单元检测(十五) 基因工程(含生物技术安全性和伦理问题)-【衡水真题密卷】2025年高考生物单元过关检测（福建专版）

2024一2025学年度单元过关检测（十五） 生物学·基因工程 (含生物技术安全性和伦理问题】 (考拭时同75分钟，总分100分》 一、单项选择愿：本驱共15小驱，其中，第1一1小恩，每驱2分：第11-15小题.每题4 分，共40分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是持合题目要装的。 题号12346678910111213141s 容案 1.如图为DNA分子在不同腾的作用下所爱生的变化，图中依次表示限割胖、DNA聚合 制.DNA连接南.解能衔作用的正确顺序是 A①④①④ 玉①④ C.①④9③ D.①④W 2.粮细自一巨藤细围集落荆数因子(GM-CSF)可以增加白细胞的数量，某科研团队将人 的GMCS部基国导人大新杆葡可大量生产GMCF,并用于临床上化放疗之后的肿物 治疗，下列叙连正确的是 A可通过PR的方法失取人的GM(C基因 H构硅GM-CSF表达我体需要限制酶和NA聚合衡 C基因表达载体上的夏制原点可测控GM CSF基因的表达 D可通过显衡注射的方法将GMSF基因导入大斯仟茵 3.莹火虫的茂光素南能催化ATP查活的费充素氧化发光，议一现象在生物检圈和成像方 面有重经的应用价值。为了解决天然蒙光素南不能高效靠化人工合成的荧光素DTZ 发光的问想，研究人员采用蛋白质工程（又称为第二代基以工程）对它进行了改造。下 列叙述正确的是 A通过化学诱变削可定向改造天然荧光素群的基因序列 我改造天然党光素南所用的蒸因表达线体不需要启待子和终止子 C可用汽R方法检测笑变的荧光素衡基因是否陆译成蛋白因 九.改苗后的卖光素情在，定条件下霍化1D汀Z发光是将化学能转化为光能 单元过关检测（十五}生物学第1页{共12面） 衡水真 七.“DNA目提取与整定”的实验步课是：研留·去象质→析出→鉴定。下列说法情误 的是 A,洋葱，菜花，香蕉，菠菜和瑞肝均可作为提取DNA的材料 且对研W液进行离C是为了加速DNA的沉淀 C.过就液淀过程在4C冰箱中进行是为了陟止DNA降解 D析出时的离心转速明显高于去杂厦时的离心转速 5,科学家指燕御干早静泊反应中具有调粒作用的ACM0基因转人院花潮图中，站育出 了转基因流早绵花，下列叙述错误的是 A,将ACMO5因导人棉花细密可用农杆菌转化法 且构建基以表达载体是精育转基以抗晕棉花的核心工作 C、ACMO基因成功插人棉花组鼠染色体上也未必俊正君表站 DP代CR扩增Ah)林因时需要设计两种戴基互补的物 6,NA酯物餐散电冰的分子第效是指作为支持介质的琼脂槽，具有网络结构，处大分了物 质在遥过时受列较大阻力，提此分离不同大小的DNA片段。下列说法错谈的是《》 A.DNA片段相对分千质量糖大，迁移成馨慢 且凝胶制备中加人核酸染料能与DNA分子结合，用于分离后DNA片段的检测 C将电滋缓冲液加入电泳情中，电泳握冲液不佳没过凝教 琅当辅凝放电袜可用于分离、鉴定DNA分子的混合物 了，基因工程中常采用发杆菌转化法将日的基因导入植物挥鞋。某科研小组欲将某抗虫基 因导人某植物，下列分析错误的是 A.应孩将抗虫基因能人农杆菌五质轮的T-DNA片段内 B可以用农杆菌侵染水稻，玉采等单子叶植物 仁目的基因与T行质粒的结合表衫及碱基互补配对原则 口传基因是否成功，最简视的方法是观察该植物有没有抗虫性状 通密在 单元过关检测（十五】生物学第2页（共12页引 9 &瑞典科学家斯万特·帕博凭槽对灭绝古人类某因组和人类进化的爱现象获022年 诺贝尔奖生理学或属学奖，他在研究过程中：用了大引物PR构建定点突变，其过程 如图。下列叙述正雨的是 () 秀节使试 表州有。 代2日 引精2 A进行汽R扩增需要的降有解能爵和耐高祖的DNA聚合碍 我利用该技术将某功能蛋白的结构改变属于蛋白质工程 C在求1中张得的大引物是指以引物1延钟得到的NA链为倾板 DPCR子链的廷伸过程都是从引物的'精开始的 9.昭草果智满全国，苹果切开后不久搬色便会加深，这种观象称为桐变”。褐变是由位于 帽围的多雨氧化所()能化位于液浓中的多肠类物质生成格色色素所致。据此，科研 人员培育出了抗馨变的转因草果，其工作流程红图。下列述正确的是 平用堵卧 生：人国为上爆海性禁因 转某网学率同简 A如若想获得抗揭变的转落因草果，期目的基因可选卡都薄素杭生基因或掉制O表 达的林因 B过程①是基因工程的核心步骤，至少需要限制所和DN入聚合酶的参与 C在漫②之前，需要用次氯酸钠溶液对草果嫩叶碎片迹行灵菌处开 几为了评估目的基因对补制平果锡变的效果，可与导人不含目的基因质粒的植株作对照 1D.干找素是一种具有干找病博复时件用的精蛋白，在性床上被广泛用于油疗病毒感染性疾病 如果将干状素分子上的一个半酰氢酸（密丹子：LU、UX)变战丝氨酸（密码子：U. 0C,CA.X),就可以延长干扰素的体外保存时间。下列述误的是 单元过关检测（十五}生物学第3页共12面） 衡水真见 A.对干优素的股计和皮益，以基因的结构和功佳的关系为基 对干扰素基因击行是点义变(CG)来实现城基的替提 C,该蛋白置工程的技术思驿与中心法财相反 D改造后的干找家的功能与天然干扰素不是完全不同 11在DNA分子杂交的过程中，两种生物DNA单战的豆补碱林会结合在一起，形成染合 双体区，在受有互补戴基序列的部位，仍然是两条避离的单链，如图所示。下列叙述正 角的是 醇的单目 背种代A 98为n 打种简0水A 静介衣料 A.在DNA分子杂交之前，可在50℃的条件下使DNA变性解聚为单链 B两个缘物种生物的DA分子之间进行杂交，形成的染合双陈区较少 C,适过设计两种DNA引物分别与DNA的两条链结合，经CR技术可大量扩增目的 基因 D索合双链区一条的序列是'GCT-',另一条链的序列是3'CGUAGA5 12.基因工程中需使用特定的限解陈切料基因找体，以便与目的基圆连接形成基圆表达 载体。研究人员将相月的基因载体分组并进行相应制切处理（如表），其中限制南H 和H2识则序列不月。各组基因载体经费切处理后，进行浆脂糖凝胶电这松测，实验结 果如图所示。下列说法正峰的是 《 分里相皮切处 M 甲 限制南H 限制南社 6 丙限脑南1+H拉 2 A.孩基因载体为8kb的环状DNA分子 B限割衡H和与H2在该载体上都有惧别和切割位点 C限割南H1与H2在该镜体上的爵切位点最短相距0,4kb 口限制南作用于该载体时会直接导致氢堡和降酸二密健的新及 密 单元过关检测（十五）生物学第4页（共12页] 13.知图是利用基因工程技术培食新品种水稻的部分麓程，序号代表操作过程。下列叙述 情视的是 ·农轩菌 C 食婚 衡衣霸 A利用R技术扩增日的蒸因需依次经过变性，廷伸，夏性阶段 县为防止目的基因自身环化，过程①最好使用两种限制周 C、常用农杆菌作为受体湘围，原因是紧殖速度快，蒸因组结构简单 九重组丁广方质粒上的TDNA他将目的甚因整合到宿主细图染色体上 14,神经科学家设计了一种合成蛋白质LK1(结合ATP算桶酸化其尼标的蛋白规)，佳 改善老华认知退化人的记忆功能。下列叙迷错误的是 A设计蛋白质LK灯时，先设计其基因的碱基序列再推测其功能 B通过基因定点突变技术可对[K]蛋白某因进行碱某的特换 C.设针蛋白质1MK们利用的技术是蛋白质工程，其可制造新的蛋白爱 D.蛋白质的高级结构十分复牵，故蛋白质工程是一项难皮很大的工程 15.下列不属于对转基因生物安全性评价的是 入对转基因生物的额色，大小形态的评价 五附转人基因是香会污橐本土生物进行评价 C转琴因食品的毒理学，政敏性和营养学评价 D.对转基因生将的天敌，相食对象等的影响 二、非选择题：本题共5小题，共仙分。 1后，12分)重叠延神PCR定点突变过型分为两步，如图1。内皮即素能通试抑满血管内皮 相胞的增殖和直管的生戒限脚种宿细图的生长。西究人员利用重叠延钟R定点刻 变技术将内皮抑素耗因南数益为能进入偏鞋并有较强邦癌作用的突变基因和(m), 排再与抗Her2(人表皮生长因子受体2)的纳米抗体基因Dm形戒融合基因 Dmdo(m》,导人大肠杆南并表达，主要过程如图2，其中K容表示卡那霜素抗性 基因，刊竹振因1FI的表达物能和操纵基因40结合抑制基因的表达，PTG佳 与L【的表达产物结合，透导目的基因的表达.同答下列同题 单元过关检测（十五}生物学第5页{共12面） 衡水真显 4代发3引身为1K妇 突空F 矣里 “美变R 华2网 舞安位过 -(a A R动子a 同梦从因年上 (1)图1中代R和风R2配制反应体系时需加人不同的一·图2中构建重组 质粒时使用的限制酶是 (2)下列①-是相关引特，其中突变1F为引物①，则突变1R,突变F,突变2R分别 为 D5-GCGGCATGOGGGOCGATOGOGTGACTGOCAGTGCTGTOC-3 -CGGAATTOCATATGOGOOGOOGOCGOCGOCGCCGCCGCCGC3 S5-GGACAGCACIGGCAGTCAOGOGATOGOOOCGCATGOOGC-3 -GTGGCATGGCTCGGACGCAAACGGGOGCAGGCTG3 O5'-ATTTCTCGAGTTACTTGGAGGCAGTCATGAAGCTG-3 O5-CAGCCTGCGCCOGTTTGCGTCCGAGCCATGOCAC-3' (3)导人重组质粒的大肠杆图由于周节基因L斯】的表达产物能和操枫蒸因0结 合，阻止爵的移动，抑Dmmd如(m》的转录。当菌株扩大培养到一定数 量后在培养基中加入 ,使Dimr endo(m》持镂表达. 密在 单元过关检测（十五】生物学第6页（共12页」 9 (4)研究表麦明，乳肆癌霜出现H2某因的高表达（不同乳粮瘤维监的表达有染界），因觉 H:2放认为是乳粮癌粒离和治疗的重要花点，研究人黄用不同漆度Dm(m) 融合蛋白处理乳廉亮组熊SK球3，DA231,MC下了和正常乳藤组胞HB图100作为 实验组，选取正常培养的乳馨癌紐底和正常乳藤相触作为对搦组。一段时间后分别 测定对器组和宾验组的闺胞数并计算神刚率，结果如图所示，押制率的计算公式是 。Dmmo(网)监合蛋白对不同乳整高组鞫的抑料率木同，其 可能蒙因是 M7 9川 (行》纳米抗体是传统抗体的重陆可变区片段，只有传烧抗体的1/10，但内都存在更多的 二魔键，结构更稳定。与传统抗体相比，钠米抗体的优点是 17,(12分)人乳铁蛋白(1F)具有多种生理功能，被认为是一种极具开发潜力的食品逐加 剂。如图为某食品公国利用乳摩生物反应器生产下的过程，国答以下闻愿： 1情强子1控 1光务作的性 他及之之箱清子团奖国低框，监花位 I。I。3I,u目得制南，为眼我延具.四为宾格城胜某四的年拥国 口)瑟从bLF乳黎表达授体中获取目的基因并使之成功表达生产LF,使用的限到刚 最住是 。将月的基因导人成纤蜂细胞中一般应用的技术是 (2)成虾维细图培养液中漆知HPO,一，HPO,一和CO一的作用是 在导人目的蒸因之前，或纤峰细胞需用 处理使之分散成单个相型。 单元过关检测（十五}生物学第7页！共12页} 衡水真见 (3)在较移植过程中，先将采集到的廊母组围体外培养到 期后去枚，再将成纤维 组做从切口往时到卵周慰内，使用电刺酸或化学方法促证 形成重构胚 《4)在获取府母钰散和胚始移植前要注射促唐生成微素成刻前列焰醇等性藏素。对 供明母羊往射促府海生成数素等微素，其目的是 :对受体母羊 (代华羊)佳射刻前列烯醇，其目的是 (5)为检验乳翠生物反成渴是香成功，研究人员进行了物菌实验。其结果如下： 妇划 1 2 3 4 几4万U青有素 人乳清 物满国乳清 边抵上物质 ?(缩盼倍) 0,25万U链葡素 (浓缩2的结) (排缩)信) 海菌图直径(m） 22 15 1.7 无 ①组则4遂纸上的物质是 ②与人的lF相比，无摩生物反应器生产的h山F抑菌皱果 (6)为绳保转基因产品的安全性，谈食品公司后阶段应进行的工作是 A,实雀转蒸因产品标识 A进行食月安全性评估 C、检测转基因羊乳成分 几鉴定基因是否量定遗传 18.(12分)植物在高于监内N滚度的环境下，S以53和S05叉颜活位于爱额上的转运蛋 白S51,5S】通过50S信号通路与鞫场内结合并将其持出服直外，维持其正常 生合活动。国答下列题： 1D植物利用S3信号通路将N:'排出E数外，这种运输方式的特点是 (2)酒过基国工程在水暂中过量表达O1夤白，以期增强水稻抗盐能力 ①为孩朝编码SS1蛋白的基因，可提取所生型水稻总RNA,道过 茯得模 板DNA,经PCR获得SOS基因片段 ②调序表明，S3」甚因编刊序列含有3444个核苷酸，其中A+T含量占53%，模 板鼓中C含量为6%，那么SS!基国双提序列中G十C的含量为 %. ③构建表达载体时，在下图所示载体含有的限制酶讽划位点薇入SS基因。序 列分析发凳S1基因内部有XI的识别序列，为使载体中SS基因和绿色荧 光蛋白基因正确表达，度在S1基因两南分别泽加 两种限 制库的积别序列，将S1基因辑人载体前应这用 两种限刺 屏对载体酶韧。 密在 单元过关检测（十五）生物学第8页（共12页] 色家无金◆) Austil SeI GAC ATG......T GAA TIC AIG-DNA 一er An cily✉m fily Gil Ph Mer…niy s-CIMA I T.AGATETS y.ucC. 1于tT c0d0GG w14 S-ACIAGET 盒 ()重组爱粒转化水眉后，过取可发绿色荧完的植株，整定其抗盐能力是否增强，采取 的操作是 (4)若发现水稻中过量表达5：基因并不能明是提高其抗盐能力，从信号通路角度 分析，可能的家因是 19.(12分)荧光素南1c蛋白)由550个氢其能组成，分为N绮和C%2个功能片段，即 1u加蛋自(2416氢从酸)和CLuC蛋白(398一550氢本酸)，两部分不能白动重组并发 挥作用：将目杯蛋白OBKI蛋白和O⅓门G2蛋白分别与NLc蛋白和CL蛋白腔 合，若2个目标蛋白相作用，期NL©蛋白和Cc蛋白能域功朔装为荧光素南并分 解荧光素发出荧光。科研人员构建了可表达OWK]-HAN融合蛋白的表达载体 1和可表达C☐eOX1G2融合蛋白的表达线体2并进行了检测，如图1解京，图中 HA为标签置白（用于口的蛋白的粒圈，示踪等）的偏码序列： Ape l SI 流站线体2一 用目随段载体露分结利 单元过关检测（十五}生物学第9页共12面） 衡水真见 KO! H2 (门)质粒载体有一至多个 ,供外翼DA片段插人其中：已知 表达残体1和2上均含有卡那霉素抗性基因，目的是 :烟草 是双子叶植物，将藏组质粒导人草叶片看用的方社是农杆常转化法，侵垫烟草叶 片细散后的农仟菌在转化过程中表规出的特点是 (2》构建重组质粒1时，需要把OK1基因的对应降止密弱子的3个碱基去除，原因 专 :图中HA编码序列扬入到OK1基因 编码随的 (填5'端”或“？'精”")，偏码链为转录时历用模板链的互补链。 (3》如果用抗L心蛋白抗体分别校测表达结体1和2融合蛋白表达精况，结果如图2所 承，可优先选用抗 蛋白杭体进一步区分，条带1为 融合蛋白， (4)将分别含有表达裁体1和2的农杆茵圆液其同注财到含有卖光素的烟章叶片后可 检测到荧光，说明 21,(12分)拟南体内的基因X具有多个启动子，通过一种光敏色素作为受体，对光刺激 进行应答，由此就拆不同的启动子并转录出长度不刺的mRNA,从面表达出存在于泪 胞内不同置的不同蛋白质，由此使拟南芥基残出不司的生长状态。其期关蛋白的合 成过程如医所示 通子 0清千2 ● ■ 5● ■了 mKN X.1 ■了 国RNAX￥ 细可保转移的可 ■水升白线X 末满 ■丰韩白项关之 密西 单元过关检测{十五】生物学第10页（共12页】 9 (1》两种蛋白规 (填”或b”)末端的氢基酸序列相同，该末端对成的是蛋白 质的 《“一NH:"或·一COOH)末希。米骑是引蛋白质被运输进人叶 绿体的信号肽段 (2)研究人员通过特定技术，将绿色菱光蛋白(GFP)的基因片段辅入到基因X的特定 位置，使表达出的蛋白霞X①，X四能带有绿色数光蛋白，以实观它们在细盥内的可 视化，由此得到A系植株，(《GFP基因不含启动子和终止子) ①根据图1，GFP基因片段应插入到基因X内学每表示的特定位置 ②GF尸基因来白于水辞等动物的细韵中，需先选择合适的限制南将其从处色体 DNA上切下来。GFP基因两侧的碱基序列如图2所示，限据碱基序列应遗择下 表中的 进行切图。 限制帝 飘序列 G+GATOC Bne HI CCTAG +G Hind目 A+AGCTT TTGA年A G CGGOCGC Nar I OGOCGGC G G￥AAT EcpR CTTAA↑G 衡切菌需对GFP基因进行PR扩增，b侧所用引物己轻裤定，侧引物活在以 下‘种中进行还择。根暴a侧序列应选择 ,不砖其能8种的由是 在R仪中完成4个霜环后， 含有该引物的DNA片段数为 个。 引物1B'ATCCTGCTAR ☑引物2：5 TATGGATCC3 写引物3,5 GGATCCATA3 物4：5 GGAAGGATA3 单元过关检测1十五}生物学第11页（共12页引 衡水真驱 (3)研究人员在A系植袜的基魂上，去除产生光敏色素的基因后得到B系植依。围后， 分别在圆暗条件和红光条件下堵养A,B两系植株，培养条件及底测到黄光的部位 如表所示。 GF印卖光的局部器位 发有暴件 国明条件红光条件 A系植物阳胞质基烦] 叶绿体 日系植物图购质基质门帽购质蒸质 根据以上研究结果，A系植株对红光颗预件出定容被激活的原因是 公在 单元过关检测{十五】生物学第12页（共12页】衡水真题密卷 果醋发酵时pH较低，抑制了菌种活性。 ③果醋的形成是以乙醇为底物，在酶的催化下， 通过醋酸发酵形成的。依据图3可知，当乙醇 含量较低时(5%)，总酸含量较低，此时是由于 乙醇作为底物不足所导致：当乙醇含量过高时 (9%),总酸含量更低，推测原因可能是乙醇含 量过高则会抑制醋酸菌的生长和代谢，导致青 梅果醋中总酸含量较低。 19.(1)C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶刚果红染色法 (2)选择培养（增加纤维素分解菌的数量）能 利用刚果红的微生物也能出现透明圈（能利用 淀粉的微生物也能出现透明圈，因为淀粉也能 与刚果红形成红色复合物) (3)纤维素葡萄糖能被细菌利用，影响实验 结果 (4)增加土壤肥力，提高肥效，减少环境污染 【解析】(1)纤维素分解菌可以合成和分泌纤维 素酶，纤维素酶是一种复合酶，其组分至少有C 酶，Cx酶和葡萄糖苷酶。对纤维素分解菌进行初 步筛选后，可通过刚果红染色法进行进一步鉴定， 菌落周围出现透明圈的即为纤维素分解菌。 (2)培养基A中含有的滤纸作为唯一碳源，滤纸 的主要成分是纤维素，用该培养基培养的目的 是增加纤维素分解菌的数量，相当于选择培养。 培养基C中长出的菌落不一定都能分解纤维 素，能利用刚果红的微生物也能出现透明圈（能 利用淀粉的微生物也能出现透明图，因为淀粉 也能与刚果红形成红色复合物)。 (3)为了比较几种纤维素分解菌的分解能力，检 测每种菌种的发酵液中“纤维素”含量的变化比 较准确，因为纤雏素分解过程中会产生很多中 间产物，未必都是终产物葡萄糖，因此检测纤雏 2024一2025学年度单元过关检 (含生物技术安 一、单项选择题 1.C【解析】限制性核酸内切酶用于切制DNA片 段，故①用的是限制性核酸内切酶：DNA聚合酶 用于DNA的复制过程，将单个的脱氧核糖核苷 酸连接起来，形成脱氧核糖核苷酸链，故④用的 是DNA聚合酶：DNA连接酶用于连接DNA片 段，故②用的是DNA连接酶：解旋酶会使DNA 双链解旋而分开，故③用的是解旋酶。 单元过关检测 素含量较准确，且葡萄糖会被纤雏素分解菌利 用，进而影响检测效果。 (4)筛选出的菌株用于堆肥后，肥料可用于还 田，其意义是增加土壤肥力，提高了肥效，减少 了环境污染。 20.(1)获得能产生特定（治疗乳腺癌的）抗体的B 淋巴细胞 (2)动物细胞的融合一定的流动性 (3)筛选杂交瘤细胞能大量增殖，又能产生特 定抗体 (4)单克隆抗体能使药物精准地作用于乳腺癌 (靶)细胞，避免其他细胞受损 (5)由单一B淋巴（或杂交瘤）细胞克隆产生的、 只识别某一特定抗原的特异性抗体（或由一种B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的单一杂交瘤 细胞产生的特异性抗体) 【解析】(1)向小鼠注射特定的抗原应取自人的 乳腺癌细胞，目的是使小鼠体内能产生获得能 产生特定（治疗乳腺癌的）抗体的B淋巴细胞。 (2)步骤①是指动物细胞的融合，实现该过程依 赖于细胞膜具有一定的流动性的结构特点。 (3)步骤②是指筛选杂交瘤细胞，经步骤③筛选 得到的杂交瘤细胞具有的特点是能大量增殖， 又能产生特定抗体。 (4)ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，原因 是单克隆抗体能使药物精准地作用于乳腺癌 (把)细胞，避免其他细胞受损。 (5)单克隆抗体是指由单一B淋巴（或杂交瘤） 细胞克隆产生的、只识别某一特定抗原的特异 性抗体（或由一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合得到的单一杂交瘤细胞产生的特异性抗体。 测（十五）生物学·基因工程 全性和伦理问题) 2.A【解析】PCR是一项体外扩增DNA分子的技 术，可用于目的基因的获取及扩增，故可通过 PCR的方法获取GM-CSF基因；构建GM-CSF 基因表达载体是基因工程的核心，该过程需要限 制酶和DNA连接酶：基因表达载体上的复制原 点可以启动复制过程，启动子和终止子可以调控 GM-CSF基因的表达；大肠杆菌属于原核生物， 将目的基因导入原核生物的方法是C2+处理法 ·生物学· (感受态细胞法)，将目的基因导入动物细胞最有 效的方法是显微注射法。 3.D【解析】通过化学诱变剂可以让天然荧光素 酶的基因序列进行随机突变，但化学诱变通常是 不定向的；改造天然荧光素酶所用的基因表达戟 体必须包含启动子和终止子，启动子是驱动基因 转录的元件，而终止子是指示转录终止的元件： PCR方法主要用于检测DNA的存在或者染色 体DNA上是否插入目的基因，检测目的基因是 否翻译为蛋白质的方法为抗原一抗体杂交：改造 后的荧光素酶在一定条件下催化DTZ发光是将 化学能转化为光能。 4.B【解析】DNA粗提取与鉴定的实验中，应选择 富含DNA的材料，洋葱、莱花、香蕉、菠莱和猪肝 均可作为提取DNA的材料：离心研磨液的目的是 加速沉淀，离心能够加速知胞膜、细胞器、一些较大 杂质的沉淀，离心法可以获得更高纯度的DNA;过 滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止DNA 降解；去杂质时离心转速为1500r/min析出时离 心转速为100000r/min,故析出时的离心转速明 显高于去杂质时。 5.D【解析】将AhCMO基因导入棉花细胞可用 农杆菌转化法，因为农杆菌中的T质粒能将目 的基因整合到受体细胞的染色体DNA上；基因 表达载体的构建是基因工程的核心，即构建基因 表达载体是培育转基因抗旱棉花的核心工作； AhCMO基因成功插入棉花细胞柒色体上也未 必能正常表达，因为基因的表达包括转录和翻译 两个步骤，因此还需要对转基因棉花进行进一步 的检测和鉴定；PCR扩增AhCMO基因时需要设 计两种引物，这两种引物之间不能发生碱基互补 配对，否则无法实现DNA体外扩增。 6.C【解析】相对分子质量大小会影响物质在电泳 时的迁移速率，DNA片段相对分子质量越大，迁 移就越慢，分子量越小，迁移速度越快；为了便于 对分离后的DNA片段进行检测，在凝胶制备中 加入核酸染料，能够与DNA分子结合：将电泳缓 冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶1mm 为宜：琼脂糖凝胶电泳可根据DNA分子大小、电 荷等对DNA混合物进行分离、鉴定 7.C【解析】农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可 转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的 DNA上，因此应该将抗虫基因插入农杆菌Ti质 粒的T-DNA片段内；若在单子叶植物的伤口处 涂抹酚类化合物，则可以用农杆菌侵染水稻、玉 米等单子叶植物，目的基因的黏性末端与质粒的 黏性末端依赖碱基互补配对原则连接在一起；转 参考答案及解析 基因是否成功，最简便的方法是从个体水平上观 察该植物有没有抗虫性状。 8.B【解析】进行PCR扩增需要的酶是耐高温的 DNA聚合酶，不需要解旋酶；欲将某功能蛋白的 结构改变，应设计诱变引物，该过程属于蛋白质 工程：在PCR1中获得的大引物是指以诱变引物 延仲得到的DNA链为模板；PCR子链的延仲过 程都是从5'开始的，引物与产物互补配对，因此 都从引物的3'端开始的。 9D【解析】要想获得抗褐变的转基因苹果，可选 抑制PPO表达的基因作为目的基因，而卡那霉 素抗性基因为标记基因；过程①是目的基因表达 载体的构建，是基因工程的核心步骤，该过程中 至少需要限制性内切核酸酶和DNA连接酶的参 与：在步骤②之前，需要用次氯酸钠溶液对苹果 嫩叶碎片进行消毒处理，从而保证脱分化过程正 常进行：为了评估目的基因对抑制苹果褐变的效 果，可与导入不含目的基因质粒的植株作对照， 本实验设计的目的是排除质粒导入本身对实验 结果的影响，同时也能检测导入目的基因的 效果。 10.A【解析】蛋白质工程的目的是根据人们对蛋 白质的功能需求改造或制造蛋白质，理论基础 是蛋白质的结构与功能相适应：比较半胱氨酸 和丝氨酸的密码子，若第二个碱基由G替换为 C,就可引起氨基酸的替换，所以基因上发生定 点突变(C→G),可实现基因的改造；该蛋白质工 程的技术思路与中心法则相反：改造后的干扰 素由于氨基酸序列改变，导致结构改变，从而延 长体外保存时间，但其仍具有干扰病毒复制的 功能，即改造后的干扰素与天然干扰素的功能 不是完全不同。 11.C【解析】当温度超过90℃时，DNA分子发 生变性，双链DNA解聚为单链，PCR时，一般 热变性温度设置在94℃；在分子杂交时，形成 杂合双链区的部位越多，DNA碱基序列的一 致性越高，说明在生物进化过程中，DNA碱基 序列发生的变化越小，因此亲缘关系越近。所 以两个近缘物种生物的DNA分子之间进行杂 交，形成的杂合双链区较多；要扩增出目的基 因，需要根据DNA的两条链分别设计引物，所 以设计两种DNA引物分别与DNA的两条链 结合，经PCR技术可大量扩增目的基因：DNA 分子杂交后，杂合双链区（碱基互补配对）一条 链的序列是5'-GCATCT-3',另一条链的序列 是3'CGTAGA-5'。 9 衡水真题密卷 12.B【解析】由图可知，当仅用一种限制酶切割载 体时，仅产生一种长度的DNA片段，因此该载 体最有可能为0.8kb或0.8kb倍数的环状 DNA分子；当用一种限制酶切割载体时，产生 的DNA片段等长，而用两种限制酶同时切割 时，产生两种长度的DNA片段，所以两种限制 酶在该载体上都有酶切位点：用两种很制酶同 时切割载体时，产生0.6kb和0.2kb两种长度 的DNA片段，所以两种限制酶的酶切位，点最短 相距0.2kb;限制酶切割载体时直接破坏的是 作用位点上两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二 酯键。 13.A【解析】利用PCR技术扩增目的基因需依 次经过高温变性、低温复性、中温延仲阶段；构 建重组质粒时用两种限制性核酸内切酶进行酶 切，可以防止目的基因的反向连接和质粒的自 身环化：常用农杆菌作为受体细胞，原因是繁殖 速度快、基因组结构简单，农杆菌中T质粒上 的T-DNA能转移到植物细胞，并將目的基因整 合到宿主细胞染色体的DNA上，所以农杆菌中 的Ti质粒可作为基因工程的载体。 14.A【解析】蛋白质工程的基本途径是：从预期 的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列·找到相对应的脱氧核 苷酸序列（基因）；通过基因定点突变技术可对 LMK1蛋白基因进行碱基的替换：设计蛋白质 LIMK1利用的技术是蛋白质工程，其可制造新 的蛋白质：蛋白质的高级结构十分复杂，故蛋白 质工程是一项难度很大的工程。 15.A【解析】转基因生物的颜色、大小，形态与转 基因生物的安全性无关，故对转基因生物的颜 色、大小、形态的评价不属于对转基因生物安全 性评价；污染本土生物会对生物多样性造成威 胁，因此对转入基因是否会污柒本土生物进行 评价属于对转基因生物安全性评价：对转基因 食品的毒理学、致敏性和营养学评价属于对转 基因生物食物安全的评价：转基因生物的天敌 捕食对象与生物多样性和生态系统稳定性有 关，因此对转基因生物的天敌、捕食对象等的彩 响属于对转基因生物安全性评价。 二、非选择题 16.(1)引物EcoRI、HindⅢ (2)③④⑥ (3)RNA聚合IPTG 9 单元过关检测 (4)(1一实验组细胞数/对照组细胞数)X100% 不同乳腺癌细胞Her2基因的表达水平不同，进 入癌细胞的Dim-endo(m)融合蛋白的数量有差 异；Dim-endo(m)融合蛋白中的endo(m)对不 同乳腺癌细胞的杀伤力不同) (5)穿透力强，作用持久，免疫原性弱 【解析】(I)DNA聚合酶要延仲DNA链，必须 要有一个3'端的羟基，没有这个结构，DNA聚 合酶无法合成DNA。引物为DNA聚合酶提供 3'端羟基，使得PCR继续，因此必须选用不同的 引物，保证它们能够复制；要从含有emdo(m)基 因的DNA分子中获得edo(m)基因并保留突 变位，点，只能选用EcoR I、HindⅢ来切割，同 时将endo(m)基因插入质粒时需要保留KanR、 LacI等，所以选用EcoR I、HindⅢ这两种限 制酶来处理DNA分子和质粒； (2)根据引物的作用及特，点，如果突变1F为引 物①，则突变1R、突变2F、突变2R的引物分别 为③、④、⑥： (3)由题千可知，当调节基因LacI的表达产物 能和操纵基因Lac0结合抑制Dim-endo(m)的 转录，而转录过程需要RNA聚合酶来催化，因 此LacI的表达产物能和操纵基因Lac0结合， 阻止RNA聚合酶的移动而阻止转录过程；由题 千可知，IPTG能与LacI的表达产物结合，诱 导目的基因的表达，因此当葡株扩大培养到一 定数量后在培养基中加入PTG能促进Dim endo(m)持续表达； (4)抑制率一（对照组平均细胞数一实验组平 均细胞数)/对照组平均细胞数×100%，即抑 制率=(1一实验组平均细胞数/对照组平均细 胞数)×100%； 由题意可知，不同乳腺癌细胞的Her2基因表达 有差异，因此用不同浓度的Dim-endo(m)融合 蛋白处理乳腺癌细胞后融合的细胞数量不相 同，从而对不同乳腺癌细胞的抑制率不同： (5)纳米抗体内部存在更多的二硫键，其结构更 稳定，作用的时间更长：纳米抗体是传统抗体的 重链可变区片段，意味着钠米抗体与传统抗体 同源性比较近，它的免疫原性比较低：钠米抗体 只有传统抗体的1/10，分子更小，具有较强的穿 透力；纳米抗体可以在微生物系统（如细菌、酵 母菌、真菌)中大量表达，并且可以通过展示文 ·生物学· 库中快速筛选，使得纳米抗体具备更低的生产 成本优势。 17.(1)SalI和NolI显微注射法 (2)维持pH值胰蛋白酶 (3)MⅡ/减数第二次分裂中 细胞融合 (4)超数排卵同期发情 (5)①正常羊乳清②差/弱 (6)ABC 【解析】(1)对目的基因进行切割时，通常选用 两种不同的限制酶，分析题图所给的LF乳腺 表达载体，从中获取目的基因并使之成功表达 生产hLF,使用的限制酶最佳是SalI和NouI, XhoI和NheI这两种限制酶具有两处可以作 用的切割位点，不宜选用。将目的基因导入成 纤维细胞（动物细胞中一般应用的技术是显微 注射法。 (2)成纤维细胞培养液中添加H2PO、HPO 和HCO;的作用是维持pH值。在导入目的基 因之前，成纤雏细胞需用胰蛋白酶（或胶原蛋白 酶)处理使之分散成单个细胞。 (3)在核移植过程中，先将采集到的卵母细胞体 外培养到MⅡ（减数第二次分裂中）期后去核， 再将成纤维细胞从切口注射到卵周隙内，使用 电刺激或化学方法促进细胞融合，形成重构胚。 (4)在获取卵母细胞和胚胎移植前要注射促卵 泡生成激素或氟前列烯醇等性激素。对供卵母 羊注射促卵泡生成激素等激素，其目的是超数 排卵，获得更多的卵细胞：对受体母羊（代孕羊） 注射氯前列烯醇，其目的是同期发情，使得受供 体处于相同的生理状态。 (5)①为检验乳腺生物反应器是否成功，组别4 滤纸上的物质是正常羊乳清（浓缩20倍）。 ②从表格数据可知，与人的hLF相比，转基因羊 乳清（浓缩20倍）实验组的抑菌图直径更小，说 明乳腺生物反应器生产的hLF抑菌效果差 (弱)。 (6)为确保转基因产品的安全性，该食品公司后 阶段应进行的工作是实施转基因产品标识、进 行食用安全性评估以及检测转基因羊乳成分， 由于羊乳为外分泌液，鉴定基因是否稳定逢传 不影响其产品，ABC正确，D错误。 18.(1)需要能量、需要载体 参考答案及解析 (2)①逆转录②47③SpeI、EcoR I XbaI、EcoR I (3)将转基因水稻和普通水稻种植于高于胞内 Na浓度的环境下，观察两种水稻的生长状况。 (4)过量表达SOS1基因使转运蛋白SOS1含量 增多，SOS1通过SOS信号通路将胞质内的 Na过多地排出细胞外，影响细胞本身对Na 的利用 【解析】(1)由题千信息“在高于胞内Na+浓度 的环境下，SOS1通过SOS信号通路与胞质内 Na结合并将其排出细胞外”可知，植物利用 SOS信号通路将Na排出细胞外是逆浓度梯度 的运输，因此运输方式为主动运输，特点是需要 转运蛋白，需要能量。 (2)①为获得编码SOS1蛋白的基因，可提取野 生型水稻总RNA,通过逆转录获得模板DNA, 再经PCR获得SOS1基因片段。 ②SOS1基因编码序列中A十T含量占53%，则 G十C含量为47%. ③由图可知，荧光蛋白基因内部存在SpI和 BamH I两种限制酶切序列，因此对载体酶切 时不能选择这两种酶，并且不能选择限制酶 SmaI,否则会导致载体中SOS1基因和绿色 荧光蛋白基因不能正确表达，故选择Xb如I和 EcoR I两种限制酶对载体酶切，由于SOS1基 因内部有XbaI的识别序列，故不能选择限制 酶XbaI对目的基因酶切，但需要目的基因有 与载体相同的黏性末端，故可在SOS1基因两 端分别添加SpeI和EcoR I两种限制酶的识 别序列。 (3)鉴定水稻抗盐能力是否增强，采取的操作是 将转基因水稻和普通水稻种植于高于胞内Na+ 浓度的环境下，观察两种水稻的生长状况。 (4)过量表达SOS1基因使转运蛋白SOS1含量 增多，SOS1通过SOS信号通路与胞质内的 Na过多地排出细胞外，影响细胞本身对Na+ 的利用。 19.(1)限制酶切割位点便于重组DNA分子的 筛选（重组质粒、重组载体、目的基因都对）能 将Ti质粒上的TDNA转移到被侵染的细胞， 并且将其整合到该细胞的染色体DNA上 (2)保证OsBIK1基因编码的蛋白和NLuc基因 片段编码的蛋白形成融合蛋白3'端 9 衡水真题密卷 (3)HA OsBIK1+HA+NLuc (4)OsBIK1蛋白和OsXLG2蛋白有相互作用 【解析】(1)质粒载体有一至多个限制酶切割位 点，供外源DNA片段插入其中；表达载体1和2 上含有的卡那霉素抗性基因是标记基因，可便 于重组DNA分子的筛选。农杆菌侵染烟苹后， 其Ti质粒上的T-DNA能转移到被侵染的细 胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上 使其随着染色体的复制而复制。 (2)构建表达载体1的日的是将OsBIK1-HA NLuC三个基因连在一起共同表达，因此需要使 其共同受到相同的启动子和终止子的调控，所 以构建重组质粒1时，需要把OsBIK1基因的对 应终止密码子的3个碱基去除，以保证OsBIK1 基因编码的蛋白和NLuC基因片段编码的蛋白 形成融合蛋白。已知编码链为转录时所用模板 链的互补链，编码链和模板链反向螺旋在一起， 而转录时RNA聚合酶是从DNA模板链的3'端 向5端移动，因此图中HA编码序列插入到 OsBIK1基因编码链的3'端，才能使转录时 OsB1K1-HA两个基因同时转录。 (3)根据图2可知，用抗LuC蛋白抗体分别检测 表达载体1和2融合蛋白表达情况，会出现条带 1和条带2，图2中最后一幅图出现的是条带1， 且已知图中HA为标签蛋白的编码序列，可用 于目的蛋白的检测、示踪等，因此可优先选用杭 HA蛋白抗体进一步区分条带1为OsBIK1十 HA十NLuc融合蛋白。 (4)将分别含有表达载体1和2的农杆菌菌液共 同注射到含有荧光素的烟草叶片后可检测到荧 光，说明OsBIK1蛋白和OsXLG2蛋白有相互 作用，使其组装形成了荧光素酶并分解荧光素 9 ·18 单元过关检测 发出荧光。 20.(1)b-C00H (2)①C②Bam HI、NotI③引物2引物 1不含有BamH I酶切位点、引物3方向错误 无法扩增、引物4后面6个碱基无法与模板链 配对15 (3)在光敏色素作用下A系植株选择启动子1 表达出蛋白质X① 【解析】(1)分析题图可知，X①和X②蛋白质b 末端的氨基酸序列是相同，由于肽链的合成方 向为氨基端到羧基端，故b末端对应的是蛋白 质的一COOH末端。 (2)①分析题图1可知，GFP基因片段应插入到 基因X内启动子②的下游，即字母C表示的特 定位置，从而经过转录、翻译得到目的产物。 ②限制酶能识别DNA分子中特定核苷酸序列， 并使每一条链中特定部位的磷酸二酯健断开， 分析题图2可知，应选择表中的BamH I和 NotI将GFP基因从染色体上切割下来。 ③引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序 列互补配对的短单链核酸。由于引物1不含有 BamHI酶切位点、引物3方向错误无法扩增、 引物4后面6个碱基无法与模板链配对，故应选 择引物2用于a侧进行PCR扩增；每次PCR循 环后，目的基因的量可以增加一倍，故在PCR仪 中完成4个循环后，含有该引物的DNA片段数 为15。 (3)分析表中数据可知，与去除产生光敏色素的 基因后得到B系植株相比，A系植物能对红光 刺激作出应答被激活，原因为在光敏色素作用 下A系植株选择启动子1表达出蛋白质X①。