第1章 第2节 第1课时 微生物的基本培养技术（学生版）-【创新教程】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程五维课堂同步复习（人教版）

生物·选择性必修第三册 第2节 讲 微生物的培养技术及应用 第1课时微生物的基本培养技术 课标内容要求 核心素养对接 1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的 科学思维：根据微生物的代谢类 前提 型分析培养基的组成 2.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区 科学探究：尝试配制培养基，并进 域不被微生物污染的技术 行操作纯化大肠杆菌的两种方法 教材梳理。预新知 ◆[基础梳理] 3.消毒和灭菌的辨析 1.培养基 项 (1)概念：人们按照微生物对 的不同 条件 结果 常用方法 应用范围 目 需求，配制出供其 的营养基质。 煮沸消 (2)营养组成：一般都含有 日常用品 毒法 仅杀死物 和无机盐。此外，还需要满足微生物生长 体表面或 巴氏消 不耐高温 对 、氧气以及 较为 消 内部的部 毒法 的液体 的要求。 的物理或 毒 分对人体 用酒精擦 (3)种类：按照物理性质可分为 培养 化学方法 有害的微 化学药剂 拭双手，用 基和固体培养基。 生物 消毒法 氯气消毒 2.无菌技术 水源 (1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止 的方法。 灼烧灭 接种工具 (2)关键：防止 的入侵。 菌法 杀死物体 (3)不同对象的无菌操作方法（连线） 内外所有 灭 玻璃器皿、 方法 类型 对象 灭强烈的理的微生 菌法 金属工具 ①灼烧灭菌 I.接种针环 菌 化因素 物，包括 ②干热灭菌 a.消毒 和 Ⅱ培养皿 湿热灭菌法 ③巴氏消毒 b.灭菌 培养基及容 (高压蒸汽 ④紫外线 Ⅲ.操作者的 器的灭菌 衣着和手 灭菌法) ⑤化学药物 ⑥高压蒸汽灭菌 V水源地 6· 第一章发酵工程 4.平板划线法 6.两种纯化细菌方法的比较 平板划线操作及培养结果：接种环在固体培 项目 优点 缺点 养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步分散 可以观察菌落特 到培养基的表面。平板划线示意图(A)及 平板划 征，对混合菌进行 不能计数 培养后菌落分布示意图(B)如下图所示。 线法 分离 吸收量较小，较 稀释涂布 可以计数，可以 麻烦，平板不干 平板法 观察菌落特征 燥效果不好，容 易蔓延 5.稀释涂布平板法 ◆[基础诊断] (1)主要操作环节：梯度稀释和涂布平板。 (1)液体培养基含有水，而固体培养基不含水。 (2)梯度稀释和涂布平板后培养结果如图 () 所示： (2)培养基分装到培养皿后进行灭菌。( (3)高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 表指针回到零后，开启锅盖。 () (4)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免 9mL无 菌水 培养基溅到皿盖上。 () 菌液 稀释一9高9988部9 (5)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁 每个平板加 0.1mL样品 热快速挑取菌落。 () (6)平板划线法和稀释涂布平板法接种时都要 159 16 菌数太多难以计数 菌落数菌落数菌落数 在无菌环境中进行。 互动究⊙克疑难 疑难点一培养基的成分及无菌技术 1.培养基的配制原则 2.培养基的成分及功能 (1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据 营养 作用 功能 主要来源 培养目的进行配制。 物质 (2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要 构成生物体的 无机碳源： 适宜。 能为微生 细胞物质和一 CO2、NaHCO3 (3)pH要适宜：为维持pH的相对恒定，可在培养 碳源 物代谢提 些代谢物，有 等；有机碳源： 供碳元素 些是异养生物 基中加入缓冲剂，常用K2HPO4一KHPO4。 糖类、牛肉膏等 的能源物质 7。 生物·选择性必修第三册 续表 续表 营养 作用 灭菌和消毒 功能 主要来源 物质 主要方法 应用范围 的种类 无机化合物： 能为微生 煮沸 100 ℃煮沸 家庭餐具等生 合成蛋白质、 2、NH3、铵盐 物的代谢 消毒法 5~6 min 活用品 氨源 核酸以及含氨 硝酸盐等；有机 提供氮 的代谢物 氨源：尿素、蛋 62~65℃消 牛奶、啤酒、果 元素 白胨等 巴氏 毒30min或 酒和酱油等不 不仅是优良的 消毒法 80~90℃处 宜进行高温灭 是生命活 溶剂，而且可 水 动所必 外界摄入 消 理30s1min 菌的液体 维持生物大分 需的 毒 紫外 紫外线照射 子结构的稳定 接种室空气 线消毒 30 min 为微生物 细胞内的组成 提供除碳、 成分，生理调 用体积分数 皮肤、伤口、动 无机 氮以外的 节物质，某些 为 70% 植物组织表面 无机化合物 化学药 盐 各种重要 化能自养菌的 75%的乙醇、 和空气、手术 物消毒 元素，包括 能源，酶的激 碘酒涂抹，来 器械、塑料或 大量元素 活剂 苏尔喷洒等 玻璃器皿等 3.常用灭菌与消毒方法的比较 ◆[互动探究] 灭菌和消毒 1.牛肉膏蛋白胨培养基是一种常见的细菌培养 主要方法 应用范围 的种类 基，其中牛肉膏、蛋白胨能够提供哪些营养 湿热灭菌 100kPa、 培养基及多种 成分？ (高压蒸汽 121℃维持 器材、物品 灭菌法) 15~30 min 2.在科研和生产上，研究和应用微生物的前提是 玻璃器皿（如 什么？在实验室中培养微生物应注意哪些 吸管、培养皿 问题？ 干热灭菌箱 等)、金属用具 千热灭菌 160~170℃ 等，凡不适宜 灭 加热2~3h 用其他方法灭 菌 菌而又能耐高 温的物品 3.无菌技术除了用来防止实验室培养物被其 他外来微生物污染外，还有什么目的？ 微生物接种工 具，如接种环、 酒精灯火焰 接种针或其他 灼烧灭菌 的外焰灼烧 金属用具等，接 4.消毒和灭菌的原理有哪些？试举例说明。 种过程中的试 管口或瓶口等 8· 第一章发酵工程 ◆[对点训练] 2.下列不是细菌接种过程中的无菌操作的是 1.不同培养基的具体配方不同，但一般都含 ( A.灼烧接种环 B.高压灭菌 C.在超净工作台上操作D.靠近火焰 A.碳源、磷酸盐和维生素 ◆[易错警示] 误认为消毒就是灭菌 B.氨源和维生素 消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀 C.水、碳源、氨源和无机盐 死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢 和孢子)；灭菌是指使用强烈的理化方法杀死 D.碳元素、氧元素、氢元素、氮元素 物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）。 疑难点二微生物的纯培养 平板划线法与稀释涂布平板法的注意事项 ◆[互动探究] 1.平板划线法 分析下图，思考下列问题： (1)接种环的灼烧 ①第一次划线前：杀死接种环上的微生物， 避免污染培养物。 ②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划 线菌种来自上次划线末端。 图二 ③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环 境和感染操作者。 (1)如图一所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通 (2)灼烧接种之后，要冷却后再进行操作，以免 过火焰？ 温度太高杀死菌种。 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大划破 培养基。 2.稀释涂布平板法 (1)稀释操作时：每支试管及其中的9mL水、 移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液 (2)如图二所示，从防止杂菌污染的角度思考， 管应在离火焰1~2cm处。 将平板倒置的原因是什么？ (2)涂布平板时： ①涂布器浸在体积分数为70%的酒精中， 取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将 沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。 ②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧 杯中，以免引燃其中的酒精。 ③酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管 头不接触任何物体。 9 生物·选择性必修第三册 ◆[对点训练] C.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内， 1.下列关于平板划线操作的叙述，正确的是 划三至五条平行线即可 D.最后将平板倒置，放在培养箱中培养 2.将接种后的培养基和一个未接种的培养基 A.使用已灭菌的接种环、培养皿，在操作过 都放入37℃恒温箱的目的是 ) 程中不需要再灭菌 A.对比观察培养基有没有被微生物利用 B.对比分析培养基是否被杂菌污染 B.打开含菌种的试管，需通过酒精灯火焰 C.没必要放入未接种的培养基 灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 D.为了下次接种时再使用 课堂自测⊙固双基 1.下列有关微生物营养的说法正确的是 3.如图是两种不同接种方法所得到的结果，下 ( 列说法正确的是 ( A.纤维素分解菌与硝化细菌所利用的碳源 ① 物质是相同的 B.实验室培养乳酸杆菌时需要在培养基中 B 添加维生素 A.A、B两种接种方法使用的接种工具在 C.培养基中的营养物质浓度越高对微生物 接种前都要在酒精灯火焰上灼烧，且处 的生长越有利 理方法完全相同 D.任何培养基都必须含有碳源、氮源、无机 B.进行接种之前都要对操作者双手和培养 盐、水和琼脂 基进行灭菌处理 2.下列有关无菌技术的说法，其中正确的有几项 C.A方法划线时，是沿方向①②③进行，且 ( 在③区域看到有单个菌落，可直接计数 ①无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微 D.A、B所使用的培养基可以相同，且制作 生物②煮沸消毒法中100℃煮沸5~6mim 时要先调pH再灭菌最后倒平板 可以杀死微生物细胞和部分芽孢、孢子③经 4.如图是平板划线法接种 巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底 微生物的示意图，下列叙 消灭，所以不能在常温下长期保存 述正确的是 ④高压蒸汽灭菌时若不将锅内冷空气排出 A.该接种过程一般需 则达不到预期的灭菌效果⑤将接种环直 灼烧接种5次 接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅 B.在第5区域中才可以得到单个菌体形成 的菌落 速彻底地灭菌⑥无菌技术中，若处理对象 C.划线时，在火焰附近将皿盖打开一条缝隙 为液体，则只能消毒，不能灭菌 D.该接种方法也能计数培养液中微生物 A.2项 B.3项 C.4项 D.5项 数量 ·10· 第一章发酵工程 5.琼脂是一种多糖类物质，由于很少有微生物 (3)为了检验上述假说①是否正确，研究人 能将其降解而成为配制固体培养基时常用 员分别使用两种培养基对上述微生物进行 的凝固剂之一。某实验室在处理一批已进 培养，其中一种为牛肉膏蛋白胨培养基a, 行过微生物培养的废弃固体培养基时发现， 则另一培养基b中不能加入下列的 几乎全部培养基上的微生物都已死亡，但在 其中一个培养基上存在一个正常生长的菌 A.牛肉膏 B.蛋白胨 落。对此，研究人员做出了以下假说：①此 C.氯化钠 D.琼脂 培养基内的营养未被消耗殆尽：②形成此菌 (4)用上述a、b培养足够时间，菌落生长情 落的为自养型微生物；③形成此菌落的微生 况为 物能利用琼脂。 时，则排除了假说②③，证明假 (1)从研究人员所作的假说可以推测①所说 说①正确。 的“营养”指的最可能是 (填“碳源” (5)若上述实验否定了假说①，为进一步检 “氮源”或“无机盐”)。 验假说②和③，研究人员想要配制一种新的 (2)配制牛肉膏蛋白胨培养基的步骤包括： 培养基c,并以b与c上是否出现菌落作为 计算、 、灭菌、倒平板。 观察指标，则与b相比，c的成分需要做出 倒平板所用的培养皿和培养基所用的灭菌 的改变是 方法依次是 和 C温馨提店 学习至此，请完成配套训练 第2课时 微生物的选择培养和计数 课标内容要求 核心素养对接 1.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物 生命观念：理解微生物的选择培 2.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生 养和计数的原理 物分离和纯化的常用方法 科学探究：开展稀释涂布平板法 3.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量 的操作和土壤中分解尿素的细菌 的常用方法 的分离与计数实验 教材梳理。预新知 ◆[基础梳理] 2.实验室中目的菌株的筛选 一、选择培养基 (1)原理：人为提供有利于 生长 1.自然界中微生物的分离 的条件（包括营养、温度、pH等），同时 其他微生物的生长。 (1)目的菌株是优势种群： 或 (2)方法：利用选择培养基分离。 法。 ①选择培养基：允许 的微生 (2)目的菌株非优势种群：利用 物生长，同时 其他种类微生 分离。 物生长的培养基。 11生物·选择性必修第三册 5.解析：(1)图中过程①和②是酵母菌进行无氧呼吸产生酒精 的过程，无氧呼吸的场所是细胞质基质。过程③为有氧呼吸 的第二和第三阶段，场所为线粒体。在有氧条件下酵母菌进 行有氧呼吸，产生更多的能量供酵母菌繁殖利用，故有氧条 件下酵母菌的繁殖速度更快。(2)醋酸杆菌是好氧型细菌， 因此，在醋酸杆菌作用下，将乙醇转变为乙酸的过程需要在 有氧条件下才能完成。(3)在生产过程中，第一阶段酵母菌 产生乙醇的适宜温度为18~30℃，第二阶段醋酸杆菌产生 醋酸的适宜温度为30一35℃，第一阶段的温度低于第二阶 段的温度。(4)醋酸杆菌属于原核生物，原核细胞中的细胞 器只有核糖体一种，不含线粒体。 答案：(1)细胞质基质线粒体快(2)有氧(3)低于 (4)原不含有 第2节微生物的培养技术及应用 第1课时微生物的基本培养技术 教材梳理·预新知 基础梳理 1.(1)营养物质生长繁殖(2)水、碳源、氨源pH特殊营 养物质(3)液体2.(1)杂菌污染(2)外来杂菌 方法 类型 对象 ①灼烧灭菌 I.接种针（环 ②干热灭菌 ,a.消毒 (3) Ⅱ培养皿 ③巴氏消毒 b.灭菌八 ④紫外线 Ⅲ.操作者的 衣着和手 ⑤化学药物 ⑥高压蒸汽灭菌 V水源地 3.温和芽孢孢子干热 基础诊断 (1)×(2)×(3)×(4)×(5)×(6)/ 互动探究·克疑难 疑难点一互动探究 1.提示：碳源、磷酸盐和维生素氮源和维生素。 2,提示：在科研和生产上，研究和应用微生物的前提是进行微 生物的培养。实验室中培养微生物应注意无菌操作，根据不 同物品选择不同的灭菌或消毒方法。 3.提示：还可以保护实验人员的安全。 4.提示：①使菌体蛋白凝固变性，如湿热灭菌；②抑制细菌代谢 和生长，或破坏细菌细胞膜的结构，改变其通透性，使细胞破 裂、溶解，如某些化学消毒法；③损伤细菌DNA等，如紫外 线消毒法。 对点训练 1.C[培养基中一般都含有水、碳源、氨源和无机盐，此外还 应考虑pH、特殊营养物质及O,等条件。] 2.B[在细菌接种的前后都需要灼烧接种环，A不符合题意； 高压蒸汽灭菌一般用于培养基的灭菌，而在细菌接种过程中 不需要高压蒸汽灭菌，B符合题意；细菌接种过程应该在超 净工作台上操作，以防止杂菌的污染，C不符合题意：细菌接 种过程应该在酒精灯火焰附近进行，以防止杂菌的污染， D不符合题意。] ·9 疑难点二互动探究 (1)提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (2)提示：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的 水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造 成污染。 对点训练 1.D[在平板划线时，已灭过菌的接种环在每次划线后，必须 用灼烧灭菌法灭菌，以杀死上次划线结束后接种环上残留的 菌种；盛有菌种的试管在打开后或重新塞棉塞前，都需将试 管口通过酒精灯火焰灼烧和灭菌：在平板内划三至五条平行 线后应盖上皿盖，并灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划 线的末端开始往第二区域划线，并按此操作继续往三、四、五 区域划线；接种完成后，需将平板倒置放入培养箱，以防培养 皿皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。门 2.B[对未接种的培养基进行培养，起对照作用，可确定培养 基是否被杂菌污染。] 课堂自测·固双基 1.B[纤雏素分解菌是异养型微生物，其碳源为有机碳源，硝 化细菌是自养型微生物，其碳源为CO2,A错误；雏生素是乳 酸杆菌生长繁殖所必需的生长因子，而乳酸杆菌不能合成， 所以实验室培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加雏生素， B正确；培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物不能从 培养基中吸水，将出现失水过多而死亡的现象，对生长不利， C错误；培养基不一定都含有碳源、氨源，如培养自养型微生 物的培养基中不需要加入碳源，分离自生固氨菌的培养基中 不需要加入氨源，D错误。] 2.C[①无菌技术的关键是防止杂菌的污染，①错误；②煮沸 消毒法中l00℃煮沸5~6min可以杀死微生物细胞和一部 分芽孢和孢子，②正确；③经巴氏消毒法处理的食品因微生 物未被彻底消灭，所以不能在常温下长期保存，③正确：④高压 蒸汽灭菌时若不将锅内冷空气排出则达不到预期的灭菌效果， ④正确；⑤将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以 迅速彻底地灭菌，⑤正确；⑥无菌技术中，若处理对象为液体，可 以用高压蒸汽灭菌法灭菌，⑤错误。故选C。] 3.D[图A使用的工具是接种环，接种前需在明火上灼烧灭 菌，冷却后再进行划线操作，图B使用的接种工具是涂布 器，涂布器的处理方法是将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯 上引燃，燃尽且冷却后即可涂布，A错误；操作者的双手应进 行酒精消毒处理，B错误；平板划线法不能对细菌计数， C错误；A、B所使用的培养基可以相同，且制作时要先调 pH再灭菌最后倒平板，D正确。] 4.C[每一次划线前后都要灼烧灭菌，所以共要灼烧6次， A错误；随着划线次数增多，细菌数目依次减少，在第3次或 第4次划线区域也可能形成单菌落，B错误；平板划线时一 定在火焰旁，培养皿盖只打开一道缝隙，以避免杂菌污染，C 正确；平板划线法不能用于微生物计数，D错误。] 5.解析：(1)从三个假说所指向的微生物来看，其差别主要在于 所需碳源不同。 (2)培养基配制的基本步骤是计算→称量→溶化→灭菌→倒 平板，培养皿等玻璃器皿一般采用干热灭菌，而培养基往往 采用湿热灭菌。 (3)A、B可以为绝大多数微生物提供碳源，而从实验目的分析，b 培养基应该要排除依靠此类碳源生活的微生物，故选AB。 (4)a培养基上长出菌落，b培养基上不长菌落说明该微生物 只能利用常规碳源生活，也就说明假说①更可靠。 (5)要出现菌落，需要用固体培养基，题干提示，琼脂是配制 固体培养基时常用的凝固剂之一，因此较为简单的做法是将 琼脂换用其他凝固剂，这样就可以通过b和c的对比来确定 该微生物能否利用琼脂作为碳源。 答案：(1)碳源(2)称量溶化干热灭菌湿热灭菌 (3)A、B(4)a培养基上长出菌落，b培养基上不长菌落 (5)将琼脂换用其他凝固剂 第2课时微生物的选择培养和计数 教材梳理·预新知 基础梳理 一，1.(1)平板划线法稀释涂布平板(2)选择培养基 2.(1)目的菌株抑制或阻止(2)特定种类抑制或阻止 尿素脲酶 二、2.(1)9(2)1混匀(3)13.0.1酒精冷却涂布 器菌液培养基转动倒置单 三、活菌 四、1.3~82.(1)稀释度菌落数目(2)30~300 3.(1)温度时间(2)24h菌落稳定4.(1)灭菌 火焰棉塞火焰(2)标记(3)制订计划 基础诊断 (1)/(2)/(3)×(4)×(5)×(6)× 互动探究·克疑难 疑难点一互动探究 1.提示：可同时用于分离微生物和统计活菌数的接种方法为稀 释涂布平板法。为了保证结果准确，一般选择菌落数为 30-300的平板进行计数。 2.提示：不能。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实 验，在同一稀释度下涂布3个平板，统计结果后计算平均值。 3.提示：微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果不一 致的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的 原因，需重新实验，而不能筒单地舍弃后进行计数。 对点训练 1.C[选择培养基是在培养基中加入特殊营养物质或化学物 质，抑制其他微生物的生长，有利于所需微生物生长的培 养基。] 2.C[对微生物计数时，培养液经过静置后，需要先摇匀，若 未摇匀，由于微生物的沉淀，培养液的上层微生物数量少，进 行直接计数会使计数值偏低：进行梯度稀释时，若每支试管 加入了过多的无菌水，会使菌液稀释超过需要稀释的倍数而 使结果偏低：利用显微镜直接计数时，如果先滴加菌液再加 ·9 参考答案 盖玻片，容易使盖玻片由于液滴的表面张力作用而不能严密 地盖到计数板表面上，使计数室内的体积增大，计数结果将 偏高；平板上有不少菌落是两个细菌长成的菌落连在一起形 成的，按一个菌落计数，会使数值偏小。」 疑难点二互动探究 (1)提示：用以尿素为唯一氮源的培养基进行选择培养。不能 合成脲酶的微生物无法分解尿素获得氮，生长受到抑制。 (2)提示：防止培养皿盖上的水滴落造成培养基的污染。 (3)提示：分解尿素的细菌能合成脲酶，而脲酶可将尿素分解成 氨和CO2,从而为微生物提供氮源。 (4)提示：(54+46十50)÷3×10°=5×10个。 对点训练 1.C[在“分解尿素的细菌的分离与计数”实验中，必须在含 微生物丰富的湿润、肥沃土壤中取样，所用小铁铲和信封必 须灭菌。] 2.D[对照组培养基也应严格灭菌，且不接触任何生物， A正确；对照组和实验组的培养基应放在相同的条件下培 养，所用培养基成分及H大小完全与实验组一致，B、C正 确：对照组培养基的量的大小与实验组不一定绝对相 同，D错误。] 课堂自测·固双基 1.C[只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺乏脲酶的 微生物由于不能分解尿素，缺乏氨源，使其生长、发育及繁殖 受到抑制，所以，以尿素为唯一氨源的培养基能够选择出分 解尿素的微生物。] 2.A[分离菌种常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平 板法，对活菌进行计数常用稀释涂布平板法而不能用平板划 线法，A错误：实验目的是筛选出能分解石油的细菌，培养基 中应以石油为唯一碳源，B正确；对微生物进行分离时可用 稀释涂布平板法接种，C正确：微生物分离和培养的关键是 无菌技术，因此在微生物的分离和培养过程中称取和稀释土 壤等活动要在火焰旁进行，D正确。」 3.C[用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上 的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也 可能来自两个或多个细菌，所以此方法统计的菌落数可能低 于活菌的实际数目。] 4,D[硝化细菌属于自养型生物，因此培养硝化细菌的培养 基中不需要加入有机碳源，则培养基中不能加入牛肉膏蛋白 胨，A错误；培养基制备过程中应先调节DH,再高压蒸汽灭 菌，B错误；用滴管或移液管取少量菌液滴到培养皿上，然后 用经过灭菌的涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，C错 误；用稀释涂布平板法统计菌落数目时，由于会出现两个或 多个细菌连在一起形成一个菌落的情况，这样统计的菌落数 往往比活菌的实际数目少，D正确。] 5.解析：(1)配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氨源和无机 盐等主要营养成分外，还应加入适量的雏生素和琼脂。在培 养基各成分溶化与灭菌之间，要先调DH。 (2)接种微生物的方法有很多，图1中过程①②③所示的方 法为稀释涂布平板法，用该方法统计样本菌落数时，同时需