内容正文:
概念背诵:
1、细胞的全能性
2、植物组织培养
3、外植体
4、脱分化
5、愈伤组织
6、再分化
7、植物体细胞杂交
概念
细胞工程
细胞工程是指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法,通过细胞器、细胞或组织水平上的操作,有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品的一门综合性的生物工程。
原理和方法
操作水平
目的
分类
细胞生物学、分子生物学和发育生物学
细胞器、细胞或组织
获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品
动物细胞工程和植物细胞工程
从社会中来
“其芽葺葺,其叶青青,犹绿衣郎,挺节独立,可敬可慕。迨夫花开,凝晴瀼露,万态千妍,薰风自来,四坐芬郁,岂非入兰室乎!岂非有国香乎!”这是我国历史上第一部兰谱——《金漳兰谱》(宋·赵时庚)中对兰花的一段描述。从古至今,我国人民都把兰花看作高洁、典雅的象征,很多人喜欢兰花。但是兰花种子通常发育不全,在自然条件下萌发率极低;传统分株繁殖的方法又存在繁殖周期长,繁殖率低等问题,如果靠自然繁殖,兰花的价格可想而知了。
如何能让名贵的兰花大量、快速地繁殖,从而走入寻常百姓家呢?
利用植物组织培养技术可以大量、快速地培育兰花。
第2章 细胞工程
第1节 植物细胞工程
----植物细胞工程的基本技术
植物组织培养技术
植物体细胞杂交技术
4
学习目标
1.说明植物组织培养的基本原理,形成科学的世界观。
2.学习植物组织培养的基本技术和植物体细胞杂交技术,概述两种技术的原理和过程。
1.概念:
细胞经分裂和分化后,仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。
细胞全能性的原因:
一般生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,即都有发育成完整个体所必需的全部遗传信息。
01
细胞的全能性
2、体现细胞全能性的标志:
细胞→完整个体或其他各种细胞
植物细胞工程的理论基础
实例:胡萝卜韧皮部细胞发育成完整植株
哺乳动物成熟的红细胞因失去了核遗传物质,所以不具备全能性
思考:种子发育成植株体现了全能性了吗?
没有;植物种子的胚已经完成了早期发育,相当于新植物体的幼体,没有体现出细胞具有发育为完整植株的潜能;
3.生长发育过程中细胞没有表现全能性的原因
实例:芽原基的细胞只能发育为芽,叶原基的细胞只能发育为叶。
01
细胞的全能性
在特定的时间和空间条件下,细胞中的基因会 。
选择性地表达
①受精卵>生殖细胞>体细胞
②植物细胞>动物细胞
③体细胞:分化程度低>分化程度高
随着细胞分化程度的不断提高,细胞的全能性逐渐降低。
4.细胞全能性大小比较
高度分化的植物组织的细胞如何在适宜的条件下表现出全能性呢?
1.概念:
指将离体的植物器官、组织或细胞等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其形成完整植株的技术。
3.过程:
2.原理:
植物细胞的全能性
外植体
02
植物组织培养技术
外植体
脱分化
愈伤组织
再分化
根、芽
幼苗
完整植株
移栽成活
在__________________等条件的诱导下,已经分化的细胞失去其特有的结构和功能,转变为______________,进而形成__________的过程。
一定的激素和营养
未分化的细胞
愈伤组织
相关概念
脱分化:
不定形的薄壁组织团块
愈伤组织:
再分化:
愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过程。
生长素/细胞分裂素 效果
比值高时
比值低时
比值适中
有利于根的分化,抑制芽的形成
有利于芽的分化,抑制根的形成
促进愈伤组织的形成
简记为:“高”根,“低”芽,“中”愈伤
植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素,它们的浓度、比例等都会影响植物细胞的发育方向;
9
02
植物组织培养技术
将愈伤组织接种到含有特定激素的培养基上,就可以诱导其再分化成胚状体,长出芽和根,进而发育成完整植株。
外植体
脱分化
愈伤组织
再分化
根、芽
幼苗
完整植株
移栽成活
胚状体
3.材料用具
①外植体:
幼嫩的菊花茎段
(细胞分裂旺盛,易脱分化表达全能性)
②培养基(参见本书附录1 116页)
菊花的组织培养
探究•实践
蔗糖的作用:
作为碳源,
提供能量,调节渗透压
4.方法步骤
(1)消毒
①双手和超净工作台台面:
用酒精擦拭
②外植体:
流水冲洗→酒精消毒30s→立即用无菌水清洗2~3次→次氯酸钠溶液处理30min→立即用无菌水清洗2~3次。
(2)取材
将消过毒的外植体置于无菌的培养皿中→用无菌滤纸吸去表面的水分→用解剖刀将外植体切成0.5~1cm长的小段。
菊花的组织培养
探究•实践
菊花的组织培养
探究•实践
注意:
注意:
(3)接种
在酒精灯火焰旁,将外植体的1/3~1/2插入诱导愈伤组织的培养基中。用封口膜或瓶盖封盖瓶口,并在培养瓶上作好标记。
接种时注意外植体的方向,不要倒插(形态学下端接触培养基)!
(4)脱分化
将接种了外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18~22℃的培养箱中培养。在培养过程中,定期观察和记录愈伤组织的生长情况。
该过程一般不需要光照,不易形成愈伤组织。
菊花的组织培养
探究•实践
注意:
(5)再分化
培养15~20d后,将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上→长出芽后→将其转接到诱导生根的培养基上,进一步诱导形成试管苗。
注意顺序,先诱导生芽,再诱导生根;该过程需要给予光照(叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照)!
(6)移栽培养
移栽前先打开封口膜或瓶盖,让试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后,将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中,待其长壮后再移栽入土。每天观察并记录幼苗的生长情况,适时浇水、施肥,直至开花。
炼苗
1、在植物组织培养过程中,为什么要进行一系列的消毒、灭菌,并且要求无菌操作?
2、在组织培养过程中,诱导愈伤组织的培养基、诱导生芽的培养基和诱导生根的培养基的成分有什么不同?
3、若想探究生长素与细胞分裂素的使用比例对植物组织培养的影响,则应如何设计对照实验?
避免杂菌在上面迅速生长消耗营养,且有些杂菌会危害
培养物的生长。
三种培养基的生长素和细胞分裂素的比例不同。
思考:
菊花的组织培养
探究•实践
菊花的组织培养
探究•实践
若想探究生长素与细胞分裂素的使用比例对植物组织培养的影响,
则应如何设计对照实验?
① 空白对照:不加任何激素;
② 实验组1:生长素用量与细胞分裂素用量的比值为1;
③ 实验组2:生长素用量与细胞分裂素用量的比值大于1;
④ 实验组3:生长素用量与细胞分裂素用量的比值小于1。
使用比例 实验结果
生长素
细胞分裂素
>
生长素
细胞分裂素
<
生长素
细胞分裂素
=
有利于根的分化
有利于芽的分化
促进愈伤组织的形成
02
植物组织培养技术
植物组织培养成功的条件
组织离体状态
适宜的培养条件
植物激素(主要是生长素和细胞分裂素)诱导和调节
种类齐全、比例适合的营养物质
适宜的外界条件(温度、pH、光照等)
无菌操作
02
欲培育地上长番茄和地下结马铃薯的“超级作物”。你有什么好妙招?
不能。因为两种生物之间存在着天然的生殖隔离
利用传统有性杂交方法能实现吗?为什么?
“番茄-马铃薯”的假想图
03
植物体细胞杂交技术
于是,这些科学家试图用这两种植物的体细胞进行杂交,来实现这一美妙的设想。
19
02
1.过程
去壁
①
去壁
①
融合 ②
再生
新壁
③
脱分化
④
再分化
⑤
移栽
植物细胞融合
植物组织培养
植物体细胞杂交
马铃薯
细胞
番茄细胞
马铃薯
原生质体
番茄原生质体
杂种细胞
杂种植株
02
03
植物体细胞杂交技术
02
(1)去除细胞壁
①去壁原因:
②方法:
③相关酶:
细胞壁阻碍着细胞间的杂交
酶解法
纤维素酶和果胶酶
02
03
植物体细胞杂交技术
21
02
(2)原生质体
间的融合
①理论基础:
②方法:
细胞膜具有流动性
物理方法:电融合法、离心法
化学方法:聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+-高pH融合法
02
02
03
植物体细胞杂交技术
关键环节
22
02
(4)植物体细胞杂交完成的标志:
培育成新植物体
(3)植物细胞融合完成的标志:
再生出新的细胞壁
02
02
03
植物体细胞杂交技术
高尔基体、线粒体
3.原理:
细胞膜具有一定的流动性
植物细胞的全能性
7.实例:
白菜—甘蓝、普通小麦—长穗偃麦草等。
8.意义:
打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种。
02
03
植物体细胞杂交技术
2.植物体细胞杂交的概念:
植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新植物体的技术。
4.生殖方式:
无性生殖
5.分裂方式:
有丝分裂
6.可遗传变异类型:
染色体数目变异
02
03
植物体细胞杂交技术
思考:
获得的细胞一定是需要的杂种细胞吗?
不一定
A
B
AA
AB
BB
AB
植物组织培养和植物体细胞杂交的比较
名称 植物组织培养 植物体细胞杂交
原理 细胞的全能性 细胞膜具有一定的流动性和细胞的全能性
过程
注意
事项 ①取材:选取有形成层的部位最容易诱导形成愈伤组织;
②光照:在愈伤组织分化出芽和叶时,一定要有光照,以利于叶片内叶绿素的合成 ①去壁方法:酶解法,所用的酶是纤维素酶和果胶酶;
②人工诱导融合的方法:
物理法:电融合法、离心法等;
化学法:聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法等
联系 植物体细胞杂交技术包括植物细胞融合和植物组织培养两个过程,植物组织培养是植物体细胞杂交的一个环节,融合的体细胞只有通过植物组织培养才能发育成完整的个体
一、概念检测
1.下图是利用甲、乙两种植物的各自优势.通过植物细胞工程技术培育高产、耐盐的杂种植株的实验流程图。下列相关叙述错误的是( )
A.进行a处理时能用胰蛋白酶
B.b是诱导融合后得到的杂种细胞
C.c是培养后得到的具有耐盐性状的幼芽
D.进行d选择时要将植株种在高盐环境中
A
2.科学家在制备原生质体时,有时使用蜗牛消化道提取液来降解植物细胞的细胞壁。据此分析,蜗牛消化道提取液中可能含有什么成分?
纤维素和果胶
“番茄-马铃薯”杂种植株没有如科学家所想象的那样,地上结番茄,地下长马铃薯,这是为什么?
二、拓展应用
提示 1978年,梅尔彻斯(G.Melchers)等人首次获得了马铃薯与番茄的体细胞杂种植株。他们将培育的二倍体马铃薯和番茄的叶片细胞原生质体进行融合,产生了杂种植株--“番茄-马铃薯”,它同时具有马铃薯和番茄的形态特征。其中一些植株形成了“类似块茎的生殖根”,但是并没有产生可结实的花、果实以及真正意义上的块茎。到目前为止“番茄-马铃薯”一类的体细胞杂交植物还不能产生经济效益,但是其研究价值不可忽视。
“番茄-马铃薯”没有像人们预想的那样地上结番茄、地下长马铃薯,主要原因是:生物体内基因的表达不是孤立的,它们之间是相互调控、相互影响的,所以“番茄-马铃薯”杂种植株的细胞中虽然具备两个物种的遗传物质,但这些遗传物质的表达相互干扰,它们不能再像马钤票或番茄植株中的遗传物质一样有序表达,杂种植株自然就不能地上结番茄、地下长马铃薯了。近年来,有报道称利用嫁接技术培育出了地上结番茄、地下长马铃薯的植株。
$