第41讲 基因工程的基本操作程序 课件 2026届高三生物一轮复习（人教版）

该高中生物学高考复习课件聚焦基因工程基本操作程序及PCR技术等核心考点，依据高考评价体系梳理目的基因获取、载体构建等四大模块，通过近5年真题分析明确分子水平检测（占比38%）、PCR计算（高频考点）等权重，归纳载体构建、电泳鉴定等常考题型，体现备考针对性。 课件亮点在于“考点突破+实验实操+真题演练”策略，如通过双酶切防环化原理分析培养科学思维，结合PCR扩增及电泳鉴定实验强化探究实践，以2024黑吉辽卷电泳题为例解析“迁移速率与片段大小关系”答题技巧，帮助学生掌握得分要点，教师可据此高效规划复习，提升备考效率。

第41讲 基因工程的基本操作程序 Never 学习目标 1.阐明基因工程的原理和基本操作程序 2.针对人类生产或生活中的某一需求，选取适当的基因工程的技术和方法，尝试设计获得某一转基因产品的方案。 3.尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。 目的基因概念 基因工程基本操作程序 目的基因的筛选与获取 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 植物 微生物 分子水平检测 个体水平检测 方法： 从基因文库获取 人工合成 PCR扩增 基因表达载体的构建 目的 组成： 复制原点、启动子、目的基因、终止子、标记基因 动物 抗虫棉 培育转基因抗虫棉主要需要四个步骤： 重组DNA分子 1.目的基因的筛选与获取 2.基因表达载体的构建 3.将目的基因导入受体细胞 苏云金杆菌 Bt蛋白基因 棉花细胞 （核心） 4.目的基因的检测与鉴定 ②利用 和序列比对工具进行筛选。 1.目的基因概念： 用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因 主要是编码特定蛋白质的基因 ①从相关的已知 的基因中进行筛选是较为有效的方法之一 结构和功能清晰 序列数据库 2.明确目的基因的方法： 一、目的基因的筛选与获取 3.目的基因的获取方法 (1)从基因文库中获取 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 类 型： 基因组文库：含有某种生物全部基因片段的重组DNA的克隆群体。 部分基因文库：含有某种生物部分基因片段的重组DNA的克隆群体。 提取某种生物的全部DNA 一定大小的DNA片段 导入受体菌中储存 用适当的 限制酶切 将DNA片段 与载体连接 基因组文库 基因组文库的构建模式图 ① 5 成熟mRNA 成熟mRNA cDNA文库 成熟mRNA 部分基因文库构建模式图 ② 6 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 物种间基因交流 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 小结： 基因文库对比 7 （2）通过DNA合成仪直接合成 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA 基因比较小、核苷酸序列已知 8 （3）利用PCR获取和扩增目的基因 ①PCR的概念：PCR是________________的缩写，它是一项根据__________________的原理，在体外提供______________的各种组分与反应条件，对_____________________进行大量复制的技术。 聚合酶链式反应 DNA半保留复制 参与DNA复制 目的基因的核苷酸序列 I.全称： II.原理： III.操作环境： IV.目的： V.优点： 聚合酶链式反应 DNA半保留复制 体外（PCR扩增仪/PCR仪） 对目的基因的核苷酸序列进行大量复制 可以在短时间内大量扩增目的基因 PCR由穆里斯等人于1985年发明，为此，穆里斯于1993年获得诺贝尔化学奖。 A T C G A A T C G G T T U A C C T T A G C C A A DNA 聚合酶 母链 DNA 子链 DNA 引物 3′ 3′ 5′ 5′ 知识回顾---DNA复制过程 10 小结：细胞内DNA复制所需条件： 引物： 模板： 原料： 酶： 能量： DNA的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚合酶 ATP 一小段RNA（体内） 因为DNA聚合酶只能将新的核苷酸加到已有的DNA双链上，所以DNA复制需要引物。 ②体外DNA复制所需的基本条件 耐高温的DNA聚合酶 （Taq酶） DNA模板 引物（2种） 稳定的缓冲溶液 （一般添加Mg2+） 四种脱氧核苷酸(dNTP) 激活真核细胞和细菌的DNA聚合酶 dATP dGTP dCTP dTTP 一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸 (催化形成磷酸二酯键) 12 dATP 腺嘌呤脱氧核苷酸 dADP 腺苷（A) 腺嘌呤 脱氧 核糖 P P P ~ ~ OH H 在PCR过程中实际加入的为dNTP（即dATP、dGTP、dTTP、dCTP），既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。 脱氧核苷三磷酸 13 3′ 5′ 子链的延伸方向是5 ′→3 ′ DNA聚合酶 3′ 5′ 模板链 子链 DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有链的3′端 子链延伸 子链延伸 -5 ′ 3′- 引物 5′- -3′ 5′- -3′ 引物 3′- -5′ 引物 2种 引物为DNA聚合酶提供了游离的3 ′端，使DNA聚合酶从3 ′端延伸子链。(DNA聚合酶不具有从头合成子链的功能) 14 1.概念： 引物是一小段能与DNA模板链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。 2.作用： 使Taq酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。 3.结合部位： 引物结合在模板链的_________端。 3’ 4.PCR扩增时至少需要______种引物，原因是 2 DNA的两条链是反向平行的，两条链的3’端的序列是不同的,用2种引物才能保证DNA的两条链同时被扩增. 小结：引物 5.设计引物的要求： ①同种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是： ②2种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是： 防止引物自身折叠 防止引物之间配对，导致引物不能与模板链结合 ③引物不能太短，原因： 引物太短，特异性不强，容易扩增出非特异性序列。 过长会导致延伸温度太高从而不利于Taq DNA聚合酶发挥作用 ④引物不能太长，原因： PCR反应的过程动画： 耐高温的DNA聚合酶(Taq酶） 4种脱氧核苷酸（DNTP） 引物 待扩增的DNA片段（模板） 5’ 5’ 变性 复性 延伸 温度上升到90℃以上，双链DNA解聚为单链 当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。 ②过程 90 50 72 ℃ 变性 3` 5` 5` 3` 90 50 72 ℃ 复性 90 50 72 ℃ 延伸 90 50 72 ℃ 变性 90 50 72 ℃ 复性 90 50 72 ℃ 延伸 90 50 72 ℃ 变性 90 50 72 ℃ 复性 90 50 72 ℃ 延伸 受热变性 引物 耐高温的 DNA聚合酶 PCR技术 (1)过程： (2)条件：DNA模板、分别与两条模板链结合的2种_______、四种______________、____________________。 引物 脱氧核苷酸 耐高温的DNA聚合酶 （3）结果：1个模板DNA分子经过n轮PCR，以_____方式扩增，可以扩增出 个DNA片段，共需要引物数量为 个。　　　　 指数 2n 2n＋1－2 【知识小结】 (一小段单链DNA--体外) 以_____方式扩增，即____(n为扩增循环的次数)，使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。 27 Q1： PCR技术获取目的基因时至少要经过几次循环才能从DNA分子中分离出目的基因？ 第一次循环 的产物 第二次循环 的产物 第三次循环 的产物 目的 基因 3次 Q2： PCR技术循环n次需要加入多少个引物？ 2n+1-2 拓展：PCR相关计算 小结：PCR中的数量关系 复制次数 1 2 3 n DNA分子数 2 4 8 2n 含引物的DNA分子数 2 4 8 2n 含其中一种引物的DNA分子数 1＝21－1 3＝22－1 7＝23－1 2n－1 同时含两种引物的DNA分子数 0＝21－2 2＝22－2 6＝23－2 2n－2 共消耗引物的对数 1＝21－1 3＝22－1 7＝23－1 2n－1 含脱氧核苷酸链等长的DNA分子数 0＝21－2 0＝22－4 2＝23－6 2n－2n PCR技术与DNA复制过程比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原则 原料 条件 不同点 解旋方式 场所 酶 结果 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞内（主要在细胞核内） 耐高温的DNA聚合酶 解旋酶、DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 1.一个DNA，一对引物（A与B），复制n次： （1）子代DNA分子等长的DNA分子数为：_________个 （2）子代DNA分子中不等长链DNA分子数为：_________个 （3）子代DNA分子中含模板链DNA分子数为：__________个 （4）子代DNA分子中含引物A（或B）的DNA分子数为：____个 （5）复制过程中共需引物________个 （6）第n次复制需要引物_________个 2n-2n 2n 2 2n-1 2n＋1-2 2n 课堂随练 PCR过程可以在_________________中自动完成，完成以后，常采用 来鉴定PCR的产物 琼脂糖凝胶电泳 PCR扩增仪 ③产物进行鉴定 实验：DNA片段的扩增及电泳鉴定 ② PCR扩增DNA片段还利用了DNA半保留复制的原理。一次PCR一般要经历30次循环。 ① PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合，PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。 1.利用PCR在体外进行DNA片段扩增的原理 一、实验原理 2.DNA片段电泳鉴定的原理 ① DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。 33 ②线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子大小呈 ，分子越大则所受阻力越大，也越难在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢，随着时间的推移，不同大小的DNA分子就会在凝胶中呈现出一个一个的条带。 ③ 凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。 反比 34 PCR反应体系的配方 用量 10倍浓缩的扩增缓冲液（含Mg2+） 5μL 20mmol/L的4种脱氧核苷酸的等量混合液 （实为dNTP） 1μL 20μmol/L的引物Ⅰ 2.5μL 20μmol/L的引物Ⅱ 2.5μL H2O 28～33μL 1-5U/μL的Taq DNA聚合酶 （即耐高温的DNA聚合酶） 1～2U 模板DNA （用量为1pg-1μg） 5～10μL 注意：反应体系总体积为50μL，一般按照用量由大到小的顺序来加样，最后才加DNA聚合酶，这样既保证所加各试剂体积的准确性也能保护酶的活性 二、PCR实验 35 1 2 3 移液：用微量移液器按照PCR反应体系配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。 离心：待所有组分都加入后，盖严离心管的盖子，将微量离心管放入离心机里，离心约10s，使反应液集中在离心管的底部（提高反应速率）。 扩增：参照下表的参数，设置好PCR仪的循环程序。将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应。 实验步骤： (1) DNA片段扩增的具体过程： 预变性：使DNA充分变性，以利于引物更好地和模板结合。 制备凝胶 电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积比0.8%～1.2%的琼脂糖溶液。在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖熔化。稍冷却后，加入适量的核酸染料混匀。 将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。 待凝胶溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入电泳槽内。 进行电泳 将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜。 扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液(内含指示剂)混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物。 接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为1～5V/cm。待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，停止电泳 观察鉴定 取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。 ①融化： ②倒模: ③凝固: ①加液： ②加样： ③电泳： (2) PCR扩增产物电泳鉴定的具体过程： 电泳缓冲液用来维持pH值，使DNA带负电荷。 观察记录 取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。 1.(2024·黑吉辽卷，7)关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是(　　) A.琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小 B.凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置 C.在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快 D.琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来 A 课堂随练 解析　琼脂糖凝胶的浓度会影响DNA分子在凝胶中的迁移率，因此琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小，A正确； 凝胶载样缓冲液指示剂的作用是指示电泳进度，B错误； 在琼脂糖凝胶电泳中，DNA片段是向正极迁移的，且在同一电场作用下，DNA片段的迁移速率与其大小成反比，即DNA片段越长，迁移速率越慢，C错误； 琼脂糖凝胶中的DNA分子需染色后，才可在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来，D错误。 1.基因表达载体的组成及作用 质粒 标记基因 复制原点 启动子 终止子 限制酶切位点 位于基因的上游，紧挨转录起始位点，是RNA聚合酶识别和结合的部位，具有驱动基因转录的作用。 位于基因下游，使转录在所需的地方停止下来。 供目的基因插入载体中 便于重组DNA的筛选 载体DNA复制的起始点 目的：使目的基因在_________中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 受体细胞 二、基因表达载体的构建--核心 项目 启动子 终止子 起始密码子 终止密码子 本质 DNA DNA mRNA mRNA 位置 目的基因上游 目的基因下游 mRNA首端 mRNA尾端 功能 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA 使转录在所需要的地方停下来 翻译的起始信号(编码氨基酸) 翻译的结束信号(不编码氨基酸) 比较：“启动子与终止子”和“起始密码子与终止密码子” 载体 （质粒） DNA分子 （含目的基因） 限制酶处理 带有黏性末端或平末端的切口 带有相同黏性末端或平末端的目的基因片段 DNA连接酶 重组DNA分子(重组质粒) 同一种 2.基因表达载体的构建过程 （1）单酶切 将同一种限制酶切割获得的目的基因和质粒混合后加DNA连接酶会出现的连接方式有: 质粒 目的基因 自身环化 目的基因自身环化 质粒自身环化 质粒与目的基因反向连接 目的基因与目的基因连接 质粒与质粒连接 正向连接 反向连接 自身连接 Q: 怎么改进解决以上问题？ 用两种限制酶切割质粒和含有目的基因的DNA片段。 限制酶a切割 a b DNA连接酶 连接 限制酶b切割 限制酶a切割 限制酶b切割 a b （2）双酶切 双酶切的优点: (1)防止质粒自身环化，防止目的基因自身环化 (2)防止质粒与目的基因反向连接 1.将目的基因导入植物细胞 方法2：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。 方法1：用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中 目的基因 目的基因 适用生物：开花植物 （1）花粉管通道法（我国科学家独创） 三、将目的基因导入受体细胞 注意：农杆菌转化法过程 Ti质粒 目的基因 构建基因表达载体 含目的基因的重组Ti质粒 转入 农杆菌 含重组Ti质粒的农杆菌 植物细胞 导入植物细胞 表现出新性状的植物 将目的基因插入染色体DNA中 T-DNA 植物组织培养 可转移DNA 将目的基因插入Ti质粒的T－DNA中→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达 （2）农杆菌转化法 可转移的DNA Q1: 什么是转化？ 转化：指目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程。 此处“转化”与肺炎链球菌转化实验中的“转化”含义相同，实质都是基因重组。 Q2: 农杆菌用于转化，有何特点？ (2)农杆菌细胞内含有_______，当它侵染植物细胞后，能将_______上的_____ _________ （__________）转移到被侵染的细胞，并且将其__________________ _____________________。 (1)能在自然条件下侵染___________和___________，而对大多数___________没有侵染能力； 双子叶植物 裸子植物 单子叶植物 Ti质粒 Ti质粒 T-DNA 整合到该细胞的染色体DNA上 农杆菌转化法小结： Ti质粒 目的基因 构建 基因表达载体 转入 农杆菌 导入 植物细胞 T-DNA携带目的基因插入植物细胞染色体DNA中 表达 新性状 该过程经过____次拼接、____次导入？ (1)第一次拼接___________________________ (2)第二次拼接___________________________ (3)第一次导入___________________________ (4)第二次导入___________________________ 将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上 插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上（非人工操作） 两 两 将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌 含目的基因的T-DNA导入受体细胞（非人工操作） 优先选择受伤的叶片与重组质粒的农杆菌培养，叶片伤口处的细胞可释放大量的酚类物质，可吸引农杆菌 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 （3）基因枪法 适用于单子叶植物 49 ——显微注射法 （1）受体细胞： 受精卵 （2）过程： 构建基因表达载体并提纯 利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中 早期胚胎培养 胚胎移植 获得具有新性状的动物 2.将目的基因导入动物细胞 ①体积大，易操作。 ②全能性高，易培养成完整个体。 50 ——Ca2+处理法 （1）受体细胞： 常用原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌最广泛。 （2）原核生物的优点: 繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少、易于培养。 （3）一般过程: Ca2+处理大肠杆菌 使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 将重组的基因表达载体导入其中 （Ca2+的作用：增加细胞壁的通透性） （感受态细胞） 3.导入微生物细胞 Ca2+ 感受态细胞 吸收 实例：利用转基因大肠杆菌生产药物 注意：原核生物作为受体细胞产生的真核生物的蛋白质通常没有生物活性（无内质网和高尔基体加工），需要在体外进行再加工。 检测目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性 （1）检测目的基因是否导入 如：检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因或检测Bt基因 ——通过PCR等技术检测 提取DNA PCR操作 是否扩增出目的基因 M：marker；1-阳性质粒；2：原始品系；3-9转Bt品系； 电泳操作 害虫死亡 抗虫棉 PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果 1.分子水平检测 四、目的基因的检测与鉴定 探针 目的基因 DNA分子杂交技术 原理：碱基互补配对 带标记(荧光、放射性同位素)的基因探针（可以是DNA或RNA），与目的基因DNA单链在一定条件下互补配对，结合成双链，从而出现杂交带。 首先取出转基因生物的基因组DNA。② 将含目的基因的DNA片段用放射性同位素（荧光分子或 化学发光催化剂）等作标记，以此做探针。③ 使探针和转基因生物的基因组杂交，若显示出杂交带， 表明目的基因已插入染色体DNA中。 54 （2）检测目的基因是否转录 如：检测Bt基因是否翻译出mRNA ——通过PCR等技术检测 Bt M3 C0 T-9 T-2 T-51 T-5 T-23 T-11 T-20 T-21 T-34 T-10 10个PCR阳性棉花植株中，有四株Bt基因发生转录 提取mRNA PCR操作 是否扩增出目的基因 对扩增产物进行检测 害虫死亡 抗虫棉 逆转录 产生DNA ③检测目的基因是否翻译 苏云金芽孢杆菌 提取 Bt毒蛋白 注射小鼠体内 抗体 标记抗体 提取蛋白 电泳分离 抗原 抗体 杂交 ——通过抗原-抗体杂交检测 转基因生物 鉴定方法 成功标志 抗虫植物 抗病毒（菌）植物 抗盐植物 抗除草剂植物 获取目的基因产物的转基因生物 饲喂害虫（抗虫接种实验） 害虫死亡 病毒（菌）接种实验 未染病 盐水浇灌 正常生长 喷洒除草剂 正常生长 提取细胞产物与天然产品进行功能活性比较 功能、活性正常 2.个体水平检测 1.（2025·山东临沂·三模）下列有关“DNA粗提取与鉴定”、“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的叙述，错误的是（　 ） A．设置一组加二苯胺但是不加DNA的对照组用来排除二苯胺受热变蓝的可能 B．提取到的白色丝状物直接与一定浓度的二苯胺溶液混合，沸水浴5min后变蓝 C．电泳实验中待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时停止电泳 D．琼脂糖凝胶中加入核酸染料，便于在300nm的紫外灯下检测扩增产物 B 课堂随练 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 2．（2025·山东潍坊·一模）提取细菌中质粒时常通过调节pH使DNA先变性再复性，拟核DNA分子因为无法复性与其他较大的分子沉淀下来，质粒可以复性与其他小的核酸分子留在上清液中。下列说法错误的是（     ） A．DNA变性过程中会发生氢键的断裂 B．提取液中应加入一定量的核糖核酸水解酶 C．将提取液中的质粒加乙醇析出后，可以再溶于2mol/L的NaCl溶液中 D．通过电泳分离质粒时，待分离的质粒越大，配置的琼脂糖溶液浓度越高 D 课堂随练 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 3. (2025·山东菏泽·二模）下列关于“DNA的粗提取与鉴定”和“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的叙述，错误的是（     ） A．DNA不溶于95%的冷酒精，但可溶于2mol/LNaCl溶液 B．将洋葱切碎、研磨、过滤，滤液放置4℃冰箱中静置几分钟后，DNA存在于上清液中 C．在凝胶电泳中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关 D．凝胶载样缓冲液中加入的核酸染料能与DNA分子的结合，便于在紫外灯下观察 D 课堂随练 [解析] 沸盐水需要冷却后加入坛中，防止杀死菜料表面的乳酸菌，A错误；盐水需要浸没全部菜料，主要目的是制造无氧环境，有利于乳酸菌无氧呼吸，B错误；盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水，目的是排气减压、隔绝空气、防止杂菌污染等，C正确；整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量变化是先增加后逐渐下降并趋于相对稳定，不是一直降低，D错误。 4.某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带(引物与模板完全配对)外，还有2条非特异条带(引物和模板不完全配对)。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（ ） A.增加模板DNA的量 B.延长热变性的时间 C.延长延伸的时间 D.提高复性的温度 C 课堂随练 5.下图表示培育转基因抗植物病毒番茄的过程示意图。下列叙述正确的是( ) A.过程A需要限制酶和DNA聚合酶的参与 B.过程B需要用CaCl2处理，以提高番茄细胞细胞壁的通透性 C.抗植物病毒基因一旦整合到番茄细胞的染色体上，就能正常表达 D.转基因抗植物病毒番茄是否培育成功可通过抗病毒接种实验进行鉴定 D 课堂随练 讲师：xxx 2026年高考一轮复习 感谢观看 THANK YOU 我爱生物 63 Lavf53.24.2 $