第1章 第2节 第2课时 微生物的选择培养和计数-【精讲精练】2025-2026学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程教师用书word（人教版）

本讲义聚焦微生物的选择培养和计数核心知识点，系统梳理选择培养基原理（如以尿素为唯一氮源筛选分解尿素细菌）、微生物数量测定方法（稀释涂布平板法等），通过实验步骤解析、表格对比（平板划线法与稀释涂布平板法）及例题应用，搭建从原理到操作再到实践的学习支架。 该资料以探究实践为主线，设置选择培养基筛选原理、计数结果可靠性分析等探究点，结合高考真题及检测题，培养科学思维（如数据计算、结果判断）与探究实践能力。包含知识框架图、实验流程图等可视化工具，课中辅助教师教学，课后助力学生查漏补缺，强化知识应用。

第2课时　微生物的选择培养和计数 学习目标 1.阐明微生物选择培养的原理 科学思维 2.概述测定微生物数量的方法 科学思维 3.进行土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 科学探究 一、选择培养基及微生物的选择培养 1．选择培养基 有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步验证。　 2．微生物的选择培养(稀释涂布平板法) (1)系列稀释操作 将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 (2)涂布平板操作 (3)培养分离：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37 ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 二、微生物的数量测定 1．微生物数量测定的基本方法 2．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)实验原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 (2)方法步骤 尿素是一种重要的农业氮肥，但是尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成NH3以后，才能被利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。尿素只能在脲酶的催化下被分解成NH3才能被植物吸收利用。结合所学知识判断： (1)筛选分解尿素的细菌的培养基以尿素为唯一氮源，且为液体培养基(×) (2)能分解尿素的细菌之所以能分解尿素，是因为其能产生脲酶(√) (3)稀释涂布平板法能分离细菌，也能计数(√) (4)测定不同微生物数量时，接种的土壤悬浮液的稀释度相同(×) (5)菌落特征是鉴别菌种的重要依据(√) (6)利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量(×) 探究点一　选择培养基和微生物的选择培养 筛选分解尿素的细菌的选择培养基的配方如表所示，探究下列问题： 组分 含量 KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖 10.0 g 尿素 1.0 g 琼脂 15.0 g H2O 定容至1 000 mL (1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 提示　碳源是葡萄糖，氮源是尿素。 (2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？ 提示　该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 (3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？ 提示　分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可催化尿素分解产生NH3，NH3可作为微生物生长的氮源。 如何进一步鉴定选择培养基上的菌落是分解尿素的细菌？ 提示　在培养基中添加酚红指示剂，培养基变红则可以初步鉴定为分解尿素的细菌。 1．两种接种方法的比较 项目 平板划线法 稀释涂布平板法 用途 一般用于菌种的纯化 一般用于筛选菌株 优点 可对混合菌进行分离 可以计数 缺点 不能计数 操作复杂，若平板不干燥，则效果不好；若菌液浓度大，则长不出单菌落 培养 结果 2.稀释涂布平板法操作注意问题 (1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处。 (2)涂布操作中的注意事项 ①涂布器浸在体积分数为70%的酒精中，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧。 ②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃烧杯中的酒精。 (3)同一稀释度的样液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。 1．(2025·邯郸高二月考)下图为从土壤中分离纯化尿素分解菌的过程。酚红指示剂在碱性环境中呈红色。下列有关叙述错误的是(　　) A．①②③④培养基都应以尿素为唯一氮源 B．图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌 C．④过程采用稀释涂布平板法进行接种，接种工具是涂布器 D．可用酚红指示剂鉴定，菌落周围是否出现红色圈 解析　尿素分解菌可以产生脲酶将尿素分解，从而能利用尿素，但其他微生物不能，因此要分离纯化尿素分解菌，培养基都应以尿素为唯一氮源，A正确；对培养基的灭菌常用高压蒸汽灭菌法，B正确；据图可知，④过程采用的是平板划线法进行接种，接种工具是接种环，C错误；尿素分解菌能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，使培养基碱性增强，pH升高，酚红指示剂会变红，因此可用酚红指示剂鉴定菌落周围是否出现红色圈，D正确。 答案　C 2．(2023·广东卷)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是(　　) A．a点时取样、尿素氮源培养基 B．b点时取样、角蛋白氮源培养基 C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基 D．c点时取样、角蛋白氮源培养基 解析　研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够高效降解角蛋白，所以在c点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，D正确，A、B、C错误。 答案　D 探究点二　微生物的数量测定 1．甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为1×106的培养基中，得到以下两种统计结果。探究下列问题： (1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？ 提示　不可靠。为增强实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下涂布至少3个平板，统计结果后计算平均值。 (2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？ 提示　不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验结果不一致的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，需重新实验，而不能简单地舍弃。 (3)某同学在三种稀释度下吸取0.1 mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到了以下的数据，试计算1 g样品的活菌数。 稀释度 平板 平板1 平板2 平板3 1×104 320 360 356 1×105 212 234 287 1×106 21 23 18 提示　1×105的稀释度下取0.1 mL涂布的三个平板上的菌落数在30～300，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以换算出1 g样品中活菌数为(244÷0.1)×105＝2.44×108。 2．下面是土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验流程示意图，探究下列问题： (1)图示统计菌落数目的方法是什么？利用该法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，为什么？ 提示　稀释涂布平板法。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 (2)在稀释涂布平板法中，为何需至少涂布3个平板？ 提示　作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的说服力。 (3)为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？ 提示　尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落。 1．两种微生物计数方法的比较 2．“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验结果分析 3．(2025·荆州高二月考)平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是(　　) A．采用稀释涂布平板法获得的菌落数往往多于实际的活菌数 B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线 C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基中进行培养 D．与平板划线法相比，稀释涂布平板法形成单菌落的效果更好 解析　由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以利用稀释涂布平板法获得的菌落数往往少于实际的活菌数，A错误；平板划线法不需要稀释菌液，是将菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线，B错误；稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基中进行培养，C错误。 答案　D 4．(2025·江苏卷)从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是(　　) A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌 B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布 C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线 D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存 解析　制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误；将土样加入无菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布于培养基表面，分离并计数，B正确；连续划线时，每次应从上次划线的末端开始，若从起始端开始无法有效分离单菌落，C错误；斜面培养基保存菌种需置于4 ℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法(－20 ℃)，室温下无法长期保存，D错误。 答案　B 关注图中5支试管的梯度稀释倍数，通过如下公式计算：每克样品中的菌落数＝×稀释倍数。　 [构建课堂要点] [检测学习效果] 1．用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目，为了提高实验结果的可信度，往往要设置对照实验，对于对照组的要求不包括以下哪项(　　) A．对照组培养基也要严格灭菌，且不接种任何微生物 B．对照组和实验组培养基放在相同条件下培养 C．所用培养基成分及pH大小完全与实验组一致 D．在对微生物进行培养前，需要对菌液和培养基进行灭菌 解析　对照组培养基也要严格灭菌，且不接种任何微生物，为空白对照，A不符合题意；对照组和实验组的培养基都要置于相同条件下培养，以保证单一变量，B不符合题意；对照组所用培养基的成分及pH应与实验组完全一致，C不符合题意；在对微生物进行培养前，需要对培养基进行灭菌，不能对含目的菌的菌液进行灭菌，D符合题意。 答案　D　 2．稀释涂布平板法是微生物培养的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是(　　) A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释 B．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落 C．需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面 D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理 解析　稀释涂布平板法的操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，当稀释度足够高时，可在培养基表面形成单个的菌落，若稀释度不够高，细胞聚集在一起，得不到单个的菌落，A正确，B错误；需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，C正确；操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，以防杂菌污染，D正确。 答案　B 3．筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。 菌种 菌落直径：C/mm 透明圈直径：H/mm H/C 细菌Ⅰ 5.1 11.2 2.2 细菌Ⅱ 8.1 13.0 1.6 有关本实验的叙述，错误的是(　　) A．培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质 B．筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布 C．以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外 D．H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异 解析　微生物培养基一般都含有四类营养物质：水、无机盐、碳源、氮源，A正确；常用稀释涂布平板法筛选淀粉分解菌，涂布前需将菌液稀释，B正确；由题图可知，细菌Ⅰ和Ⅱ形成的菌落周围都出现了透明圈，说明两种细菌都能将淀粉酶分泌至细胞外，C错误；淀粉分解菌可分解淀粉，导致菌落周围的淀粉被分解，不能与碘液反应生成蓝色，故而出现透明圈，透明圈直径与菌落直径的比值越大，说明细菌分解淀粉能力越强，D正确。 答案　C 4．(多选)下列有关微生物分离、纯化、计数及培养的叙述中，错误的是(　　) A．测定土壤中细菌的数量，一般选用1×104、1×105、1×106倍稀释的稀释液进行平板培养 B．菌落的大小、颜色、有无荚膜、隆起程度等特征都可作为菌种鉴定的依据 C．用血细胞计数板计数微生物时，实验结果往往偏小 D．将好氧型菌株接种到培养液中需静置培养，防止培养液沾染试管壁引发污染 解析　菌落的大小、颜色、隆起程度等特征都可作为菌种鉴定的依据，但是有无荚膜通过肉眼无法观察，B错误；用血细胞计数板计数微生物时，因死菌、活菌都计算在内，因此，实验结果往往偏大，C错误；将好氧型菌株接种到培养液中需振荡培养，D错误。 答案　BCD　 5．某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题： (1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是_________________________________ ________________________________________________， 但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_______________________ ______________________________________________(答出两点即可)。 (2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是 ________________________________________________________________________。 (3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出两点即可)。 解析　(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。能分解尿素的细菌是一种分解者，属于异养型生物，不能以尿素的分解产物CO2作为碳源。能分解尿素的细菌可以以葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解为细胞生命活动提供能量，另一方面其代谢中间产物可为多种有机物的合成提供原料。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择以尿素作为唯一氮源的选择培养基，而其他两组都含有含氮物质NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用：KH2PO4和Na2HPO4构成缓冲对，可维持培养基的pH相对稳定；KH2PO4和Na2HPO4能为微生物生长提供无机盐。 答案　(1)脲酶　分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物　为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料　(2)尿素　其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用　(3)为细菌生长提供无机盐离子，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定 [基础达标练] 1．最常用的接种微生物的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，下列关于二者的比较，正确的是(　　) 平板划线法 稀释涂布平板法 ① 需在无菌条件下操作 不需要无菌操作 ② 培养基中不加琼脂 培养基中加有琼脂 ③ 不可计算菌液中的活菌数 可计算菌液中的活菌数 ④ 需要接种环 需要涂布器 A.③④ B．②④ C．①④ D．②③ 解析　两种方法都需要在无菌条件下操作，①错误；两种方法都需要配制固体培养基，均需要添加琼脂，②错误；平板划线法不能对菌落进行计数，稀释涂布平板法能进行活菌计数，③正确；平板划线法的接种工具是接种环，稀释涂布平板法的接种工具是涂布器，④正确，A符合题意。 答案　A 2．下列关于微生物数量测定的相关叙述，正确的是(　　) A．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 B．利用显微镜直接计数时，可使用普通的载玻片完成计数 C．平板划线法除用于分离微生物外，也常用于统计细菌数目 D．应尽量选菌落数少的平板来统计，以确保一个菌落来自单个细菌 解析　利用显微镜直接计数时，需要使用特定的细菌计数板或血细胞计数板来计数，B错误；平板划线法只用于分离微生物，不能用于统计细菌数目，C错误；利用平板计数时，需要选择菌落数为30～300的平板计数，D错误。 答案　A 3．在筛选纤维素分解菌的培养基中加入刚果红染料，研究者观察到几个有透明圈的菌落。据图分析正确的是(　　) A．透明圈内的刚果红染料已被分解 B．菌落②中的菌株降解纤维素能力最强 C．图中菌落可能是细菌也可能是真菌 D．图中培养基可用牛肉膏、蛋白胨配制 解析　根据分析可知，透明圈不显红色的原因是其中的纤维素已被分解，A错误；菌落①形成的透明圈直径与菌落直径之比最大，说明菌落①降解纤维素能力最强，B错误；根据题干信息不能判断图中菌落的微生物类型，可能是细菌也可能是真菌，C正确；图中培养基应以纤维素为唯一碳源，不可用牛肉膏、蛋白胨配制，D错误。 答案　C 4．下列有关微生物实验室培养的说法，正确的是(　　) A．利用血细胞计数板可以直接统计待测菌液中的活菌数目 B．培养不同微生物的培养基都要将pH调至中性或微碱性 C．分离纤维素分解菌时最好以纤维素作为培养基中的唯一碳源 D．稀释涂布平板法只可以用于分离微生物，不能用来统计样品中活菌的数目 解析　利用血细胞计数板，不能区分死菌与活菌，A错误；不同的微生物培养需要的pH是不同的，如培养细菌时需将培养基的pH调至中性或微碱性，B错误；纤维素分解菌可以将纤维素分解，而其他微生物不能，因此筛选纤维素分解菌时，要将土壤稀释液接种到以纤维素作为唯一碳源的固体培养基，C正确；稀释涂布平板法既可以用于分离微生物，也可以用来统计样品中活菌的数目，D错误。 答案　C 5．(2025·邢台期末)下列有关土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的实验操作，错误的是(　　) A．取土壤用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌 B．测定土壤中细菌的数量一般选用1×102、1×103、1×104倍的稀释液进行平板培养 C．鉴定分解尿素的细菌，利用了尿素可被分解产生氨，从而使培养基pH升高的原理 D．每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果 解析　取土壤用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌，A正确；土壤中细菌比真菌多，在测定土壤中细菌的数量时，一般选用1×104、1×105和1×106倍的稀释液进行平板培养，B错误；鉴定分解尿素的细菌的原理是该种细菌能产生脲酶，脲酶能将尿素分解产生氨，从而使培养基pH升高，使酚红指示剂变红，C正确；为防止遗漏菌落，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果，D正确。 答案　B 6．(2025·唐山期末)某生物兴趣小组同学进行了微生物的分离与培养实验，实验结果如下图所示。下列相关叙述正确的是(　　) A．甲为选择培养基，接种后应立即倒置 B．欲获得强分解效果的菌落，可选择图甲中透明圈直径与菌落直径比值大的Ⅱ菌落 C．图乙接种方式为平板划线法，划线前必须将菌液进行梯度稀释，方可获得单菌落 D．图乙第二次及之后的划线起点为上次划线的末端，每次划线前后都要灼烧接种环，共需灼烧3次 解析　甲培养基可以筛选微生物，属于选择培养基，接种后等菌液被培养基吸收后再倒置，A错误；透明圈越大，说明分解菌的分解能力越强，所以应选择图甲中透明圈直径与菌落直径比值大的Ⅱ菌落，B正确；图乙接种方式为平板划线法，划线前不需要将菌液进行梯度稀释，C错误；图乙第二次及之后的划线起点为上次划线的末端，接种前需要灼烧接种环，每次划线前后都要灼烧接种环，所以共需灼烧4次，D错误。 答案　B 7．(2025·山东卷)深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是(　　) 组别 压强 纤维素 淀粉 菌落 ① 常压 － ＋ － ② 常压 ＋ － － ③ 高压 － ＋ － ④ 高压 ＋ － ＋ 注：“＋”表示有；“－”表示无 A．可用平板划线法对该菌计数 B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌 C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长 D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长 解析　平板划线法可以分离微生物，获得单菌落，但不能进行计数，A错误；制备培养基的过程中，应先进行高压蒸汽灭菌，再在酒精灯旁倒平板，B错误；分析表格数据，比较②④组，两组均以纤维素为唯一碳源，②组常压条件下无菌落产生，④组高压条件下有菌落产生，说明在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在高压下生长，C错误；比较③④组，高压条件下，该菌在以淀粉为唯一碳源的培养基上不生长，而在以纤维素为唯一碳源的培养基上生长，D正确。 答案　D 8．某生物兴趣小组完成了“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”的实验，操作流程如图所示。下列相关叙述正确的是(　　) A．取距地表约3～8 cm的土壤样品时必须在酒精灯火焰旁 B．图中振荡的目的主要是为了增加分解尿素的细菌的浓度 C．用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面的过程中不再灭菌 D．由图示菌落计数结果可知10克土样中的菌株数约为1.6×106个 解析　土壤取样时不用在酒精灯火焰旁，A错误；振荡的目的主要是为了使分解尿素的细菌均匀分布在悬浮液中，B错误；用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面的过程中不再灭菌，C正确；图示平板中有16个菌落，该过程中稀释的倍数为100×10×10×10，最后只取了0.1 mL进行涂布稀释，因此由图示菌落计数结果可知10克土样中的菌株数约为16×105÷0.1＝1.6×107个，D错误。 答案　C [素能提升练] 9．(多选)某生物兴趣小组做了如下实验，先在培养皿底部倒入以尿素为唯一氮源的基本培养基，待凝固。利用稀释涂布平板法接种菌液，培养一段时间后，基本培养基上生长出菌落。再向培养皿内轻轻倒上一薄层完全培养基，再次培养后实验结果如图所示。下列说法正确的是(　　) A．虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐 B．再经培养后，会长出形态较小的新菌落，它们都是能分解尿素的菌株 C．若用基本培养基分离纤维素的分解菌，则配方中应该以纤维素作为唯一碳源 D．若用含特定生长因子的完全培养基作第二层，也可直接分离到相应的营养缺陷型菌株 解析　虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，A正确；初次利用底层基本培养基培养的菌落是能分解尿素的菌株，再经培养后长出形态较小的新菌落，它们都是在完全培养基上生长的，不能分解尿素的菌株，B错误；若用基本培养基分离纤维素的分解菌，则配方中应该以纤维素作为唯一碳源，C正确；底层不添加特定生长因子，营养缺陷型菌株不会生长，若用含特定生长因子的完全培养基作为第二层，这些菌株就会在其上生长，选出底层不生长，第二层生长的菌株就可直接分离得到相应的营养缺陷型菌株，D正确。 答案　ACD 10．(多选)(2024·临沂高二质检)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示，下列说法正确的是(　　) A．倒成平板后直接培养可判断有无污染 B．倒成平板后不需要进行灭菌处理 C．图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙 D．生长图形法还可用于某些菌种的筛选 解析　平板上不含任何生长因子，若倒成平板后直接培养，出现菌落说明已被杂菌感染，因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培养基中生长，A正确；制备平板时，先灭菌再倒平板，故倒成平板后不需要进行灭菌处理，B正确；图中菌落生活在乙丙区域之间，说明同时需要乙和丙，C错误；不同菌种所需生长因子不同，可利用生长图形法筛选菌种，D正确。 答案　ABD 11．(2025·广州检测)分离筛选降解纤维素能力强的微生物，对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有重要意义。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、KCl、酵母膏等配制的培养基，成功地筛选到了能产生纤维素酶的微生物。请回答下列问题： (1)培养基中加入的化合物A是________。本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择培养，目的是_______________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，可向培养基中加入________，等培养基上长出菌落后，能产生纤维素酶的菌落周围会出现__________________________________________。 (3)为在培养基表面形成单个菌落，将平板分为5个区域进行划线，理论上需要灼烧接种环________次。若用稀释涂布平板法进行接种，在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是_______________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)用三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定，结果如图。据图分析可知，三种菌株对________的降解作用最强。与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中________的降解率变化最大。 解析　(1)由题干信息分析可知，该实验是为了分离筛选降解纤维素能力强的微生物，故培养基中加入的化合物A是纤维素。本实验将样品稀释涂布到鉴别培养基之前要进行选择培养，目的是增加能产生纤维素酶的微生物的数量。(2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，在培养基中加入刚果红，其可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选出纤维素分解菌。(3)为在培养基表面形成单个菌落，将平板分为5个区域进行划线，理论上需要灼烧接种环6次。若用稀释涂布平板法进行接种，在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是培养基表面的菌液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。(4)据图分析可知，三种菌株对半纤维素的降解作用最强。与第5天的结果相比，第10天秸秆各组分中纤维素的降解率变化最大。 答案　(1)纤维素　增加能产纤维素酶的微生物的数量　(2)刚果红　透明圈　(3)6　培养基表面的菌液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果　(4)半纤维素　纤维素 12．为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题： (1)通常培养基采用________法灭菌；在制备固体培养基的倒平板操作时，待平板冷却至________左右时，应将平板倒过来放置，这样做的目的是 ________________________________________________________________________。 (2)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为________个。 (3)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。 (4)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (5)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。 解析　(1)微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌；倒平板操作的最适温度为培养基冷却至50 ℃左右，将平板倒置的作用是防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(2)为了检测培养基灭菌是否彻底，应该取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间。根据题意分析，3个平板的菌落数分别是39、38和37，且水样稀释了100倍，体积为0.1 mL，因此每升水样中的活菌数＝(39＋38＋37)÷3÷0.1×100×1000＝3.8×107(个)。(3)在采用平板划线法分离菌种的过程中，对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，目的是将聚集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的单菌落。(4)据图分析可知，图中A表示的是用平板划线法接种培养后得到的结果，B表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(5)根据题意分析，振荡培养不仅提高了培养液中溶解氧的含量，还可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，使细菌生长速度加快。 答案　(1)高压蒸汽　50 ℃　防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染　(2)检测培养基平板灭菌是否合格　3.8×107　(3)灼烧　将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落　(4)B　(5)溶解氧　营养物质 学科网（北京）股份有限公司 $