第3章 第2节 第1课时 目的基因的筛选与获取和基因表达载体的构建-【成才之路·学案】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程同步新课程学习指导(人教版)

(3)析出并获得DNA DNA不溶于酒精 (4)白二苯胺沸水浴冷却蓝色 (5)猪是哺乳动物，哺乳动物血液中成熟的红细胞没有细胞核 【解析】(1)题述图示中，该实验的正确操作顺序是③→② →①→④⑤。(2)DNA在不同浓度的Nad溶液中溶解度 不同，DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液。(3)步骤①的目的 是利用DNA不溶于酒精的性质，除去细胞中溶于酒精的物 质，提取DNA。(4)提取的DNA为白色丝状物，鉴定DNA用 二苯胺试剂，沸水浴加热5min,冷却后溶液呈蓝色。(5)猪是 哺乳动物，哺乳动物血液中的成熟红细胞没有细胞核和众多 的细胞器，因此用猪血代替鸡血来进行该实验难以取得成功。 第2节基因工程的基本操作程序 第1课时目的基因的筛选与获取和 基因表达载体的构建 必备知识自主梳理 一、1.(1)筛选与获取(2)基因表达载体(3)受体细胞 (4)检测与鉴定 2.(1)①受体细胞性状预期表达产物②Bt抗虫蛋白基 因(2)①已知结构功能清晰②序列信息Bt抗虫蛋 白③测序序列序列比对(3)①DNA半保留复制 ②解旋酶模板DNA聚合酶3'③变性90℃单链 复性50℃碱基互补配对延伸72℃DNA聚合 酶4种脱氧核苷酸3'④PCR扩增仪(PCR仪) 微思考 提示：真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg+激活。 二、1.(1)受体细胞(2)表达 教材隐性知识 直接分解细胞分裂不含有目的基因借助载体将其导入 棉花细胞 2.启动子上游RNA聚合酶终止子下游转录 标记 微思考 提示：启动子位于DNA分子上，启动的是转录过程；起始密码 子位于mRNA分子上，是翻译过程的起始位置。 3.(1)限制酶(2)同种(3)DNA连接酶 自我检测 1.×用PCR仪对DNA分子扩增常用耐高温的DNA聚合酶。 2.×PCR反应中温度的周期性改变是为了让DNA分子解聚 引物与DNA单链结合和子链延伸。 3./ 4.×PCR反应中DNA分子完全解旋之后再进行复制。 5.V 6.×基因表达载体中含有启动子和终止子。 7.×启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位。 8.V 合作探究能力提升 任务一 合作探究 1.提示：不是；PCR扩增的仅仅是两种引物之间所对应的特定 DNA片段。 2.提示：根据目的基因两端的核苷酸序列设计引物。 3.提示：3轮：1/4。 21 4.提示：第1组：引物I和引物Ⅱ会因局部发生碱基互补配对而 失效。第2组：引物I'自身折叠后会因出现局部碱基互补配 对而失效。 5.提示：要在两种引物的5'端分别添加上限制酶的识别序列。 6.提示：共需消耗2”-1对引物。 7.提示：DNA聚合酶不能从头合成子链，只能把游离的脱氧核 苷酸连接到已经存在的片段上。加入引物，能够使DNA聚合 酶从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。DNA链复制的方向 总是从子链的5'端向3'端延伸 典例剖析 例：D由题图可知，以原来的每条母链为模板经第一轮合成的 两个DNA分子中，只含有引物A或引物B,而以新合成的子 链为模板合成新DNA分子时，两种引物都含有，故第三轮循 环共产生8个DNA分子，其中含有引物A的分子是7个，即 占7/8，D错误。 变式训练 1.A目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有 调控作用的因子，A错误。 任务二 合作探究 1.提示：启动子下游和终止子上游；因为只有插入在启动子和终 止子之间，目的基因才可以正常表达。 2.提示：不能；因为SaI会破坏质粒的抗生素抗性基因。该基 因是标记基因，便于重组DNA分子的筛选，若被破坏，无法进 一步筛选。 3.提示：可以防止质粒和目的基因的自身环化以及目的基因与 载体的反向连接。 典例剖析 例：D切割外源DNA分子上的目的基因时，用BamH I切割会 破坏目的基因，只用PtI切割目的基因和质粒载体，会出现 目的基因和质粒的自身环化，或目的基因和质粒的反向连 接，而用PstI和HindⅢ进行酶切，能确保目的基因和质粒的 正向连接，并且质粒上可保留新霉素抗性基因作为标记基 因，A、C正确：在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基 因，至少需要保留其中的一个，B正确：用PstI切割后，质粒 上的氨苄青霉素抗性基因被破坏了，导人重组质粒的大肠杆 菌不可以在含氨苄青霉素的培养基中生长，D错误。 变式训练 2.B启动子位于基因的上游，它是RNA聚合酶识别和结合的 位点，组成它的基本单位是脱氧核苷酸，A正确；基因表达载 体的组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等组件，B 错误；人工构建的诱导型启动子，当诱导物存在时，可激活或 抑制目的基因的表达，C正确：由于受体细胞有植物、动物以 及微生物之分，且目的基因导入受体细胞的方法不同.因此基 因表达载体的构建是不完全相同的，D正确。 课堂达标巩固训练 1.A构建重组质粒时，要将目的基因插人启动子和终止子之 间，而且不能破坏启动子、终止子、复制原点、抗生素抗性基因 等部位，故只能选用NdeI和BamH I切割质粒和含目的基因 的DNA片段，因此在PCR扩增的该基因两端需分别引入 NdeI和BamH I两种限制酶的识别序列。 29 2.B该图表示PCR循环中的复性环节，A错误：引物的长度 引物中碱基的比例以及反应体系中引物的浓度都与扩增产物 的特异性相关，B正确：脱氧核苷酸作为扩增的原料会依次连 接到3'端，C错误：用图中引物扩增至少三个循环后可获得目 的产物，D错误。 3.(1)④②③① (2)耐高温的DNA聚合酶延伸引物通过碱基互补配对与 单链DNA结合 (3)病原菌DNA (4)在生物体外大量快速扩增特定DNA片段的技术 【解析】(1)为了检测病人是否感染了某种病原菌，首先应 采集病人组织样本，然后从病人组织样本中提取DNA,利用 PCR扩增DNA片段后，再分析PCR扩增结果，所以正确的操 作顺序是④②③①。(2)PCR技术中用到的酶是耐高温的 DNA聚合酶，PCR反应中的每次循环可分为变性、复性和延 伸三步。复性是温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互 补配对与两条单链DNA结合。(3)PCR反应所用引物要根据 需要扩增的目标DNA的碱基序列来设计，要检测是否感染病 原菌，应根据该病原菌的DNA碱基序列合成引物，这样PCR 反应所用的引物会与该种病原菌的DNA特异性结合。 (4)PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合 成技术，通过这一技术，可以在短时间内大量扩增目的基因。 第2课时将目的基因导入受体细胞和 目的基因的检测与鉴定 必备知识自主梳理 一、1.维持稳定表达 2.(1)①子房花粉管通道胚囊②双子叶裸子 T-DNA染色体DNA Ti质粒的T-DNA(2)①显微注射 ②受精卵(3)①Ca2+ 二、1.(1)①PCR②抗原一抗体 微思考 1.提示：通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫，观察棉铃虫的生活 情况。 2.提示：仅一条染色体含有抗性基因，另一条没有其等位基因。 2.目的基因限制酶DNA连接酶基因表达载体表达 载体检测和鉴定 三、1.(1)DNA的热变性温度解聚与结合(2)①可解离 正电荷负电荷②电场相反③浓度大小构象 ④紫外 2.(1)微量移液器微量离心管离心机反应液(2)琼 脂糖核酸染料加样孔电泳缓冲加样孔内指示分 子大小的标准参照物指示剂紫外灯 自我检测 1.×也可以以体细胞为受体细胞。 2.V3.V 4.×抗虫效果的鉴定要在个体生物学水平上做抗虫接种实验 来鉴定。 5.V 6.×应放在冰块上缓慢融化。 7.×在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子 的大小和构象等有关。 8.×应进行高压灭菌，属于湿热灭菌，枪头是塑料的，干热灭 菌会损坏 2 合作探究能力提升 任务一 合作探究 1.提示：限制酶、DNA连接酶。 2.提示：原因是农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA(可转移的 DNA)可转移到被侵染的细胞，并且整合到该细胞的染色体 DNA上 3.提示：基因表达载体（重组质粒）导入农杆菌细胞时，要用 Ca+处理农杆菌细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态，利于重组质粒的导入。 4.提示：①对于植物来说，受体细胞可以是受精卵或体细胞，因 为植物细胞具有且容易表现全能性。②对于动物来说，受体 细胞一般是受精卵，因为受精卵表现全能性相对容易，而高度 分化的动物体细胞的全能性不易表现。③大肠杆菌和酵母菌 在基因工程中都可以作为受体细胞，但又有所不同。大肠杆 菌为原核细胞，而酵母菌为真核细胞（具有多种细胞器），所 以酵母菌在用于生产需要加工和分泌的蛋白质时比大肠杆菌 有优势。 典例剖析 例：AT-DNA可将T-DNA之间的DNA序列转移并整合至 受体细胞的染色体DNA上，使目的基因能够稳定遗传，故 T-DNA插人外源基因后不会失去作用，A错误；用C处 理农杆菌，使农杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子 的生理状态，利于农杆菌吸收目的基因完成转化过程，故图 中②过程（将载体导入农杆菌）需要在无菌环境下用Ca2+处 理农杆菌，B正确；为从个体生物学水平上检测图中植株是 否具有抗除草剂性状，可采用的方法是用相应除草剂喷洒待 测植株，C正确：筛选含重组质粒的农杆菌时用的是固体培 养基，扩大培养时应该用液体培养基，故该过程需要用到固 体和液体培养基，D正确。 变式训练 1.D可利用花粉管通道法培育转基因植物，A正确；用Ca2+处 理大肠杆菌，使之处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生 理状态，B正确；对于动物来说，受体细胞一般是受精卵，因为 受精卵的全能性易于表现，C正确；将目的基因转入动物细胞 常用显微注射法，将目的基因转入微生物细胞常用C2+处理 法，D错误。 任务二 合作探究 1.提示：属于个体生物学水平的鉴定。 2.提示：PCR技术。 3.提示：用PCR技术检测目的基因是否转录出mRNA:用抗原 抗体杂交技术检测目的基因是否翻译出相应蛋白质。 4.提示：用导入抗虫基因的棉花叶片饲养棉铃虫，观察棉铃虫是 否死亡。 5.提示：如果目的基因是耐盐基因，则要用一定浓度的盐水浇 灌，观察植物的抗盐情况。 典例剖析 例：A检测目的基因是否成功导入或表达的方法有多种。① 分子水平上的检测：通过PCR等技术检测转基因生物的染 色体DNA上是否插入了目的基因或检测目的基因是否转录 出了mRNA:检测目的基因是否翻译成蛋白质用抗原一抗体 杂交技术。②个体生物学水平的鉴定：检测是否具有抗性及 30104 第己节基因工程的基本操作程序 第1课时 目的基因的筛选与获取和基因表达载体的构建 课标要求 学科核心素养 1.生命观念：运用结构与功能观等观念，理解PCR技术 闻明基因工程的基本操作程序主要 的过程、原理、条件等内容。 包括目的基因的筛选与获取、基因表达 2.科学思维：运用文字与图示的方式，说明基因工程的 载体的构建、将目的基因导入受体细胞 基本操作程序。 和目的基因及其表达产物的检测鉴定等 3.科学探究：基于DNA片段的扩增及电泳鉴定，尝试 步骤。 进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。 必备知识自主梳理 ●目的基因的筛选与获取 1.培育转基因抗虫棉的四个步骤 (1)目的基因的 (2) 的构建。 (3)将目的基因导入 (4)目的基因的 2.目的基因的筛选与获取（第一步】 (1)目的基因 ①概念：用于改变 或获得 等的基因。 ②实例：培育转基因抗虫棉用到的目的基因是 (2)筛选合适的目的基因 ①较为有效的方法：从相关的 和 的基因中进行筛选。 ②实例：在培育转基因抗虫棉之前，科学家不仅掌握了B基因的 ,也对B基因的 表达产物 有了较为深入的了解。 ③认识基因结构和功能的技术方法： 技术、 数据库、 工具等。 (3)利用PCR获取和扩增目的基因 ①原理： 0 ②DNA复制所需的基本条件 参与的组分 在DNA复制中的作用 (体外用高温代替)》 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的 105 4种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料 催化合成DNA子链 引物 使DNA聚合酶能够从引物的 端开始连接脱氧核苷酸 ③过程 基于PCR的过程，请回答下列问题： 5 T 3 s'mmmr3 5! 3'L5' 待扩增的DNA片段 n 5 3' 5'Tumm 3 5 31 5 a.过程I为 ,该阶段的温度为 以上，目的是使双链DNA解聚为 b.过程Ⅱ为 该阶段的温度为 左右，两种引物通过 与两 条单链DNA结合。 c.过程Ⅲ为 该阶段的温度为 左右，该过程需要在耐高温的 的作用下，利用 为原料，根据碱基互补配对原则从子链引物的 端 延伸合成新的DNA链。 ④仪器： ⑤鉴定方法：琼脂糖凝胶电泳。 )微思考 PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2+,原因是什么？ 白基因表达载体的构建 1.基因表达载体的构建目的 （1)使基因在 中稳定存在，并且遗传给下一代。 (2)使目的基因能够 和发挥作用。 106 了教材隐性知识 (选择性必修3Pso“小思考”)获取B基因后不能直接将它导入受体细胞，是因为游离的DNA 进入受体细胞，一般会 即使可以转录、翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着 而进行复制，导致子代细胞中 。 因此，获取B基因后，还需要 ,才能使棉花植株获得抗虫特性。 2.基因表达载体的组成 -目的基因 「位置：位于基因的 功能：是 识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA 复制原点 「位置：位于基因的 功能：终止 基因：便于重组DNA分子的筛选 〉微思考 启动子和起始密码子有什么不同？ 3.基因表达载体的构建过程 (1)首先用一定的 切割载体。 (2)然后用 限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。 (3)再利用 将目的基因片段拼接到载体的切口处（如图所示）。 质粒 外源DNA 限制酶 DNA连接酶→ 两个切口，获取目的基因 一个切口，两个黏性末端( 基因表达载体 》自我检测 1.用PCR仪对DNA分子扩增常用耐高温的DNA连接酶。 ( 2.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应。 3.PCR技术中，DNA模板链上碱基G和C的比例越高，DNA变性解链的温度就越高。 4.PCR反应中DNA分子边解旋边复制。 ( 5.基因表达载体的构建是基因工程操作程序的核心工作。 ( 6.基因表达载体中有的含有启动子和终止密码子。 ( 7.基因表达载体中启动子是DNA聚合酶识别和结合的部位。 ( 8.标记基因不一定是抗生素抗性基因。 ●107 合作探究能力提升 任务一：分析PCR扩增技术的原理和过程 ●情境解读 图形情境：图1、图2分别是PCR反应相关过程，请思考回答下列问题： 变性 第一轮循环 复性 〔引物I 引物B 引物歌 第1组引物 CAGGAT im- 引物Ⅱ 延伸 ATCCTG 〔引物I′ 'IL。 第2组引物 AACTG CAGTT TmmmmmL, 引物 )变性 CGACT GATTA 图1 图2 ●合作探究 1.PCR扩增的是完整的模板DNA分子吗？并说明理由。 2.如果已知某目的基因的序列和结构，利用PCR筛选和扩增出该目的基因的关键是什么？ 3.图1所示利用PC技术扩增目的基因，在第几轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的 DNA片段？比例是多少？ 4.图2是某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列），两组引物都不合理，请分别说明理由。 108 5.要保证目的基因能与载体相连接，还要对引物进行什么操作？ 6.如果循环n次，则共需消耗多少对引物？ 7.PCR过程中为什么需要引物？DNA链复制的方向是怎样的？ 碱斟 碱基 我品 -08 OH 威翅碱翅碱塞威塞碱到 0 3端 复制方向 ●典例剖析 例 如图表示利用PCR技术扩增目的基因的部分过程，其原理与细胞内DNA复制类似。下列有 关叙述错误的是 () mm 变性 第一轮 复性 循环 引物B T 引物A 几延伸 "TT。 Sm 变性 A.耐高温的DNA聚合酶总将游离的脱氧核苷酸连接到3'端 B.在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段 C.引物之间或引物自身发生碱基互补配对，则不能有效扩增目的基因 D.从理论上推测，第三轮循环产物中含有引物A的DNA片段占3/4 109 〉变式训练 1.下列有关获取目的基因的叙述，错误的是 A.目的基因就是编码蛋白质的基因 B.获取目的基因是基因工程的第一步 C.来自苏云金杆菌的B抗虫蛋白基因可作为转基因抗虫棉的目的基因 D.序列比对工具的应用为科学家找到合适的目的基因提供了更多的机会 ●归纳提升 1.PCR扩增的过程（如图） 模板DNA引物1引物2 □---- 明赋时变性 变性 继续循环 (超过90℃时） 目的基因DNA受热变性后解聚为单链 72℃左右↑延伸 50℃左右村复性 复性 两种引物通过碱基互补配对与两条单 循 (50℃左右) 链DNA结合 50℃左右↑复性 以单链DNA为模板，在时高温的DNA 72℃左右延伸 延伸 第二轮循环 (72℃左右) 聚合酶作用下进行延伸，即将4种脱 氧核苷酸加到引物的3'端 超过90℃时变性 2.PCR扩增的计算：理论上DNA数目呈指数扩增。 (1)若开始只有一个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目为2个。 (2)若开始有N。个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目为N。·2”个。 3.生物体内DNA复制和PCR扩增的比较 项目 DNA复制 PCR 解旋方式 解旋酶催化 DNA在高温作用下变性解旋 场所 细胞内（主要在细胞核内） 细胞外（主要在PCR仪内）》 酶 解旋酶、普通的DNA聚合酶 耐高温的DNA聚合酶 温度条件 细胞内温和条件 需控制温度，在较高温度下进行 结果 DNA分子 DNA片段或目的基因 ①模板：均需要DNA的两条单链作为模板 相同点 ②原料：均为4种脱氧核苷酸 ③酶：均需DNA聚合酶 任务二：分析基因表达载体构建的目的和方法 ●情境解读 图形情境：目的基因导入受体细胞之前，需构建基因表达载体，图甲、乙分别表示质粒及目的基因 所在DNA片段，图中箭头表示相关限制酶的切割位，点。 抗生素 BamH I 抗性基因 HindⅢ EcoR I目的基因EcoR I Sma I 质粒 -EcoR I 一外源 本， BamH I Hind M DNA 甲 乙 110 ●合作探究 1.构建基因表达载体时目的基因插入的位置应该在哪里？为什么？ 2.构建基因表达载体时，能否用SmaI酶切割质粒？为什么？ 3.与只使用EcoR I相比较，使用BamH I和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点是 什么？ ●典例剖析 例 图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，Amp表示氨苄青霉素抗性基因，no 表示新霉素抗性基因。下列叙述不正确的是 () Bam HI Hind ll Hind lll Pst 目的基因 三外源 eo Pst I CAmp R Bam HI PSI DNA A.在构建重组质粒时，可用PsI和HindⅢ切割质粒和外源DNA B.在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因 C.若只用PstI处理质粒和外源DNA分子片段，无法避免自身环化和反向连接 D.导入重组质粒的大肠杆菌可以在含氨苄青霉素的培养基中生长 〉变式训练 2.下列关于基因表达载体的构建的叙述，错误的是 A.启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，组成它的基本单位是脱氧核苷酸 B.基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止密码子、标记基因等组件 C.人工构建的诱导型启动子，当诱导物存在时，可激活或抑制目的基因的表达 D.由于受体细胞不同，基因表达载体的构建也有所差别 111 ●归纳提升 1.区分启动子和终止子与起始密码子和终止密码子 启动子和终止子位于DNA上，是基因表达载体必需的部分，而起始密码子和终止密码子位于 mRNA上，决定翻译的开始和结束。 2.图解限制酶的选择原则 标记基因 PstI Pst I Sma I Pst I EcoR I SnaI目的基因EdoR1 Sma 甲 (1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstI,而不能选择SaI。 (2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图 乙中不能选择SmaI。 (3)确保出现相同黏性末端原则：通常选择与切割目的基因相同的限制酶切割质粒，如图中 PsI;为避免目的基因和质粒自身环化和反向连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和 质粒，如图也可选择PstI和EcoR I两种限制酶。 ●知识拓展 原、真核细胞基因的结构和表达 （1)基因的结构 非编码区 编码区 非编码区 原核生 物基因 RNA聚合酶 结合位点 启动子 终止子 真核生 物基因 外显子 内含子 (2)基因表达遗传信息 ①原核生物基因 编码区 鉴子 转录」 mRNA<3 翻译， 出一一一一一一终止密码子 多肽链H,NO00000O00OOC00H ②真核生物基因 非编 编码区 非编 合陵 转录 前体mRNA5 3 加工 成熟mRNA 5U西U3' 口外显子 翻译 终止密码子 口内含子 多肽链 0-o-C00H 12 课堂达标 巩固训练 1.如图所示为某质粒限制酶酶切图谱。某基因 C.脱氧核苷酸作为扩增的原料会依次连接到 不含图中限制酶识别序列，为使PCR扩增的 5'端 该基因与该质粒构建重组质粒，则扩增的该基 D.用图中引物扩增两个循环后可获得目的 因两端需分别引入哪两种限制酶的识别序列 产物 )3.PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测 Xho I 病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关 HindⅢ Nde I 操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样 抗生素启动子 -Xba I Pst I- 抗性基因 BamH I 本中提取DNA;③利用PCR扩增DNA片段； 终止子 复制原点 EcoR I ④采集病人组织样本。请回答下列问题： (1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺 Kpn I Xba I 序应该是 (用数字序号表 注：图中不同限制酶的识别序列及切割形成的 示)。 黏性末端均不相同。 (2)操作③中使用的酶是 A.NdeI和BamH I B.NdeI和XbaI ,PCR反应中的每次循环可 C.XbaI和BamH I D.EcoR I和KpnI 分为变性、复性、 三步，其中 2.PCR引物的3'端为结合模板DNA的关键碱 基，5'端无严格限制，可用于添加限制酶切点 复性的结果是 等序列。下列叙述正确的是 5' 3′5 (3)为了作出正确的诊断，PCR反应所用的引 uwwwwwwww 物应该能与 特异性结合。 A.该图表示PCR循环中的变性环节 (4)PCR(聚合酶链式反应)技术是指 B.引物的长度、引物中碱基的比例以及反应 该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等 体系中引物的浓度都与扩增产物的特异性 方面。 相关 课时小结 筛选合适的目的基因 目的基因的筛选与获取 利用PCR获取和扩增目的基因 组成：启动子、目的基因、终止子、标记基因等 基因表达载体的构建 构建：限制酶切、DNA连接酶连接 夯基提能作业 请同学们认真完成练案[13]