1.2 微生物的选择培养和计数 课件 2025—2026学年高二下学期生物人教版选择性必修3

二、微生物的选择培养和计数 自然界中的微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。 该怎么办呢 选择培养 稀释涂布平板法呈现的杂菌群 微生物分离的实例——水生栖热菌的筛选 水生 栖热菌 提取 耐高温 DNA聚合酶 用于 体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应 （PCR） 美国黄石国家公园的热泉 1973年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中筛选出耐热的水生栖热菌。 筛选原因： 水生栖热菌能在70～80℃高温条件下生存，绝大多数微生物在此条件下不能生存。 2 启示： 寻找目的菌种时要根据它对___________的要求，到相应的环境中去寻找。 生存环境 热泉 冰川冻土层 被石油污染的土壤 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 3 (一)微生物的选择培养/分离/筛选 1.实验室中微生物筛选的原理： 人为提供__________________的条件（包括_______、______和_____等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。 有利于目的菌生长 营养 温度 pH 2.方法： 用选择培养基进行筛选 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 加入青霉素的培养基: 加入高浓度食盐的培养基: 不加氮源的无氮培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: 创造无氧环境培养微生物： 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离金黄色葡萄球菌 分离固氮菌 分离自养型微生物 分离厌氧或兼性厌氧型微生物 思考•讨论 选择培养基的配方设计 【资料】尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥，但尿素不能直接被农作物吸收。尿素施入土壤后，被某些细菌分解成NH3，NH3再转化成NO3－、NH4＋等才能被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。 CO(NH2)2+H2O 脲酶 CO2+2NH3 讨论 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 设计一种选择培养基，用尿素作为唯一氮源，可以将分解尿素的细菌分离出来。 这种培养基与普通培养基相比，只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同。 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 3.怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 对照组：基础培养基/完全培养基（如牛肉膏-蛋白胨培养基） 实验组：选择培养基 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 水 定容至1000mL 土壤中分解尿素的细菌的选择培养基（P18） 无机盐 碳源、能源 唯一氮源(不作碳源) 水 凝固剂 异养型 选择培养基 固体培养基 合成培养基 a.为细菌生长提供无机营养 b.作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定 1.用来判断选择培养基是否起到了选择作用和培养基是否被污染需要设置的对照分别是(　　) ①未接种的该选择培养基　 ②接种了的该选择培养基　 ③接种了的牛肉膏蛋白胨培养基　 ④未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 A.②① B.④② C.③① D.③② C 习题巩固 详解: 根据单一变量原则，对照组需要与选择培养基一样接种、培养，因此用接种了的普通培养基和选择培养基进行对照，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的落数目应明显多于选择培养基上的数目，说明选择培养基具有选择的功能，作为选择培养基合格的依据，而培养基是否被污染需要设置的对照是相同的选择培养基但不接种，在相同的条件下培养，观察是否有菌落产生。因此用来判断选择培养基是否起到了选择作用和培养基是否被污染需要设置的对照分别是接种了的牛肉膏蛋白胨培养基、未接种的该选择培养基。 故选C。 2.“筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是（　　） A.在牛肉膏蛋白胨培养基中，筛选大肠杆菌 B.在以尿素为唯一氮源的固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物 C.用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物 D.在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物 A 几乎所有细菌都能生长 习题巩固 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 土壤细菌的数量庞大，该如何获得土壤中特定微生物的纯培养物，并计数呢？ 稀释涂布平板法 平板划线法 × √ (二)微生物的数量测定/计数 稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 系列稀释 涂布平板 系列稀释 铲取土样，将样品装入纸袋中。 1 90mL无菌水 9mL无菌水 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶，充分摇匀。 2 3 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1 mL 5 将涂布浸入在盛有酒精的烧杯中 1 mL 取0.1mL菌液，滴加到培养基表面 4 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 7 将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 6 滴 浸 涂 灼 涂布平板 涂布平板 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。 在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 恒温培养箱 讨论 1.设置空白对照组的目的是什么？ 2.根据实验结果，能否计算出细菌的数目是多少？ 可以。 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 培养与观察 检测培养基是否被污染或灭菌是否彻底。 (二)微生物的数量测定/计数 1.稀释涂布平板法（活菌计数法）★ (1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2)原则：①一般选择菌落数在 的平板进行计数。 ②同一稀释度下，至少对 个平板进行重复计数， 然后取其平均值。 (3)缺点：统计的菌落数往往比活菌实际数目___。(原因★) 统计结果一般用________而不用活菌数来表示。 30-300 3 少 菌落数 一个活菌 9×107个/g土 (4)计算公式： 【例1】某研究小组测定某地1克土壤中有多少能分解尿素的细菌。甲同学用稀释倍数105的菌液涂布了3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？ 每克土样中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 【例2】如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(　 　) A.3号试管中的菌液稀释倍数为103倍 B.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数理论上是5号试管的10倍 C.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×107个 D.该实验方法统计得到的结果往往会比活菌的实际数目要高 B 104 低 1.7×109 【详解】 3号试管中菌落稀释信数是 10'倍,A错误 4号试管的稀释倍数比5号低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数理论上是5号的10倍; 5号试管进行稀释涂布平板法计教的结果表明每克土壤中的活菌数为(168+175+167)/3÷0.1X106=1.7x109,C错误;(个); 通过稀释涂布平板法得到的菌落可能存在两个或多个细胞长成一个菌落的情况，故该实验方法统计得到的结果拉往会比实际活菌数目要低，D错误。 (二)微生物的数量测定/计数 2.显微镜直接计数法★ (1)原理：利用特定的____________或_____________，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是_______和_________的总和。 (2)优点：快速、直观、设备简单；能观察微生物的形态特征。 (3)缺点： ①不能区分死菌和活菌，统计结果会_____； ②不适于对运动细菌的计数。 ③个体小的细菌在显微镜下难以观察。 可用台盼蓝染液染色，统计无色细胞的个数。 细菌计数板 血细胞计数板 活菌数 死菌数 偏大 边长为1mm，深度为0.1mm 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供计数用。 ②中方格 ③小方格 计数用具——血细胞计数板 （双线分割） ①大方格 计数室 1个计数室的体积为0.1mm3， 1个计数室有400个小方格。 每个小方格的体积是1/4000mm3。 每1毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×104×稀释倍数 测定方法 稀释涂布平板法 显微镜直接计数法 主要用具 计数数据 优点 缺点 计算公式 菌体本身 培养基上的菌落数 计算方便、操作简单 计数的是活菌 不能区分死菌与活菌 不适于对运动细菌的计数 当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 比实际值偏小 比实际值偏大 每克样品中的菌株数 ＝(C÷V )×M 每mL含菌量＝每小格平均菌体数×400×104×稀释倍数 显微镜、细菌计数板或血细胞计数板 涂布器 比较 平板划线法 稀释涂布平板法 关键 操作 菌体 获取 特点 平板 示图 共同点 用接种环在固体培养基表面连续划线 系列稀释和涂布平板 从最后划线的区域挑取 稀释度合适，整个平板上都可找到单菌落 ①都能分离纯化菌种，获得单菌落；②都是在固体培养基上进行的。 方法简单，但不能计数 可以计数，但操作复杂，需涂布多个平板 习题巩固 1．下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。下列叙述中错误的是（　　） A.甲涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能涂菌液 B.甲、乙操作中只有甲可以用于微生物的计数 C.乙中接种环需要灼烧5次 D.乙中连续划线的起点是上一次划线的末端 C 6次 2.如图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，图丙是接种后培养的效果图解。下列相关叙述不正确的是（　　） A.图甲是平板划线法，图乙是稀释涂布平板法 B.这两种方法所用的接种工具分别是接种针和接种环 C.图丙是采用图乙所示方法得到的结果 D.两种方法的接种操作都一定要在火焰附近进行，因为火焰附近存在着无菌区域 B 接种环和涂布器 习题巩固 3．营养缺陷型菌株是指缺乏合成某些营养物质（如氨基酸、维生素）的能力，必须在基本培养基中补充特殊营养物质才能正常生长的一类菌株，可自然产生或人工诱导获得。用一定方法诱变大肠杆菌并将其接种到甲培养皿上，一段时间后将菌落影印接种（不改变菌落在培 养基中相应位置）到乙、丙两培养 皿中，进一步培养一段时间可筛选 出营养缺陷型菌株，结果如图所 示。下列说法正确的是（　　） A.将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为平板划线法 B.甲、丙两培养皿中培养基均添加了特殊营养物质 C.乙培养皿中能生长的为所需的营养缺陷型菌株 D.甲中部分大肠杆菌发生了基因突变或染色体变异 B 稀释涂布平板法 不能 原核无染色体 解析:由菌落的分布情况可知，将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为稀释涂布平板法，A错误;根据甲、丙两培养皿中培养基上的菌落位置可知，甲中的菌株在丙培养基中均能生长，再结合乙培养皿中菌落的生长情况，可推测甲、丙培养皿中培养基都添加了特殊营养物质，B正确;乙培养皿中不能生长的为所需的营养缺陷型菌株，C错误;甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变，不可能发生染色体变异，因为大肠杆菌是原核生物，不含染色体,D错误。 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.提出问题： 2.基础知识： (1)如何分离土壤中能分解尿素的细菌？ (2)如何计算每克土壤样品中有多少分解尿素的细菌？ 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成______的微生物才能分解尿素。 利用______________________的______培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 脲酶 以尿素作为唯一氮源 选择 CO(NH2)2+H2O 脲酶 CO2+2NH3 3.实验步骤： (1)土壤取样 细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3-8cm的土壤层。因此，取样时一般要铲去表层土。 (2)制备培养基 ①选择培养基：以尿素为唯一氮源 ②牛肉膏蛋白胨培养基：作为对照组，来判断选择培养基是否具有选择作用 (3)样品的稀释与涂布平板 测土壤中细菌数量，一般选1×104、 1×105、 1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。 在初次实验时，可以将稀释的范围放宽一点，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。 选择培养基 （重复实验） 完全培养基 （牛肉膏蛋白胨培养基） (3)样品的稀释与涂布平板 作为对照，检测选择培养基是否具有选择作用。 还要设置2个空白对照平板：未接种的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以检测培养基是否被污染或灭菌是否彻底。 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (4)微生物的培养与观察 不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。本实验中，每隔24h统计一次菌落数目，选取 时的记录作为结果，防止 。 一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如 等。 因培养时间不足而导致遗漏菌落数目 菌落数目稳定 形状、大小和颜色 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 4.结果分析与评价 (1)结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落？ (2)你是否获得了某一稀释度下菌落数为30～300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？ (3)你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异大，可能是什么原因引起的？ 若未接种的培养基上无菌落生长，说明培养基未被杂菌污染。 若接种后的完全培养基上的菌落明显多于选择培养基的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。 若得到了两个或多个菌落数为30~300的平板，说明稀释度合格，操作比较成功，能够进行菌落的计数。 若用同一土样进行操作，数据应该比较接近。若差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。 5.进一步探究 本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌，对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料，进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。 思考： 利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物，都是能分解尿素的微生物吗？ 不一定。因为微生物的培养是个复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物进行生长繁殖。 组分 含量 KH2PO4 1.4 Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g H2O 定容至1000mL 鉴别培养基 土壤中分解尿素的细菌的鉴定 土壤中分解尿素的细菌的鉴定 ①原理： 脲酶催化尿素分解成氨 → 培养基碱性增强 → 酚红变红 → 脲酶阳性 ②方法： 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。若PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 【拓展延伸】鉴别培养基 鉴别培养基 在培养基中加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应，从而达到鉴定的作用。 伊红—亚甲蓝琼脂培养基 （鉴别大肠杆菌——菌落 呈深紫色，有金属光泽） 刚果红培养基 （鉴别纤维素分解菌 ——出现透明圈） P30 P20 项目 选择培养基 鉴别培养基 原理 用途 举例 图示 尿素分解菌 大肠杆菌 加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应；使目标菌落出现特定的特征。 培养、分离出目标微生物 鉴别目标微生物 培养真菌时，可加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来分离可尿素分解菌。 可用伊红—亚甲蓝琼脂培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌（若有，则菌落呈黑色，且带有金属光泽）。 添加（或缺少）某种化学物质，促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长。 【拓展延伸】鉴别培养基 伊红—美蓝培养基 1.(2025·湖南·高考真题)采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（ ） A.稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数 B.完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照 C.土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸 D.用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质 B 习题巩固 【详解】A、稀释涂布平板法可通过菌落数进行计数，而平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数，A错误; B、平板划线法操作后需设置未接种的平板作为空白对照，以验证培养基灭菌是否彻底，B正确; C、醋酸菌为严格好氧菌，其代谢需氧气，无氧条件下无法将葡萄糖转化为乙酸，C错误; D、筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨(含其他氮源)，则无法筛选目标菌，D错误 2.下列关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述，正确的是（ ） A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 B.筛选分解尿素的细菌时,应以尿素作为培养基中唯一的营养物质 C.统计样品中的活菌数目一般用平板划线法 D.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,若指示剂变蓝,则表明选到了能分解尿素的细菌 A 习题巩固 【详解】A、只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A正确; B、筛选分解尿素的细菌的实验中，采用的是以尿素为唯一“氮源”的培养基，B错误; C、统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法，C错误; D、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂变红，这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素，D错误。 故选 A。 3.下列有关土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的实验操作，错误的是（ ） A.取土壤用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌 B.测定土壤中细菌的数量一般选用102、103、104倍的稀释液进行平板培养 C.鉴定分解尿素的细菌，利用了尿素分解成氨，从而使pH升高的原理 D.用牛肉膏蛋白胨培养基作对照，来验证选择培养基是否有选择性 B 104、105和106 习题巩固 【详解】A、取土壤用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌，A正确; B、土壤中细菌比真菌多，在测定土壤中细菌的数量时，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，B错误; C、鉴定分解尿素的细菌的原理:该细菌能产生脲酶，脲酶能将尿素分解成氨，从而使pH升高，使酚红变红色，C正确; D、用牛肉膏蛋白胨培养基作对照，来验证选择培养基是否有选择性，若有选择性，其上菌落数目要比对照组少的多，D正确。故选B。 4.一次性口罩的主要成分为聚丙烯纤维(PP)，某科研团队准备从土壤中筛选出高效降解一次性口罩的细菌。图甲表示PP分解菌分离与计数的过程，6号试管涂布的三个平板的菌落数为550、601、688；7号试管涂布的三个平板的菌落数为58、73、97；8号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28。图乙表示在培养基中加入能与PP结合而显色的染色剂，目的菌落周围出现透明圈的情况。下列说法错误的是（　　） A．图甲、图乙所用培养基分别为选择培养基和鉴别培养基，都以PP作为唯一碳源 B．图甲、图乙所用接种方法分别为稀释涂布平板法和平板划线法，都需在酒精灯火焰旁进行 C．1 g 土壤样品中含有PP分解菌的估算数目是7.6×1010个，此数值一般偏小 D．可选择图乙培养基中D/d比值大的PP分解菌作为目的菌种推广使用 √ 【详解】 A、根据题意，本实验目的是筛选出可以高效降解一次性口罩的细菌，图甲使用的是选择培养基图乙所用培养基分别为鉴别培养基，两个实验都以PP为唯一碳源，A正确; B、图甲和图乙两个实验所用到的都是稀释涂布平板线法，需要在酒精灯火焰旁进行，B错误; C、计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30~300的平板进行计数，因此应用7号试管涂布的结果，通过计算可以得到:(58+73+97)/3÷0.1x108=7.6x1010，C 正确: D、图乙中透明圈越大，说明分解菌的降解能力越强，即 D/d 比值越大，降解能力越高，故可选择图乙培养基中 D/d 比值大的 PP 分解菌作为目的菌种推广使用，D 正确。故选 B。 1.研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出一种石油降解菌。判断下列相关表述是否正确。 (1)这种培养基是一种选择培养基。（ ） (2)利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤。（ ） (3)相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌。（ ） √ 一、概念检测 练习与应用 √ √ 2. 用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是（ ） A.菌落中的细菌数目是恒定的 B.平板上的一个菌落就是一个细菌 C.通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同 D.平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 D 二、拓展应用 1. 反刍动物，如牛和羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。 提示：由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡。因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基、还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。 ①用“尿素为唯一氮源”的选择培养基进行培养 ②创造无氧环境进行培养 练习与应用 2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖 物质形成红色复合物，但并不与水解后 的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。 当我们在含有纤维素的培养基中加入刚 果红时，刚果红与纤维素形成红色复合 物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后， 复合物就无法形成，培养基中会出现以 这些菌为中心的透明圈（如下图所示）。 请回答下列问题。 几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈 (1)现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。 土壤取样 → 富含纤维素的环境 → 以纤维素为唯一碳源，增加目的菌浓度 （选择培养基） → 制备系列稀释液 → 筛选产生透明圈的菌落 选择培养 涂布平板 → 将样品涂布到含刚果红的培养基上 （鉴别培养基） 梯度稀释 挑选 (2)你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？ (3)有同学说，可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。 纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。 这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境，腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。 $