1.2.1 微生物的基本培养技术-酵母菌与超级细菌的PK（情境课件）生物人教版选择性必修3

人教版选择性必修3 第1章 发酵工程 第2节 微生物的培养技术及应用 一 微生物的基本培养技术 超级细菌pk酵母菌谁是王者？ 目录 生命观念 1. 据不同培养基的用途，选择相应类型的培养基培养酵母菌，并分析培养基的营养构成，解释“获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础”的生物学原理。 科学思维 1.能够归纳概括出常见的消毒和灭菌的方式，并准确说出具体的事物或环境所应用到的无菌技术，尝试使用初无菌操作、倒平板和平板划线法技术对酵母菌进行纯培养，获取纯培养物。 社会责任 1.能说出日常生活中保存食品的原理，关注发酵技术在生活中的应用，强化勤洗手注重卫生的观念 素 养 目 标 情境导入 超级细菌pk酵母菌谁是王者？ 情境启思 酵母菌---微生物界的核武器 自然界中，酵母菌以温和的发酵之力构筑人类文明基石，而超级细菌却以凶猛的耐药性威胁现代医疗;前者是生命化学反应的‘精准工匠’，后者则是基因突变的‘疯狂赌徒’一一二者的攻防博弈，恰是微生物世界‘创造与毁灭’的永恒命题。 酵母菌是人们对抗超级细菌的希望，要让酵母菌为人类所用，人们要先培养再研究改造酵母菌。 现在我们必须首先学会如何培养它？ 微生物 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜。 在制作过程中有杂菌混入。 思考1：食用自制酸奶导致肠胃不适的原因是什么？ 思考2：怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？ ？ 微生物 难以用肉眼观察的微小生物的统称。P9 相关信息 原核生物 (细菌、蓝细菌等) 病毒（无细胞结构） 真核生物 原生生物 (如草履虫、衣藻等) 真菌 (如酵母菌、霉菌等) 本章中提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜。 思考3：怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？ 制作工具和原料灭菌 控制发酵条件避免杂菌进入 接种纯的菌种 微生物的无菌培养技术 ☞防止杂菌污染、获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提（发酵工程的重要基础） 情境串讲 一、培养基的配置 【任务一】阅读课本结合教材9-10页，思考回答下列问题： 1.培养基的概念、作用、种类及用途？ 2.结合教材P10中“表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成”，分析培养微生物的培养基必备营养成分有哪些？ 3.配制培养基时，如何满足不同微生物的特殊需求？举例说明。 情境串讲 一、培养基的配置 1.定义： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2.作用： 用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 3.种类： 微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。 固体 培养基 液体 培养基 +琼脂 微生物在固体培养基表面或内部生长，就可以形成肉眼可见的菌落。 扩大培养、工业生产 微生物的分离、鉴定、活菌计数 情境串讲 一、培养基的配置 4.培养基的营养构成: 相关性信息 牛肉膏和蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。 牛肉膏 蛋白胨 1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 碳源、氮源、和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000mL 水 分析培养微生物的培养基的营养构成有哪些？ 情境串讲 一、培养基的配置 （1）基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 4.培养基的营养构成: ①碳源： （提供碳元素） 无机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 有机碳源： 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等 培养自养微生物 培养异养微生物 ②氮源： （提供氮元素） 无机氮源： NH4＋、NO3-、NH3等 有机氮源： 牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等 ③无机盐： 大量元素：Ca、K 、Mg等 微量元素：Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo等 （调节酸碱平衡、 维持一定的渗透压） 培养固氮微生物 有些无机盐离子可以作为化能合成菌的能源（如铁细菌） 情境串讲 一、培养基的配置 （2）特殊需求： 4.培养基的营养构成: 满足微生物对 、 、 的需求。 特殊营养物质 pH O2 主要指生长因子：如:维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。 实例： ①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 ； 维生素 ②培养霉菌时，需要将培养基pH调至 ； 酸性 ③培养细菌时，需要将培养基pH调至 ； 中性或弱碱性 ④培养厌氧微生物时，需要提供 的条件。 无氧 旁栏思考 情境串讲 一、培养基的配置 为什么培养基需要氮源? 培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 琼脂是一种从红藻中提取的多糖 琼脂易溶于沸水，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，在常规培养条件下呈现固态。 固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。 拓展延伸 琼脂 拓展延伸 培养基种类及用途 划分标准 培养基种类 特点 用途 物理性质 化学成分 用途 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 不加凝固剂 扩大培养、工业生产 加凝固剂，如琼脂 观察微生物的运动、分类鉴定 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 天然培养基 合成培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 培养基成分明确 分类、鉴定 选择培养基 鉴别培养基 加入某种化学物质，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长 培养、分离出特定微生物 在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用以鉴别不同种类的微生物 鉴别不同种类微生物 培养基中加氨苄青霉素 具有抗氨苄青霉素能力的菌落 没有氨苄青霉素抗性的细菌 选择培养基 培养基+氨苄青霉素 培养基 没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰 怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? 拓展延伸 样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? ① 含有C、H、O、N的有机物可作为异养型微生物的碳源、氮源、能源。 ② 自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于碳源。 因此可以根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。 ③无机氮源不但能给自养型微生物提供氮源，也能作为能源物质，如NH3既作为硝化细菌的氮源，也作为能源（NH3氧化释放的化学能）。 ④微生物常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；常用的无机氮源是铵盐、硝酸盐 归纳总结 培养基的配置 1．微生物的培养需要配制培养基，以下叙述合理的是( ) A.培养基中都含有碳源、氮源、水、无机盐 B.因成分不同，培养基可分为固体培养基和液体培养基 C.培养基中的氮源能提供氮元素，但不能作为能源物质 D.筛选自养型微生物时，培养基中不需要加碳源 D 即学即练 培养基的配置 如自养微生物可直接利用空气中的CO2作为碳源 物理性质 NH3氧化释放化学能（可提供能量） 2.下表是某种微生物培养基的成分。以下说法错误的是（    ） A．此培养基可用来培养自养型微生物 B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源 C．若除去①，此培养基可培养固氮菌 D．培养基中若加入氨基酸，则它可充当碳源、氮源 C 固氮菌可能是异养型，该培养基不含有机碳源，不能培养异养固氮菌 即学即练 培养基的配置 A、异养型微生物必须从环境中摄取现成的有机物才能生存，此培养基中没有任何有机物，因此可用来培养自养型微生物，A正确； B、此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源（（NH4）2SO4），B正确； C、固氮菌可能是异养型，该培养基不含有机碳源，不能培养异养固氮菌，C错误； D、蛋白胨是含C和N的有机物，因此培养基中若加入蛋白胨，则它可充当碳源、氮源，D正确。 故选C。 情境串讲 二、无菌技术 制备好了培养基，但由于培养过程中被其他杂菌污染导致酵母菌PK失败 我们怎样才能避免杂菌污染呢？ 任务二：阅读教材P10-11页，思考下列问题： 1.获得纯净的微生物培养物的关键？ 2.无菌技术包括什么？消毒和灭菌的对象？ 3.常用的消毒和灭菌方法？ 4.概括实验前、中、后防止杂菌污染的具体措施。 5.(旁栏思考)无菌技术除用来防止培养物被污染外，还有什么作用？ 1.无菌技术的关键： 获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。 情境串讲 二、无菌技术 无菌技术应围绕着如何避免杂菌污染展开。 观察上面两图，你认为，哪些方面在培养过程中容易造成杂菌污染?那如何避免杂菌污染呢? 情境串讲 二、无菌技术 2.无菌技术的对象： （1）实验操作的空间、操作者的衣着和手 （2）培养的器皿、接种用具和培养基等 进行清洁和消毒 进行灭菌 培养皿 接种环 培养基 情境串讲 二、无菌技术 旁栏思考 无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。 无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？ 情境串讲 二、无菌技术 3.常用的消毒和灭菌方法： （1）消毒 使用较为温和的物理、化学或生物等方法，杀死物体表面或内部一部分微生物。 常用的消毒方法： ①煮沸消毒法： 100℃煮沸5-6min。 ②巴氏消毒法： 62-65℃下煮30min 或 72-76℃下煮15s或 80-90℃ 下煮10s-15s，不破坏食物营养成分 ③化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。 ④紫外线消毒法： 用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台，在照射前，适量喷洒苯酚或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果 情境串讲 二、无菌技术 3.常用的消毒和灭菌方法： （2）灭菌 指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。 芽孢 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。 芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。 孢子 细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。 芽孢和孢子具有高度的耐热性，可抗化学药物和抗辐射。 情境串讲 二、无菌技术 3.常用的消毒和灭菌方法： （2）灭菌 常用的灭菌方法： 原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性 优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的 某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。 对象：培养基、无菌水等 注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。 ①湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121 ℃下维持15-30min 高压蒸汽灭菌锅 情境串讲 二、无菌技术 3.常用的消毒和灭菌方法： （2）灭菌 常用的灭菌方法： 原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等 对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器)金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌 ②干热灭菌：干热灭菌箱内160-170 ℃下加热2-3h ③灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧 效果：最彻底 原理：使微生物燃烧 对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过 程中的试管口或瓶口等易被污染部位 情境串讲 二、无菌技术 实验前： 对操作空间、操作人员消毒 对所用器皿、接种用具和培养基灭菌 操作时： 避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触（再次污染）。 实验操作在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。 实验后： 培养基需灭菌之后再丢弃，避免污染环境或感染操作者。 4.防止杂菌污染的措施： 类型 适用范围 操作方法 消 毒 灭 菌 较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 日常生活 100 ℃煮沸5～6 min 巴氏消毒法 不耐高温的液体（如牛奶） 62-65℃下煮30min 或 72-76℃下煮15s或 80-90℃ 下煮10s-15s。 化学药剂 生物活体、水源等 擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源 紫外线 紫外线照射30 min 灼烧灭菌 接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧 干热灭菌 耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等 物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h 湿热灭菌 培养基等,生产和实验室常用 高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min 接种室、接种箱，超净工作台 归纳总结 常用的消毒和灭菌方法 1.请回答下列问题： （1）实验器具灭菌方法？ （2）培养基灭菌方法？ （3）双手消毒方法？ （4）接种环灭菌方法？ （5）涂布器灭菌方法？ （6）为保证无杂菌，实验操作都要在哪里进行？ （7）如何制备无菌水？ 湿热灭菌法 灼烧灭菌法 浸泡在75%酒精中，使用前灼烧 超净工作台的酒精灯火焰旁 用三角瓶装水，湿热灭菌法灭菌 湿热灭菌法 75%酒精擦拭 即学即练 无菌技术 2.在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解错误的是（     ） A．消毒是指杀死物体表面或内部部分微生物 B．灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 C．实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境 D．吸管和培养皿可以采用干热灭菌法 C 灭菌 即学即练 无菌技术 【详解】A、消毒和灭菌的结果不完全相同，消毒只能杀灭物体体表或内部的一部分微生物，不能杀死孢子和芽孢，而灭菌能杀灭环境中一切微生物，包括孢子和芽孢，A正确； B、灭菌是将处理物体中的一切生物全部杀灭。在经过灭菌后的物体中，不再存在任何活着的生命，包括芽孢和孢子，B正确； C、实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，C错误； D、常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等，吸管和培养皿可以采用干热灭菌法，D正确。 故选C。 3.灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是(　　) A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行 B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染 C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌 D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌 D 动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行 动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保证无菌环境，而微生物的培养基中不能加入抗生素 一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染 即学即练 无菌技术 情境串讲 三、微生物的纯培养 任务三：阅读教材P11-13页，思考下列问题： 1.培养物、纯培养物、纯培养的概念？ 2.什么是菌落？单菌落？ 3.获得单菌落的方法？ 4.酵母菌的纯培养的基本步骤？（注意倒平板和接种的具体操作） 纯培养物 培养物 纯培养 在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体。 获得纯培养物的过程。 由单一个体繁殖所获得的微生物群体。 配制培养基 灭菌 接种 分离 培养 情境串讲 三、微生物的纯培养 （一）培养物、纯培养物、纯培养概念辨析： 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 1.实验原理 菌落 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。 鉴别菌种：菌落的大小、形状、颜色、透明度、光泽度等是鉴定菌种的重要依据。 单菌落 一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 获得单菌落的方法 分散或稀释 繁殖 单个细胞 微生物群 单个菌落 平板划线法 稀释涂布平板法 念珠菌显色培养基 大肠杆菌培养基 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 2. 实验目的 ① 学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板 ② 学会进行无菌操作 ③ 尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落 3. 材料用具 酵母菌培养液 提供接种用的酵母菌 配制酵母菌固体培养基 马铃薯 葡萄糖（或蔗糖） 蒸馏水 琼脂 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 天平，小刀，纱布，烧杯，锥形瓶，棉塞、牛皮纸（或报纸）； 皮筋，培养皿，接种环，酒精灯，超净工作台； 高压蒸汽灭菌锅，干热灭菌箱和恒温培养箱等； 3. 材料用具 高压蒸汽灭菌锅 干热灭菌箱 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 ① 配制培养基 去皮 切块 加水 (1000mL) 加热煮沸 软烂 马铃薯 纱布 过滤 加琼脂 （15～20g） 酵母菌 培养基 加水定容 (1000mL) 称取 马铃薯 (200g) 马铃 薯块 滤液 加葡萄糖/蔗糖 （20g） 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 转移 灭菌15~30min 皮筋勒紧 包牛皮纸 放入高压蒸汽灭菌锅中（100kPa、121℃） 酵母菌培养基 锥形瓶 加棉塞 ② 灭菌： 培养基 ——湿热灭菌 a. 能避免因水蒸气凝结而浸湿棉塞。 b. 在取出盛有培养基的锥形瓶时，能隔绝空气中杂菌。 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 ② 灭菌： （1）制备培养基 4. 方法步骤 培养皿——干热灭菌 灭菌2h 几层牛皮纸包紧 放入干热灭菌箱（160～170℃） 5～8套培养皿 干热灭菌箱 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 ② 灭菌： 培养皿 ——干热灭菌 灭菌2h 几层牛皮纸包紧 放入干热灭菌箱（160～170℃） 5～8套培养皿 干热灭菌箱 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 ① 配制培养基 ② 灭菌 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 ③ 倒平板： 培养基冷却到50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。 翻转 1.拔出锥形瓶的棉塞 2.将瓶口迅速通过火焰 3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入，立即盖上皿盖。 4.等待培养皿冷却后，将培养皿倒过来放置。 倒平板注意事项： ①温度：50℃左右 ②操作：在酒精灯火焰附近 ③冷凝后平板倒置 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 不能完全打开，以免杂菌污染培养基。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 ③ 倒平板： 思考： (1) 需要冷却到50℃左右时，才能倒平板，为什么？用什么办法来判断温度？ (2)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。过高：烫手；过低：琼脂会凝固 将平板倒置，既可以避免培养基中的水分过快蒸发又可防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 ③ 倒平板： 思考： (3)培养基的制作是否合格？ 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1-2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 (4)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 ③ 倒平板： 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离到单菌落。 1 2 3 5 连续划线法 分区划线法 平板划线法 方法 操作 4 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 平板划线法 方法 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 平板划线法 方法 ① ③ ② ④ ⑤ ⑥ ⑥ ⑤ ① ② ④ 答案： ③ ⑦ ⑦ 请同学们阅读教材P13平板划线法,将下图排序 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 平板划线法 方法 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。 1 接种环：灼烧灭菌 2 在火焰旁冷却接种环。同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞。 防止温度太高杀死菌种。 3 3 将试管口通过火焰。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 平板划线法 方法 4 在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。 5 将试管口通过火焰，并塞上棉塞。 在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。 6 注意不要划破培养基。 a.划破，会造成划线不均匀，难以分离单菌落； b.存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 平板划线法 方法 灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意：不要将最后一次的划线与第一次的划线相连。 7 使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 最后一次划线已稀释成单个细胞，如与第一次相连则增加细菌数目，达不到纯化的效果。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 1 2 3 4 5 平板划线法 方法 接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次； 划线首尾不能相接； 每次划线前后灼烧接种环进行灭菌； 划线操作结束后，仍需灼烧接种环。 1 2 3 4 划线后，培养皿倒置培养。 5 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 蘸取菌液 思考：完成图示操作，共做了五次划线，接种环灼烧灭菌了几次？ 6次 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 平板划线法 方法 思考： （1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 杀死接种环上原有微生物 杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 平板划线法 方法 思考： （2）在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 （3）在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因？ 使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，以便获得单个菌落。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板 (一般做三组，重复实验)和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24-28h。 作空白对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染。 既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？ 在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染或灭菌不彻底。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 2.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、形状和大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？ 在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点， 则说明纯化酵母菌的操作成功；如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。 制培养基 接种酵母菌 分离酵母菌 培养酵母菌 分析与评价 情境串讲 三、微生物的纯培养 探究•实验 酵母菌的纯培养 在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。 警示 3.你是如何记录实验结果的？ 可以在培养12h和24h后，观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加，等等。 1.下图为微生物的实验室培养的有关操作，下列相关叙述错误的是(　　) A．步骤①中，需将接种工具灼烧至变红，以杀灭杂菌 B．步骤②中，将接种工具冷却时不宜距酒精灯火焰太远 C．图中接种方法的目的是使菌种逐渐稀释，经培养后获得单个菌落 D．接种后应将培养皿倒置培养，培养后可以根据结果进行微生物计数 D 图示的平板划线法不能用于微生物的计数 即学即练 微生物的纯培养 2.如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是(　　) A．步骤①后需将培养基灭菌并调节pH B．步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行 C．步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了5次 D．步骤①结束后需倒置平板，步骤④结束后不需要 B 步骤①表示倒平板，培养基需要先调节pH后灭菌 步骤③到④的过程中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止造成污染，步骤③到④的过程中共需灼烧接种环6次 步骤④操作结束后需在培养皿的底上做好标记，并倒置放入培养箱中进行培养 即学即练 微生物的纯培养 评估论点的可信程度 所谓“酵素”，就是“酶”的另一种说法。“酵素”制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。这样制作的“酵素”中可能有糖类(包括一些简单的糖和膳食纤维等)、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质,食用后可能会危害人体健康。因此,“吃水果‘酵素’可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力”的论点值得怀疑。 思维训练 1.“酵素”是什么？水果“酵素”的制作原理是什么？ 2.水果“酵素”中可能含有哪些成分？它是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？ 3.水果“酵素”中的所有成分都有益于人体健康吗？ 所谓"酵素"，就是"酶"的另一种说法。"酵素"制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。 可能有糖类（包括一些简单的糖和膳食纤维等）、蛋白质（包括多种酶）、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质。 酵素可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。 "吃水果'酵素'可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力"的论点值得怀疑。 可以通过查阅专业学术期刊上发表的有关研究论文，或亲自检测水果"酵素"中的成分，获取科学可靠的证据进行全面论证。 思维训练 无菌技术 微生物的基本培养技术 微生物的纯培养 紫外线消毒 化学药物消毒 巴氏消毒 煮沸消毒 培养基的配制 培养基的种类 培养基的营养成分 消毒 灭菌 湿热灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 制备培养基 接种分离 培养 基本成分：碳源、氮源、水、无机盐 特殊需求：维生素（如乳酸杆菌）等 平板划线法 配制培养基➡灭菌➡倒平板 课堂小结 微生物的基本培养技术 1.下列四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述，正确的是( ) A.硝化细菌 B.乳酸菌 C.酵母菌 D.衣藻 硝化细菌 乳酸菌 酵母菌 衣藻 能源 氧化NH3 分解乳酸 固定N2 利用光能 碳源 CO2 糖类 糖类 CO2 氮源 NH3 N2 N2 NO3- 代谢类型 自养需氧型 异养需氧型 异样需氧型 自养需氧型 A 课堂练习 能力提升 2.下列有关无菌技术的说法，正确的是( ) A.无菌技术的关键是杀灭实验室中的所有的微生物 B.培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌 C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存 D.无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌 C 课堂练习 能力提升 3.关于消毒、灭菌的方法，下列描述错误的是( ) A.接种用的无菌操作台要进行灭菌处理 B.用巴氏消毒法处理牛奶是因为高温易破坏牛奶的营养成分 C.煮沸半小时后的凉开水中可能仍含有部分芽孢和孢子 D.先喷洒消毒液，再用紫外线照射可增强消毒效果 B 课堂练习 能力提升 4.微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是（　　） A．①②⑤⑥ B．③④⑥⑦ C．①②⑦⑧ D．①③④⑤ D × × × × 课堂练习 能力提升 【详解】②不能完全握住棉塞，⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙，⑦接种环划线时首尾不能相连，⑧在恒温培养箱中培养时应将平板倒置，其余操作均正确，综上，①③④⑤正确，D正确，ABC错误。 故选D。 5.实验小组对酿酒酵母菌进行平板划线的纯培养操作，下列有关叙述正确的是( ） A.将配制好的马铃薯琼脂培养基放入干热灭菌箱内灭菌 B.在酒精灯火焰附近，将培养皿盖完全打开后倒入培养基 C.从第一次划线的末端开始到第二次划线结束，即完成接种 D.将接种后的平板和未接种的平板倒置，放入恒温培养箱中培养 D 课堂练习 能力提升 6.微生物接种的方法有很多，平板划线法是常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是（    ） A．划线操作时，用蘸有菌种的接种环在培养基表面划线 B．划线时不要将第④区域的划线与第①区域相连 C．完成图中所示的平板划线实验，接种环共需灼烧 4 次 D．完成平板划线后需要将平板倒置，放入恒温培养箱中培养 C 课堂练习 能力提升 【详解】A、划线操作时，用蘸有菌种的接种环在培养基表面划线，避免将培养基划破，A正确； B、划线时不要将第④区域的划线与第①区域相连，相连就影响单菌落分离，B正确； C、每次划线前灼烧一次，所有划线结束再灼烧一次，图中共划线4次，因此接种环共需灼烧 5 次，C错误； D、完成平板划线后需要将平板倒置，防止冷凝水落到培养基上影响单菌落的形成，且需要放入恒温培养箱中培养，D正确。 故选C。 表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000ml 水 6.分析基础培养基实例——牛肉膏蛋白胨培养基，回答问题： （1）分析该培养基的营养构成，上述实例属于固体/液体培养基？为什么？ 液体培养基 未加琼脂 （2）为什么培养基需要氮源？ 培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。 （3）所有微生物是否都可以用培养基进行培养？ 否。病毒是没有细胞结构微生物,必须在活细胞内寄生。 课堂练习 能力提升 人教版选择性必修3 感谢观看！ Multimedia Cloud Transcode (cloud.baidu.com) Content Adaptive Encoding 3.1 Lavf58.51.100 Lavf58.51.100 Lavf58.12.100 Tencent APD MTS $你有没有听说过超级恐怖的超级细菌，被其感染后什么药都不管用，抑菌就能置人于死地？绝命毒君孔子曰三步之内必有解药，就是我酵母菌。就你这家伙，你以为酵母菌只是发面的，其实我可是军界灭霸，妥妥的白切黑切白。终于从医院出来了，传说中的超级细菌，难道要生灵涂炭了让我把这个世界搅的。天翻地覆。怎么感觉呼吸不上来呢？就什么声音，这周围哪里有菌？幼军在繁殖的过程中会把氧气全部吸走，让其他军窒息而死。哎呀呀超级细菌俺真是不好意思了。兄弟你安心的去吧，我会继承你的遗志的。我可是大名鼎鼎的厌氧菌，没有氧气让我来。这是当酵母菌消耗完氧气就进入到第二阶段，厌氧呼吸释放酒精，无差别扫射任何细菌，这样不会是酒精消毒。我，兄弟看来你酒精过敏，还是不好意思。王者之路总是孤独的我是小教主就忙小科普。