2026届一轮复习专题题型 PCR技术类型

高三一轮复习专题题型 PCR技术类型 一、常规PCR 1.（2021·湖北·高考真题）某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（    ） A．增加模板DNA的量 B．延长热变性的时间 C．延长延伸的时间 D．提高复性的温度 二、多重PCR 2．（22-23高三上·北京昌平·期末）科研人员在常规PCR基础上发展出同时检测多种病原体的多重PCR技术，检测原理（a、b）及结果（c）如下图。下列叙述错误的是（    ） A．需要针对不同病原体设计特异性引物和荧光探针 B．图中b是PCR反应的复性过程 C．多重PCR同时完成对4种病原体的检测 D．由结果推测该检测样品中有A病原体的核酸 三、降落PCR 3．（24-25高二下·山东·阶段练习）降落PCR能有效扩增一段特异性较高的DNA片段。常规PCR的退火温度固定在55℃，而降落PCR的前10个循环中退火温度从65℃逐步降至55℃，后续25个循环保持在55℃。降落PCR的产物电泳结果显示单一明亮条带，而常规PCR出现多条非特异性条带。下列说法正确的是（　　） A．降落PCR初始退火提高了引物与模板的特异性结合，减少非配对产物的积累 B．常规PCR的退火温度过低，导致DNA变性不彻底，非特异性产物被优先扩增 C．降落PCR的循环次数更多，DNA聚合酶活性更高，因此产物量更大 D．降落PCR的35个循环过程一共消耗引物的个数为235－2 四、热启动PCR 4．（22-23高二下·山东青岛·期中）传统的PCR反应体系中各成分一次性加入并进入循环，反应温度由室温上升到高温的过程中可能发生引物与模板中的非靶位点错配，在Taq酶的作用下延伸，形成非特异性产物。热启动PCR可优化目标扩增产物，方法之一是：先将除Taq酶以外的各成分混合后，加热到70°C以上再混入酶，然后开始PCR扩增，下列说法正确的是（    ）（多选） A．非特异性产物可以在以后的循环中继续扩增，不断积累 B．与传统的PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物的错配 C．热启动过程双链DNA可直接与引物结合从而被识别 D．PCR反应中温度的周期性改变是为了Taq酶催化不同的反应 五、大引物PCR 5．（2021·山东济南·模拟预测）大引物PCR定点突变常用来研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变仅需进行两轮PCR反应即可获得，第一轮加诱变引物和侧翼引物，第一轮产物作第二轮PCR扩增的大引物，过程如图所示。下列叙述正确的是（　　）（多选） A．第一轮PCR过程中退火所用的温度与第二轮PCR退火的温度是一样的 B．PCR扩增的定点诱变产物通常需要连接到载体分子上才能表达出相应的性状，该定点诱变产物需具备启动子、终止子等结构才能进行转录和翻译 C．第二轮PCR所用的引物是第一轮PCR的产物DNA的两条链 D．将某功能蛋白的第17位Cys（UGU）改造成Ser（UCU），属于蛋白质工程 6．（22-23高二下·山东滨州·阶段练习）IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿的IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C．为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，如图所示。下列说法正确的是（　）（多选）    A．PCR1中使用的引物有引物A、引物C B．PCR2中使用的引物有引物B、大引物a C．PCR1过程需要扩增3轮才能获得目标产物 D．PCR2过程中，为减少错误DNA片段的产生可适当升高复性温度 六、巢式PCR 7．（21-22高三下·山东济南·阶段练习）为减少引物与模板之间的非特异性配对，人们在常规PCR技术的基础上进行了改良，发明了巢式PCR技术。其原理是利用两套PCR引物进行两轮PCR扩增，首先利用第一对引物（外引物）对目的基因所在DNA进行15- 30个循环的扩增；第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板，利用第二对引物（内引物或巢式引物）进行15-30个循环扩增，具体过程如图所示。下列叙述错误的是（    ） A．巢式PCR中加入的组分与常规PCR相同，但扩增产物比常规PCR特异性更强 B．两套引物需进行两次PCR，由于和两套引物都互补的靶序列较少，因此大大提高了扩增的特异性 C．内引物扩增的模板是外引物扩增后的产物，第二阶段反应能否进行，也是对第一阶段反应正确性的鉴定 D．如果第一次扩增产生了错误片段，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率将会增加 七、重叠延伸PCR 8．（2025·湖南衡阳·二模）重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，经过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变，其操作步骤如下图所示。下列说法错误的是（    ）（多选） A．PCR1和PCR2在同一个系统里面进行以便重叠延伸 B．通过PCR2能得到产物CD至少经过3次DNA的复制 C．取AB上链和CD下链加入引物再次扩增即可得到产物AD D．根据诱变基因单链的3'→5'方向来设计引物a和引物d 9．（23-24高二下·山东潍坊·阶段练习）重叠延伸PCR技术是设计含突变点的互补核苷酸片段作为引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得突变基因的方法。科研人员将枯草芽孢杆菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突变为1，构建出了对甘油高效利用的枯草芽孢杆菌。下列说法正确的是（　）（多选） A．通过PCR1获得产物AB需要进行2轮PCR扩增 B．无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD C．在同一反应体系中加入四种引物可以同时获得大量产物AB和CD D．获取目的基因后，构建质粒载体，形成基因表达载体。基因表达载体上保证其能在宿主细胞中扩增的结构是复制原点，保证目的基因能正常转录的结构是启动子和终止子 八、反转录PCR 10．（21-22高二下·广东佛山·期中）RT-PCR技术是反转录-聚合酶链式反应的简称，是指将RNA的反转录和cDNA的PCR相结合的技术。下图为RT-PCR技术过程示意图。据图分析，下列说法正确的是（    ） A．催化①②过程所需的酶都是DNA聚合酶 B．催化③⑤过程的酶都具有耐高温特性 C．杂交双链中嘌呤数量一定等于嘧啶数量 D．④过程需要冷却至70℃左右 11．（2024·辽宁·模拟预测）反转录PCR又称逆转录PCR（RT－PCR），是以mRNA为模板进行的特殊PCR，过程如图。下列相关叙述正确的是（　　）  （多选） A．过程①除图示条件外还需反转录酶和扩增缓冲液等 B．过程②形成的双链cDNA中含外显子和内含子等片段 C．过程③中子链沿着模板链的5′→3′方向延伸 D．RT－PCR技术可应用于是否被RNA病毒感染的检测 九、实时定量荧光PCR 12．（2022·全国·模拟预测）实时荧光定量PCR可用于基因工程步骤中目的基因的检测。其原理如图1：提取待检测生物的DNA，进行PCR，在PCR体系中加入可在目的基因中部结合的TaqMan探针，当DNA聚合酶移动到探针处时，探针被分解，发出荧光，实时检测荧光强度，体系达到一定荧光强度（Ct）时所需的循环次数越多，反推模板量越少。研究者使用此方法检测了转基因大豆中目的基因g10evo-epsps的情况，结果如图2。下列说法正确的是（    ）（多选） A．可以设计与目的基因任意一条链的碱基配对的TaqMan探针 B．反应后期荧光强度不再增加，可能是因为DNA聚合酶失活或探针耗尽 C．待测样品中目的基因含量排序是：1<2<3<4<5<6 D．若使用逆转录所得cDNA为PCR模板，可用于检测目的基因的转录量 十、反向PCR 13．（24-25高三上·江苏扬州·开学考试）常规PCR只能扩增两引物间的DNA区段，要扩增已知DNA序列两侧的未知DNA序列，可用反向PCR技术。反向PCR技术扩增的原理如下图所示。下列叙述正确的是（　　）（多选） A．切割M和N时选用的限制酶可以相同，也可以不同 B．环化之后产生的DNA分子没有游离的磷酸基团 C．图中引物，应选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对 D．PCR扩增，每轮循环前应加入限制酶将环状DNA切割成线状 14．（2024·江西景德镇·模拟预测）反向PCR是一种通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增的技术，其过程如下图所示。下列叙述错误的是（    ）（多选） A．应选择引物1和引物4进行PCR扩增 B．设计的引物中GC碱基含量越高，复性的温度越高 C．PCR产物是包含所有已知序列和未知序列的环状DNA分子 D．整个过程需用到限制酶、DNA连接酶、耐高温DNA聚合酶及逆转录酶 十一、不对称PCR 15．（24-25高二下·江苏淮安·期末）不对称PCR是一种大量制备单链DNA的手段，PCR的两种引物添加的量不同，一种引物添加较多，称非限制性引物，另一种引物添加较少，称限制性引物，在PCR的前10个循环中，两条链的扩增均正常进行，第11～30个循环中，限制性引物耗尽，仅通过非限制性引物扩增其中一条链，下列相关叙述正确的有（    ）（多选） 单链DNA 5'-AACCGCTCATCTAAG……CCTAGCTAGTCAACC-3' 引物1 5'-AACCGCTCATCTAAG-3' 引物2 5'-GGTTGACTAGCTAGG-3' A．若要大量制备表格中的单链DNA，引物2是限制性引物，引物1是非限制性引物 B．在PCR的第11～30个循环，延伸时间应当明显短于前10个循环 C．若PCR开始之前有a个模板DNA分子，限制性引物至少需要（210-1）a个分子 D．若PCR开始之前有a个模板DNA分子，非限制性引物至少需要（20×210-1）a个分子 十二、甲基化PCR 16．（2025·黑龙江·模拟预测）CpG岛主要位于基因的启动子和外显子区域，富含C、G核苷酸，长度为300~3000个碱基对。甲基化特异PCR的基本原理是DNA经重亚硫酸盐处理后，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，以处理后的产物作为模板，加入甲基化特异性的引物(primerI)或非甲基化的引物(primerII)，进行特异性的扩增。只有结合完全的甲基化或非甲基化特异性引物的片段才能得到扩增片段。据此分析，下列相关叙述正确的是（    ） A．CpG岛中一条单链中的C和G之间形成三个氢键 B．设计引物时，primerI中含有碱基G，primerII中不含碱基G C．甲基化的DNA无法与DNA聚合酶结合，从而影响DNA的复制 D．若primerI得不到而primerII得到扩增产物，则证明DNA发生甲基化 17．（2024·广东茂名·三模）胃癌是一种严重威胁人类健康的恶性肿瘤。为研究E—cadherin基因（与肿瘤转移相关）启动子甲基化状况在胃癌发生、发展中的改变及作用，研究人员对早期胃癌和进展期胃癌中，E—cadherin基因启动子甲基化状况进行了检测，甲基化特异性PCR检测结果如图所示。下列相关判断错误的是（    ） A．胃癌的发生与包括E—cadherin基因在内的多个基因碱基序列改变有关 B．E—cadherin基因的启动子发生甲基化后可能影响RNA聚合酶与之结合 C．早期胃癌和进展期胃癌中，E—cadherin基因的启动子均存在甲基化修饰 D．进展期胃癌中E—cadherin基因表达产物的减少可能加速癌细胞的转移 十三、免疫PCR 18．（2025·安徽芜湖·模拟预测）免疫PCR是对微量抗原的一种检测方法。下图是利用该技术检测牛乳中微量抗生素的流程图：首先将抗体1固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，再加入DNA标记的抗体2，进行PCR扩增，最后进行电泳检测，相关叙述正确的是（    ） A．图示抗原检测过程发生三次抗原与抗体的结合 B．如果电泳检测到目标条带，则表明牛乳中无抗生素 C．图示第三次冲洗的目的是洗去未结合的DNA标记的抗体2 D．免疫PCR技术直接放大了微量抗生素，以达到可检测水平 十四、数字PCR 19．（23-24高二下·江苏徐州·期中）微滴式数字PCR（ddPCR）是一种检测RNA病毒等病原体的手段，原理如图所示，分为样本分散、PCR扩增、检测三个过程。下列有关叙述错误的是（    ） A．RNA病毒样本在进行ddPCR检测时，需要先进行逆转录处理 B．多孔板中如果某个孔没有核酸分子，就不需要加入引物和Taq酶 C．检测时只要有一个孔出现阳性结果，就可以说明原样本中有病毒核酸 D．相对于传统手段，ddPCR更加灵敏，更容易检测出微量病毒 十五、原位PCR 20．（22-23高二下·江苏徐州·期中）原位PCR技术是利用原位PCR仪，在组织或细胞中靶DNA所在的位置上进行的PCR循环扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。进行扩增时，反应体系中的反应成分需渗透到组织或细胞的靶DNA处才能进行扩增。PCR反应体系中需要添加一定浓度的Mg2+，而组织细胞间的物质会吸附Mg2+，使进入细胞的Mg2+减少。下列说法错误的是（    ）（多选） A．原位PCR技术需要从患者细胞中选择耐高温的DNA聚合酶 B．原位PCR反应体系中使用的Mg2+浓度要比常规PCR高 C．反应体系中引物引物中G、C碱基含量越高，其退火温度越低 D．反应体系中子链的合成需要从模板链的5'端向3'端进行延伸 高三一轮复习专题题型 PCR技术类型 1．D 【详解】A、增加模板DNA的量可以提高反应速度，但不能有效减少非特异性条带，A错误； BC、延长热变性的时间和延长延伸的时间会影响变性延伸过程，但对于延伸中的配对影响不大，故不能有效减少反应非特异性条带，BC错误； D、非特异性产物增加的原因可能是复性温度过低会造成引物与模板的结合位点增加，故可通过提高复性的温度来减少反应非特异性条带的产生，D正确。 2．B 【详解】A、不同的病原体的碱基序列是不同的，因此需要根据病原体的碱基序列设计不同的特异性引物和荧光探针，A正确； B、图中b是PCR反应的延伸过程，该过程中发生合成子链的过程，B错误； CD、科研人员在常规PCR基础上发展出同时检测多种病原体的多重PCR技术，由图c可知，多重PCR同时完成对（A、B、C、D）4种病原体的检测，实验组中B、C、D的剩余探针荧光强度与阴性对照组相似，说明该检测样品中没有B、C、D病原体的核酸，实验组中A的剩余探针荧光强度与阴性对照组不同，说明该检测样品中有A病原体的核酸，CD正确。 3．A 【详解】A、常规PCR的退火温度固定在55℃，而降落PCR的前10个循环中退火温度从65℃逐步降至55℃，后续25个循环保持在55℃，可知降落PCR初始退火温度较高，提高了引物与模板的特异性结合，减少非配对产物的积累，A正确； B、退火（复性）目的是使引物结合到互补链DNA上，常规PCR的退火温度过低会导致引物与非目的基因结合，从而产生非特异性产物，B错误； C、由题干信息，不能比较降落PCR和常规PCR循环次数的多少，C错误； D、每形成一个DNA需要2个引物，降落PCR的35个循环过程，会产生235个DNA，其中235-1个DNA是新合成的，因此一共消耗引物的个数为（235-1）×2=236－2，D错误。 4．AB 【详解】A、由于非特异性产物中有与引物发生配对的序列，故可以在以后的循环中继续扩增，不断积累，A正确； B、题干给出热启动PCR 是在温度达到70°C以上才添加Tag DNA聚合酶，可以减少PCR反应前即起始时的引物错配，前期没有DNA聚合酶是不会形成产物的，B正确； C、热启动过程双链DNA与引物结合前需先解开双链，C错误； D、PCR反应中温度的周期性改变是由变性、复性和延伸时所需要的温度不同，D错误。 5．BD 【详解】A、为了使两轮PCR反应在同一支试管中进行，引物设计时应考虑不同的退火温度，第二轮PCR的退火温度应该比第一轮高，A错误； B、若要使得目的基因可以表达出蛋白质，则需要在产物上具备启动子和终止子，诱导基因转录和翻译，B正确； C、第一轮产物作第二轮PCR扩增的大引物外，第二轮PCR仍需加入的引物是另一种侧翼引物，以便进行另一条链的延伸，C错误； D、欲将某功能蛋白的第17位Cys（UGU）改造成Ser（UCU），应将诱变引物设计包含-AGA-或-TCT-序列，该过程属于蛋白质工程技术范畴，D正确。 6．AD 【详解】A、在PCR1中，需要两种引物，将来在切取IKKβ基因时，需要在基因的左侧用限制酶HindⅢ来切割，在基因的右侧用限制酶SacI来切割，因此在该基因的左端应有限制酶HindⅢ识别的序列，在基因的右端应有限制酶SacI识别的序列，因此在PCR1中结合到基因右端的引物序列从5′到3′端的开始部位应含有限制酶SacI识别的序列，所以要用到引物C，从题图中看，另一个引物从5′到3′端的序列中开始部位应含有突变碱基C，所以要用到引物A，A正确； B、在PCR2中，有一个引物结合到了基因的左端，在它从5′到3′的序列的开始部位应含有限制酶HindⅢ识别的序列，所以要用到引物B，而另外的一个引物就是大引物中的一条链，它应该结合到基因的右端，且从5′到3′端的序列中开始部位应含有SacI识别的序列，从图中看，它是大引物的b链，B错误； C、PCR1过程主要是为了获得大引物a、b，则扩增2轮即可获得目标产物，C错误； D、由于大引物较长，含C与G的碱基较多，为减少非目标基因的获得，在PCR2复性过程中应适当提高退火温度，便于引物与模板链的结合，D正确。 7．D 【详解】A、巢式PCR中加入的组分与常规PCR相同，包括5种基本成分，依次为：引物、DNA聚合酶、dNTP（原料）、模板DNA、Mg2+，但扩增产物比常规PCR特异性更强，A正确； B、巢式PCR通过两轮PCR反应，使用两套引物扩增特异性的DNA片段，第二对引物的功能是特异性的扩增位于首轮PCR产物内的一段DNA片段。第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在内引物的存在下进行第二轮扩增，从而提高反应的特异性获得的产物特异性更强，B正确； CD、内引物扩增的模板是外引物扩增后的产物，第二阶段反应能否进行，也是对第一阶段反应正确性的鉴定：如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率减小，C正确，D错误。 8．ABC 【详解】A、通过PCR1能得到大量产物AB，该过程需要加入引物a、b，同时，通过PCR2能得到大量产物CD，该过程需要引物c、d，PCR1和PCR2必须分两个系统进行，不能在同一个系统里面，否则引物b、c之间发生碱基互补配对将导致扩增失败，即不在一个系统里面进行的目的是防止两种引物在扩增时进行碱基互补配对，失去作用，A错误； B、通过PCR2能得到产物CD至少经过2次DNA的复制，因为第一次复制获得的子代DNA带有模板链，而第二次复制就能产生图中CD类型的DNA片段，B错误； C、结合图示可以看出，AB上链和CD下链在突变位点处的碱基序列互补，能起到引物b、c的作用，因此不需要另加引物，C 错误； D、引物的方向是5'→3'，所以根据诱变基因单链的3'→5'方向来设计引物a和引物d，D正确。 9．BD 【详解】A、通过PCR1获得产物AB需要进行3轮PCR扩增，A错误； B、AB下链的延伸方向向左，CD上链的延伸方向向右，所以无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD，B正确； C、需要分别在不同的反应体系中通过PCR获得AB和CD，C错误； D、获取目的基因后，下一步就是要让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时，使目的基因能够表达和发挥作用，这就需要构建基因表达载体。基因表达载体需要有复制原点、启动子、终止子、标记基因和目的基因，其中复制原点能保证目的基因在宿主细胞种复制，启动子和终止子保证了目的基因在受体细胞中正常转录。D正确。 10．C 【详解】A、分析题图可知，①是由RNA形成单链DNA的过程，为逆转录过程，催化该过程的酶是逆转录酶，②是以单链DNA合成双链DNA的过程，是DNA分子复制过程，催化该过程的酶是DNA聚合酶，A错误； B、③是变性，在高温条件下，DNA的双链打开，不需要酶的参与，⑤过程为延伸，所需的酶为Taq酶，该酶具有耐高温特性，B错误； C、杂交双链中由于碱基互补配对原则，嘌呤数量一定等于嘧啶数量，C正确； D、④过程需要冷却至55°C左右，延伸是在70~75°C左右，D错误。 11．AD 【详解】A、图中①过程是逆转录过程，该过程需要逆转录酶的催化，此外还需扩增缓冲液等，A正确； B、经逆转录得到的单链cDNA中不含内含子等非转录区段，故过程②形成的双链cDNA中也不含内含子，B错误； C、过程③中，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3端开始延伸DNA链，即子链沿着模板链的3′→5′方向延伸，C错误； D、RT－PCR是将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增相结合的技术，可应用于是否被RNA病毒感染的检测，D正确。 12．AD 【详解】A、探针是一段与模板DNA互补配对的片段，可以设计与目的基因任意一条链的碱基配对的TaqMan探针，A正确； B、荧光强度是反应之前就设定好的，反应后期荧光强度不再增加，可能是因为探针耗尽，B错误； C、荧光强度达到设定的阈值所需的循环数越少，说明待测样品中目的基因的含量越多，因此排序是1＞2＞3＞4＞5＞6，C错误； D、mRNA逆转录可以得到cDNA，检测cDNA的含量，可以检测转录的量，D正确。 13．ABC 【详解】A、切割M和N时选用的限制酶要保证产生相同的黏性末端，可以选相同的酶，也可以是不同酶，A正确； B、环状DNA分子没有游离的磷酸基团，B正确； C、PCR过程需要两种引物，能分别与目的基因两条链的3＇端通过碱基互补配对结合，为保证延伸的是已知序列两侧的未知序列，应该选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对，C正确； D、PCR的扩增只需要第一次循环前加入足够的限制酶，并不需要每轮都加入，D错误。 14．CD 【详解】A、DNA子链合成的方向为5'端到3'端，因此要通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增应选择引物1和引物4进行PCR扩增，A正确； B、G-C碱基含量越高，碱基对间氢键的含量越多，复性时的温度越高，B正确； C、PCR产物是包含所有已知序列和未知序列的链状DNA分子，扩增产物还需要经过限制酶切割后再用DNA连接酶连接才能形成环状，C错误； D、整个过程需用到限制酶、DNA连接酶和耐高温DNA聚合酶，不需要逆转录酶，D错误。 15．AC 【详解】A、要制备表格中的单链DNA，引物2为限制性引物，引物1为非限制性引物，应为它可以与表格中的单链DNA的互补链结合，从而扩增单链DNA，A正确； B、扩增形成的产物是一样的，所以延伸时间不变，B错误； C、模板链不需要引物，所以限制性引物至少需（210-1）a个，C正确； D、前10次循环的产物为双链DNA，DNA进行半保留复制，10次循环结束后产生a·210个双链DNA分子，最初需要添加非限制性引物（引物C）的数量为（210-1）a，后20次循环以前10次循环的DNA产物的一条链为模板（前10次扩增后该链共有n·210），所以此过程需要非限制性引物（引物C）个数为n·210·20个，因此此过程需要非限制性引物个数为（210-1）a+a·210·20=（210×21－1）a，D错误。 16．B 【详解】A、DNA一条链中的G和C是通过脱氧核糖-磷酸-脱氧核糖相连的，不形成氢键，A错误； B、若DNA未发生甲基化，亚硫酸盐处理后，CpG岛中的C全部变为U，设计引物时不含有G，若DNA发生甲基化，则甲基化部位依然为C，设计引物时需含有G，B正确； C、甲基化发生子启动子区域，启动子是与RNA聚合酶结合部位，影响转录，C错误； D、用primerI得不到扩增产物，primerII得到扩增产物，说明未发生甲基化，D错误。 17．A 【详解】A、根据题意，只能判断胃癌的发生可能与E-cadherin基因启动子的甲基化修饰有关，无E-cadherin基因的碱基序列改变能导致胃癌发生的相关信息，A错误； B、E-cadherin基因的启动子发生甲基化后，会影响DNA的转录，所以可能影响RNA聚合酶与之结合，B正确； C、由图可知，与正常对照组相比，早期胃癌和进展期胃癌中，甲基化特异性PCR检测结果不同，说明早期胃癌和进展期胃癌中，E-cadherin基因的启动子均存在甲基化修饰，C正确； D、由题干信息可知，E-cadherin基因与肿瘤转移相关，进展期胃癌中E-cadherin基因表达产物的减少可能加速癌细胞的转移，D正确。 18．C 【详解】A、流程中共发生 两次 抗原与抗体的结合：首先将抗体1固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，此处发生第一次抗原与抗体的结合（抗生素与抗体1的结合），再加入DNA标记的抗体2，抗体2与抗生素进行第二次抗原与抗体的结合，A错误； B、据图可知，抗生素和抗体1可以结合，抗体2也可与抗生素进行结合，此后进行PCR扩增并PCR检测，若电泳检测到目标条带，则表明牛乳中有抗生素，B错误； C、第三次冲洗是为了去除未结合的游离抗体2，避免其后续PCR扩增产生假阳性信号，C正确； D、免疫PCR放大的是 DNA标记信号（通过PCR扩增），而非直接放大抗原本身，D错误。 19．B 【详解】A、PCR是一项体外扩增DNA分子的技术，新冠病毒的遗传物质是RNA，故新冠病毒样本在进行ddPCR检测时，需要先进行逆转录处理得到DNA，A正确； B、由于核酸分子无法肉眼观察到，即使某个孔中不含核酸分子也无法得知，故为避免有遗漏，每个多孔板中都需要加入引物和Taq酶，最终通过阳性反应进行鉴定，B错误； C、阳性结果意味着有核酸分子能与试剂发生碱基互补配对，故检测时只要有一个孔出现阳性结果，就可以说明原样本中有病毒核酸，C正确； D、相对于传统手段，ddPCR在每个孔中含有少量核酸的条件下即可检测，故更加灵敏，更容易检测出微量病毒，D正确。 20．ACD 【详解】A、耐高温的DNA聚合酶是从自然界热泉环境中提取的，而非来源于患者细胞，A错误； B、据题可知，PCR时组织细胞间的物质会吸附Mg2+，使进入细胞的Mg2+减少，因此原位PCR反应体系中使用的Mg2+浓度要比常规PCR高，B正确； C、G-C之间有3个氢键，反应体系中引物的G、C碱基含量越高，DNA稳定性越强，其退火温度越高，C错误； D、反应体系中模板与引物结合后，在DNA聚合酶作用下子链沿从5′端向3′端方向进行延伸反应，D错误。 学科网（北京）股份有限公司 $