴定交配 载体及限制酶，pCLY11为质粒)。下列说法 获得的4只新生小鼠的基因型，设计了引物1 不正确的是( 和引物2用于PCR扩增，PCR产物电泳结果 限制酶识别序 t-PA改良基因 如图乙所示。 列和切割位点： CCGG BglⅡAGATCT CTAG Gata3 非编码区3 Nhe I GCTAGC Sma I Xma I Bgl II 插入前启动子区，编码 Nhe I -5 SmaI CCCGGG mlacZ Gata3 引物1 GFP 插入后启动子区编码 编码区非编码区 XmaI CCCGGG pCLY11 NeoR:新霉素抗性基因 Neo"复制 引物3 引物2 mlacZ::表达产物会使细胞呈蓝 原，点 色，否则细胞呈白色 下列叙述正确的是 A.改造后的t-PA基因的黏性末端如上图所 A.Gata3基因的启动子 123 示，则需要选用限制酶XmaI和NheI切 大片段 无法控制GFP基因的 小片段一 割质粒pCLY11 表达 乙 B.成功转入重组质粒的受体细胞在培养基 B.翻译时先合成Gata3蛋白，再合成GFP 上会出现白色菌落 蛋白 C.以上技术制造出性能优异的改良t-PA的 C.2号条带的小鼠是野生型，4号条带的小鼠 过程被称为蛋白质工程 是Gata3-GFP基因纯合子 D.改良t-PA基因的表达可在一定程度上降 D.若用引物1和引物3进行PCR,能更好地 低颅内出血的概率 区分杂合子和纯合子 进阶突破拔高练P13 第3章黑白题59