2026届高三生物一轮复习课件第54讲 基因工程的基本工具和基本操作程序(含DNA的粗提取)

该高中生物学高考复习课件聚焦“基因工程与DNA粗提取”专题，依据新课标要求梳理了基因工程基本工具、操作程序及DNA提取鉴定三大核心考点，通过分析近5年高考真题明确工具酶选择（占30%）、表达载体构建（占25%）等高频考点分布，归纳限制酶作用分析、PCR技术应用等常考题型，体现高考备考的针对性。 课件亮点在于“真题情境+素养导向”的复习策略，如结合2024山东卷DNA粗提取题剖析实验步骤优化，2023湖北卷重组质粒筛选题讲解双标记基因应用，培养学生科学思维与探究实践素养。特设易错点分析（如限制酶与DNA聚合酶辨析）和答题模板（如双酶切防环化策略），助力学生掌握得分技巧，教师可据此高效规划复习，提升备考质量。

基因工程的基本工具和基本操作程序 (含DNA的粗提取) 生物 大 一 轮 复 习 第54讲 课标要求 1.概述基因工程是在微生物学、生物化学和分子生物学等学科的基础上发展起来的。 2.阐明重组DNA技术的三种基本工具。 3.DNA的粗提取与鉴定。 4.阐明基因工程的基本操作程序。 一、基因工程的基本工具 基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做重组DNA技术。 思考： 1.不同生物的基因为什么能拼接？ 2.外源基因为什么能在受体细胞中表达？ ①DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。 ②DNA分子都遵循碱基互补配对原则。 ③双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。 ①遗传信息的传递都遵循中心法则。 ②生物界共用一套遗传密码。相同的遗传信息 在不同的生物体内表达出相同的蛋白质。 基因工程的理论基础 赫伯特·韦恩·伯耶 1968年，美国科学家伯耶和研究小组成员在一位年轻生物化学家古德曼（HowardGoodman）的帮助下，从大肠杆菌（Escherichia coli）R型菌株中分离出的第一种限制酶，根据命名原则称为EcoR Ⅰ。 资料卡 限制酶EcoR Ⅰ的由来 一、基因工程的基本工具 任务1 分析限制性内切核酸酶——“分子手术刀”： 原核生物 来源： ； C G A A 3´ 5´ T T 简图： 切割位点 G CTTAA 5´ 3´ 3´ 5´ AATTC G 粘性末端 粘性末端 粘性末端 粘性末端 G 5´ C T T 3´ A A EcoR Ⅰ 的识别序列 识别序列的特点: 一、基因工程的基本工具 两条单链从5´—3´的碱基排列顺序是一样的，即回文序列。 P71旁栏思考题 1.你能根据所掌握的知识，推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么吗？ 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，所以它在长期的进化过程中形成了套完善的防御机制。限制酶就是它的一种防御性工具。当外源DNA入侵时，它会利用限制酶来切割外源DNA，使之失效，以保证自身的安全。 二、拓展应用 1. 想一想，为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？ 细菌中限制酶之所以不切割自身的DNA，是因为含有某种限制酶的细胞的DNA分子不具备这种限制酶的识别序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶，也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA入侵。 Hind Ⅲ Bgl Ⅰ SmaⅠ GGATCC CCTAGG 5´ 3´ 3´ 5´ AAGCTT TTCGAA 5´ 3´ 3´ 5´ AGATCT TCTAGA 5´ 3´ 3´ 5´ CCCGGG GGGCCC 5´ 3´ 3´ 5´ 思考： 1.不同限制酶的切割位点有什么特点？切出的末端类型分别是什么？ ②在中轴线上：平末端 ①在中轴线两侧：粘性末端 2.不同的限制酶切出的粘性末端一定是不同的吗？ 有可能相同，如BamHⅠ和BglⅠ，二者互为同尾酶 3.不同的限制酶切出的粘性末端可以通过碱基互补配对相连接吗？ 同尾酶可以。只要是粘性末端相同，就可以碱基互补配对相连接。 BamH Ⅰ 一、基因工程的基本工具 分析限制酶的作用和选择 将从苏云金杆菌中获取的Bt基因转入棉花细胞内培育转基因抗虫棉的过程中，需借助多种分子工具且经历多个操作步骤。实验人员使用限制酶 关键能力 提升 EcoRⅠ和NheⅠ切割质粒。如图表示常用的限制酶识别序列和切割位点以及质粒上的限制酶切割位点。请思考以下问题： (1)限制酶EcoRⅠ和NheⅠ切割产生的黏性末端分别是________________ __________和_____________________。 (2)切割图示中的目的基因应选用哪类限制酶？请说明理由。 用限制酶MunⅠ和Spe Ⅰ切割目的基因。限制酶MunⅠ和EcoRⅠ切割后形成的黏性末端相同，限制酶NheⅠ和SpeⅠ切割后形成的黏性末端相同， 实验人员使用限制酶EcoRⅠ和NheⅠ切割质粒，应选用MunⅠ和SpeⅠ切割目的基因。 一、基因工程的基本工具 任务2 分析DNA连接酶——“分子缝合针”： 类型 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 缝合_________ 缝合 和 。 黏性末端 平末端 （效率低） 黏性末端 DNA连接酶与DNA聚合酶作用一样吗？为什么？（P72旁栏思考题） DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键，不需要模板。 DNA聚合酶将单个核苷酸加到已有核酸片段的末端，形成磷酸二酯键，需要以一条DNA链为模板。 一、基因工程的基本工具 一、基因工程的基本工具 任务3 分析基因导入受体细胞的载体——“分子运输车”： 种类：质粒、噬菌体、动植物病毒 大肠杆菌中的质粒是最常用的运载体 质粒是裸露、结构简单、独立于细菌拟核之外的小型环状DNA 思考： 1.天然的质粒可以直接用做基因工程载体吗？ 真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。 特点： 标记基因 便于重组DNA分子的鉴定和选择 复制原点 目的基因插入位点 （多个酶切位点） 四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性因 ①能在受体细胞内复制并稳定地保存 ②具有多个限制酶切割位点,便于目的基因插入 ③具有标记基因，便于重组DNA分子的鉴定和选择 ④必需是安全的，对受体细胞无害 2.具备什么条件才能充当“分子运输车”？ 任务4 阅读教材P74，并结合视频简述实验思路及过程： 实验思路： 获取细胞 破碎细胞 提取DNA 鉴定DNA 取材 研磨、过滤、离心取上清液 冷酒精析出DNA NaCl溶液溶解DNA并鉴定 实验过程： DNA不溶于酒精， 某些蛋白质溶于酒精 在一定的温度下（沸水浴），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂 DNA在不同NaCl溶液中的溶解度不同，可溶于2mol/L的NaCl溶液中 4℃冰箱放置几分钟 ①本实验不能用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是 。可选用鸡血细胞作为材料。 ②加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成丝状沉淀。 哺乳动物成熟的红细胞无细胞核和其他细胞器(无DNA) 提醒 考向二　DNA的粗提取与鉴定 3.(2024·安徽，14)下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是 A.实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低 B.利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离DNA C.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，该原理可用于纯化DNA粗提物 D.将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应，可检测溶液中是否含有蛋白 质杂质 √ 4.(2024·山东，13)关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是 A.整个提取过程中可以不使用离心机 B.研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中 C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变 D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰 √ 生物材料 人工合成 获取目的基因 DNA cDNA 一定大小范围的DNA PCR mRNA 基因组文库 cDNA文库 基因文库 包括 限制酶 酶切 逆转录 导入受体菌中保存 序列数据库和序列比对工具进行筛选 DNA合成仪 二、基因工程的基本操作程序 任务1 分析目的基因的获取： 基因组文库 从细胞中提取DNA 细胞 基因组DNA 质粒 质粒酶切 DNA连接酶连接 限制酶酶切 导入细菌中 基因组文库克隆 提取 酶切的DNA片段 cDNA文库 逆转录 逆转录酶 酶切的cDNA片段 限制酶酶切 质粒 质粒酶切 连接 导入细菌中 cDNA文库克隆 提取 基因组DNA限制酶酶切 mRNA逆转录得cDNA，酶切 拼接质粒，导入细菌中保存为文库 基因组文库 cDNA文库 （部分基因文库） 利用PCR技术扩增目的基因 PCR——多聚酶链式反应（polymerase chain reaction） PCR是一项体外复制特定DNA片段的核酸合成技术 适用：获取核苷酸序列已知或部分已知的目的基因 结合细胞内DNA复制，思考PCR的进行需要哪些条件？ DNA模板 引物 4种脱氧核苷酸 耐高温的DNA聚合酶 缓冲液 引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的 。用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸。 真核生物和细菌的DNA聚合酶都需要 激活。因此，PCR反应缓冲液中一般要添加 。 P77相关信息 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 5’ 3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ GGAUCG 5‘ AUCGCG 5‘ RNA引物Ⅰ RNA引物Ⅱ TAGCGCTATCGCATCGACGCT 3’ ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG 3’ Mg2+ Mg2+ 短单链核酸 使Taq酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。 92 55 75 ℃ 3` 5` 5` 3` 将模板DNA、4种脱氧核苷酸（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、耐高温的DNA聚合酶、过量的2种引物、Mg2+加入缓冲溶液中。 引物1 引物2 原料 模板DNA 目的基因 Taq聚合酶 92 55 75 ℃ 变性 3` 5` 5` 3` 92 55 75 ℃ 退火 92 55 75 ℃ 延伸 92 55 75 ℃ 变性 92 55 75 ℃ 退火 92 55 75 ℃ 延伸 92 55 75 ℃ 变性 92 55 75 ℃ 退火 92 55 75 ℃ 延伸 简述PCR扩增的过程 90 单链 50 引物 72 耐高温的DNA聚合酶 思考1：PCR扩增时至少需要2种引物，原因是什么？ 思考2：设计引物的要求： ①同种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是？ ②2种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是？ ③引物不能太短，原因是？ 二、基因工程的基本操作程序 DNA的两条链是反向平行的，两条链的3’端的序列是不同的, 用2种引物才能保证DNA的两条链同时被扩增. 防止引物自身折叠 防止引物之间配对，导致引物不能与模板链结合 引物太短，特异性不强，容易扩增出非特异性序列。 思考3：PCR技术获取目的基因时至少要经过几次循环才能从DNA分子中分离出目的基因？ 第一次循环 的产物 第二次循环 的产物 第三次循环 的产物 目的 基因 3次 思考4：PCR技术循环n次需要加入多少个引物？ 2n+1-2 二、基因工程的基本操作程序 目的 基因 思考5：若要在扩增的目的基因两侧添加限制酶识别位点，可以在引物的 端添加。 二、基因工程的基本操作程序 5’ 较小的DNA片段在凝胶中移动较快 当电泳结束时，DNA样品所在的位置和一系列已知大小的DNA片段的位置(标准)进行比较。 DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向看与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就叫电泳。 琼脂糖凝胶电泳 思考6：如何对PCR产物进行鉴定？ 二、基因工程的基本操作程序 归纳提升 (1)耐高温的DNA聚合酶的作用： 。 (2)引物(2种)的作用：使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸。 (3)缓冲液的作用： 。 (4)复性温度过高，则 ， 温度过低则 ，均无法获得PCR产物。 催化合成DNA子链 维持反应体系pH稳定 引物难以与模板链结合 易使两条母链配对结合 1.基因工程操作中，构建基因表达载体的目的是什么？ 标记基因 便于重组DNA分子的鉴定和选择 复制原点 目的基因插入位点 （多个酶切位点） 确保目的基因在受体细胞中能够稳定存在和表达，并且能够遗传给下一代。（教材P80） 二、基因工程的基本操作程序 任务2 分析基因表达载体的构建——基因工程的核心： 2.作为基因表达载体，只需要含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 启动子： 终止子： RNA聚合酶识别和结合的部位， 驱动基因转录出mRNA 具有终止基因转录的作用 二、基因工程的基本操作程序 辨析 启动子和起始密码子 终止子和终止密码子 启动子和终止子位于DNA分子中，作用：起始和终止DNA的转录 起始密码子和终止密码子位于RNA分子中，作用：起始和终止翻译的过程 3.基因表达载体的构建流程？ BamH Ⅰ GGATCCAAGCTTGGG CCTAGGTTCGAACCC CCCAAGCTT GGGTTCGAA Hind Ⅲ Hind Ⅲ BamH Ⅰ Bt基因 Hind Ⅲ Xba Ⅰ Sma Ⅰ 多 克 隆 位 点 动 子 启 终 子 止 标 R 记 基 因 Kan 复制 原点 1.用限制酶在载体的基因插入位点处切割质粒 2.用同种限制酶切割含有目的基因的片段，获取目的基因 3.用DNA连接酶把目的基因和载体连接，构建重组DNA分子 二、基因工程的基本操作程序 4.基因表达载体构建过程中可能遇到的问题： 如何防止目的基因和载体的自身环化以及目的基因的反向接入？ 双酶切，用两种限制酶来切割含有目的基因的DNA片段和质粒，得到两种末端 A C T A G A C G T T G C AGCTT A G CCTAG Bt基因 两种限制酶切（双酶切） 二、基因工程的基本操作程序 （一）转化的概念： 目的基因进入受体细胞，并且在受体细胞内 并 的过程，称为转化。 （二）常用的转化方法： 将目的基因导入 的方法 将目的基因导入 的方法 将目的基因导入 的方法 二、基因工程的基本操作程序 任务3 分析将目的基因导入受体细胞： 维持稳定 表达 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 将目的基因导入受体细胞——植物细胞 （二）常用的转化方法： 1. ； 载体： 受体细胞： 农杆菌Ti质粒（T-DNA） 主要是双子叶植物和裸子植物（受精卵或体细胞） 农杆菌转化法 将目的基因导入受体细胞——植物细胞 （二）常用的转化方法： 2.基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，成本较高。 将目的基因导入受体细胞——植物细胞 （二）常用的转化方法： 3. ; 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。 就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 花粉管通道法 花粉管通道法 将目的基因导入受体细胞——动物细胞 方法: 显微注射技术 操作程序: 利用 将基因表达载体注入动物的受精卵中 获得具有新性状的动物 显微注射 早期胚胎培养 胚胎移植 构建基因表达载体并提纯 将目的基因导入受体细胞——微生物细胞 （1）受体细胞： 理由： （2）方法流程： 大肠杆菌 溶于缓冲液中的重组DNA分子 感受态细胞 CaCl2 （易吸收外源DNA分子的状态） 转化（重组DNA分子进入受体细胞） 原核生物（常用大肠杆菌） 繁殖快、多为单细胞、 遗传物质相对较少、易于培养。 Ca2+ 转化法 如何筛选含重组质粒的目的菌？ 将目的基因导入受体细胞——微生物细胞 利用标记基因筛选 检测水平 DNA水平: ; RNA水平: ; 蛋白质水平: ; 个体水平: ; 二、基因工程的基本操作程序 任务4 分析目的基因的检测与鉴定： 检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因 检测目的基因是否转录出mRNA 检测目的基因是否翻译成为蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定等 PCR等技术 抗原-抗体杂交技术 分析基因工程的基本操作程序 接种疫苗是预防传染病的一项重要措施，乙肝疫苗的使用可有效阻止乙肝病毒的传播，降低乙型肝炎发病率。乙型肝炎病毒是一种DNA病毒。重组乙肝疫苗的主要成分是利用基因工程技术获得的乙型肝炎病毒表面抗原(一种病毒蛋白)。回答下列问题： (1)制备重组乙肝疫苗时，需要利用重组表达载体将乙肝病毒表面抗原基因(目的基因)导入酵母细胞中表达。重组表达载体中通常含有抗生素抗性基因，抗生素抗性基因的作用是 。为确保目的基因可以正常表达，其上下游序列需具有 。 关键能力 提升 用于筛选含有重组表达载体的细胞 启动子和终止子 (2)目的基因导入酵母细胞后，若要检测目的基因是否插入染色体中，需要从酵母细胞中提取 并用 扩增，电泳后观察是否扩增出目的基因。 (3)若要通过实验检测目的基因在酵母细胞中是否表达出目的蛋白，请简要写出实验思路。_______________________________________________ _________________________________。 染色体DNA(基因组DNA) PCR 从酵母细胞中提取蛋白质，再用相应的抗体进行抗原—抗体杂交，检测是否出现杂交带 考向三　辨析基因工程的基本操作程序 5.(2023·湖北，4)用氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、四环素抗性基因(TetR)作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体(重组质粒)，并转化到受体菌中。下列叙述错误的是 迁移应用 评价 A.若用Hind Ⅲ酶切，目的基因转录的产物可能不同 B.若用PvuⅠ酶切，在含Tet(四环素)培养基中的菌落，不一定含有目的基因 C.若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否 D.若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp(氨苄青霉素)和Tet的 培养基中能形成菌落 √ 若用Hind Ⅲ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，转录的产物可能不同，A正确； DNA凝胶电泳技术可以分离出不同大小的 DNA片段，重组质粒的大小与原质粒不同， 能够鉴定重组质粒构建成功与否，C正确； SphⅠ的酶切位点位于四环素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，重组质粒中含氨苄青霉素抗性基因(AmpR)，因此在含Tet的培养基中不能形成菌落，D错误。 归纳提升 双标记基因与影印接种法筛选含重组质粒的菌落 (1)原理：将目的基因插入含有两种抗生素抗性基因的载体时，如果插入某种抗生素抗性基因内部，则会导致该抗生素抗性基因失活。如图，目的基因插入四环素抗性基因内部，则四环素抗性基因失活。 (2)被转化的细菌有三种：含自身环化目的基因的细菌、含重组质粒的细菌、含自身环化质粒的细菌。 归纳提升 (3)筛选方法：将混合处理后的细菌先放在含氨苄青霉素的培养基上培养，能生长的是含重组质粒的细菌和含自身环化质粒的细菌，如图1、2、3、4、5菌落，再利用无菌的绒布影印到含有四环素的培养基上，如图能生长的菌落为2、3、4，则在含四环素培养基上不生长的细菌即为含重组质粒的细菌，如图1、5菌落。最后，可在含氨苄青霉素的培养基上挑取1、5菌落进行培养。 6.(2024·河池模拟)研究人员将目的基因插入质粒，构建重组质粒的过程如图所示，再将该重组质粒导入大肠杆菌中。由LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可分解X－gal产生蓝色物质，使菌落呈蓝色，否则菌落为白色。下列叙述错误的是 A.将目的基因插入质粒中时，需要用到的酶有Xho Ⅰ、Nhe Ⅰ和DNA连接酶 B.需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处 于一种易于吸收周围环境中DNA分 子的状态 C.按图示构建的重组质粒导入大肠杆 菌后，大肠杆菌可正常表达该目的 基因 D.在含X－gal的培养基上培养导入了 重组质粒的大肠杆菌，可出现蓝色菌落 √ 重组质粒含有LacZ基因，其编码产生的β-半乳糖苷酶可分解X－gal产生蓝色物质，故在含X－gal的培养基上培养导入了重组质粒的大肠杆菌，可使菌落呈蓝色，D正确。 按图示构建的重组质粒导入大肠杆菌后，由于目的基因的转录方向和启动子的方向相反，大肠杆菌不能正常表达该目的基因，C错误； 过教材 1.下列关于“DNA 粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是 A.与洋葱相比，猪血更适合作为DNA的粗提取与鉴定实验的材料 B.实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低 C.因DNA溶于酒精但蛋白质不溶于酒精可分离DNA与蛋白质 D.研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后，取沉淀进一步实验 E.预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解 F.加入预冷酒精析出白色丝状物的过程中用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌 G.两次离心，第一次DNA主要存在于上清液中，第二次主要存在于沉淀物中 H.将提取的丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，将二苯胺试剂加入就能出现蓝色 √ √ √ √ 查落实固基础 猪血细胞无细胞核，不适合用于提取DNA，A错误； 因DNA不溶于酒精但某些蛋白质溶于酒精，因而可分离DNA与蛋白质，C错误； 研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后，DNA在上清液中，故取上清液进一步实验，D错误； 将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂，经过沸水浴加热5 min才会出现蓝色，H错误。 2.下列关于基因工程中工具酶的叙述，正确的是 A.限制性内切核酸酶可以从某些原核生物中提取 B.限制性内切核酸酶也可以识别和剪切RNA C.不同限制性内切核酸酶可能切割出相同的黏性末端 D.DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键 E.E.coli DNA 连接酶只能将有互补黏性末端的两个DNA 片段连接起来 √ √ 限制酶能够识别双链 DNA分子的特定核苷酸序列，不能识别剪切RNA，B错误； DNA连接酶连接的是两个DNA片段之间的磷酸二酯键，D错误； E.coli DNA连接酶既能连接具有黏性末端的DNA片段，也能连接具有平末端的DNA片段，只是连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于T4DNA连接酶，E错误。 3.下列关于基因工程中载体的叙述，错误的是 A.基因工程中所用的载体除质粒外，还有噬菌体、动植物病毒等 B.基因工程中用的载体大多数为天然质粒 C.质粒是常用的载体，有2个游离的磷酸基团 D.必须具有自我复制能力 E.具有一个至多个限制酶切割位点，以便目的基因的插入 F.载体质粒中必须有抗生素抗性基因，便于重组DNA分子的筛选 √ √ √ 在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的，B错误； 质粒是一种双链环状DNA分子，无游离的磷酸基团，C错误； 载体质粒中必须有标记基因，但不一定是抗生素抗性基因，F错误。 4.下列关于基因表达载体及其构建过程的说法，正确的是 A.基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建 B.构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中能稳定存在且遗 传给下一代 C.一个基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、起始密码子和终止 密码子等结构 D.基因表达载体的构建至少需要两种工具酶 E.基因表达载体的构建过程中会发生碱基互补配对 F.诱导物与诱导型启动子结合可激活或抑制目的基因表达 G.基因表达载体中启动子具有DNA聚合酶的结合部位，启动复制过程 √ √ √ √ √ 基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分，C错误； 基因表达载体中启动子具有RNA聚合酶的结合部位，启动转录过程，G错误。 5.下列关于将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测和鉴定的叙述，正确的 A.农杆菌转化法是利用土壤农杆菌侵染植物细胞，然后将重组Ti质粒整合到受 体植物细胞的染色体DNA上 B.将重组Ti质粒导入土壤农杆菌中时，可以用钙离子处理细菌 C.应该将抗虫基因插入农杆菌Ti质粒的T－DNA片段内 D.将目的基因导入动物细胞常用体细胞作受体细胞，采用显微注射技术进行操作 E.可采用PCR检测目的基因是否转录和翻译 F.某抗虫基因转基因是否成功，最简便的方法是观察该植物有没有抗虫性状 √ √ √ 农杆菌转化法是将目的基因插入农杆菌的Ti质粒中的T－DNA上，让携带目的基因的农杆菌侵染植物细胞，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞的染色体DNA上，A错误； 动物受精卵全能性最高，应用显微注射技术将表达载体导入受精卵来获得转基因动物，D错误； 可采用PCR检测目的基因是否转录，采用抗原—抗体杂交技术检测目的基因是否翻译，E错误。 返回 Lavf58.29.100 Packed by Bilibili XCoder v2.0.2 $