生物技术与工程带着问题去读书-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3

该高中生物学选修3学习任务单聚焦发酵工程、植物细胞工程、动物细胞工程、基因工程及生物技术伦理等核心模块，以问题链串联概念原理与实验操作，从基础定义（如发酵工程、无菌技术）到实验流程（如培养基配制、灭菌方法），再到技术应用（如单克隆抗体制备、转基因技术），构建递进式学习支架。 任务单突出问题驱动与实验细节深度融合，通过对比分析（如消毒与灭菌区别）、实验逻辑辨析（如斜面与平板培养基操作差异）强化科学思维，结合发酵条件控制、原生质体融合等探究实践培养操作能力。习题紧扣教材页码，注重细节辨析与原理应用，助力学生构建结构与功能观等生命观念，树立生物技术安全的态度责任，提升学习效率。

❥带着问题去读书———选修3 第一章 发酵工程 第一节 1. 什么是发酵工程？P2 2. 什么是无菌技术？P3 3. 什么是培养基？P3 4. 培养基可以为微生物提供什么？生存环境和营养物质 5. 培养基的成分中应包含什么？P4 6. 培养基中的各成分分别具有什么作用？P3 备注：碳源可以分为无机碳和有机碳，若是有机碳除了提供碳元素，还可以提供能量 7. 以无机碳作为碳源的生物称为？有机碳作为碳源的生物称为？ 自养型生物（生产者）；异养型生物（次级生产者） 8. 自养型生物都能进行光合作用吗？ 不是，如硝化细菌能进行化能合成作用，把无机物变成有机物 9. 固氮菌的氮源是？氮气。固氮菌都是自养型生物吗？不是 10. 蛋白胨/酵母提取物/牛肉膏可以为微生物的生长提供？ 碳源、氮源、生长因子 11. 细菌和霉菌对培养基中的pH的要求通常为？P4 12. 霉菌是真菌还是细菌？真菌 13. 按照物理特征，培养基可以分为？两者的区别是？ 14. 液体培养基、平板、斜面培养基分别具有什么作用？P4 备注：斜面培养基的作用是保存菌种 15. 培养基配制的一般步骤？ 计算→称量→溶化→调pH→分装→灭菌 16. 斜面培养基和平板培养基在上述操作中的区别是？为什么？ 斜面先分装再灭菌，平板先灭菌再分装；平板培养基的容器是培养皿，分装过程中不易被 杂菌污染，且若先分装灭菌时容易因为高温导致培养基沸腾溢出，斜面培养基的容器是试 管，恰好相反。 17. 配制培养基需要用无菌水吗？书本上有哪些情况需要用到无菌水？ 不需要；配制菌悬液、稀释菌液、外植体消毒后冲洗等 18. 培养酵母菌的培养基是？培养植物主要要用到的培养基是？培养细菌时通用培养基是？ 马铃薯蔗糖培养基；MS培养基；LB培养基 19. 消毒和灭菌的区别？P7 20. 消毒的方法有哪些？一般用于？ 75%酒精：操作者的手，超净工作台的台面； 75%酒精+10%NaClO/0.1%HgCl：外植体 紫外线：操作间，超净工作台 21. 灭菌的方法有哪些？一般用于？ 高压蒸汽灭菌：培养基，各种器材等 灼烧灭菌：接种环 过滤灭菌：尿素 22. 加热和紫外线消毒的原理是？P5 23. 获得微生物“纯培养物”的基础是？P5 24. 什么是芽孢？具有什么特点？P6 25. 高压蒸汽灭菌的条件？什么时候开始计时？P6 26. 灭菌后的操作最好在哪里进行？使用前需要对其如何处理？P6 27. 什么是接种？接种的工具有？接种前分别如何灭菌？ 第二节 1. 分离和纯化目标微生物的方法？P11 2. 什么是单菌落？P11 3. 什么是平板划线法？用到的接种工具是？P11接种工具接种前应？P8灼烧灭菌并冷却 4. 多次连续平行划线过程中需要蘸取菌液几次？灼烧接种环几次？每次灼烧的目的是？ 每次划线从哪里开始？如果某个区域未出现菌落，原因可能是？ 1次； 划线次数+1。第一次灼烧（取菌种前）：杀死接种环上原有微生物，避免接种环上可能存在的微生物污染菌种；以后每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端；划线结束灼烧：及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者 接种前接种环未冷却或未从上一划线区域末端开始 5. 平板划线发法获得单菌落的原理？P12 6. 稀释涂布平板法获得单菌落的操作过程？该过程中取多少体积菌液接种？接种工具是？P12接种工具接种前应？P8 7. 获得单菌落后，如何选取目标微生物？P12 8. 取1g土壤加入99mL无菌水中制成菌悬液，稀释倍数为？取1mL菌悬液加入9mL无菌水？ 100倍；10倍 9. 接种、培养并分离酵母菌以空白培养基作为对照的目的？ 检验培养基灭菌是否彻底以及操作培养过程中有无杂菌污染 10. 什么是倒平板？ 即制作平板：p14； 倒平板时能将皿盖放在桌面上吗？ 不能 11. 测定微生物数量的方法？哪一种更适合活菌计数？哪一种方法直接对菌体进行计数？哪个统计结果偏小？为什么？哪个偏大？为什么？ 稀释涂布法和显微镜计数法； 稀释涂布法；显微镜计数法； 稀释涂布法结果偏小,原因当两个或多个细胞连在一起时，平板上只能观察到的只是一个菌落； 显微镜计数法结果偏大，死菌也被计入 12. 使用稀释涂布法时如何减小估算误差？P15 13. 稀释涂布法如何计算稀释前原菌液的浓度?p15 平均菌落数➗ 0.1×稀释倍数 14. 显微镜计数法要用到哪些器材？P15 15. 一个血细胞计数板中有几个计数区？每个大方格的面积为？中央平台比两侧低多少？所以盖玻片下每个大方格内的液体体积为？大方格又被分为几个中方格？每个中方格又被分为几个小方格？所以一个大方格中总共有几个小方格？P16 16. 计数区大方格内的小方格为计数提供了方便，但总计400个小方格的计数工作量较大，此时应依据统计学的什么原则进行取样来统计酵母菌的细胞数？如果总共有25个中方格，可以采用什么方法进行计数？此时，仍满足随机取样的原则吗？P17 17. 显微镜计数法如何计算菌液浓度？ 酵母细胞数个/ml=大方格中细菌数量（若为五点取样法，可以通过5个中方格中统计的细胞总数数➗5×25计算得到）➗ 0.1mm3（大方格中菌液体积）×1000×稀释倍数 18. 为了避免重复计数，应遵循什么计数原则？P18 19. 用显微镜进行酵母细胞计数时，应先将专用的盖玻片盖在计数板上，还是先滴加菌液？ 滴加菌液时要注意什么问题？菌液滴加前要进行什么操作？P17 20. 什么是选择培养基？比如？P19 21. 如何分离能够分解尿素的细菌？它们的直接氮源是？如何鉴定培养基中的菌落为尿素分解菌？P19. 若菌落周围未出现红色区域，可能是由于什么原因？ 该菌落中的细菌可能为固氮菌或直接吸收利用尿素的细菌。 22. 将接种后的平板培养基倒置培养的目的？（注意：这不叫倒平板） 防止冷凝水滴入培养基，影响单菌落的形成。（个别答案里还会出现防止污染，也算对，但自己回答时，前面这个目的一定要写） 第三节 1. 酵母菌的代谢类型？利用酵母菌酿酒的原理？ 异养兼性厌氧型；酵母菌在无氧条件下，通过厌氧呼吸，将葡萄糖氧化为乙醇和二氧化碳。 2. 醋酸杆菌的代谢类型？酿醋的原理？ 异养需氧型； 原理：02和糖源充足：C6H12O6+O2 → 2CH3COOH(醋酸)+2CO2+2H2O 缺少糖源：C2H5OH(酒精)+O2 → CH3COOH(醋酸)+H2O 注意：无气体生成 3. 酿酒和酿醋在环境条件上的区别？发酵过程中的pH如何变？ 酿酒初期通入少量氧气或留存少量空气，发酵过程中保持无氧，温度一般为25摄氏度左右， 酿醋时需通入氧气，温度要更高一点； 两者发酵过程中pH均会变小 4. 酿酒过程中，用凡士林密封吸管与小洞的连接处的目的？ 防止杂菌和氧气进入 5. 吸管的作用？ 排出CO2 6. 将吸管插入水中的目的？ 防止氧气进入 7. 发酵初期，水少量进入吸管的原因？ 发酵初期，酵母菌需要呼吸消耗氧气，释放的CO2又易溶于水中，瓶内出现负压 8. 将葡萄洗净的目的？能否揉搓？为什么要摘除腐烂的葡萄？ 洗去灰尘和农药；但不能揉搓，防止挤碎葡萄被杂菌污染；腐烂的葡萄中含有较多杂菌 9. 晾干后，放入发酵瓶前将葡萄挤碎的目的？可以榨汁代替吗？为什么葡萄一般连皮放入？ 放入前挤碎的目的使酵母菌与葡萄中的糖分充分接触；可以榨汁代替；葡萄皮上含有酵母菌。 10. 放入葡萄的体积为什么不要超过矿泉水瓶的1/2？ （1）为初期酵母菌繁殖提供氧气； （2）可暂时储存发酵过程中产生的CO2，防止因为大量气泡的产生导致液体外溢而引起发酵液损失和瓶口等处污染杂菌污染，影响产物品质 11. 可以通过什么方法提高酒精产量？ 添加白糖/蔗糖 12. 加入糖越多，酒精含量越高吗？ 不会，酒精浓度达到一定值会杀死酵母菌 13. 为什么1号矿泉水瓶中要加入干酵母？干酵母用温水调匀的目的? 使酵母菌迅速繁殖成为优势菌，抑制杂菌生长; 使用温水调匀的目的：促进干酵母活化 14. 酒精发酵停止的标志？ 不再产生气泡 15. 醋酸发酵时，在矿泉水瓶上戳一个小洞的目的？为什么要置于温暖的环境中？ 醋酸发酵需要氧气；醋酸发酵所需要的温度高于酒精发酵 16. 为了制出果醋，为什么要选取酒味较重的一瓶果酒通入空气? 酒精是醋酸发酵的原料 17. 乳酸菌的代谢类型为？泡菜腌制的原理？ 异养厌氧性；C6H12O6→2C3H6O3(乳酸) 18. 腌制泡菜前，将白菜和萝卜切成小块的目的？ 增大乳酸菌与营养物质的接触面积 19. 加入盐水的目的？ ①抑制杂菌；②调味 （浓度过高抑制乳酸菌自身繁殖；过低杂菌滋生繁殖） 20. 盐水没过蔬菜的目的？用水封住坛口的目的？ 形成无氧环境，促进乳酸发酵否则会有许多需氧腐生菌生长，蔬菜会腐烂变质 21. 对于新配制的泡菜原料，如果加入一些老泡菜汁，为什么可以缩短腌制时间？ 老泡菜汁中含有较多的发酵菌 22. 在泡菜腌制过程中，泡菜坛中冒出气体说明什么? 其他细菌（如酵母菌）发酵产生了气体 23. 发酵工程的基本流程？P31首要步骤（前提条件）是？选育菌种 24. 发酵工程中菌种的来源？ 自然界筛选/诱变育种/基因工程育种/原生质体融合 25. 选育的菌种需满足哪些条件？ 首先，应选择高产的菌种，使菌种的发酵产物中，需要的产物多、不需要的产物少; 其次，培养基来源充足且廉价，被转化的效率高; 第3， 菌种发酵产物易于分离; 第4， 菌种对环境没有明显或潜在的危害; 第5， 菌种的遗传特性和生产能力稳定。 26. 若发酵产物为细胞本身，分离的方法有？ 过滤、离心、沉淀 27. 若发酵产物为代谢产物，分离的方法有？ 真空发酵、吸附发酵、萃取发酵 28. 发酵工程与传统发酵的区别？ ①单一菌种发酵；②严格灭菌；③严格测量和控制发酵温度、pH、溶解氧等条件 29. 发酵工程主要利用的是哪类生物细胞？ 微生物 第二章 植物细胞工程 第一节 1. 什么是细胞工程？从生物类型上可以分为？基础技术分别是？P40 2. 什么是植物组织培养？P42理论基础是？P43 3. 什么是全能性？P43细胞具有全能性的原因？P43影响植物细胞全能性表达的因素有哪些？ 影响因素：（1）外界因素：离体；无菌；植物激素；营养物质；pH；温度等 （2）内部因素：植物的种类、同种植株不同基因型、同一植株的不同部位 （3）培养物的培养时间 4. 离体培养条件下，植物细胞全能性的表达需要通过什么过程实现？ 5. 什么是脱分化？P43 6. 什么是愈伤组织？P43 7. 什么是再分化？P43 8. 若以植物的茎尖或带芽的茎段为外植体进行培养时，发育成一株幼苗是否一定要经历愈伤组织阶段？当培养基中细胞分裂素浓度较高时，有利于形成？P43 9. 由愈伤组织再分化形成完整植株，有哪几条路径？具体的过程是？P43 10. 脱分化和再分化过程中所需要的条件有哪些区别？举例说明. 脱分化不需要光照，再分化需要光照；脱分化和再分化都需要植物激素（生长素和细胞 分裂素）但比例要求不同。 11. 植物组织培养需要什么样的条件？P44备注：前提条件：离体 12. 如何保证植物组织培养是在严格的无菌条件下进行的？P44-45 13. 外植体消毒的原因？P44如何消毒？P50 14. 培养基需要为植物组织培养提供哪些营养条件？P45 15. 为什么需要为植物组织培养提供有机碳？P45最常用的有机碳是？P45为什么？具体有什么作用？P45 选用蔗糖作为有机碳的原因是①蔗糖是植物体内糖类运输最主要的形式；②一般微生物以葡萄糖作为碳源，蔗糖作为碳源不容易引起杂菌污染 16. 在植物组织培养过程中，起到关键作用的物质是？P45 17. 生长素类和细胞分裂素类物质的比值大时，有利于形成？;比值小时，则促进形成？P45 18. 目前使用最广泛的植物组织培养基是？P46 19. 植物组织培养有哪些应用？P47 20. 利用植物组织培养技术繁殖植物有哪些优点？P47能否代替自然条件下的有性繁殖？为什么？ 优点：（1）繁殖速度快；（2）保持品种的优良性状 不能代替。原因：（1）导致遗传多样性降低；（2）长期培养后，植物细胞可能失去全能性表达能力 21. 获得脱病毒苗通常选用的外植体是？为什么？P47脱病毒苗抗病毒吗？不抗 22. 利用组织培养技术生产人工种子的优点？ （1）繁殖速度快；（2）保持优良性状 23. 利用组织培养技术工厂化生产细胞代谢产物时，需要将培养成完整植株吗？大体过程？ 不需要。具体过程：p53 24. 利用组织培养技术培育作物新品种的具体体现在哪些方面？P48 25. 利用植物组织培养筛选突变体的原理？P48 26. 单倍体育种获得的是单倍体吗？ 27. 组培获得的试管苗移栽前需要进行？如何操作？P51 28. 试管苗取出后，洗掉根部琼脂的目的？ 防止杂菌滋生 第二节 1. 植物体细胞杂交技术的基本流程？P56图2-25 2. 获得原生质体的具体方法？用到了哪些试剂？P56 3. 诱导植物原生质体融合的方法？P56原理是？与动物细胞融合的区别是？ 细胞膜具有流动性；不能用灭活的病毒诱导 4. 检测原生质体活性的方法是？ 染色法，胞质环流，测定细胞呼吸，渗透吸水失水等 5. 细胞融合成功/杂种细胞形成的标志是？为什么？植物体细胞杂交技术完成的标志是？ 再生出细胞壁；只有这样的细胞才能继续分裂；再生成杂种植株 6. 获得真正的杂种植株必要过程是？原因？P56 7. 植物体细胞杂交技术是哪两种技术的结合？P56因此该技术的原理/理论基础包括？ 8. 植物体细胞杂交技术的意义是？P57 第三章 动物细胞工程 第一节 1. 动物细胞工程常用的技术手段包括哪些？P62 2. 什么是动物细胞培养？P63 3. 动物细胞培养需要什么条件？P64 4. 为了创造更加稳定的适宜的环境条件，动物细胞一般放在哪里培养？P64 5. CO2培养箱的作用？含有CO2?空气？P64 作用：（1）维持温度 （2）维持pH （3）提供细胞呼吸所需的氧气 6. CO2培养箱为什么可以维持pH稳定？为此，在动物细胞培养过程中采用开放式培养，还是密闭式培养？P64 7. 动物细胞培养过程中，如何保持无菌、无毒的条件？P64 8. 动物细胞培养的培养基的基本成分包括？P65和植物组织培养基的区别？ 区别：（1）动物细胞培养基为液体培养基 （2）加入的糖类的为葡萄糖 （3）添加一定比例的血清或其他天然成分 9. 动物细胞培养一般包括哪两个过程？P65 10. 什么是原代培养？P65什么是传代培养？P66 11. 原代培养具体的操作过程？P65图3-2 12. 为什么要用胰蛋白酶处理？P65-66能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？不能 13. 体外培养的动物细胞往往具有什么特点？P66 14. 人体中哪些细胞为悬浮生长？P66 15. 动物细胞培养过程中，区分癌细胞和正常细胞的标志？P66 16. 为什么需要进行传代培养？P66 17. 对于贴附生长的细胞进行传代培养前需进行什么处理？P66 18. 什么是细胞克隆？最基本的要求是？P67 第二节 1. 什么是动物细胞核移植？利用该过程培育出来的动物叫？P70属于哪种生殖？无性 2. 动物细胞核移植技术利用的原理是？ 动物细胞核具有全能性。 3. 为什么胚胎细胞核移植成功率远高于体细胞？ 分化程度越高，细胞全能性的表达能力越低 4. “多莉”羊克隆的过程？P72 图3-10 5. “多莉”羊与核供体性状完全相同吗？ （1）核DNA来自核供体，质DNA来自核受体 （2）表型是基因和环境共同作用的结果 （3）个体发育过程中可能发生基因突变 5. 核移植过程中取核和将核植入去核卵细胞中常用的操作技术是？ 显微操作技术 6. 核移植技术的应用？P73 7. 核移植技术已经很完善了吗？P73 第三节 1. 什么是细胞融合？P77原理是？动物细胞融合常用的方法有？和植物细胞的原生质体融合的方法有什么区别？ 2. 传统获得抗体的方法？缺点？P79 3. 什么是单克隆抗体？ 4. 单克隆抗体制备流程？ 5. B淋巴细胞可以从小鼠的什么器官中获得？脾脏 6. 单克隆抗体制备过程中第一次筛选要用到什么培养基？原理是？P82-82 获得的杂交瘤细胞有什么特点？ 特点：既能产生抗体又能无限增殖 7. 单克隆抗体制备过程中第二次筛选需要经过哪些过程？获得的杂交瘤细胞具有什么特点？ 克隆培养、抗体检测；特点：既能产生特异性抗体又能无限增殖 抗体检测过程中利用了什么技术？抗原-抗体杂交法 8. 单克隆抗体最大的优点是？P81 9. 单克隆抗体有哪些应用？P81 第四节 1. 什么是胚胎工程？主要包括哪些技术？操作的对象主要是？P85 2. 什么是受精作用？为什么同种动物的精卵才能结合？P86 3. 什么是雄原核？什么是雌原核？P86 4. 受精完成的标志是？ 雄原核和雌原核的融合 5. 一个精子入卵后，后续精子还能入卵吗？不能 6. 人体早期胚胎发育的过程？P87/p88图3-22 受精卵→卵裂期→桑葚胚→囊胚期 7. 卵裂过程中，细胞数目？体积变？胚胎总体积？P87 8. 什么是囊胚腔？什么是滋养层？滋养层发育成什么？内细胞团发育成什么？ P87/p88图3-21囊胚期的结构图 9. 囊胚期细胞发生分化了吗？还具有全能性吗？ 已分化，不具有全能性，单个细胞不能发育成完整个体（但诱导后可以形成任意的组织器官，可以认为具有发育的全能性（了解）） 10. 囊胚期继续发育形成？具有几个胚层？分别称为？P89 11. 体外受精过程中，成熟的精子需要通过什么处理才能获得进入卵细胞（受精能力）？采集的精液如何保存？P90 12. 什么是超数排卵？需要用到什么激素？P90 13. 体外受精获得试管动物属于什么生殖？有性生殖 14.什么是胚胎移植？P92 15. 胚胎移植的受体会对供体的胚胎产生免疫排斥吗？ 不会，所以胚胎移植不需要对受体进行免疫抑制的处理 16. 胚胎移植前需要对受体进行什么处理？同期发情 17. 运用胚胎移植技术繁殖良种山羊的过程？P92 18. 运用胚胎移植技术繁殖良种山羊的优势？P92 19. 什么是胚胎分割？P93属于什么生殖？无性 20. 胚胎分割的基本过程？P93 21. 分割获得的胚胎可以直接移植还是要培养至囊胚期？P93 22. 胚胎分割技术的应用？P94 胚胎分割获得的个体在性状上一定完全相同吗？不一定 第四章 基因工程 第一节 1. 什么是基因工程？核心是？P99 2. 基因工程的理论基础是？P99 （1） DNA是细胞生物的遗传物质 （2） 中心法则：阐明了遗传信息传递和表达的机制 （3） 除极个别生物外，自然界中不同生物共用一套遗传密码 3. 限制酶主要来源于什么生物？P100 4. 限制酶的作用？P100 识别......催化......水解；可以剪切RNA吗？不能 5. 什么是粘性末端？什么是平末端？P100 6. 来源不同的2个DNA分子若粘性末端互补则会自发形成什么键？稳定吗？因此要将2个DNA稳定连接在一起还需要？催化什么键形成？P101 7. DNA连接酶可以来源于哪些生物？作用上有什么区别？P101 8. 外源DNA直接导入受体细胞后自身很难在受体细胞内成功复制，需要与含有什么的DNA分子相连才行，这种具备自主复制能力的DNA分子称为？P101 9. 理想的载体应该具有哪些特征？P101 10. 哪些可以作为载体？其中最常用的是？P102 11. 活动“DNA粗提取和鉴定”的基本操作过程？P103-104 12. DNA位于细胞内，因此提取DNA的首要步骤是对细胞进行？常用的方法是？P103 13. DNA易溶于什么溶剂？因此用于提取DNA的研磨液中要加入该溶剂。P103 思考：光合色素易溶于什么溶剂？所以研磨时加入？溶剂用于提取光合色素。 14. 提取DNA过程中，离心后取？P104 15. 离心后，为什么在上清液中加入冷酒精？P104 16. DNA用什么试剂鉴定？在什么条件下出现什么反应？P104 17. 基因工程的基本步骤是？P104 18. 启动子位于？具体的作用是？（与什么酶结合，控制什么过程开始？）p105 本身会被转录吗？备注：不会 19. 终止子位于？当RNA聚合酶到达该位置时代表着什么过程结束？P105 本身会被转录吗？备注：不会 20. 原核生物和真核生物的基因的结构有什么相同点和区别？P105图4-8 21. 什么是外显子？什么是内含子？但两者都会在基因表达过程中被？因此含有内含子的真核生物基因在转录形成RNA后需要经过什么过程才能形成直接用于翻译的mRNA？P105-106 思考：真核生物的mRNA逆转录后形成的DNA中是否含有启动子、终止子、内含子？ 22. 获取目的基因的方法？P106 （1） 化学合成法 （2） 构建基因文库（包括基因组文库和cDNA文库） （3） PCR技术（聚合酶链式反应） 23. 化学合成法的前提是？缺点是？P106 24. 什么是基因组文库？如何构建？P106/p107图4-10 备注：基因组文库图4-10中包含所有DNA序列的菌群，而不是指所有DNA。 25. 什么是cDNA文库？如何构建？P106 26. 不同组织细胞构建的cDNA文库相同吗？同一组织细胞在不同的发育阶段，cDNA文库一定相同吗？P106为什么？ 27. 基因组文库和cDNA文库的区别？ 基因组文库含有所有的DNA，cDNA文库只含有细胞中表达的DNA；cDNA由mRNA逆转录形成，因此cDNA文库中的基因还不含有内含子、启动子和终止子，但基因组文库中的基因一般都有。 28. PCR技术是基于对体内DNA复制过程的模仿，因此需要哪些条件？P107 29. PCR的原料是？P107具有什么作用？ 作用：作为原料合成子链和提供能量 30. 什么是引物？具有什么作用？P107 作用：NA聚合酶发挥作用时需要一小段双链核酸启动，因此在体外需要人工合成引物，即很短的DNA单链，与模板互补配对形成一小段DNA双链，因此DNA聚合酶的作用也可以说是确定模板链复制的起点。而两个引物共同作用下，决定了扩增DNA片段的起点和终点。 31. 需要什么酶？为什么不需要解旋酶？P107 32. PCR的过程？P107 33. 经过几轮循环可以得到只含目的基因的片段？3轮 34. PCR的产物可以通过什么技术鉴定？P107 35. 什么是电泳？电泳过程中，分子的迁移速率受到哪些因素的影响P107 36. 核酸带有什么电？电泳时迁移速率主要受到什么影响？对迁移速率的影响是？P107 37. 电泳时常用什么作为介质？P107 38. 凝胶浸没于电泳缓冲液中，电泳缓冲液的作用是？p108 39. DNA片段根据长度大小在凝胶上分开，形成不连续的条带（p109图4-12BC），每个条带包含的DNA片段长度？ 条带越宽代表？条带离负极（加样孔）越远说明迁移速率越？条带中的DNA长度越？ 备注：每个条带中的DNA片段长度相同，条带越宽代表该长度DNA含量越多，条带离负极（加样孔）越远说明迁移速率越越快，条带中的DNA长度越越短 40. 含有DNA条带的凝胶可以用刀片切割下来，回收凝胶中的DNA，从而达到什么目的？ p109 41. DNA本身是无色的，可以通过如何处理观察到凝胶上的条带？P109 42. 什么是DNA分子相对分子质量标准物（DNA marker）？P109 43. 核酸分子的大小常用什么描述？P109 44. 电泳前，加样（将待检测的DNA加入加样孔）时加入溴酚蓝的作用是？P110 备注：DNA本身无色，电泳时溴酚蓝迁移速率较快，在其迁移出凝胶前关闭电泳仪电源，防止DNA迁移出凝胶。 45. PCR所需要的反应试剂使用什么仪器量取？P111 46. 将PCR反应液加入离心管后，为什么要离心？P111 47. PCR过程中用到的器材，如离心管、移液枪的枪头为什么要灭菌？ 避免外源DNA影响 48. PCR过程中（P112），预变性10min的目的？ 使DNA彻底解旋 49. 电泳的基本操作流程是？P112-114 思考：凝胶放入电泳槽时，加样孔朝向哪一极？ 50. PCR成功的话，电泳会得到几个条带？为什么？ 一个条带；PCR成功可以得到大量的目的基因，虽然含有其他少量含有非目的基因序列的DNA（长度与目的基因不同），但量少，不足以呈现出肉眼可见的条带。 51. 什么是克隆载体？什么是表达载体？两者分别含有什么元件？有什么区别？P115 52. 将目的基因和载体连接起来，形成重组DNA分子需要用到什么酶？ 53. 构建重组DNA分子过程中，最好使用几种限制酶？为什么？ 思考：选择限制酶时，还需要考虑哪些问题？ （1） 不能破坏目的基因 （2） 保证目的基因和载体按照正确的方向连接，保证目的基因的正常转录 54. 将重组DNA分子导入受体细胞（微生物、动物、植物），可以分别用什么方法，如何操作？P115-116 55. 农杆菌转化法的受体细胞是？但需要将重组DNA分子导入什么细胞？此时需用什么试剂处理该细胞？ 备注：植物细胞；农杆菌；CaCl2 56. 若使用农杆菌转化法，需要将目的基因插入Ti质粒的什么片段中？为什么？ 备注：T-DNA；农杆菌会在感染植物细胞时，将自身的Ti质粒上的T-DNA片段插入植物细胞的染色体DNA上。 57. 农杆菌感染植物细胞后，往往需要用农杆菌敏感的抗生素进行处理，为什么？ 备注：杀死农杆菌，防止农杆菌感染影响植物的生长 58. 目的基因及其表达产物的检测和鉴定可从哪些方面来进行？P117 59. 如何检测目的基因是否导入受体细胞？P117 （1） 标记基因法（如p117）备注：标记基因可以是抗生素的抗性基因也可以是其他表达后使受体产生特殊性状的基因 （2） PCR技术 （3） 核酸分子杂交法 上述什么方法更精确？P117 60. PCR技术检测目的基因的具体操作？P117 61. 什么是核酸分子杂交？P117如何利用核酸分子杂交法检测目的基因？什么是核酸探针？P118 62. 用什么方法检测目的基因表达产生的mRNA？P118 63. 用什么方法检测目的基因表达产生的蛋白质？P118 64. 判断转基因是否成功的直接证据？P118 第二节 1. 基因工程在生产生活中的应用？P122-127 2. 利用哺乳动物的乳腺生物反应器生产蛋白质类药物的流程？ 获取目的基因→构建重组DNA分子（表达载体）【需包含目的基因、乳腺蛋白基因的启动子、终止子、复制起点和标记基因】→显微注射法导入受精卵（雌性）→转基因动物 3. 利用哺乳动物的乳腺生物反应器生产蛋白质类药物的优点？P125缺点？ 缺点：只能利用雌性，受哺乳期限制 思考：如何改进？膀胱生物反应器 4. 什么是蛋白质工程？是对蛋白质的直接改造吗？ 备注：通过设计和改造编码蛋白质的基因，从而改变氨基酸序列，最终获得特定功能的蛋白质 5. 蛋白质工程与基因工程的区别？ 从操作上看，基因工程对基因进行拼接，将一物种的基因导入另一物种细胞内，蛋白质工程需对基因进行改造。 从结果上看，基因工程获得的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程获得的是改造后自然界中不存在的蛋白质。 6. 蛋白质工程的基本流程？P128 第五章生物技术的安全与伦理 第一节 1. 为什么在转基因生物中，有时候会出现一些人们意想不到的后果？P138 2. 关于转基因产品的安全性的争论的关键问题是哪两个？P138 3. 对于转基因食品的安全性的担忧，主要是因为转基因产物可能具有什么样的危害？P138 4. 转基因作物的环境安全性主要体现在哪些个方面？P138 5. 什么是基因漂移？P139图5-4 如何避免这种情况？可将目的基因导入叶绿体基因中 第二节 1. 我国对克隆的立场？P145 2. 什么是生殖性克隆？ 3. 什么是治疗性克隆？P145（图5-7） 第三节 1. 如何对待生物武器？P147 2. 什么是生物武器？P147-148 1 学科网（北京）股份有限公司 $