内容正文:
考 前 必 背
第1章 发酵工程
1.传统发酵技术:直接利用原材料中天然存在的微生物或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术。容易受杂菌污染,生产效率较低,产物不单一。
2.腐乳制作:多种微生物参与发酵,起主要作用的是毛霉。
3.乳酸菌、酵母菌、醋酸菌的比较
乳酸菌
酵母菌
醋酸菌
生物学分类
原核生物
真核生物
原核生物
代谢类型
异养厌氧
异养兼性厌氧
异养好氧
主要应用
泡菜的腌制、乳制品的发酵
酿酒(18~30 ℃)、制作馒头和面包
制作各种风味的醋(30~35 ℃)
4.泡菜中亚硝酸盐的含量变化与腌制时间、腌制温度和食盐用量有关。温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短,易造成细菌大量繁殖,使亚硝酸盐含量增加。
5.当O2、糖源都充足时,醋酸菌能将糖分解成乙酸,同时释放CO2;当缺少糖源时则直接将乙醇转化为乙醛,再将乙醛变为乙酸,该过程不释放CO2。
6.泡菜制作过程中严格控制无氧环境的措施
(1)选择密封性良好的泡菜坛。
(2)盐水煮沸后冷却待用。
(3)装坛时压实,盐水没过全部菜料。
(4)盖上坛盖后要在坛盖边沿的水槽中注满水,并在发酵过程中注意经常向水槽中补充水。
7.酒精发酵时发酵瓶中留有大约1/3的空间的原因:让酵母菌先进行有氧呼吸耗尽O2(酵母菌增殖),再进行酒精发酵,同时防止发酵过程中产生的CO2使发酵液溢出。
8.酒精发酵时适时拧松瓶盖的原因:及时排出发酵过程中产生的CO2,防止发酵瓶爆裂。
9.牛肉膏和蛋白胨可为微生物提供碳源、氮源和维生素等营养物质。
10.培养霉菌时,一般需要将培养基调至酸性;在培养细菌时,一般需要将培养基调至中性或弱碱性。
11.消毒和灭菌的比较
结果
方法举例
消毒
仅杀死物体表面或内部一部分微生物
巴氏消毒法对不耐高温的液体(如牛奶)进行消毒
通过紫外线对接种室、超净工作台等进行消毒
灭菌
杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子
湿热灭菌(高压蒸汽灭菌):培养基等
干热灭菌:耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等
灼烧灭菌:微生物的接种工具、接种过程中的试管口或瓶口等
12.微生物培养时常用的两种接种方法:平板划线法(接种环平板划线,不可用来计数)和稀释涂布平板法(涂布器涂布平板)。
13.平板划线操作中接种环的灼烧时间及目的
灼烧时间
灼烧目的
蘸取菌液前
杀死接种环上原有的微生物,防止外来杂菌污染培养基
第二次及之后每次划线前
杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使划线时的菌种直接来源于上次划线的末端
最后一次划线后
杀死接种环上残存的菌种,避免微生物污染环境和感染操作者
14.稀释涂布平板法原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。
15.稀释涂布平板法测定的微生物数量往往比实际值偏小的原因:当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。
16.显微镜直接计数法统计的结果偏大的原因:统计的是活菌和死菌数目的总和。
17.判断培养基是否被杂菌污染(是否灭菌合格):设置空白对照(培养灭菌后未接种的培养基),观察是否有菌落生长,若有,说明培养基被杂菌污染(灭菌不合格)。
18.判断选择培养基是否起筛选作用:与完全培养基对照,若对照组上的菌落数目大于选择培养基上的菌落数,则选择培养基具有筛选作用。
19.发酵工程的中心环节:发酵罐内发酵。
20.不同发酵产品的分离
微生物菌体(单细胞蛋白)
过滤、沉淀等方法
微生物的代谢物
提取、分离和纯化措施等
第2章 细胞工程
1.植物组织培养
(1)诱导愈伤组织期间一般不需要光照,在后续的培养过程中,每日需要给予适当时间和强度的光照。
(2)培育突变体新品种对愈伤组织进行诱变处理的原因:愈伤组织细胞处于增殖状态,容易受到培养条件和诱变因素的影响而产生突变。
2.植物体细胞杂交
人工诱导原生质体融合方法:电融合法、离心法、聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法等。
3.植物组织培养与植物细胞培养
(1)植物细胞培养原理:细胞增殖。
(2)植物细胞培养的结果是形成细胞群,不形成个体,没有体现细胞的全能性;植物组织培养的结果是形成个体,体现了细胞的全能性。
4.动物细胞培养
(1)条件:营养条件(糖类、氨基酸、无机盐、维生素、血清等),无菌、无毒的环境,适宜的温度、pH和渗透压,适宜的气体环境(O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH)。
(2)培养液定期更换的原因:清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
(3)用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等分散细胞,不能用胃蛋白酶分散细胞(胃蛋白酶在动物细胞培养环境中失去活性)。
5.与植物原生质体融合相比,灭活病毒诱导法是诱导动物细胞融合特有的方法。
6.单克隆抗体的制备
(1)筛选1[用特定的选择培养基(HAT培养基)筛选杂交瘤细胞]:未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡,只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
(2)筛选2(用96孔板培养和筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞):在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
7.动物细胞核移植技术
(1)原理:动物细胞核的全能性。
(2)常用的去核方法是显微操作法。也可采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法,这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性。
(3)过程(以克隆高产奶牛为例)
核移植获得的克隆动物与提供细胞核的亲本性状不完全相同:卵母细胞的细胞质中含有少量的遗传物质;生物的性状不仅与遗传物质有关,还受环境的影响。
8.受精
(1)在自然条件下,哺乳动物的受精在输卵管内完成。
(2)精子获能是获得受精能力,可在雌性生殖道或获能液中获能;卵子需要到MⅡ期时才具备与精子受精的能力。
(3)防止多精入卵的两道屏障:透明带反应和卵细胞膜反应。
(4)卵子受精的标志:观察到两个极体或者雌、雄原核。
(5)受精作用完成的标志:雌、雄原核融合形成合子。
9.胚胎早期发育
(1)场所:输卵管和子宫。
(2)过程:受精卵→桑葚胚→囊胚→原肠胚。孵化指的是囊胚进一步扩大,导致透明带破裂,胚胎从其中伸展出来。
(3)囊胚中,滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘;内细胞团(细胞具有全能性)将来发育成胎儿的各种组织。
10.胚胎工程技术
(1)体外受精
(2)胚胎移植(以牛的胚胎移植为例)
(3)胚胎分割:可对桑葚胚或囊胚进行分割,对囊胚进行分割时,应将内细胞团均等分割。可用分割针取样滋养层,做DNA分析,鉴定胚胎性别。
第3章 基因工程
1.酶的比较
限制酶
DNA连接酶
解旋酶
DNA聚合酶
作用对象
DNA分子
DNA片段
DNA分子
脱氧核苷酸
作用部位
磷酸二酯键
磷酸二酯键
氢键
磷酸二酯键
作用结果
将DNA分子从内部剪切成片段,形成具有黏性末端或平末端的DNA片段
将两个DNA片段连接成重组DNA分子
将双链DNA分子局部解旋为单链
合成DNA链
2.质粒作为基因工程的载体需具备的条件:①能自我复制,或整合到受体DNA上,随受体DNA同步复制。②有一个至多个限制酶切割位点,供外源DNA片段(基因)插入其中。③具有特殊的标记基因,便于重组DNA分子的筛选。
3.引物:一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸,使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始合成子链。
4.基因表达载体的组成:目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点等。
5.将目的基因导入受体细胞的方法
生物种类
方法
受体细胞
植物
农杆菌转化法、
花粉管通道法
体细胞或受精卵
动物
显微注射法
受精卵
原核细胞
Ca2+处理
原核细胞
6.蛋白质工程并不是直接改造蛋白质分子的结构,而是通过基因操作来实现对蛋白质的改造。
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