内容正文:
真题大数据
考点 核心知识 考频 年份与卷别
基因工程 单克隆抗体及其应用 10次 2025:湖南卷、河北卷、黑吉辽蒙卷、安徽卷
胚胎工程 24次 2025:山东卷、广东卷、河北卷、黑吉辽蒙卷、江苏卷、安徽卷、陕晋宁青卷
限制性内切核酸酶与DNA连接酶 25次 2025:山东卷、河北卷、黑吉辽蒙卷、江苏卷、陕晋宁青卷、河南卷
PCR 33次 2025:山东卷(2)、湖南卷(2)、河北卷(3)、黑吉辽蒙卷、江苏卷、安徽卷、浙江第一次卷、陕晋宁青卷、河南卷
基因表达载体的构建 25次 2025:山东卷、湖南卷(2)、浙江第一次卷、陕晋宁青卷
2.重组DNA技术的基本工具
限制性内切核酸酶
来源:主要是原核生物
作用:识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开
结果:形成黏性末端或平末端
考点2 基因工程
DNA连接酶
作用:将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子
考点2 基因工程
基因进入受体细胞的载体
作为载体的条件
能自我复制
有切割位点
有遗传标记基因
对受体细胞无害、易分离
种类
质粒 噬菌体 动植物病毒
在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行人工改造的
质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞核和原核细胞拟核DNA之外,并具有自我复制能力的环状双链DNA分子
考点2 基因工程
3.基因工程的基本操作程序
目的基因的筛选与获取
从基因文库中寻找
多聚酶链式反应(PCR)扩增
化学合成法
目的基因的核苷酸序列未知
目的基因的核苷酸序列已知
初始目的基因的来源
1. 从生物中直接获取
2. 人工合成
注意:要保持基因的完整性
考点2 基因工程
基因表达载体的构建
组成
目的基因
启动子,位于基因的上游。是DNA聚合酶识别和结合位点
终止子,位于基因的下游,使转录在特定的位点停止
标记基因,鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而筛选出含有目的基因的细胞
考点2 基因工程
过程
用一定的限制酶切割质粒,使其出现一个切口
用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段
利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处,形成一个重组DNA分子
考点2 基因工程
将目的基因导入受体细胞
农杆菌转化法的过程
将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA上
用农杆菌侵染植物细胞
将目的基因整合到植物细胞染色体的DNA上
目的基因表达
方法
导入植物细胞
导入动物细胞
导入微生物细胞
农杆菌转化法
花粉管通道法
——显微注射法
——感受态细胞
考点2 基因工程
目的基因的检测与鉴定
考点2 基因工程
4.PCR
条件
解旋酶
DNA母链
4种脱氧核苷酸
DNA聚合酶
引物
过程
变性:90 ℃以上
复性:50 ℃左右
延伸:72 ℃左右
考点2 基因工程
5.蛋白质工程
概念
以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系为基础,通过改造与合成基因,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需要
蛋白质工程和基因工程的区别与联系
考点2 基因工程
应考基础训练
1.下列关于基因工程的叙述,正确的是( )
A.因动植物间存在生殖隔离,故动物细胞的基因不可以用于改良植物的遗传性状
B.目的基因和受体细胞均可来自动物、植物和微生物
C.若检测培育的抗虫棉花是否成功,可用相应的病菌侵染棉花植株进行个体水平的鉴定
D.载体上的抗性基因有利于检测目的基因是否插入受体细胞的染色体上
2.下列有关基因工程的叙述正确的是( )
A.基因工程的步骤首先是将提取的目的基因与运载体结合
B.限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶都是基因工程的工具酶
C.限制酶将一个DNA片段切成两个片段需要消耗两个水分子
D.基因工程是在细胞水平对生物体的遗传性状进行定向改造
B
C
3.如图为基因表达载体的模式图,下列叙述错误的是( )
A.构建基因表达载体需要用到限制酶和DNA连接酶
B.终止子位于基因的下游,使翻译在所需要的地方停止下来
C.转化成功后可使目的基因在受体细胞中稳定存在, 并遗传给下一代
D.抗生素抗性基因作为标记基因,可检测受体细胞中是否导入了目的基因
B
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