课时作业(2) 微生物的基本培养技术（Word练习）-【金榜题名】2025-2026学年高二生物选择性必修3 生物技术与工程同步学案（人教版）

课时作业(二) 一、选择题 1．下列关于制备牛肉膏蛋白胨培养基的叙述，错误的是(　　) A．培养基应先调pH再进行灭菌 B．培养基应先灭菌再分装到培养皿中 C．熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌 D．使用高压蒸汽灭菌锅时直接将灭菌锅密闭加热 解析：选D　使用高压蒸汽灭菌锅时，把灭菌锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭，继续加热使锅内的气压逐步上升。 2．下列叙述正确的是(　　) A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌 解析：选A　培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。培养基的种类根据划分依据的不同而不同，如根据化学成分可分为天然培养基和合成培养基。固体培养基是液体培养基添加凝固剂形成的，其他成分均相同。单个的微生物形体微小，肉眼无法看到，必须借助仪器才能看到，在固体培养基上用肉眼观察到的是一个菌落。 3．检验培养基是否有杂菌污染的最有效方法是(　　) A．将未接种的培养基放在实验桌上培养 B．将未接种的培养基放在窗台上培养 C．将未接种的培养基放在恒温箱中培养 D．将已接种的培养基放在恒温箱中培养 解析：选C　检验培养基有没有被杂菌污染，可将未接种的培养基放在恒温箱中培养。如果在培养过程中未接种的培养基上没有菌落生长，则说明培养基没有被杂菌污染；若未接种的培养基上有菌落生长，则说明培养基已被杂菌污染。 4．下列有关微生物培养与应用的叙述，正确的是(　　) A．同一种物质可能既作为碳源又作为氮源，所有碳源都能提供能量 B．接种前需对培养皿、接种环进行灭菌处理，对操作者的双手等进行消毒处理 C．要从多种细菌中分离出某种细菌，培养基要用液体培养基 D．微生物生长不可缺少的微量有机物有氨基酸、维生素和蛋白胨等 解析：选B　同一种物质既可作为碳源又可作为氮源，如牛肉膏，但自养微生物利用的无机碳源不提供能量，A错误；培养皿、接种环等需要进行严格的灭菌处理，而操作者的双手需要进行消毒处理，B正确；从多种细菌中分离出某种细菌应该使用固体培养基，C错误；微生物生长不可缺少的微量有机物主要包括氨基酸、维生素等，D错误。 5．下列常用的无菌操作中错误的是(　　) A．无菌操作不要求杀死培养基中的一切细菌 B．对操作者进行消毒的方法是用酒精擦拭双手 C．实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭进行灭菌 解析：选D　无菌技术是用来防止培养物被其他外来微生物污染的，而不是杀死培养基中的一切细菌，A正确。对操作者应用较温和的方法进行消毒，B正确。实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行，防止杂菌污染，C正确。对无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌法灭菌，D错误。 6．下列有关细菌培养的叙述，正确的是(　　) A．在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌 B．在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长 C．向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长 D．有的物质既可作碳源也可作氮源，碳源并不都能提供能量 解析：选D　菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，所以单个菌落中通常只有一种细菌，A错误；青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，所以加入青霉素的培养基可抑制细菌生长而促进真菌生长，B错误；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，C错误；有的物质既可作碳源也可作氮源，如蛋白胨，碳源并不都能提供能量，如CO2等，D正确。 7．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作中错误的是(　　) ①煮沸消毒可以杀死微生物细胞和一部分芽孢　②接种操作要在酒精灯火焰附近进行　③家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌　④培养基要进行高压蒸汽灭菌 ⑤加入培养基中的指示剂或染色剂不需要灭菌 A．①②　　　　　　　 B．②④ C．②⑤ D．③⑤ 解析：选D　无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能对葡萄进行灭菌，培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法；故③⑤操作错误。 8．微生物接种的方法很多，平板划线法是常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是(　　) A．划线操作时，将醮有菌种的接种环插入培养基 B．平板划线后培养微生物时要倒置培养 C．不能将第④次的划线与第①次的划线相连 D．在②～④次划线前都要对接种环进行灭菌 解析：选A　划线时不能将接种环插入培养基，而是在培养基表面划线，A错误；用平板培养基培养微生物时，为防止水蒸气凝集滴入培养基造成干扰或污染，应将平板倒过来放置培养，B正确；划线时要避免最后一次的划线与第一次的相连。如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果，C正确：在②～④次中划线前都要对接种环进行灼烧灭菌，保证每次划线的菌种来自上一区域的末端，D正确。 9．做“酵母菌的纯培养”实验时，下列叙述正确的是(　　) A．高压蒸汽灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上 解析：选D　高压蒸汽灭菌时，到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到零时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，A错误；倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；经灼烧灭菌的接种环应在火焰旁冷却后再挑取菌落，C错误；标记菌落时应用记号笔标记在皿底上，D正确。 10．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的具体描述正确的是(　　) ①等培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板　②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞　③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰　④用左手的拇指和食指打开皿盖　⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖　⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 A．①②③④ B．④⑤⑥ C．③⑤ D．①②④⑥ 解析：选C　①待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板；②将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿盛有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞；④用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙；⑥等待平板冷却5～10 min，将平板倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。改正后的①～⑥步骤为倒平板的具体操作。 11．(不定项)下列有关倒平板的叙述，正确的是(　　) A．在酒精灯的火焰旁进行操作 B．将打开的锥形瓶瓶口迅速通过酒精灯的火焰 C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上 D．待平板冷却凝固后需要倒过来放置 解析：选ABD　整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此，应在酒精灯的火焰旁进行操作，打开的锥形瓶瓶口应迅速通过酒精灯的火焰。培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙进行操作，不能将培养皿盖完全打开。平板冷却凝固后需要倒过来放置。 12．(不定项)下列有关平板划线接种法的操作正确的是(　　) A．将接种环放在火焰上灼烧 B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D．接种环划线要将最后一次的划线与第一次的划线相连 解析：选ABC　为了避免杂菌污染，蘸取菌液和划线要在火焰旁进行，C正确；每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，A正确；灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，杀死菌种，B正确；在平板划线时不要将最后一次的划线与第一次相连，D错误。 二、非选择题 13．在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下： ―→―→―→ 请回答下列有关问题： (1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是________________________________。不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是________________。 (2)倒平板的适宜温度是50 ℃左右，原因是________________。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止________________。 (3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的________，若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图________。 (4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有______________________。 (5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。 解析：(1)培养基中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。微生物生长需要一定的pH，所以培养基装瓶前需要调节pH。(2)倒平板的适宜温度是50 ℃左右，原因是温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)由图可知，A为接种环，B为涂布器，C为胶头滴管，D为接种针，故稀释涂布平板法应选择的涂布工具是B，平板划线法应选择的接种工具是A。(4)由题意分析可知，造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。(5)有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。 答案：(1)所培养微生物对各营养成分的需要量　调整pH　(2)温度过高会烫手，过低培养基又会凝固　皿盖上的水珠落入培养基，造成污染　(3)B　A　(4)①接种环灼烧后未冷却；②划线未从第一区域末端开始　(5)灭菌 14．回答下列与细菌培养相关的问题。 (1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO 3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是____________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上________(填“能够”或“不能”)生长，原因是___________________________________。 (2)用平板培养细菌时一般需要将平板________(填“倒置”或“正置”)。 (3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是_________________________________。 (4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。 解析：(1)细菌培养时常用牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏能提供碳源、氮源、磷酸盐、维生素，蛋白胨能提供碳源、氮源、维生素，而葡萄糖不能提供氮源，NaNO3不能提供碳源。不同细菌生长、繁殖所需要的最适pH是不同的，应根据培养细菌的不同来调节培养基的pH。硝化细菌是化能合成自养型细菌，可以利用空气中的CO2作为碳源，因此在没有碳源的培养基上能够生长。(2)在平板培养基上培养细菌时，一般需将平板倒置，这样可以防止皿盖上的水珠落入培养基。(3)不同种类的细菌所形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征，不同种细菌在一定培养条件下表现出各自稳定的菌落特征，可以作为菌种鉴定的重要依据。(4)使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，以免污染环境。 答案：(1)蛋白胨　不同细菌生长、繁殖所需的最适pH不同　能够　硝化细菌可以利用空气中的CO 2作为碳源　(2)倒置　(3)在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征　(4)灭菌 15．下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题： 试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 用量 5 g 10 g 5 g 20 g 定容至 1 000 mL (1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是______________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行________处理。 (2)微生物在生长过程中对各种成分的需要量不同，配制培养基时各成分要有合适的________。在烧杯中加入琼脂加热时要不停地________，防止_____________。 (3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后，若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入________中灭菌，压力为________kPa，温度为________，时间为____________。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应________。 (4)使用高压蒸汽灭菌锅时应注意，先向锅内倒入______________。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后，将锅密闭。 (5)从一支试管向另一支试管接种时应注意，接种环要在酒精灯________(填“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环________后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近。将接种的试管在适温下培养，长成菌落后放入________ ℃冰箱中保藏。 解析：(1)培养基中一般都含有水、无机盐、碳源、氮源。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。(2)在配制培养基时营养要协调，按所培养微生物对各种成分的需求确定其成分及比例；在加入琼脂后，要不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。(3)培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌锅，在压力为100 kPa、温度为121 ℃条件下，灭菌15～30 min。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，应废弃。(4)高压蒸汽灭菌锅操作步骤为先向锅内倒入水，加热煮沸，将冷空气排出，将锅密闭，继续加热使锅内气压和温度上升到需要的程度。(5)酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却再蘸取菌种，否则会烫死菌种造成实验失败。 答案：(1)氮源　蛋白胨和牛肉膏　灭菌　(2)比例　搅拌　琼脂糊底引起烧杯破裂 (3)高压蒸汽灭菌锅　100　121 ℃　15～30 min　废弃　(4)适量水　(5)外　冷却　4 学科网（北京）股份有限公司 $