内容正文:
专题二 精液品质的检查(二)
[考纲要求]
(1) 了解:与畜禽精液检查相关的生物技术和仪器设备,包括显微镜、精子质量分析仪等。。
(2) 掌握:畜禽精液检查的基本原理和方法。
(3) 理解:精液检查在畜禽繁殖中的重要性和应用,包括提高受胎率、防治繁殖障碍等。
[课时安排]
2课时
[知识梳理]
任务三:精子密度检查
精子密度的大小直接影响精液稀释倍数与输精剂量的有效精子数,也是评定精液品质优劣的重要指标之一。品质好的精液,精子密度大; 品质差的精液,精子密度小。精子密度测定方法有估测法和血细胞计数法。
一、估测法
取1滴原精液滴在载玻片上,盖上盖玻片,放在400~600倍显微镜下观察,按其稠密程度划分为“密” “中” “稀”三个等级。
“密”:精子布满整个视野,精子之间的空隙小于一个精子的头长,难以看清楚单个精子的活动情况。
“中”:精子在视野中比较分散,精子彼此之间的距离约与一个精子的头长相等,可以看清楚精子的活动情况。
“稀”:视野中只能看到分散的少数精子,精子之间的空隙很大。
在生产中,通常将精子活力和精子密度同时进行检查,然后进行综合评定。牛、羊精液中副性腺分泌物少,精子密度大,因此要求精液达到“密”0.6级(即精子密度为“密”,精子活力为0.6级) 、 “中”0.8级以上,才能作为合格精液。猪精液中副性腺分泌物多,精子密度小,因此要求精液应达到“中”0.6级、 “稀”0.8级以上,才能作为合格精液。
二、血细胞计数法
血细胞计数法可以准确地测定每毫升精液中所含有的精子数。计数时,先用血细胞吸管稀释精液,牛、羊等精子密度高的精液,用红细胞吸管稀释成100~200倍液。猪等精子密度低的精液,用白细胞吸管稀释成20倍液。稀释液用3%氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数。其操作方法如下。
1.将血细胞计数板、盖玻片冲洗干净并晾干,置于显微镜载物台上,盖好盖玻片备用。
2.用吸管吸取精液至所需刻度(0.5或1) ,接着用原吸管吸取稀释液至11(白细胞吸管) 或101(红细胞吸管) 的刻度上 ,用拇指和食指分别按压吸管两端,充分摇振,使之混合均匀。
3.弃去吸管前端1-2滴,再滴1小滴于盖玻片与计数板之间的空隙边缘,使精液自动渗入计数室。注意不要使精液溢出盖玻片外,计数室不应有气泡或干燥之处。如有这些现象,必须重做。
4.置于400-600倍显微镜下,统计四角及中央5个中方格,即80个小方格内的精子数,头部压线的精子应遵循“数上不数下,数左不数右”的原则,避免重复与遗漏。
5.计数:
1mL精液的精子总数=5个中方格的精子数×5(计数室有25个中方格)×10(1mm³计数室高度为1/10mm) ×1000(1mL=1000 mm³) ×稀释倍数
为了计算简便、快速,在算出的5个中方格精子总数后面加“0”,稀释20倍加6个“0” , 稀释200倍加7个“0” 。
精子数要求计算两次,如果两次结果相差10%以上,则需重做第三次,取两次误差不超过10%的数字求出平均值。
练一练
1.测定精子密度时,用于杀死精子便于计数的稀释液是( )。
A. 生理盐水
B. 3% 氯化钠溶液
C. 95% 酒精
D. 亚甲蓝
【答案】B
【解析】稀释液用 3% 氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数。
2.牛羊等精子密度高的精液,稀释时应选用的吸管是( )。
A. 移液枪
B. 滴管
C. 红细胞吸管
D. 白细胞吸管
【答案】C
【解析】牛、羊等精子密度高的精液,用红细胞吸管稀释成 100-200 倍液。
3.精子计数时,头部压线的精子应同时计数上下或左右压线的,避免遗漏。( )
【答案】错误
【解析】头部压线的精子应遵循数上不数下,数左不数右的原则。
任务四:精子畸形率检查
一、畸形精子的种类
畸形精子又称变态精子,是指精液中形态不正常的精子 。在精液中如果发现大量畸形精子,说明精子在生长过程中受到破坏。畸形精子过多,精液品质就会下降,对受胎效果影响极大。畸形精子一般分为以下几类。
1.头部畸形包括头巨大、瘦小、双头、顶体脱落等。
2.断裂包括颈部断裂、尾部断裂等。
3.双头、双尾、尾部弯曲等。
4.带有原生质滴。
二、畸形精子测定方法
1.涂片:
将1滴精液样本(牛、羊的精液可预先在载玻片上滴加生理盐水进行稀释,牛的精液按1:5稀释,羊的精液按1:10稀释,并混合均匀)滴于干净的载玻片一端,用另一载玻片置于精液滴上,使精液充满载玻片的边缘,以30°角平稳向前推进,使精液均匀涂抹于载玻片上,制成抹片,但不宜过厚。
2.固定: 用95%酒精浸泡2-3min进行固定。
3.染色:置于纯蓝墨水或亚甲蓝中染色2-3min。
4.冲洗:用蒸馏水缓慢冲洗染料,自然风干。
5.镜检:置于400~600倍显微镜下检查300-500个精子,记录精子总数、畸形精子数目,然后代入公式计算精子畸形率。
精子畸形率计算公式( 结果取整数) :
R=A₁÷A×100
式中:
R: 精子畸形率, %; A₁:畸形精子数,单位为个;A:正常精子数,单位为个。
二、畸形精子测定方法
品质优良的精液,牛、猪精子畸形率不超过18%,羊不超过14%。各种家畜的精子畸形率均不应超过20%,超过20%,不宜用作输精。
练一练
1.精子畸形率检查中,用于固定精液涂片的试剂是( )。
A. 3% 氯化钠溶液
B. 生理盐水
C. 95% 酒精
D. 纯蓝墨水
【答案】C
【解析】用 95% 酒精浸泡 2-3min 进行固定。
2.两次精子计数结果的误差超过( )时,需重做第三次。
A. 5%
B. 10%
C. 15%
D. 20%
【答案】B
【解析】如果两次结果相差 10% 以上,则需重做第三次。
3.精子畸形率是畸形精子数与正常精子数的百分比。( )
【答案】正确
【解析】精子畸形率是畸形精子数与正常精子数的百分比。
[真题练讲]
1.(单选题)估测法评定精子密度时,“中” 级的标准是( )。
A. 精子布满视野,空隙小于一个精子头长
B. 精子分散,距离约一个精子头长,能看清活动
C. 视野中少数精子,空隙大
D. 精子活力 0.6 级以上
【答案】B
【解析】“中” 级定义为 “精子在视野中比较分散,精子彼此之间的距离约与一个精子的头长相等,可以看清楚精子的活动情况。
2.(单选题)血细胞计数法测定精子密度时,需统计的中方格数量是( )。
A. 4 个
B. 5 个
C. 25 个
D. 80 个
【答案】B
【解析】统计四角及中央 5 个中方格,即 80 个小方格内的精子数。
3.(单选题)公猪精液采用血细胞计数法稀释时,应选用的吸管是( )。
A. 红细胞吸管
B. 白细胞吸管
C. 滴管
D. 移液枪
【答案】B
【解析】猪等精子密度低的精液,用白细胞吸管稀释成 20 倍液。
4.(单选题)牛羊精液进行畸形率检查涂片时,羊精液的稀释比例是( )。
A. 1:5
B. 1:10
C. 1:20
D. 1:100
【答案】B
【解析】牛的精液按 1:5 稀释,羊的精液按 1:10 稀释。
5.(判断题)血细胞计数法中,滴加精液时若计数室有气泡,可继续计数,无需重做。( )
【答案】错误
【解析】计数室不应有气泡或干燥之处。如有这些现象,必须重做。
[限时练习]
1.(单选题)公牛精液采用血细胞计数法稀释时,精液应吸至的刻度及稀释倍数分别是( )。
A. 0.5,200 倍
B. 1.0,100 倍
C. 0.5,20 倍
D. 1.0,200 倍
【答案】B
【解析】公牛 精液应吸至刻度 1.0,3% 氯化钠应吸至刻度 101,稀释倍数 100。
2.(单选题)计算 1mL 精液精子总数时,计数室高度对应的换算系数是( )。
A. 5
B. 10
C. 1000
D. 稀释倍数
【答案】B
【解析】计算 1mL 精液精子总数时,计数室高度对应的换算系数是10。
3.(判断题)畸形精子包括头部畸形、断裂、双头双尾、带有原生质滴等类型。( )
【答案】正确
【解析】畸形精子包括头部畸形、断裂、双头双尾、带有原生质滴等类型。
4.(判断题)稀释 20 倍的精液,计算精子数时在 5 个中方格精子总数后加 6 个 “0”。( )
【答案】正确
【解析】稀释 20 倍的精液,计算精子数时在 5 个中方格精子总数后加 6 个 “0”。
5.(判断题)精子畸形率超过 20% 的精液,仍可用于输精。( )
【答案】错误
【解析】各种家畜的精子畸形率均不应超过 20%,超过 20%,不宜用作输精。
[内容小结]
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