第3章 第2节 第2课时 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定-【金版新学案】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程同步课堂高效讲义配套课件PPT（人教版，多选）

该高中生物学课件聚焦基因工程基本操作程序，涵盖目的基因导入受体细胞、检测与鉴定及DNA片段扩增与电泳鉴定，通过微思考、自我诊断等活动衔接前后知识，构建“原理-方法-应用”的学习支架。 其亮点在于以科学思维和探究实践为核心，通过农杆菌转化法归纳表格、PCR电泳实验步骤等，结合抗虫棉培育等实例，培养学生分析与操作能力。学生能深化理解，教师可借助现成诊断练习提升教学效率。

第2节　基因工程的基本操作程序 第2课时　将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定 　 第3章 基因工程 学习目标 1.阐明将目的基因导入受体细胞的方法。　 2.阐明目的基因的检测与鉴定的方法。　 3.明确DNA片段的扩增及电泳鉴定原理，进行相关操作。 任务一　将目的基因导入受体细胞 1 任务二　目的基因的检测与鉴定 2 任务三　DNA片段的扩增及电泳鉴定 3 课时测评 6 课堂小结 4 内容索引 课堂评价 5 将目的基因导入受体细胞 任务一 返回 1.转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内_________和_____的过程。 2.目的基因导入受体细胞的方法 (1)花粉管通道法 新知导学 维持稳定 表达 ①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入______中。 ②在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助____________进入胚囊。 子房 花粉管通道 (2)农杆菌转化法 双子叶 裸子 T-DNA 染色体DNA Ti质粒的 T-DNA 微提醒 农杆菌转化法中的两次拼接、两次导入 (1)两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞的染色体DNA上。 (2)两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA导入受体细胞。 3.将目的基因导入动物细胞 (1)方法：_________技术。 (2)受体细胞：________。 (3)过程：目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物。 4.将目的基因导入微生物细胞 常以大肠杆菌作为受体细胞，一般先用______处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能______周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。 显微注射 受精卵 Ca2＋ 吸收 微思考 (源于教材P83“到社会中去”)科研工作者在发现棉铃虫出现抗性之前，就应该想办法应对。从基因策略看，延缓棉铃虫对Bt抗虫蛋白产生抗性的措施有哪些？________________________________________________ _____________________________________________________________________________________。 在分子水平上提高转基因抗虫棉的抗虫性和抗虫持久性，包括在棉花中转入多个杀虫基因、构建组织特异性表达的启动子、提高杀虫基因的表达量等 1.花粉管通道法是我国科学家独创的一种方法，主要适用于双子叶植物和裸子植物。 ( ) 2.农杆菌侵入植物细胞后，其Ti质粒上的T-DNA能转移到被侵染的细胞，并且整合到该细胞的染色体DNA上。 ( ) 3.培育转基因动物时，常选择受精卵作为受体细胞，利用显微注射法将目的基因注入受精卵中。 ( ) 4.将目的基因导入原核细胞时，通常用大肠杆菌作为受体细胞，并需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的状态。 ( ) 5.为培育抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体细胞。 ( ) 自我诊断 × √ √ √ × 活动1　深入理解将目的基因导入受体细胞 情境：将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。结合图1、图2、图3，根据教材相关内容完成下列问题： (1)将目的基因导入植物细胞的方法有______________和______________等，其中由我国科学家独创的一种方法是______________，适用于双子叶植物和裸子植物的是______________。 探究导思 农杆菌转化法 花粉管通道法 花粉管通道法 农杆菌转化法 (2)农杆菌转化法利用了农杆菌的什么特性？ 提示：农杆菌中Ti质粒上的T-DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞的染色体DNA上。 (3)为什么植物基因工程常用的受体细胞可以是体细胞，而动物基因工程一般只用受精卵？ 提示：植物体细胞的全能性较高，可经植物组织培养过程形成完整植物体，因此受体细胞可以是体细胞；动物体细胞的全能性受到严格限制，因此动物基因工程中的受体细胞一般只用受精卵。 (4)从细胞器的功能上分析，若通过基因工程生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌作受体细胞吗？ 提示：不可以。因为糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的，而内质网和高尔基体存在于真核细胞中，大肠杆菌是原核生物，细胞中不含有这两种细胞器。 归纳总结 1.目的基因导入不同受体细胞的过程 项目 植物 动物 微生物 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 感受态细胞法 受体细胞 体细胞或受精卵 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→转入农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达　 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组的基因表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 归纳总结 2.受体细胞的选择 (1)对于植物来说，受体细胞可以是受精卵或体细胞，因为植物细胞具有全能性。 (2)对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵的全能性高，而高度分化的动物体细胞的全能性受到抑制。 (3)大肠杆菌和酵母菌在基因工程中都可以作为受体细胞，但又有所不同。大肠杆菌为原核细胞，而酵母菌为真核细胞(具有多种细胞器)，所以在生产需要加工和分泌的蛋白质时，酵母菌比大肠杆菌有优势。 针对练1.(2024·新疆乌鲁木齐高二期中)受体细胞不同，将目的基因导入受体细胞的方法也不相同，下列受体细胞与导入方法匹配错误的一项是 A.大肠杆菌—Ca2＋ B.棉花受精卵细胞—花粉管通道法 C.羊高度分化的体细胞—显微注射法 D.番茄细胞—农杆菌转化法 √ 用Ca2＋处理大肠杆菌，使细胞处于感受态，容易吸收周围环境中DNA分子，A正确；当以棉花受精卵为受体细胞时，常用花粉管通道法，B正确；将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法，常用动物受精卵为受体细胞，C错误；番茄为双子叶植物，番茄细胞可以用农杆菌转化法，D正确。 特别提醒 基因工程植物细胞和动物细胞的受体细胞存在差异 　　目的基因导入植物细胞时常选用植物的体细胞作为受体细胞，主要是因为植物体细胞具有全能性，且取材方便，而动物的体细胞不易表达全能性，故而对动物细胞来说，常选用全能性最高的受精卵为受体细胞。 针对练2．(多选)如图为科学家通过基因工程培育抗虫棉时，从苏云金杆菌中提取抗虫基因“放入”棉花细胞中，与棉花的DNA分子“结合起来”而发挥作用的过程示意图。以下相关说法正确的是 A．图中Ⅰ是质粒，步骤①需要用到限制酶和DNA连接酶 B．图中Ⅱ是含目的基因的重组质粒，步骤②是将重组质粒导入棉花细胞 C．图中Ⅲ是农杆菌，通过步骤③将目的基因导入植物细胞 D．剔除培育成功的抗虫棉体内的四环素抗性基因不会影响抗虫基因的表达 √ √ √ 图中Ⅰ为质粒，步骤①为基因表达载体的构建，需要用到限制酶和DNA连接酶，A正确；图中步骤②是将重组质粒导入农杆菌细胞，B错误；图中Ⅲ是农杆菌，通过步骤③将目的基因导入植物细胞，C正确；基因的表达具有一定的独立性，剔除抗虫棉体内的四环素抗性基因不影响抗虫基因的表达，D正确。 返回 目的基因的检测与鉴定 任务二 返回 新知导学 PCR mRNA 抗原一抗体杂交 微提醒 　　转录水平的检测与复制水平的检测原理都是分子杂交；翻译水平的检测，则是利用抗原与抗体特异性结合的原理。 1.常使用PCR等技术，从分子水平上检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因或检测Bt基因是否转录出mRNA。 ( ) 2.从分子水平上检测目的基因是否翻译出相关蛋白质的方法之一是利用抗原—抗体杂交技术。 ( ) 3.可以通过盐碱地栽培试验从细胞水平上检测转基因抗盐碱作物是否具有抗盐碱的特性以及抗盐碱的程度。 ( ) 4.用PCR技术检测目的基因是否转录出mRNA，利用了碱基互补配对 原则。 ( ) 5.基因工程是否成功需进行个体生物学水平的鉴定。 ( ) 自我诊断 √ √ × √ √ 探究导思 活动2　详细分析目的基因的检测与鉴定 情境：下图为利用农杆菌转化法制备转基因植物的过程图，据图回答下列问题： (1)在用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，一定要将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上的原因是什么？ 提示：原因是农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA(可转移的DNA)可转移至被侵染的细胞，并且整合到该细胞的染色体DNA上。 (2)将基因表达载体导入农杆菌细胞时，应怎样处理农杆菌细胞？ 提示：基因表达载体(重组质粒)导入农杆菌细胞时，要用Ca2＋处理农杆菌细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，利于重组质粒的导入。 (3)目的基因导入受体细胞时，不同生物常用的受体细胞分别是什么？ 提示：①对于植物来说，受体细胞可以是受精卵或体细胞，因为植物细胞具有全能性且容易表现。②对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为受精卵表现全能性相对容易，而高度分化的动物体细胞的全能性不易表现。③大肠杆菌和酵母菌在基因工程中都可以作为受体细胞，但又有所不同。大肠杆菌为原核细胞，而酵母菌为真核细胞(具有多种细胞器)，所以酵母菌在用于生产需要加工和分泌的蛋白质时比大肠杆菌有优势。 (4)用什么方法检测目的基因是否插入到了受体细胞的染色体DNA上？ 提示：PCR技术。 (5)用什么方法检测目的基因是否发挥作用？ 提示：用PCR技术检测目的基因是否转录出mRNA；用抗原—抗体杂交技术检测目的基因是否翻译出相应蛋白质。 (6)如果目的基因是抗虫基因，在个体生物学水平上怎样检测？如果目的基因是耐盐基因呢？ 提示：如果目的基因是抗虫基因，则要进行抗虫接种实验；如果目的基因是耐盐基因，则要用一定浓度的盐水浇灌。 归纳总结 目的基因的检测与鉴定的方法 类型 检测内容 方法 结果显示 分子水 平检测 目的基因是否插入转基因生物的DNA上 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间)或PCR等 是否成功显示出杂 交带或是否出现与 目的基因大小一致 的条带　 目的基因是否转录出mRNA 核酸分子杂交技术(DNA和mRNA之间)或PCR等 目的基因是否翻译成蛋白质 抗原抗体杂交(蛋白质和蛋白质之间) 归纳总结 类型 检测内容 方法 结果显示 个体生物学 水平鉴定 是否具有抗性及抗性程度 对转基因生物进行抗性的接种实验 是否赋予了预期抗 性或蛋白质活性　 基因工程产品与天然产品的功能活性是否相同 比较基因工程产品与天然产品的功能活性 针对练3.(2024·江苏常州高二期中)如图是将 人的生长激素基因导入细菌B细胞内制“基 因工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不 含质粒A，也不含质粒A上的基因。下列说 法正确的是 A.将重组质粒导入细菌B常用的方法是农杆菌转化法 B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的只是导入了普通质粒的细菌 C.为防止特异性引物的特异性差，PCR获取人生长激素基因设计的特异性引物不宜过长 D.目的基因成功表达的标志是受体细胞中含有人的生长激素基因 √ 将基因表达载体导入细菌B之前，一般要 先用Ca2＋处理受体细胞，使其处于感受 态，而农杆菌转化法是将目的基因导入植 物细胞的常用方法，A错误；由于重组质 粒构建过程中四环素抗性基因被破坏，所 以能在含有四环素的培养基上生长的是导入普通质粒A的细菌，B正确；PCR引物的设计是获得大量高纯度目的基因的关键，引物中碱基数量越多，则引物的特异性越高，为防止特异性引物的特异性差，PCR获取人生长激素基因设计的特异性引物不宜过短，C错误；基因表达的产物是蛋白质，目的基因成功表达的标志是受体细胞中表达出相应的蛋白质，D错误。 针对练4.科学家将苏云金杆菌中的Bt抗虫蛋白基因(Bt基因)导入棉花的愈伤组织细胞并进行组织培养获得棉花植株。经棉铃虫饲喂实验，发现棉花植株并无抗虫性状，科学家提取棉花叶片细胞中的有关成分进行了如下操作。下列有关分析错误的是 A.提取细胞中的蛋白质，采用抗原—抗体杂交技术进行检测，若检测到细胞中无Bt抗虫蛋白，则说明抗虫基因不能表达 B.若经A检测确定细胞中无Bt抗虫蛋白，可采用PCR等技术检测细胞中的RNA，若测到Bt抗虫蛋白的mRNA，则说明抗虫基因能正常转录和翻译 C.若经B检测确定细胞中无Bt抗虫蛋白的mRNA，可采用PCR等技术检测细胞中的DNA，若能检测到抗虫基因，则可能是抗虫基因反向插入载体中或抗虫基因不能正常转录 D.若经C检测确定细胞中无Bt基因，则可能是将没有目的基因的载体DNA分子导入了受体细胞 √ 若经A检测确定细胞中无Bt抗虫蛋白，可采用PCR等技术检测细胞中的RNA，若能检测到Bt抗虫蛋白的mRNA，则可能是抗虫基因能转录，但不能正常翻译出蛋白质，B错误。 返回 DNA片段的扩增及电泳鉴定 任务三 返回 一、DNA片段的扩增 1.实验原理 新知导学 解聚与结合 2.实验步骤 微量移液器 微量离 心管 离心机 反应液 二、PCR扩增产物的电泳鉴定 1.实验原理 琼脂糖凝胶电泳 凝胶的浓度 DNA 分子的大小和构象 紫外灯 2.实验步骤 琼脂糖 核酸染料 加样孔 电泳缓冲液 指示分子大小的标 准参照物 指示 剂 紫外灯 加样孔 微思考 (源于教材P85“结果分析与评价”)是否成功扩增出DNA片段及判断的依据是什么？____________________________________________________ _________________。 可以通过在紫外灯下直接观察DNA条带的分布及粗细程度来判断扩增的结果 1.利用PCR扩增DNA片段时，在第一轮循环的变性之前，通常要用94 ℃的高温处理反应液5 min进行预变性。 ( ) 2.PCR中离心的目的是让反应组分在离心管中分层分布。 ( ) 3.电泳鉴定PCR产物时，应在每个加样孔中加入等量的PCR产物与凝胶载样缓冲液的混合液。 ( ) 4.基因工程是否成功需进行个体生物学水平的鉴定。 ( ) 5.凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来。 ( ) 自我诊断 √ × × √ √ 活动3　深入理解DNA片段的扩增及电泳鉴定 情境：利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增，扩增获得的DNA片段需要进行分离、鉴定和纯化。自从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究以来，按相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术已经发展成为一种分析鉴定DNA分子的重要实验手段。 分析回答下列问题： (1)为什么PCR实验中使用的微量离心管、枪头等在使用前必须进行高压灭菌处理？ 探究导思 提示：避免外源DNA等因素的污染。 (2)为什么在PCR扩增DNA时不能随意加大试剂用量？ 提示：过高浓度的引物可能引发错配，导致非特异性扩增；4种脱氧核苷酸浓度过高可能对扩增起抑制作用。 (3)影响琼脂糖凝胶电泳DNA迁移率的因素有哪些？ 提示：①DNA分子的大小；②琼脂糖凝胶浓度；③DNA分子的构象；④电场强度；⑤碱基组成与温度；⑥电泳缓冲液的组成等。 (4)假如进行电泳鉴定的结果不止一条带，请分析产生这个结果的可能原因。 提示：引物设计不合理，它们与非目的序列有同源性或容易聚合形成二聚体；复性温度过低；DNA聚合酶不耐高温等。 归纳总结 1.PCR过程中用到的重要仪器 (1)PCR仪：该仪器能自动调控温度，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个恒温水浴锅代替，操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管：总容积为0.5 mL，实际上是进行PCR反应的场所。 (3)微量移液器：用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体。 归纳总结 2.DNA片段的扩增及电泳鉴定的注意事项 (1)为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头等在使用前必须进行高压灭菌处理。 (2)缓冲液和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。 (3)在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。 (4)在进行操作时，一定戴好一次性手套。 针对练5.(2024·吉林卷)关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是 A.琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B.凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C.在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 D.琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来 √ 琼脂糖凝胶的浓度、待测样品中DNA分子的大小和构象等都会影响DNA分子在电泳中的迁移速率，故琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小，A正确；在电泳过程中，凝胶载样缓冲液中的指示剂不会与DNA结合，而是随着电流的通过而移动，可用于确定样品的迁移方向和距离，不能用于指示DNA分子的具体位置，B错误；在同一电场作用下，DNA片段越长，即DNA相对分子质量越大，迁移速率越慢，C错误；琼脂糖凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来，D错误。 针对练6.(2024·巴蜀中学高三期末)以洋葱为材料提取DNA后，用PCR技术对目的基因进行扩增，并对扩增产物进行电泳检查。若电泳结果有多个条带，则导致该结果的原因是 A.洋葱研磨离心后，取沉淀进行了纯化 B.所用的引物，也结合了其他DNA序列 C.进行扩增时，变性温度设置成了72 ℃ D.配制琼脂糖溶液时，没有加入核酸染料 √ 洋葱研磨离心后，应该取上清液，取沉淀进行纯化，可能提取不到DNA，不会导致电泳结果有多个条带，A错误；若所用的引物，也结合了其他DNA序列，说明引物设计不合理，它们与非目的序列有同源性或容易聚合形成二聚体，则电泳结果有多个条带，B正确；进行扩增时，变性温度通常为94 ℃，若设置成了72 ℃，DNA双链不会解开，最后扩增不到DNA，电泳结果不会有多个条带，C错误；配制琼脂糖溶液时，若没有加入核酸染料，会导致看不到条带，D错误。 返回 课堂小结 返回 思维导图 要语必背 1.转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.将目的基因导入植物细胞的常用方法除了花粉管通道法之外，还有农杆菌转化法等。 3.将目的基因导入动物受精卵最常用的一种方法是利用显微注射直接将目的基因注入动物的受精卵中。 返回 4.在基因工程操作中，常用原核生物作为受体细胞，其中大肠杆菌的应用最为广泛。一般先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。 5.在电场的作用下，DNA等带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程称为电泳。 课堂评价 返回 1.(2025·陕西西安高二期中)我国科学家独创的花粉管通道法，可以使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞，是一种十分简便经济的方法，对此认识正确的是 A.不必构建表达载体就可以直接导入 B.此方法可用于转基因动物 C.受体细胞只能是植物的卵细胞 D.有时可以取代农杆菌转化法 要让目的基因进入受体细胞后能稳定存在并能表达，不管采用什么导入方法，都需要构建表达载体才能实现，A错误；花粉管通道法只适用于转基因植物的培育，B错误；采用花粉管通道法时，植物受体细胞一般是受精卵，C错误。 √ 2.(2024·浙江杭州高二期中)目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定关键步骤的是 A.检测受体细胞是否有目的基因 B.检测受体细胞是否有致病基因 C.检测目的基因是否转录mRNA D.检测目的基因是否翻译蛋白质 √ 检测受体细胞中是否有目的基因是鉴定和检测的第一步，但即便受体细胞中存在目的基因，不能说明目的基因一定会稳定存在并表达，A错误；目的基因不一定是致病基因，B错误；检测目的基因是否转录出mRNA，但能否翻译成相应的所需蛋白质却不一定，所以该步不是最关键的步骤，C错误；检测目的基因是否翻译蛋白质是检测目的基因是否表达的最后步骤，如果存在该蛋白质，说明目的基因能在受体细胞内稳定存在并能表达，D正确。 3.(2025·广东阶段练习)为了增加植物铁蛋白的多样性，研究人员通过农杆菌介导将大豆铁蛋白基因转入水稻，并在水稻种子稳定表达了大豆铁蛋白基因，已知酚类化合物可以吸引农杆菌，下列有关叙述中错误的是 A.可从大豆种子细胞中获取铁蛋白基因，并利用PCR技术扩增 B.添加适量的酚类化合物，有利于大豆铁蛋白基因的成功转化 C.DNA分子杂交技术可检测水稻种子是否表达了大豆铁蛋白 D.可利用电泳法分离转基因水稻种子细胞中的大豆铁蛋白 √ 利用大豆种子细胞的DNA，根据铁蛋白基因的特定核苷酸序列设计引物，就可以通过PCR技术扩增目的基因，A正确；酚类化合物能吸引农杆菌，添加适量的酚类化合物，有利于农杆菌介导大豆铁蛋白基因的成功转化，B正确；DNA分子杂交技术用于检测目的基因是否导入受体细胞以及是否整合到受体细胞的染色体DNA上，检测水稻种子是否表达了大豆铁蛋白应用抗原—抗体杂交技术，C错误；不同蛋白质分子的大小、带电性质和带电量不同，可利用电泳法分离转基因水稻种子细胞中的大豆铁蛋白，D正确。 4.(2024·山西太原一模)人血白蛋白在临床上被广泛应用。我国科学家通过生物工程技术在水稻胚乳中提取到人血白蛋白，其流程如下图所示。下列叙述正确的是 A.PCR扩增时需要DNA模板、引物、耐高温的RNA聚合酶等条件 B.过程①需用农杆菌转化法将人血白蛋白基因直接导入水稻胚乳细胞中 C.过程①需将目的基因与胚乳中特异性表达的基因的启动子等调控元件重组 D.过程②改变生长素和细胞分裂素的用量及比例不影响细胞的脱分化过程 √ PCR扩增时需要DNA模板、引物、耐高温的DNA聚合酶、脱氧核苷酸等条件，A错误；将目的基因导入植物细胞常用的方法有农杆菌转化法、花粉管通道法等，过程①可用农杆菌转化法将含有人血白蛋白基因的基因表达载体导入水稻细胞中，通过植物组织培养获得转基因水稻，B错误；由题干信息“我国科学家通过生物工程技术在水稻胚乳中提取到人血白蛋白”可知，过程①在构建基因表达载体时，需将目的基因与胚乳中特异性表达的基因的启动子等调控元件重组，从而使目的基因在水稻的胚乳细胞中特异性表达，C正确；过程②进行植物组织培养，主要包括脱分化和再分化过程，生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素，改变它们的用量及比例对脱分化和再分化过程均有影响，D错误。 5．(多选)(2025·河北保定高二期中)下列有关电泳的叙述，正确的是 A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率 C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相同的电极移动 D．PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定 √ 由于同性相斥、异性相吸，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动，C错误。 √ √ 6.(创新情境)B基因存在于水稻基因组中，仅在体细胞和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如图实验来获取能够在卵细胞中表达B基因的转基因植株。 注：启动子是指可在水稻卵细胞中启动转录的启动子；Luc基因表达的荧 光素酶能催化荧光素产生荧光。 回答下列问题： (1)启动子是____________酶识别并结合的部位。题中的基因表达载体除了启动子外，还必须有______________________________(答出两点即可)。 RNA聚合　 目的基因、标记基因、终止子等 启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位。题干中的基因表达载体除了启动子外，还必须有目的基因、标记基因、终止子等。 (2)为筛选出导入重组质粒的农杆菌，培养基除了添加农杆菌生长繁殖必需的成分和琼脂外，还要添加__________________(答出两点即可)。 潮霉素和卡那霉素 潮霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因作为标记基因，转化成功的农杆菌因含有上述两种抗性基因，可在含有潮霉素和卡那霉素的培养基中存活，否则不存活。 (3)②过程利用了农杆菌能侵染水稻愈伤组织并且将Ti质粒上的________转移至水稻愈伤组织细胞，并整合到水稻细胞的染色体DNA上，这种方法称为_____________。除此之外，还可用____________法把目的基因导入植物受体细胞中。 T-DNA 农杆菌转化法　 花粉管通道 ②过程利用了农杆菌能感染水稻愈伤组织并且将Ti质粒上的T-DNA转移至水稻愈伤组织，并整合到水稻细胞染色体上，这种方法称为农杆菌转化法。除此之外，还可用花粉管通道法把目的基因导入植物受体细胞中。 (4)鉴定和筛选表达B基因的转基因植株的方法是______________________ ________________________。 检测加入荧光素的该植 株卵细胞中是否发出荧光 由于基因表达载体上有Luc基因，其表达的荧光素酶能催化荧光素产生荧光，所以在鉴定和筛选转基因植株时，可以检测加入荧光素的该植株卵细胞中是否发出荧光。 返回 课时测评 返回 知识点一　将目的基因导入受体细胞 1.(2025·河南洛阳高二期中)如图表示转基因动、植物的培育过程。下列有关叙述错误的是 A.受体细胞A只能是绵羊的体细胞 B.②过程中需要进行胚胎移植操作 C.可采用花粉管通道法将目的基因导入受体细胞B D.③过程中一般需要生长素和细胞分裂素 √ 培育转基因动物时，受体细胞A一般是该种动物的受精卵，A错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 2.(2025·北京高二期末)土壤农杆菌侵染植物细胞时，Ti质粒上的T-DNA片段转入植物的基因组。利用农杆菌以Ti质粒作为载体进行转基因，下列相关叙述正确的是 A.目的基因应插入T-DNA片段外，以防止破坏T-DNA B.用Ca2＋处理农杆菌，以利于其侵染植物细胞 C.Ti质粒是一种环状DNA分子，属于细菌的拟核DNA D.T-DNA片段有利于介导外源DNA整合到植物的染色体中 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 在农杆菌转化法中，需要将目的基因插入到T-DNA片段上，A错误；农杆菌侵染植物细胞的过程中不需要用Ca2＋处理农杆菌，可利用农杆菌与植物新鲜的叶片共培养等转化方法，B错误；Ti质粒是一种环状DNA分子，是存在于细菌拟核DNA之外的DNA，C错误；T-DNA片段有利于介导外源DNA整合到植物的染色体中，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 3.(2024·甘肃天水一模)科学家将抵御干旱胁迫反应中具有调控作用的AhCMO基因转入棉花细胞中，培育出了转基因抗旱棉花。下列叙述错误的是 A.将AhCMO基因导入棉花细胞可用农杆菌转化法 B.构建基因表达载体是培育转基因抗旱棉花的核心工作 C.AhCMO基因成功插入棉花细胞染色体上也未必能正常表达 D.PCR扩增AhCMO基因时需要设计两种碱基互补的引物 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 将AhCMO基因导入棉花细胞可用农杆菌转化法，因为农杆菌中的Ti质粒能将目的基因整合到受体细胞的染色体DNA上，A正确；构建基因表达载体是培育转基因抗旱棉花的核心工作，即基因表达载体的构建是基因工程的核心，B正确；AhCMO基因成功插入棉花细胞染色体上也未必能正常表达，因为基因的表达包括转录和翻译两个步骤，因此还需要对转基因棉花进行进一步的检测和鉴定，C正确；PCR扩增AhCMO基因时需要设计两种引物，这两种引物之间不能发生碱基互补配对，否则无法实现DNA体外扩增，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 知识点二　目的基因的检测与鉴定 4.(2025·江苏盐城高二期末)利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列各项中能说明目的基因在受体细胞中完成了表达的是 A.从酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白 B.山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列 C.大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA D.棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 √ 基因表达的产物是蛋白质，因此，只有在受体细胞中检测或提取到了相应蛋白质才能证明目的基因在受体细胞中完成了表达，B、D项只能说明完成了目的基因的导入，C项只能说明完成了目的基因的导入和目的基因的转录过程。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 5.(2025·山东潍坊高二期中)科学家通过改变一种名为NR2B的基因研制出了转基因超级小鼠Hobbie-J，Hobbie-J比普通老鼠更加聪明，大脑运转更加迅速，它能够轻松完成迷宫任务。下列关于Hobbie-J产生过程的描述，错误的是 A.NR2B基因可通过PCR技术进行扩增 B.改变后的NR2B基因作为目的基因，可直接注入小鼠受精卵内 C.通常采用显微注射技术将改变后的NR2B基因重组质粒导入小鼠受精卵内 D.可采用PCR等技术检测改变后的NR2B基因是否插入小鼠染色体DNA上 √ 改变后的NR2B基因作为目的基因，需要与载体拼接后才可导入小鼠受精卵内，B错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 6.(2024·湖北武汉模拟)为了获得抗蚜虫棉花新品种，研究人员将雪花莲凝集素基因(GNA)和尾穗苋凝集素基因(ACA)与载体(pBI121)结合，然后导入棉花细胞。下列叙述错误的是 A.用限制酶BsaBⅠ和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA-ACA融合基因 B.与只用KpnⅠ相比，KpnⅠ和XhoⅠ处理融合基因和载体可保证基因转录方向正确 C.在含卡那霉素的培养基上能存活的植物细胞即为成功转入目的基因的细胞 D.用PCR技术可检测GNA基因和ACA基因是否导入棉花细胞中 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 由图可知，GNA、ACA都含有限制酶BsaBⅠ的酶切位点，故用限制酶BsaBⅠ和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA-ACA融合基因，A正确；图中质粒与GNA-ACA融合基因上都含有KpnⅠ和XhoⅠ的酶切位点，与只用KpnⅠ相比，KpnⅠ和XhoⅠ处理融合基因和载体可保证基因转录方向正确，避免反向连接，B正确；在含卡那霉素的培养基上能存活的植物细胞为成功转入目的基因的细胞或含有普通质粒的细胞，C错误；PCR技术可用于基因探针的制备，可用来检测目的基因是否导入受体细胞，即用PCR技术可检测GNA基因和ACA基因是否导入棉花细胞中，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 知识点三　DNA片段的扩增及电泳鉴定 7.(2025·江苏盐城高二期中)某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带(引物与模板完全配对)外，还有2条非特异性条带(引物和模板不完全配对)。为了减少非特异性条带的产生，以下措施中有效的是 A.增加模板DNA的量 B.延长热变性的时间 C.延长延伸的时间 D.提高复性的温度 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 增加模板DNA的量可以提高反应速度，但不能有效减少非特异性条带的产生，A错误；延长热变性的时间和延长延伸的时间会影响变性延伸过程，但对于延伸中的配对影响不大，故不能有效减少产生非特异性条带，B、C错误；非特异性条带增加的原因可能是复性温度过低而造成引物与模板的错配，故可通过提高复性的温度来减少非特异性条带的产生，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 8.(2025·湖北荆州阶段练习)图甲为某 DNA分子及其中的限制酶酶切位点，图乙为用A和B两种限制酶同时或分别处理该DNA分子后，对产物电泳分离的结果。下列叙述错误的 A.图乙中产物电泳时加样孔在图乙的上端 B.图乙中②为限制酶 B切割后的电泳结果 C.图甲中的DNA 分子全长为10 000个碱基对 D.图甲 X、Y 分别为限制酶A、B的酶切位点 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 依据电泳的原理，DNA分子的大小影响电泳的迁移速率，分子越大，迁移越慢，故依据图乙中条带分布可知，产物电泳时加样孔在图乙的上端，A正确；据图乙可知，①结果显示单酶切后可以产生6 000 bp、3 500 bp、500 bp三个条带，②结果显示单酶切后可以产生8 000 bp、2 000 bp两个条带，A＋B酶切后可以产生4 500 bp(图甲中限制酶A点与X点之间的长度)、3 500 bp、1 500 bp、500 bp，因此图甲中的DNA 分子全长为10 000个碱基对，结合图甲，限制酶A可以在3 500 bp处切割，故①为限制酶A切割后的电泳结果，进而可推知，Y为限制酶A的酶切位点(产生6 000 bp、3 500 bp、500 bp三个条带)，X为限制酶B的酶切位点(产生8 000 bp、2 000 bp两个条带)，②为限制酶B切割后的电泳结果，B、C正确，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 9.(2024·江苏扬州模拟)DNA琼脂糖凝胶电泳是一种分离、纯化或分析PCR扩增后的待检DNA片段的技术。下列关于核酸片段的扩增及电泳鉴定的相关叙述，正确的是 A.mRNA也是核酸，因此可直接用PCR扩增仪扩增 B.PCR反应缓冲液中一般要添加ATP，以激活耐高温的DNA聚合酶 C.带电量相同的情况下，相对分子质量比较大的DNA片段距离加样孔越近 D.琼脂糖凝胶电泳中的缓冲液中含指示剂，其可以在紫外灯下被检测出来 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 mRNA是核酸，但不能直接用PCR扩增仪扩增，需要先逆转录为cDNA再用PCR扩增仪扩增，A错误；PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2＋，耐高温的DNA聚合酶需要Mg2＋激活，B错误；PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关，带电量相同的情况下，相对分子质量比较大的DNA片段移动距离较短，距离加样孔越近，C正确；琼脂糖凝胶电泳中的缓冲液中不含指示剂，不能在紫外灯下被检测出来，凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 10.(2024·湖南卷，改编)最早的双脱氧 测序法是PCR反应体系中，分别再加 入一种少量的双脱氧核苷三磷酸(ddATP、 ddCTP、ddGTP或ddTTP)，子链延伸时， 双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则。以加入ddATP的体系为例：若配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为原脱氧核苷三磷酸(dATP)，继续延伸；PCR产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果如图所示。下列叙述错误的是 A.上述PCR反应体系中只加入一种引物 B.电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢 C.5'-CTACCCGTGAT-3'为对照个体的一段序列 D.患者该段序列中某位点的碱基C突变为T √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 利用双脱氧测序法时，PCR反应体系中加入的模板是待测的单链DNA，故只需加入一种引物，A正确。电泳时，产物的片段越大，迁移速率越慢，B错误。依据题干信息中双脱氧测序法的原理，可以确定每个泳道中条带(DNA片段)的3'终端的碱基，如＋ddATP的泳道中出现的条带(DNA片段)的3'终端碱基就是A。另外由于每个片段的起始点相同，但终止点不同，可以通过比较片段的长度来确定DNA序列中每个位置上的碱基；图示电泳方向为从上→下， 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 即对应的DNA片段为长→短，则对应的DNA测序结果为3'端→5'端，如对照个体的电泳结果最短的条带为＋ddCTP泳道组的条带，则说明该DNA片段5'端第一个碱基为C。因此对照个体的测序结果为5'-CTACCCGTGAT-3'，患者的测序结果为5'-CTACCTGTGAT-3'，C正确。对比患者和对照个体的测序结果可知，患者该段序列中某位点的碱基C突变为T，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 11.(2024·山东德州高二期中)限制酶介导的整合技术(REMI)是一种研究基因的新方法。用限制酶酶切得到的线性质粒与该酶组成的转化混合物进入并转化细胞时，会切割受体细胞基因组，产生与线性质粒互补的黏性末端，线性质粒通过碱基配对插入基因组。如果插入发生在一个已知基因的内部，则该基因的功能可能改变或丧失，即发生了基因突变。下列叙述错误的是 A.当外源质粒带有抗性基因时，可根据其在受体细胞内的表达情况筛选出转化细胞 B.所有的限制酶都具有专一性 C.REMI使基因突变具有随机性，且限制酶识别序列越长，随机性越大 D.REMI利用了限制酶的特异性探究某基因的功能 √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 抗性基因属于标记基因，标记基因可将含有目的基因的重组质粒筛选出来，故当外源质粒带有抗性基因时，可根据其在受体细胞内的表达情况筛选转化细胞，A正确。限制酶能识别特定的核苷酸序列，并在特定位点进行切割，即所有的限制酶都具有专一性，B正确。REMI是一种切割基因的方法，其本质是基因工程，该技术可引发基因突变；由于限制酶能够识别特定序列，并在特定位点进行切割，故限制酶识别序列越长，随机性越小，C错误。利用REMI可实现已知线性质粒插入一个基因的内部，使该基因的表达改变或功能丧失，进而可用于研究该基因的功能，即REMI利用了限制酶的特异性探究某基因的功能，D正确。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 12．(多选)(2025·江苏淮安高二质检) α1-抗胰蛋白酶缺乏症是北美常见的 一种单基因遗传病，患者成年后会 出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。利用基因工程技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更容易获得这种酶。下列关于该过程的叙述中，正确的是 A．载体上绿色荧光蛋白基因(GFP基因)的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞 B．将目的基因导入羊受精卵中，可以使用显微注射法 C．培养出的转基因羊的所有细胞中都含有该目的基因，故该羊有性生殖产生的后代也都能产生α1-抗胰蛋白酶 D．转基因母羊乳腺细胞中α1-抗胰蛋白酶基因才会得以表达，因此可以从乳汁中提取α1-抗胰蛋白酶 √ √ √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 转基因羊有性生殖产生的后代发生性状分离，产生的后代可能没有目的基因，也就不能产生α1-抗胰蛋白酶，C错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 13．(多选)在基因工程操作中，科研人员利用两种限制酶(R1和R2)处理基因载体，进行琼脂糖凝胶电泳检测，结果如图所示。下列相关叙述不正确的是 A．电泳时，核酸的移动方向是从正极到负极的 B．该载体最可能为环状DNA分子 C．限制酶R1与R2的切点最长相距约600 bp D．两种限制酶在载体上识别的序列可能相同 √ √ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 根据图示可知，200 bp的DNA分子量小，800 bp的 DNA分子量较大，200 bp的DNA移动速度快，所 以在电泳时，核酸的移动方向是从负极到正极的， A错误；当仅用一种限制酶切割载体时，仅产生一 种长度的DNA片段，因此该载体最有可能为环状 DNA分子，B正确；两种限制酶同时切割时产生600 bp和200 bp两种长度的DNA片段，所以两种限制酶的切点最长相距约600 bp，C正确；当仅用一种限制酶切割载体时，两种限制酶切割产生的DNA片段等长，而两种限制酶同时切割时则产生两种不同长度的DNA片段，所以两种限制酶在载体上各有一个酶切位点，二者识别的序列不相同，D错误。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 14.(10分)(2024·河南信阳二模)In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列，通常为15～20 bp)，然后用In-Fusion酶(能识别双链线性化DNA片段5'端→3'端末端16个碱基，并使其降解)处理即可实现无缝连接。与传统构建重组质粒的方法相 比，In-Fusion技术的优势之一是不受限制酶酶切位点的限制；可以把目的基因插入任何位点；避免限制酶切割对质粒功能区的破坏。它的操作步骤(如图)大致为：①利用PCR技术将质粒线性化；②PCR扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的基因；③目的基因与线性化质粒同源区域在In-Fusion酶作用下形成重组质粒；④将重组质粒导入受体细胞。回答下列问题： 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (1)过程①需要用到的酶是____________________________________，质粒线性化前后所含有的游离磷酸基团的个数分别为______个。 Taq DNA聚合酶(耐高温的DNA聚合酶) 0、2 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 过程①是利用两种引物进行的质粒线性化过程，该过程属于PCR技术的应用，故需要Taq DNA聚合酶(耐高温的DNA聚合酶)；环状质粒无游离磷酸基团，一条DNA链含有一个游离的磷酸基团；线性化DNA是双链，则含有2个游离的磷酸基团，故质粒线性化前后所含有的游离磷酸基团的个数分别0和2。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 过程③是基因表达载体的构建过程，该过程中，同源序列1、2中的碱基排序不同，这样设计的好处是防止目的基因反向连接，防止线性化质粒或目的基因的自身环化，以保证目的基因能够正确连接并表达。 (2)过程③中，同源序列1、2中的碱基序列不同，这样设计的好处是_____ ____________________________________________________。 防止 目的基因反向连接，防止线性化质粒或目的基因自身环化 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (3)过程④中，用______处理大肠杆菌，以便重组质粒导入受体细胞。重组质粒利用大肠杆菌细胞中的DNA聚合酶和__________酶，实现完全环化。 Ca2＋ DNA连接 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 Ca2＋处理下，细菌能吸收周围环境中DNA，常使用Ca2＋制备感受态细胞，进而转入外源DNA，故过程④中，用Ca2＋处理大肠杆菌，以便重组质粒导入受体细胞。DNA连接酶能将DNA片段连接成一个重组DNA分子，故重组质粒利用大肠杆菌细胞中的DNA聚合酶和DNA连接酶，实现完全环化。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (4)通过检测大肠杆菌的致死率可反映其转化后的抗性效果。在含_______ ______的液体培养基中培养一段时间，然后分别用显微镜计数法和稀释涂布平板法进行计数，计数结果分别是M、N，则致死率可用_____________ ×100％表示，此结果较真实值偏大，原因是后一种计数时_____________ ____________________________________________。 氨苄青 霉素 (M－N)/M　 当两个或多个 细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 结合题图，标记基因为氨苄青霉素抗性基因， 故在含氨苄青霉素的液体培养基中培养一段时 间，然后分别用显微镜计数法(死菌和活菌均被 计数)和稀释涂布平板法(用于活菌计数)进行计 数。故若计数结果分别是M、N，致死率可用 (M－N)/M×100％表示，由于在用稀释涂布平 板法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，会导致N偏小，进而导致此结果较真实值偏大。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 15.(14分)(2024·北京昌平高三期末)病毒侵染植物时，植物识别外源的核酸并启动一系列的调控机制来降解病毒的RNA。研究人员改造病毒载体，使其携带目的基因的cDNA后侵染植物，最终特异性降解目的基因的mRNA，即病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)，RNA病毒TSWV能侵染辣椒，科研人员推测用VIGS技术沉默TSWV的N基因可使辣椒抵抗TSWV，进行如下实验。 (1)用改造的病毒TRV作为载体，与TSWV的N基因连接，构建重组载体TRV-N(如下图)，通过农杆菌转化法导入辣椒细胞。请完善制备TRV-N的技术路线：获取N基因的mRNA→_________→PCR→________→连接成TRV-N。 cDNA N基因 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 制备TRV-N的技术路线：获取N基因的mRNA→cDNA→PCR→N基因→连接成TRV-N。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (2)C基因是类胡萝卜素合成关键酶的基因，当类胡萝卜素合成途径被阻断，植物出现白化现象。用上述方法构建重组载体TRV-C并导入辣椒细胞，作为构建沉默体系的对照。若辣椒出现白化表型，说明____________ _______________________________________。 重组载体TR V-C侵染成功，类胡萝卜素合成途径被阻断　 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 C基因是类胡萝卜素合成关键酶的基因，当类胡萝卜素合成途径被阻断，植物出现白化现象，构建重组载体TRV-C并导入辣椒细胞，若重组载体TRV-C侵染成功，类胡萝卜素合成途径被阻断，则辣椒出现白化 表型。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 (3)TSWV侵染辣椒植株会使其叶片出现明显的褪绿、黄化斑等症状，以易感TSWV的辣椒作为实验材料，实验分组及处理如下表。 注：＋代表添加，—代表不添加。 ①表中“？”的处理为__________。 组别 实验处理 第1组 第2组 第3组 导入TRV-C ＋ — — 导入TRV-N — — ＋ ？ — ＋ — 不做处理 表中“？”的处理为不做处理，作为空白对照。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 ②为使实验结果更准确，除设置空白对照组外，还应该增加第4组，其实验处理为__________。 组别 实验处理 第1组 第2组 第3组 导入TRV-C ＋ — — 导入TRV-N — — ＋ ？ — ＋ — 导入TSWV 为使实验结果更准确，除设置空白对照组外，还应该增加第4组，其实验处理为导入TSWV。 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 ③观察各组辣椒叶片状态和颜色，若结果为______________________________ _______________________，则说明沉默TSWV的N基因可使辣椒抵抗TSWV。 组别 实验处理 第1组 第2组 第3组 导入TRV-C ＋ — — 导入TRV-N — — ＋ ？ — ＋ — 第1组白化，第2组正常，第3组正 常，第4组褪绿、黄化斑 观察各组辣椒叶片状态和颜色，若结果为第1组白化，第2组正常，第3组正常，第4组褪绿、黄化斑，则说明沉默TSWV的N基因可使辣椒抵抗TSWV。 返回 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 谢 谢 观 看 第3章 基因工程 $