3.2基因工程的基本操作程序第一课时课件-2025-2026学年高二下学期生物人教版选择性必修3

该高中生物学课件围绕基因工程的核心内容展开，从概念原理到实际应用层层递进，以转基因抗虫棉的培育为真实情境主线，构建了“目的基因获取→载体构建→导入受体细胞→检测鉴定”的完整知识链条，形成清晰的学习支架，帮助学生理解技术流程与生命本质之间的内在联系。 其亮点在于深度融合生命观念、科学思维与探究实践三大核心素养。例如，通过分析Bt基因的作用机制体现结构与功能观，借助PCR引物设计训练逻辑推理能力，利用农杆菌转化法模拟真实科研过程强化探究意识。资料中穿插表格对比、流程图解和案例分析，既突出学科特色又提升教学实效，有助于学生建立系统认知，也便于教师精准施教，实现从知识传授向素养培育的转变。

课前检测 1.基因工程的概念、原理、三种工具？ 2.限制酶的作用、限制酶作用于什么键？书写EcoRI切割产生粘性末端的过程？如何判断是否为同一种限制酶切割产生？ 3.限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么？为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？获得相同黏性末端的方法？ 4.DNA连接酶的种类和作用、载体的条件和作用？ 5.DNA粗提取的原理？鉴定的原理、用什么样的酒精？ 6.为什么不同生物的DNA分子能拼接起来？ 1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？ 从社会中来 培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤？ 转基因抗虫棉(使棉铃虫死亡，左)与非转基因抗虫棉(右) 培育转基因抗虫棉的简要过程 与载体拼接 普通棉花 （无抗虫特性） 棉花细胞 抗虫棉 （有抗虫特性） 导入 抗虫基因 重组DNA分子 1.目的基因的筛选与获取 2.基因表达载体的构建（核心） 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的 检测与鉴定 前提 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用。 关键 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 保证 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 第3章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 PCR扩增仪 1.阐明PCR的原理，说出PCR反应所需的条件和PCR反应的过程。 2.说出基因表达载体的组成。 3.列举将目的基因导人植物细胞、动物细胞和微生物细胞的方法。 4.列举检测与鉴定目的基因在受体细胞中是否稳定维持和表达其遗传特性的方法。 5.能够用流程图的形式概括出基因工程的基本操作程序。 学习目标 目的基因的筛选与获取 什么是目的基因？培育转基因抗虫棉用到的目的基因是什么？ 转基因抗虫棉抗虫的机制是什么？Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生影响？ 获取目的基因的方法有哪些？ PCR的全程、原理，需要的条件、过程 什么是引物？作用？设计依据？为什么需要引物？两种引物的碱基序列能否互补？（议） PCR至少要经过几次循环才能从DNA分子中分离出目的基因？（议） 用PCR可以扩增mRNA吗？（议） 分析PCR技术扩增DNA与DNA体内复制的不同点（议） 思 （1）定义： 在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状的或获得预期表达产物的基因。 目的基因主要是指编码蛋白质的基因，如抗逆性基因、生产药物基因、毒物降解基因、工业用酶基因 一.目的基因的筛选与获取 1.目的基因 (2)实例： 苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt 抗虫蛋白抵抗虫害。 Bt基因即目的基因 那么，如何筛选目的基因呢？ 一.目的基因的筛选与获取 2.目的基因的筛选 1、筛选方法： 从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选 2、认识基因结构和功能的技术方法： 测序技术 序列数据库(如GenBank) 序列比对工具(如BLAST) 测定核酸和蛋白质序列 以碱基顺序或氨基酸残基顺序为基本内容的分子生物信息数据库 把感兴趣的序列跟已经存在的序列数据库进行比较的工具。通过比对识别相关的序列，从而能获得目的基因和蛋白质的功能。 ②Bt基因的筛选 一.目的基因的筛选与获取 2.筛选合适目的基因 Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体。 苏云金杆菌制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害 对Bt基因的表达产物-Bt抗虫蛋白有较为深入的了解：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴孢晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫 苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关 掌握了Bt基因的序列信息 Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因 Bt抗虫蛋白的抗虫原理：当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。 思考：Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？ 一.目的基因的筛选与获取 3.目的基因的获取方法 （1）人工合成 （2）利用PCR获取和扩增目的基因（常用） （3）从基因文库中获取 在已知目的基因核苷酸序列且基因较小的情况下，利用DNA合成仪自动合成 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 ①基因组文库：含有一种生物的全部基因。 ②部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库。 基因文库类型： PCR技术：PCR是______________ _的缩写，是一项根据___________ 的原理，在___ _提供参与DNA复制的___ ____与__ _______，对___________________ _进行______ __的技术； 聚合酶链式反应 DNA半保留复制 体外 各种组分 反应条件 目的基因的核苷酸序列 大量复制 全称 聚合酶链式反应 DNA半保留复制 体外（PCR扩增仪/PCR仪） 对目的基因的核苷酸序列进行大量复制 可以在短时间内大量扩增目的基因 一.目的基因的筛选与获取 4.利用PCR获取和扩增目的基因 原理 操作环境 目的 优点： （1）DNA复制所需的基本条件: 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 提供DNA复制的模板 合成DNA子链的原料 打开DNA双链 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 （体外用耐高温的DNA聚合酶） （体外用高温代替） （2种） 一.目的基因的筛选与获取 4.利用PCR获取和扩增目的基因 4种脱氧核苷酸【实际上是4种dNTP（脱氧核苷三磷酸）包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP】 ATP去掉两个磷酸基团后是腺嘌呤核糖核苷酸 dATP——脱氧腺苷三磷酸 关于dNTP的思考： 1.ATP与RNA的关系？dNTP与ATP的区别？ 2.PCR扩增中，加入dNTP的作用是什么？ ATP—— 腺苷三磷酸 为DNA的合成提供原料和能量 一.目的基因的筛选与获取 4.利用PCR获取和扩增目的基因 （1）概念： 是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。 （2）作用： 引物能使耐高温的DNA聚合酶从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸。 （3）结合部位： 引物结合在模板链的_________。 3’端 引物 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 3’ 5’ 引物1 3’ 5’ 引物2 3’ 5’ DNA母链1 3’ 5’ DNA母链2 子链延伸方向5’ 3’ （5）PCR扩增时至少需要____种引物，原因是______________________________________________________________ 2 DNA的两条链是反向平行的，用2种引物才能保证DNA的两条链同时被扩增 （4）PCR过程需要引物的原因： DNA复制不能从头开始，DNA聚合酶只能从引物的3'端延伸DNA链 （DNA聚合酶只能催化单个核苷酸加到已有核苷酸片段的3’端的羟基上） 一.目的基因的筛选与获取 4.利用PCR获取和扩增目的基因 引物 （6）设计引物时必须依据： 目的基因的核苷酸序列 （7）设计引物的要求： ①同种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是： ②2种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是： ③引物长度不宜过短，防止引物随机结合 ④引物在目的基因两侧 防止引物自身折叠 防止引物之间配对，导致引物不能与模板链结合 ① ② ③ ④ ①5′AACTATGCGCTCATGA3′ ③5′AGAGGCTACGCATTGC3′ 思考：若想获得以下已知序列的DNA片段，如何设计PCR引物？ 一.目的基因的筛选与获取 4.利用PCR获取和扩增目的基因 （2）PCR条件: ①稳定的缓冲溶液（一般添加Mg2+） ④四种脱氧核苷酸（或四种dNTP：dATP、dTTP、dGTP、dCTP） 真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活。 ②DNA模板（需含有目的基因） ⑤耐高温的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶） ⑥能严格控制温度的温控设备 dATP ③分别与两条模板链结合的2种引物 一.目的基因的筛选与获取 4.利用PCR获取和扩增目的基因 （3）PCR反应过程 耐高温的DNA聚合酶 4种脱氧核苷酸（dNTP） 引物 待扩增的DNA片段（模板） 5’ 5’ 变性 复性(退火) 延伸 温度上升 到 时，破坏 ，双链DNA解聚为 ，作为 。 当温度下降到 .左右时，两种 . 通过 .与两条 .结合。引物结合到模板链的 端。 温度上升到 时，溶液中的 .在 . 的作用下合成新的DNA链。 90℃ 单链 复制模板 50℃ 引物 碱基互补配对 单链DNA 3' 氢键 72℃左右 4种脱氧核苷酸 耐高温的DNA聚合酶 延伸方向： 子链的5'→3'端 脱氧核苷酸 加到引物的3'端 复性不一定均为引物与DNA模板结合。复性时，引物与DNA模板的结合是随机的，也存在DNA解开的两条链的结合。 第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物； 第二轮循环的产物作为第三轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第三轮的产物； 第二轮循环的产物 第三轮的产物 完成以后，常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物 （3）PCR反应过程 一.目的基因的筛选与获取 DNA数目呈______________ 指数形式扩增 思考：1、 PCR技术与DNA复制过程比较？ PCR技术 DNA复制 原则 原料 条件 解旋方式 酶 引物 结果 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板（DNA母链）、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化（边解旋边复制） 一小段单链DNA或RNA 一小段RNA 耐高温的DNA聚合酶 解旋酶、DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 一.目的基因的筛选与获取 一.目的基因的筛选与获取 5’ 3’ 5’ 5’ 第一次循环 第二次循环 3’ 5’ 第三次循环 3’ 3’ 思考2、PCR技术获取目的基因时至少要经过几次循环才能从DNA分子中分离出目的基因？需要几种引物？需要几个引物？ 引物1 引物2 一.目的基因的筛选与获取 思考：一个目的基因（DNA)分子在第3次扩增时，需要几种引物？需要几个引物？如果循环n次，则共消耗多少对引物？ 用PCR可以扩增mRNA吗？ mRNA不可以直接扩增，需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。 1.逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子； 2.核酸酶H降解RNA-DNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA； 3.以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子，即cDNA 一.目的基因的筛选与获取 课前检测 培育转基因抗虫棉的主要步骤？ 什么是目的基因？ 筛选目的基因的方法？ 获取目的基因的方法？ PCR的原理，条件，过程？ 什么是引物？设计的依据？引物的作用？ 为什么需要引物？为什么需要2种引物？ 思考：能不能直接将目的基因导入受体细胞，为什么？如果这么做，效果怎么样？ 构建基因表达载体（核心工作） 导 这种方法针对性差，完全靠运气也无法确定哪些基因导入了受体植物。 基因表达载体的构建 构建基因表达载体的目的？ 基因表达载体和第一节学到的载体一样吗？（议） 基因表达载体的组成元件，各部分的作用？ 构建基因表达载体时Bt基因插入的位置应该在哪里？为什么？（议） 如何构建抗虫棉的基因表达载体？请文字和箭头来表示。 使用一种限制酶进行切割含Bt基因的DNA片段和质粒，再用DNA连接酶连接，可能有几种连接情况？（议） 构建基因表达载体时往往用两种限制酶分别切割目的基因的两端以及载体，请分析原因。（议） 思、议 ① ; ② 。 二.基因表达载体的构建 1.目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代 使目的基因能够表达和发挥作用 ——核心步骤 2.组成 思考：要使Bt基因在受体细胞中稳定存在，并能够表达 和发挥作用，载体还需要哪些结构？ 载体≠表达载体： 相同点：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。 区别：表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 思考：各个元件有什么作用？ 目的基因：能控制表达所需要的特殊性状（必须插到启动子和终止子之间） 启动子： 位置：基因的上游 功能：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。 本质：特殊序列结构的DNA片段 诱导型启动子：当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达 复制原点： DNA复制的起始位点 终止子： 位置：基因的下游 功能：终止转录 本质：特殊序列结构的DNA片段 标记基因：便于重组DNA分子的筛选和鉴定。 限制酶切割位点 目的基因要插入启动子和终止子之间 因为启动子使转录开始，是RNA聚合酶识别和结合的部位；终止子位于基因的尾端，使转录终止；只有顺序正确，目的基因才能正常转录。 二.基因表达载体的构建 二.基因表达载体的构建 项目 启动子 终止子 起始密码子 终止密码子 本质 ______ _____ _______ _______ 位置 目的基因上游 目的基因下游 mRNA首端 mRNA尾端 功能 ________________________________________________ ____________________________ _____________________ ________________________ DNA DNA mRNA mRNA RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA 使转录在所需要的地方停下来 翻译的起始信号(编码氨基酸) 翻译的结束信号(不编码氨基酸) 启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比 载体 （质粒） DNA分子 （含目的基因） 限制酶处理 切开载体 出现切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子 （重组质粒） 同一种 或能产生相同 末端的限制酶处理 1个切口， 2个黏性末端 2个切口， 4个黏性末端 二.基因表达载体的构建 3.过程 产生相同的黏性末端或平末端，以便通过DNA连接酶连接； 载体 目的基因 自连 片段间的连接 目的基因自连 质粒自连 目的基因与质粒连接 目的基因与目的基因连接 质粒与质粒连接 正向连接 反向连接 1 1’ 2 2’ 1 2 2’ 1’ 2 2’ 1’ 1 二.基因表达载体的构建 同一种限制酶切割获得的目的基因和载体混合后加DNA连接酶会出现的连接方式有： 实际应用中往往选择2种不同的限制酶分别切割，减少自连情况出现 基因的反向连接导致目的基因不能正常表达 选择两种产生不同黏性末端的限制酶同时对含目的基因的DNA分子和质粒切割（使得目的基因的一端与载体一端的黏性末端相同，而目的基因的另一端与载体另一端的黏性末端相同） -G -CTTAA -A -TCTAG -G -CTTAA -A -TCTAG 为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的5'端加上限制酶的酶切位点，且常在两种引物设计上加入不同的酶切位点，主要目的是保证目的基因与载体的正向连接。 二.基因表达载体的构建 图解限制酶的选择原则 (1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。 (2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。 (3)确保出现相同黏性末端原则：通常选择与切割目的基因相同的限制酶切割质粒，如图中PstⅠ； 为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。 二.基因表达载体的构建 培育转基因抗虫棉的主要步骤？ 构建基因表达载体的目的？ 基因表达载体的组成，各部分的作用？ 基因表达载体的构建过程，画出流程图 构建基因表达载体的过程中如何防止目的基因和质粒的自身环化以及目的基因的反向连接？ 课前检测 将目的基因与载体结合，构建好基因表达载体后，下面该进行什么操作？ 基因工程第三步：将目的基因导入受体细胞 思考 是将目的基因片段导入受体细胞？ 将目的基因导入受体细胞前，必须进行基因表达载体的构建，也就是说导入受体细胞的必须是重组DNA分子，而不是直接导入目的基因 将目的基因导入受体细胞 转化的概念，实质 将目的基因导入植物细胞，动物细胞，原核生物的方法，原理 将目的基因导入动物细胞时，选用的受体细胞是什么？最终获得什么？需要利用哪些技术？ 农杆菌转化法：原理，过程（用文字和箭头构建模式图），两次拼接和两次导入分别是指什么？可以利用此方法将目的基因导入单子叶植物细胞内？ 思、议 常用方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——Ca2+处理法 我国科学家独创 三.将目的基因导入受体细胞 03 1、花粉管通道法（我国科学家独创） ②在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。 ①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中 目的基因 目的基因 适用生物：开花植物 （一）目的基因导入植物细胞 三.将目的基因导入受体细胞 2、农杆菌转化法 （一）目的基因导入植物细胞 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 三.将目的基因导入受体细胞 （1）转化： 实质是基因重组。 ③⑤⑥⑦⑨⑧ ①农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。 （2）农杆菌的特点： ②农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 拓展：农杆菌感染植物的受伤部位（受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物，从而使农杆菌移向这些细胞） 2、农杆菌转化法 （一）目的基因导入植物细胞 三.将目的基因导入受体细胞 ④⑤⑥⑦⑨⑧ (3)目的基因插入位置： 转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 （可转移的DNA） （4）具体的转化方法： ①将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株； ②可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液一段时间，然后培植植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等， 2、农杆菌转化法 （一）目的基因导入植物细胞 三.将目的基因导入受体细胞 （5）过程： Ti质粒 含目的基因的DNA分子 含目的基因的重组Ti质粒 农杆菌 植物细胞 含目的基因的植物细胞 表现出新性状的植株 构建基因表达载体 转入 导入 目的基因插入染色体DNA中 植物组织培养 方法：Ca2+转化法 方法：农杆菌转化法 （受精卵或体细胞都可以） 思考：受体细胞可以是受精卵或体细胞的原因？ 植物细胞一般易表现全能性。 经过____次拼接、____次导入 ①第一次拼接：__________________________ ②第二次拼接：__________________________ _______________________________ ③第一次导入：___________________________ ④第二次导入：___________________________ 将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上 农杆菌将插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上（非人工操作） 两 两 将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌 农杆菌含目的基因的T-DNA导入受体细胞（非人工操作） 03 （二）目的基因导入动物细胞 1、常用方法： 2、受体细胞: 显微注射法 受精卵 ①体积大，易操作。②易表现出全能性。 3、 过程： 构建基因表达载体并提纯 利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中 早期胚胎培养 胚胎移植 获得具有新性状的动物 三.将目的基因导入受体细胞 还可以选择胚胎干细胞，因为胚胎干细胞也可以发育成动物个体。 1、常用方法： Ca2+处理 目的：可使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。 2、过程： （三）目的基因导入微生物细胞 三.将目的基因导入受体细胞 Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 原核细胞（常选择大肠杆菌） 3、受体细胞： 优点：繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少，易于培养。 大肠杆菌和酵母菌在基因工程中都可以作为受体细胞，但又有所不同。大肠杆菌为原核细胞，而酵母菌为真核细胞（具有多种细胞器）,所以酵母菌在用于生产需要加工和分泌的蛋白质时比大肠杆菌有优势。 实例：利用转基因大肠杆菌生产药物 注意：原核生物作为受体细胞产生的真核生物的蛋白质通常没有生物活性（无内质网和高尔基体加工），需要在体外进行再加工。 三、将目的基因导入受体细胞 思考 基因工程第四步：目的基因的检测与鉴定 按前面三个步骤进行了操作， 1.是否可以确定目的基因进入了受体细胞并能维持稳定？ 2.是否可以确定目的基因一定能够进行表达？ 3.是否可以确定得到了新的性状？ 不一定！ 检查目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性； 2.检测内容及方法: 四.目的基因的检查与鉴定 1.目的: 类型 检测内容 方法 分子水平的检测 个体生物学水平的鉴定 受体细胞的染色体DNA上是否插入了目的基因 目的基因是否转录出了mRNA PCR等技术 目的基因是否翻译成蛋白质 抗原-抗体杂交技术 个体是否具有相应性状 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 四.目的基因的检查与鉴定 （一）分子水平的检测 1、检测目的基因是否导入 ①通过PCR技术检测 转基因生物细胞DNA 用与目的基因相关的 引物进行PCR扩增 对扩增产物进行检测 ②DNA分子杂交技术检测 ⑴制作出相应的基因探针，并用PCR扩增； ⑵提取受体细胞全部DNA并用PCR扩增，与基因探针置于同一培养液； ⑶高温变性处理，使之全部变为单链，观察是否出现杂交DNA片段。 一段带有检测标记（荧光或同位素标记），顺序已知的，与目的基因能互补的核酸序列。 15N 15N 变性 变性 探针（PCR扩增） 转基因生物的DNA 杂交DNA分子 出现杂交带 原理？ 。 碱基互补配对 四.目的基因的检查与鉴定 2、检测目的基因是否转录 提取转基因生物mRNA 逆转录 产生DNA 对扩增产物进行检测 用与目的基因相关的 引物进行PCR扩增 ①通过PCR等技术检测 （一）分子水平的检测 ②分子杂交技术检测 变性 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 原理？ 。 碱基互补配对 3、检测目的基因是否翻译 从转基因生物中 提取蛋白质 用相应抗体进行 抗原-抗体杂交检测 —通过抗原-抗体杂交检测 如果出现杂交带，说明目的基因已经翻译。 检测目的基因是否表现出相应的性状 四.目的基因的检查与鉴定 （二）个体水平的检测 个体生物学水平的鉴定具体方法举例 转基因生物 鉴定方法 成功标志 抗虫植物 抗病毒（菌）植物 抗盐植物 抗除草剂植物 获取目的基因产物的转基因生物 饲喂害虫（抗虫接种实验） 害虫死亡 病毒（菌）接种实验 未染病 盐水浇灌 正常生长 喷洒除草剂 正常生长 提取细胞产物与天然产品进行功能活性比较 功能、活性正常 $