第3章 第2节 第2课时 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定-【成才之路·练案】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程同步新课程学习指导(人教版)

练案[14]第3章第2节[第2课时 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定] 学业考达标练 C.受体细胞只能是植物的卵细胞 一、选择题 D.有时可以取代农杆菌转化法 1.下列关于目的基因导入受体细胞的描述，不正5.农杆菌侵染植物细胞时，Ti质粒上的T-DNA 确的是 片段转入植物的基因组。利用农杆菌以T质 A.培育转基因水稻可用花粉管通道法导入目 粒作为载体进行转基因，下列相关叙述正确的 的基因 是 () B.显微注射法是转基因动物中采用最多的 A.目的基因应插入T-DNA片段外，以防止 方法 破坏T-DNA C.目的基因导入大肠杆菌最常用的方法是 B.用Ca2+处理农杆菌，以利于其侵染植物 Ca2+处理法 细胞 D.农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞 C.Ti质粒是一种环状DNA分子，属于细菌的 最常用的方法 拟核DNA 2.转基因抗虫棉培育过程中，下列有关目的基因 D.T-DNA片段有利于介导外源DNA整合到 检测与鉴定方法的叙述，错误的是 ( 植物的染色体DNA上 A.检测抗虫基因是否导入—一农杆菌转化法 6.下列用于判断目的基因是否转移成功的方法， B.检测抗虫基因是否转录—PCR技术 不属于分子水平的检测的是 () C.检测抗虫基因是否翻译—抗原一抗体 A.通过观察害虫吃棉叶是否死亡 杂交 B.通过PCR检测棉花的染色体DNA上是否 D.检测抗虫蛋白生物功能—抗虫接种实验 插入抗虫基因 3.使用PCR仪的正确实验操作顺序应为( C.检测转基因生物中是否转录出相应的 ①设置好PCR仪的循环程序②按配方准备 mRNA 好各组分③用微量移液器在微量离心管中 D.从转基因生物中提取蛋白质利用抗原一抗 依次加入各组分④进行PCR反应 ⑤离心 体杂交检测目的基因是否翻译成功 使反应液集中在离心管的底部 A.②⑤③④① B.①⑤3②④ 7.下列关于DNA片段的扩增(PCR技术)及电 C.②③⑤①④ D.④②⑤③① 泳鉴定步骤的说法，错误的是 ( 4.我国科学家独创的花粉管通道法，可以使目的 A.凝胶制备中加入的核酸染料能与DNA分子 基因借助花粉管通道进入受体细胞，是一种十 结合，用于分离后DNA片段的检测 分简便经济的方法，对此认识正确的是 B.PCR既可以获取目的基因也可以扩增目的 ( 基因 A.不必构建表达载体就可以直接导入 C.双链DNA分子片段长度越大，在琼脂糖中 B.此方法可用于转基因动物 的移动速率就越大 197 D.为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验 (5)目的基因导入受体细胞后，常用 中使用的微量离心管、枪头、蒸馏水等在使 技术检测目的基因是否翻译出 用前必须进行高压灭菌处理 乙肝病毒外壳。 二、非选择题 选择考提升练 8.如图为“乙肝基因工程疫苗”生产过程图解， 质粒上箭头所指部位为相应的限制酶的切割 、选择题 位点。质粒中lacZ基因编码产生的酶可以分1.如图为转基因抗虫烟草的培育流程，下列叙述 解培养基中的X-gl,产生蓝色物质，使菌落 正确的是 呈现蓝色，否则菌落为白色。请回答下列 苏云 问题： 金杆菌抗虫基因 派非 EcoR I EcoR V 四环素抗性基因》 ① EcoR V BamH I T质粒】 青霉素 草 抗性基 lacZ基因 青霉素抗性基因 细胞 抗虫烟草 重组②导人太③乙肝病 BamHI BamHI ①质粒肠杆演 毒外壳 A.培育过程①需要使用纤维素酶和果胶酶 目的基因 B.培育过程②将重组T质粒导入烟草细胞前 EcoRV EcoRI 需要使用CaCO,处理农杆菌 (1)过程①选用限制酶的最佳方案是 C.培育过程③④仅通过调节植物激素可诱导 A.EcoR V和EcoR I 愈伤组织再生出新植株 B.BamH I和EcoR I C.EcoR V和BamH I D.可通过观察害虫吞食转基因烟草后的存活 D.只有BamH I 情况进行个体生物学水平检测 (2)构建基因表达载体时，一般将目的基因插2.农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机 在启动子和终止子之间。启动子的作用 插入被侵染植物的染色体DNA上。研究者将 是 图示中被侵染植物的DNA片段连接成环，并 以此环为模板进行PCR,扩增出T-DNA插入 (3)过程②需要先将大肠杆菌用 处 位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插 理，目的是使大肠杆菌处于一种 入的具体位置。下列说法不正确的是( 的生理状态。 (4)为了筛选含目的基因表达载体的大肠杆 未知序列引物① T-DNA引物② 未知序列 公 菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中额 3' -51 限制酶切点引物③ 引物④ 限制酶切点 外加入 和 ,培养一段时 间后挑选出 (填“蓝色”或“白 注：子链从引物的3'端开始延伸。 色”)的菌落进一步培养，从而获得大量目 A.PCR扩增利用的是DNA热变性的原理 的菌。 B.进行PCR扩增需要耐高温的DNA聚合酶 198 C.利用图中的引物②、③组合可扩增出两侧 化水稻，在水稻叶绿体内构建了一条新代谢途 的未知序列 径，提高了水稻的产量。下列叙述正确的是 D.通过与受体细胞的基因组序列比对，可确 定T-DNA的插入位置 幅素抗性基因→☑C4☑引一D,6O☑-→☑E6oL*函卡卷素抗性基国 -T-DNA- 3.下列有关电泳的叙述，不正确的是 注：→启动子终止子☑叶绿体转运肽 A.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁 A.图中表达载体中的T-DNA插入外源基因 移的过程 后将失去作用 B.待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶 B.DNA的两条单链都可作为转录的模板链 的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速 C.应选用含卡那霉素的培养基筛选被农杆菌 率 转化的水稻细胞 C.进行电泳时，带电分子会向着与其所带电 D.四种基因都在水稻叶绿体内进行转录、 荷相同的电极移动 翻译 D.PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来6.在基因工程操作中，科研人员利用两种限制酶 鉴定 (R,和R2)处理基因载体，进行琼脂糖凝胶电 4.如图表示应用基因工程技术生产干扰素的三 泳检测，结果如图所示。下列相关叙述不正确 条途径，下列相关叙述错误的是 的是 () 干扰素 ,受体细胞A→转基因牛一→乳汁中途径甲 Marker R R2 R1+R2 基因 提取 质粒 →受体细胞B→莴吉 转基因 、体细胞 负极bp 中提取 途径乙 1000 受体细胞C→转基因 培养液途径丙 →中提取 600 大肠杆菌 400 200 过程I 过程Ⅱ 过程Ⅲ ⊕ 正极 A.途径甲中，受体细胞A一般选取受精卵 缓冲液 B.途径乙中，过程Ⅱ一般所采用的方法是农 A.电泳时，核酸的移动方向是从负极到正 杆菌转化法 极的 C.途径丙中，过程Ⅱ可用Ca2+处理大肠杆菌 B.该载体最可能为环状DNA分子 D.三条途径中，由于使用的目的基因相同，表 C.限制酶R,与R2的切点最长相距约600bp 达出的干扰素结构也完全相同 D.两种限制酶在载体上识别的序列可能相同 5.OSGLOL、EeCAT、EeGCL和TSR四个基因分别7.科学家从某植物中提取乙烯受体基因(Esl), 编码四种不同的酶，研究人员将这些基因分别： 通过基因工程技术将Ers1基因反向连接到质 与叶绿体转运肽（引导合成的蛋白质进入叶绿 粒中，筛选出转入反义Es1基因的植株，其果 体)基因连接，构建多基因表达载体（载体中 实的储藏期将延长，过程如图所示。下列说法 部分序列如下图所示)，利用农杆菌转化法转 错误的是 —199 Xhol 限制酶 Xho I Cla I EcoRV BamH Hpal HO 启动子 P 终止子 识别序列及 Ers1基因 LB RB 转录方向→ 切割位点 CTCGAG ATCGAT GATATC PCR an PCR产物 (1)步骤①使用的限制酶是 ① 连接产物②农杆菌®植物细胞 质粒中插入pTM启动子的目的是 1@ 转基因植株 注：LB、RB分别为T-DNA的左边界、右边界 (2)步骤②中研究人员设计并合成了以下引 hyg为潮霉素抗性基因，Kam为卡那霉素抗性 物。合成这些引物的原料是 基因 ,引物设计的依据有 A.PCR时需在Es1基因左右两端分别添加 及 XhoI、HpaI酶切序列 两种限制酶的识别序列。 B.过程②可用氯化钙处理农杆菌，有助于促 引物1：ATCGATATGCTTGGGGTCCTGGTCCTTGGC 引物2：GATATCTCAGAGTCTCTCCGCCGTCCGCTC 进重组质粒转化到农杆菌细胞中 (3)将步骤③获得的质粒3经XhoI、EcoR V C.过程③后可在培养基中添加卡那霉素，对 酶切后电泳，结果如下图，据结果可判断 转化的植物细胞进行筛选 目的基因 (填“成功插入”或 D.可利用DNA探针技术检测该植物染色体上 “未插入”)质粒。 是否插入目的基因 二、非选择题 kb 5.5 8.血栓调节蛋白(TM)只能在血管内皮细胞中合 5.6kb 2.3kb 成，具有调节凝血的功能。为了解决异种器官 移植时引起凝血紊乱的问题，科研人员研究制 (4)质粒3经电泳导入猪胎儿成纤维细胞并接 备了猪血管内皮特异性表达人血栓调节蛋白 种至培养皿中培养48h后经适宜的酶处 (hTM)的转基因猪。如图表示部分研究过程， 理分散成单细胞，再按每孔一个细胞接种 请回答问题： 至96孔板中，加入 筛选获得抗性 Xho I Cla I 细胞，再提取抗性细胞的DNA进行PCR pTM启动 Xho I ① 鉴定，将呈 (填“阳”或“阴”)性 子(0.6kb) 8质粒2 Cla I Xho I Xho ori质粒c1aI Puro EcoR V 的细胞留存待用。 ③or Puro 质粒3 (5)取留存细胞的细胞核，显微注射到 Cla I EcoR V ② EcoR V hTM CDNA 时期的 中，再经过 PCR hTM编码区(L.7kb) 等 注：oi为复制原，点，T为终止子，Pur0为嘌呤 技术获得能表达人血栓调节蛋白的转基 霉素抗性基因，pTM为猪血栓调节蛋白，相关 因猪。 限制酶识别序列及切割位，点如表： 200应该不能生长，而在含有氨苄青霉素的培养基中能生长，结合 表格分析可知，应该选择B菌落；根据表格分析可知，A菌落 在氨苄青霉素和四环素的培养基中都能够生长，说明其导入 的是PO;C菌落在任何抗生素的培养基中都不能生长，说明其 没有导入任何质粒。(4)据图分析可知，根据目的基因插入的 位置和PCR技术的原理分析，PCR鉴定时应该选择的一对引 物是乙和丙；根据题意和题图分析可知，某同学用图中的另外 一对引物（甲、乙）从某一菌落的质粒中扩增出了400bp的片 段，说明其目的基因发生了反向连接。 练案[14] 学业考达标练 1.A水稻的花很小，不适合用花粉管通道法导入目的基因，A 错误；将目的基因导入动物细胞常用显微注射法，B正确；将 目的基因导人大肠杆菌最常用的方法是用Ca2+处理，使其处 于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，C正确；将 目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法，此外 还有基因枪法和花粉管通道法，D正确。 2.A将抗虫基因导入受体细胞可以采用农杆菌转化法，但检测 目的基因是否导入受体细胞一般采用PCR等技术，A错误。 3.CPCR反应的操作步骤一般为准备（包括配制试剂及将各 试剂放于实验台上)一→移液一→混合一→离心一→反应。PCR仪是 一种能自动调控温度的仪器，设置好循环程序就可以进行 反应。 4.D要让目的基因进入受体细胞后能稳定存在并得到复制和 表达，不管采用什么导人方法，都需要构建表达载体才能实 现，A错误；花粉管通道法只适用于转基因植物的培育，B错 误；采用花粉管通道法时，植物受体细胞一般是植物体细胞或 受精卵，通常不选卵细胞，C错误。 5.D在农杆菌转化法中，需要将目的基因插人T-DNA片段 中，A错误：农杆菌转化法中应直接利用农杆菌感染植物细 胞，B错误；T质粒是一种环状DNA分子，是存在于细菌拟核 DNA之外的DNA,C错误；T-DNA片段有利于介导外源DNA 整合到植物的染色体DNA上，D正确。 6.A通过观察害虫吃棉叶是否死亡，属于个体生物学水平的鉴 定，A符合题意；通过PCR等技术检测棉花的染色体DNA上 是否插人抗虫基因，属于分子水平的检测，B不符合题意；检 测转基因生物中是否转录出相应的mRNA,属于分子水平的 检测，C不符合题意；采用抗原一抗体杂交检测目的基因是否 翻译成蛋白质，属于分子水平的检测，D不符合题意。 7.C双链DNA分子片段长度越大，在琼脂糖中移动的速率就 越小。 8.(1)B (2)RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出RNA (3)Ca2+能吸收周围环境中DNA分子 (4)青毒素X-gl白色 (5)抗原一抗体杂交 【解析】(1)构建基因表达载体最佳方法是使用双酶切法处 理目的基因和载体，使其产生相同的黏性末端，进而通过DNA 连接酶构建基因表达载体，选择限制酶的要求是不能破坏目 的基因，故不能选择EcoR V,综合分析，可以选择BamH I和 EcoR I处理目的基因和质粒。故选B。(2)构建基因表达载 体时，一般将目的基因插在启动子和终止子之间，其中启动子 的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出 mRNA。(3)将目的基因导入大肠杆菌需要用Ca2+进行处理， 目的是使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状 态。(4)转基因成功的大肠杆菌内含有青霉素抗性基因且 29 lacZ基因被破坏，因此可在培养基中加入青霉素和X-gl;无 lacZ基因，则菌落呈白色，有青霉素抗性基因，则在含青霉素 的培养基中能存活，因此若出现白色菌落，则说明基因表达载 体成功转入大肠杆菌。(5)抗原与抗体的结合具有特异性，且 基因表达的产物通常是蛋白质，故目的基因导入受体细胞后， 常用抗原一抗体杂交技术检测目的基因是否翻译出乙肝病毒 外壳。 选择考提升练 1.D过程①表示基因表达载体的构建过程，即形成重组Ti质 粒的过程，需要使用限制酶和DNA连接酶，不需要纤维素酶 和果胶酶，A错误；过程②是将目的基因导人受体细胞的过 程，在将重组Ti质粒导入烟草细胞前需要先使用CCl,处理 农杆菌，B错误；过程③④为再分化形成植株的过程，该过程 中需要通过调节营养物质和植物激素的配比，从而实现由愈 伤组织诱导出芽和根的顶端分生组织的目的，并由此再生出 新植株，C错误：可通过进行个体生物学水平的检测判断转基 因抗虫烟草是否培育成功，即让害虫吞食转基因烟草，观察害 虫的存活情况进行判断，D正确。 2.CPCR是体外扩增DNA的一种方式，扩增利用的是DNA热 变性的原理，A正确；PCR技术需要在高温条件下进行变性， 故进行PCR扩增需要耐高温的DNA聚合酶，B正确；由于 DNA的两条链反向平行，且子链从引物的3'端开始延伸，故 利用图中的引物①、④组合可扩增出两侧的未知序列，C错 误：通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T-DNA的插 人位置，D正确。 3.C由于同性相斥、异性相吸，带电分子会向着与其所带电荷 相反的电极移动，C错误。 4.D途径甲中，要想使目的基因在牛的乳腺中表达，重组质粒 应导入受体细胞，受体细胞一般是受精卵，A正确：途径乙中， 过程Ⅱ将目的基因导入植物细胞时，一般采用的方法是农杆 菌转化法，B正确：途径丙中，过程Ⅱ将目的基因导入大肠杆 菌时，常用C2+处理大肠杆菌，使其处于一种易吸收周围环 境中DNA分子的生理状态，C正确；干扰素是一种分泌蛋白， 干扰素基因表达后需要在真核细胞的内质网和高尔基体进行 加工才能形成具有特定结构的蛋白质，大肠杆菌没有内质网 和高尔基体，表达出的干扰素结构与前两条途径的干扰素结 构不同，D错误 5.BT-DNA可将T-DNA之间的DNA序列转移并整合到受 体细胞的染色体DNA上，使目的基因能够稳定遗传，故 T-DNA插入外源基因后不会失去作用，A错误：由题图可知， 在同一个T-DNA中OsGLO1启动子启动转录的方向与其他 三个基因的不同，四个基因转录时不都以DNA的同一条单链 为模板，因此DNA的两条单链都可作为转录的模板链，不同 的基因转录的模板链可能不同，B正确：卡那霉素抗性基因不 在T-DNA中，而潮霉素抗性基因在T-DNA中，应选用含潮 霉素的培养基筛选被农杆菌转化的水稻细胞，C错误：由题意 可知，利用农杆菌转化法转化水稻，可使目的基因插人水稻细 胞中的染色体DNA上，所以与叶绿体转运肽基因连接的四个 基因，在水稻细胞核内进行转录，在细胞质中核糖体中进行翻 译，D错误 6.D根据图示可知，200bp的DNA分子量小，800bp的DNA 分子量较大，200bp的DNA移动速度快，所以在电泳时，核酸 的移动方向是从负极到正极的，A正确：当仅用一种限制酶切 割载体时，仅产生一种长度的DNA片段，因此该载体最有可 能为环状DNA分子，B正确；两种限制酶同时切割时产生 600bp和200bp两种长度的DNA片段，所以两种限制酶的切 点最长相距约600bp,C正确；当仅用一种限制酶切割载体 2 时，两种限制酶切割产生的DNA片段等长，而两种限制酶同 时切割时则产生两种不同长度的DNA片段，所以两种限制酶 在载体上各有一个酶切位点，二者识别的序列不相同，D 错误。 7.C根据题意，Es1基因的转录方向是由左向右，据图可知，质 粒中限制酶paI酶切位点靠近启动子，限制酶XoI酶切位 点靠近终止子，若要将Es1基因反向连接到质粒中，则需在 Esl基因左右两端分别添加XhoI、paI酶切序列，A正确； 图中过程②是将构建的基因表达载体导入农杆菌，用氯化钙 处理农杆菌有助于促进重组质粒转化到农杆菌细胞中，B 正确；过程③是利用农杆菌侵染植物细胞，利用了农杆菌T 质粒上的T-DNA的特点，T-DNA携带目的基因插人植物 细胞染色体的DNA上，根据图中T-DNA的左、右边界可知， 携带目的基因的T-DNA上带有潮霉素抗性基因，因此过程 ③后可在培养基中添加潮霉素对转化的植物细胞进行筛选，C 错误；可利用DNA分子探针技术检测该植物染色体上是否插 入目的基因，D正确。 8.(1)XhoI、ClaI使人血栓调节蛋白基因能在猪血管内皮细 胞中特异性表达 (2)4种脱氧核苷酸hTM基因编码区两端的核苷酸序列 ClaI、EcoR V (3)成功插人 (4)嘌呤霉素阳 (5)MⅡ去核卵母细胞早期胚胎培养、胚胎移植 【解析】(1)据题图可知，步骤①是在质粒1中插入pTM的 启动子，得到质粒2，使用的限制酶是XhoI、ClaI,其目的是 使人的血栓调节蛋白基因能在猪血管内皮细胞中特异性表 达。(2)步骤②是将逆转录得到的hTM cDNA进行PCR扩 增，需要引物诱导，合成这些引物的原料是4种脱氧核苷酸。 根据提供的2种引物的脱氧核苷酸序列以及表格判断，设计 引物的依据有hTM基因编码区两端的核苷酸序列以及ClaI 和EcoR V的识别序列。(3)将步骤③获得的质粒3经XhoI、 EcoR V酶切后电泳应当得到2种长度的片段，其中应该含有 pTM的启动子+hTM编码区=0.6+1.7=2.3，结合图中实际 电泳结果得到了5.6kb和2.3kb的2种片段，这说明hTM目 的基因已经成功地插入到质粒3。(4)由图可知，质粒3中的 标记基因为嘌吟霉素抗性基因，因此加入嘌岭霉素筛选可获 得抗性细胞，即含有质粒3或重组质粒的细胞，再提取抗性细 胞的DNA进行PCR鉴定，将呈阳性的细胞留存待用。(5)细 胞核通过显微注射到去核的MⅡ期卵母细胞中，得到重组细 胞，再经过早期胚胎培养、胚胎移植技术获得能表达人血栓调 节蛋白的转基因猪。 练案[15] 学业考达标练 1.B将草鱼的生长激素基因导人鲤鱼体内可以提高鲤鱼的生 长速率，A不符合题意：导入肠乳糖酶基因的奶牛的牛奶中乳 糖含量降低，改善了牛奶的品质，B符合题意；将降解或抵抗 某种除草剂的基因导入玉米是转基因抗除草剂植物的应用，C 不符合题意；Bt抗虫蛋白基因是抗虫基因，能够提高植物的抗 虫能力，D不符合题意 2.B由于外源抗病毒基因具有特异性，因而其表达产物具有特 异性或局限性，只能抵抗某种或某类病毒，不可能抵抗所有病 毒，更不能抗害虫。目的基因导入受体细胞后，可以随受体内 的自身遗传物质稳定遗传，也会同自身遗传物质一样发生 变异。 2 3.B乳腺生物反应器生产的药物在自然界中可以找到，只不过 在转基因动物体内更容易提取到较大量的药物。 4.D利用基因工程生产乙肝疫苗时，应向酵母菌中导入乙肝病 毒的表面抗原的基因。 5.D乳腺生物反应器是用转基因动物生产药物，属于基因工程 成果，A不符合题意：从大肠杆菌体内获得白细胞介素及从大 肠杆菌体内获得生长激素都是将相关基因转入大肠杆菌，从 而得到的基因工程药物，属于基因工程成果，B、C不符合题 意；用高产青霉菌生产青毒素利用的原理是基因突变，不属于 基因工程的范畴，D符合题意。 6.B转基因抗虫棉只是对棉铃虫有较强的抗性，并不能抵抗一 切危害棉花植株的害虫，B错误。 7.C猪的内脏构造、大小和血管分布与人的极为相似，且猪体 内隐藏的、可导致人类疾病的病毒远少于灵长类动物，B正 确，C错误：无论以哪种动物作为供体，都需要在其基因组中 导入调控基因表达的DNA序列，以抑制抗原决定基因的表 达，或设法除去抗原决定基因，再结合克隆技术，培育出不会 引起免疫排斥反应的转基因克隆动物器官，D正确。 8.(1)Ca2+ (2)感染菊花（或植物）细胞，将T-DNA转移至受体细胞 染色体DNA (3)卡那毒素 (4)抗虫基因（目的基因）含目的基因的菊花DNA(或转基 因菊花的DNA) 【解析】(1)用C+处理土壤农杆菌，使其处于一种能吸收 周围环境中DNA分子的生理状态，易于吸收外源重组DNA 分子。(2)农杆菌能够感染植物细胞，将T-DNA转移至受体 细胞中，并插入受体细胞的染色体DNA上，利用这个特点实 现导入目的基因。(3)利用添加卡那霉素的培养基可以筛选 含卡那霉素抗性基因的转基因植株。(4)用PCR方法检测转 基因菊花是否含有目的基因时，需根据目的基因的核苷酸序 列设计特异引物，以含目的基因的菊花DNA为模板进行第一 轮扩增。 选择考提升练 1.B大面积种植转基因抗虫棉，并施用杀虫剂会选择出抗性强 的害虫，导致害虫种群抗药性基因频率升高，且施用杀虫剂会 在一定程度上造成环境污染，B符合题意。 2.D转基因大西洋鲑体内并没有导入抗冻蛋白基因，只是导 入了抗冻蛋白基因的启动子，A错误：构建基因表达载体需要 限制酶和DNA连接酶，B错误：目的基因能通过PCR技术扩 增获得，C错误：生长激素基因能控制合成生长激素，生长激 素含量增加导致转基因大西洋鲑的生长速度加快，D正确。 3.B培育转基因动物通常采用显微注射法将目的基因导入动 物受精卵，B错误。 4.B生长素能促进果实发育，用特异启动子诱导表达iaaM(生 长素合成基因)可获得无子果实，A合理；大量表达pt(细胞 分裂素合成关键基因)，细胞分裂素含量升高，细胞分裂素和 生长素的比例高时，有利于芽的分化，B不合理：赤毒素能促 进细胞伸长，从而引起植株增高，提高gα2ox(氧化赤霉素的酶 基因)的表达水平使赤霉素含量降低从而能获得矮化品种，C 合理；乙烯有催熟作用，在果实中表达acs(乙烯合成关键酶基 因)的反义基因，即抑制乙烯的合成，果实成熟会延迟，D合理。 5.C步骤①是以RNA为模板生成DNA的过程，为逆转录，需 使用逆转录酶，A正确；步骤②是基因表达载体的构建，所依 据的理论基础之一是DNA分子结构的相似性，B正确；步骤 ③需用C2+处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中 3