第11讲 基因工程绝招课-【大鹏生物】2026年高考生物绝招课PPT课件

该高中生物学课件聚焦基因工程与PCR技术，涵盖限制酶选择技巧、PCR原理步骤及高考答题模板，通过木乃伊DNA克隆、PCR探针制备等经典例题导入，构建从实例到原理再到应用的学习支架。 其亮点在于融合科学思维与探究实践，如通过限制酶选择逻辑分析培养理性判断，结合实验误差分析强化严谨求实态度。知识清单系统梳理题型与答题模板，助力学生提升解题能力，为教师提供高效教学资源，促进核心素养落地。

生物技术与工程类绝招课 一、基因工程的综合题 题型一　限制酶的选择技巧 (1)根据目的基因两端的限制酶切点选择限制酶 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择Sma Ⅰ 。 ②为避免目的基因和质粒的自身环化和反向连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲可选择用Pst Ⅰ 和EcoR Ⅰ 两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点，如图乙) (2)根据质粒的特点选择限制酶(如图) [经典母题] 科学家从大量木乃伊中获得少量木乃伊DNA，进行克隆，复制了2400年前的DNA。兴趣小组同学模拟了其中部分研究过程，设计了如下实验(Msp Ⅰ 、BamH Ⅰ 、Mbo Ⅰ 、Sma Ⅰ 为4种限制性内切核酸酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG，如图所示)。请回答以下问题： (1)从解旋过程进行分析，PCR扩增木乃伊基因与体内DNA复制过程不相同的地方是_________________________________________(答出两点)。 PCR扩增是完全解旋后进行复制，在高温条件下解旋，不需要解旋酶，而体内DNA复制是边解旋边复制，需要解旋酶解旋 (2)若将图乙中质粒和图甲中木乃伊基因通过同种限制酶处理后，构建重组质粒，应选用的限制酶是_________，选择理由是_____________________。 用BamH Ⅰ 来切割目的基因和质粒，切割后能保留完整的目的基因和标记基因 (合理即可) BamH Ⅰ 　 (3)经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因不能正确表达，最可能的原因是_________________________________________________________。 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接 (4)据图丙分析，培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A、B还应分别含有_______________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______菌落中的细菌。 4和6 青霉素、四环素　 题型二　PCR技术——聚合酶链式反应 [例2] (2023·重庆市调研)DNA分子杂交时，常需要大量的单链DNA探针。不对称PCR是一种常见的单链DNA探针制备方法，其原理是反应体系中加入一对数量不相等的引物。在PCR反应的早期10～15个循环中，扩增产物主要是双链DNA，当后期数量较少的限制性引物耗尽后，数量较多的非限制性引物将引导合成大量目标DNA单链。 (1)若A链为所需的DNA分子探针，则非限制性引物应选用引物_____；PCR反应缓冲体系中一般要添加________以激活耐高温的DNA聚合酶。 　Mg2＋ Ⅳ (2)进行最初10～15个循环的目的是__________________。如果体系中原模板DNA的数量为a，最初10次循环产物为双链，后15次循环产物为单链，则最终获得的单链探针数为__________。因为DNA单链与双链的分子量不同，可通过________________将单链探针DNA分离出来。 (琼脂糖凝胶)电泳 增加模板DNA的量　 15×210·a　 (3)为精确控制产物生成量，科学家尝试设计了较长的非限制性引物与较短的限制性引物，在进行一定的循环次数后，适当提高复性温度以避免残留限制性引物与模板结合。高复性温度条件下限制性引物不能结合模板链的原因是___________________________________________________________。 引物越短，复性时可与模板链形成的氢键数越少，越容易被高温破坏 三、高考长难句答题模板总结 [事实概述类] 1.如果让你利用鲜奶和少量的酸奶制作酸奶，在制作过程和制作完成后需要控制的条件有_______________________________________________。 提示　将少量酸奶和鲜奶混合倒入容器中装满，然后严格密封，放在适宜的温度下发酵。发酵完成后放入冰箱冷藏保存 2.如果利用酵母菌发酵产生的果酒进一步发酵得到果醋，除需要加入醋酸菌外，还需要调整的两个环境条件是_______________________________。 提示　通入氧气；升高温度为30～35 ℃ 3.接种结束后，将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养的目的是______，未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键。如果有菌落生长，说明_________________________________________。 提示　对照　培养基灭菌不彻底(或培养基被污染了或培养基需要重新制备) 4.在单克隆抗体制备过程中，有两次筛选，其目的分别是_______________________________________。 提示　第一次是筛选出杂交瘤细胞(用选择培养基)； 第二次是进一步筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞(用抗原—抗体结合法) 5.质粒载体用EcoR Ⅰ 切割后产生的片段如下： 　　　　AATTC……G 　　　　　　　G……CTTAA 为使载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR Ⅰ 切割外，还可用另一种限制性内切核酸酶切割，该酶必须具有的特点是_______________。 提示　切割产生的DNA片段末端与EcoR Ⅰ 切割产生的DNA片段末端相同 6.为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测，又要在个体生物学水平上进行鉴定，后者的具体过程是_____________________________________________。 提示　抗盐基因(或目的基因)　将培育的烟草幼苗栽培于含有一定盐的土壤中，观察该烟草植株的生长状态 [原因分析类] 7.采用下表配方配制的培养液分离果胶酶产生菌时，该表X处的成分应是________(填“葡萄糖”或“果胶”)，不选另一种成分的原因是__________________________________________________。 提示　果胶　大多数微生物都以葡萄糖作为碳源，不具有选择作用 K2HPO4 MgSO4 NaNO3 FeSO4 X H2O 0.1 g 0.5 g 3 g 0.01 g 2 g 加至1 L 8.在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是________________________________________________________。 提示　培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 9.对活菌计数时往往会产生实验误差，稀释涂布平板法计数的值比实际值____，原因是____________________；显微计数法计数的结果比实际值____________，原因是____________________。 提示　偏小　当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落　偏大　显微镜下无法区分细胞的死活，计数时包括了死细胞 谢谢 $