1.2.2 微生物的选择培养和计数课件-2024-2025学年高二下学期生物人教版选择性必修3

1.2.2 微生物的选择培养和计数 1.阐明微生物选择培养的原理和数量测定方法。 一、学习目标 二、重难点 2.进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。 微生物选择培养的原理和数量测定方法。 【从社会中来】 自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。 如何从自然界中分离出需要的特定微生物？ 科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于聚合酶链式反应（PCR）。 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而水生栖热菌能在70~80℃高温条件下生存。 耐高温的酶 耐高温生物体 高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 [问题1]筛选耐高温的DNA聚合酶的思路是怎样的？ [问题2]为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？ 美国黄石公园 启示： 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 实验室中微生物筛选原理: 人为提供____________________的条件（包括_____、_____和_____等），同时____________其他微生物的生长。 有利于目的菌生长 营养 温度 PH 抑制或阻止 阅读课本P16-18，探究并思考完成以下问题： 1. 什么是选择培养基？ 2. 分解尿素的细菌筛选所用什么培养基？ 3. 稀释涂布平板法的操作过程？ 4. 将10g土样加到90mL水中是稀释了多少倍？ 5. 稀释涂布平板法和平板划线法有什么区别？ 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 分离出自养微生物 分离耐热菌 分离固氮微生物 分离真菌 不加碳源的培养基 70～80℃的高温 不加氮源的培养基 加青霉素的培养基 加石油为唯一碳源 分离出分解石油的微生物 (青霉素能杀死细菌、放线菌) （2）实例： 选择培养基 （1）概念： 7 培养基中加氨苄青霉素 具有抗氨苄青霉素能力的菌落 长出各种各样的细菌 培养基+氨苄青霉素 没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰 培养基 [现学现用]怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌？ 如何证明一个选择培养基具有选择性？ 基础培养基 选择培养基 应该设置基础培养基作为对照， 若完全培养基中生长的菌落数多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌几乎等于该选择培养基，该选择培养基不具有选择性。 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。 讨论1：如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 【思考·讨论】 CO(NH2)2 ＋H20 脲酶 + CO2 2NH3 在选择培养基中，用尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素CO(NH2)2 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基一 培养基二 讨论2：该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ ①从物理性质来讲，两者属于 培养基； ②从用途上来讲，培养基二属于 培养基，目的是为了获得 ； ③两种培养基共有的培养基成分 有： ； 培养基一的碳源主要为 ， 氮源主要为 ； 培养基二的碳源主要为 ， 氮源为 。 固体 选择 能分解尿素的微生物 碳源、氮源、无机盐、水 牛肉膏 蛋白胨 葡萄糖 尿素 那么1g土壤中有多少能分解尿素的细菌呢？ 通过选择培养基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌吗？ 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 不能，想知道就得需要解决2个问题： 可否直接制备土壤溶液，利用平板划线法接种到选择培养基上，进行培养计数？ 平板划线法 稀释涂布平板法 不能。①平板划线法最开始的划线细菌可能会长成一片，导致无法计数， ②灼烧接种环的时候也会杀死一部分细菌，导致计数偏小。 由于土壤中细菌数量的庞大，要想得到能分解尿素细菌的纯培养物，必须要对土样进行充分稀释，然后再将菌液均匀涂布到制备好的选择培养基上。 稀释涂布平板法 1.概念： 将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。 2.主要过程: A.梯度稀释菌液 B.涂布平板 稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。 聚集的微生物 单个细胞 菌液梯度稀释 单个菌落 涂布平板 生长繁殖 02 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g 微量 移液器 ①铲取土样，将样品装入纸袋中 注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌。 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。 稀释涂布平板法 微生物的选择培养 1×10 1×102 （1）梯度稀释菌液 14 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 注意：多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 稀释涂布平板法 微生物的选择培养 涂布结束后，要将涂布器灼烧灭菌。 （2）涂布平板 15 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板 ，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d，在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 微生物的选择培养 倒置 空白对照 稀释104倍 稀释105倍 稀释106倍 恒温培养箱 √ 注意事项：涂布结束后，应将一个未接种的培养基和已接种的培养基放在一起培养，以检测培养基是否灭菌彻底。 （3）培养与观察 培养时要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养为什么？ 16 17 案例:两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、 212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的做法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。 乙：其中一个平板计数结果与其他两个相差太大，操作过程可能出现了错误。 通常计数结果相差超过一个数量级，则需舍弃该数据后进行计数 （4）结果与分析 。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果 18 (5)注意事项 注意事项三 注意事项四 注意事项一 注意事项二 不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。 过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行 10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，在计算时，不要忽略； 由于使用的是选择培养基，所以一般情况下，获得的单菌落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 接种工具 单菌落的获得 用途 效果图 相同点 连续划线 梯度稀释→涂布平板 接种环 涂布器 从最后划线区挑取 稀释度合适的整个平板上都可找到单菌落 分离纯化菌种， 获得单菌落 ①分离纯化菌种，获得单菌落 ②用于计数 ①都能分离纯化菌种；②都在固体培养基上进行 平板划线法和稀释涂布平板法的比较 20 例．“筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术不能筛选成功的是(　　 ) A．在牛肉膏蛋白胨培养基中，筛选大肠杆菌 B．在以尿素为唯一氮源的固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物 C．用以纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物 D．在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物 A 例．某学者欲研究被石油污染过的土壤中的细菌数并从中筛选出能分解石油的细菌。下列有关操作错误的是(　 　) A. 利用平板划线法对细菌进行计数 B．利用以石油为唯一碳源的培养基筛选能分解石油的细菌 C．采用稀释涂布平板法分离菌种 D．称取土壤和稀释土壤溶液时应在酒精灯火焰旁操作 A 例.某同学计划用选择培养基筛选尿素分解菌,关于实验方案,下列说法正确的是(　　 ) A.进行梯度稀释的时候每次吸取的菌液量是随意的 B.从烧杯取出涂布器在火焰上灼烧后要放回烧杯中进行冷却 C.选择培养基能允许特定种类的微生物生长并抑制其他种类的微生物生长 D.涂布不同稀释倍数菌液的平板的培养时间应随菌液浓度的增大而增加 C 解析 进行梯度稀释的时候每次吸取的菌液量都是计算好的,A项错误;从烧杯中取出的涂布器在火焰上灼烧后不可再放回烧杯中,避免引燃烧杯中的酒精,B项错误;选择培养基是指在微生物学中,允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基,C项正确;涂布不同稀释倍数菌液的平板的培养时间应该一致,以排除时间变量的干扰,D项错误。 例、如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。请据图分析，下列说法错误的是(　 　) A.③号试管的稀释倍数为103 B.④号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能为⑤号试管的10倍 C.⑤号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109 D.将涂布器在酒精灯火焰上灼烧冷却后，再进行涂布 104 A 23 稀释102倍 稀释103倍 稀释105倍 既然稀释涂布平板法可以计算活菌数目，那么是怎么通过稀释涂布平板法统计活菌的数目呢？还有哪些统计活菌的方法呢？ 24 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测除样品中大约含有多少活菌。 原则 一般选择菌落数在 的平板进行计数。 同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后取其平均值。 缺点 统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。 因为当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落。 因此，统计结果一般用 而不用活菌数来表示。 30~300 少 菌落数 微生物的数量测定 （间接计数） 、 是成功统计菌落数目的关键。 恰当的稀释度 涂布是否均匀 1 稀释涂布平板计数法计数 重复实验，减少误差 25 甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？ （80+90+100）/3 0.1 × 105 = 9 ×107个/克 M代表稀释倍数； C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)； 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 计算公式 微生物的数量测定 1 稀释涂布平板计数法计数 1.间接计数法——稀释涂布平板法 26 原理 利用特定的 或 ，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。 细菌计数板 血细胞计数板 较薄，对细菌等较小的细胞进行观察和计数。 较厚，用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。 细菌计数板 血细胞计数板 优点 快速、直观、设备简单；能观察微生物的形态特征。 ①不能区分死菌和活菌 缺点 也可选择用台盼蓝染色法来区分活菌和死菌。 微生物的数量测定 2 显微镜直接计数 细菌计数板 血细胞计数板 ②不适于运动的和个体小的细菌 →统计结果会偏大 能被染色的为死菌 27 内容 显微镜直接计数法 间接计数法（稀释涂布平板法） 主要用具 计数依据 优点 计算公式 缺点 结果 微生物的计数方法比较 显微镜、细菌计数板或血细胞计数板 涂布器 细菌个数 培养基上菌落数 计数方便、操作简单 计数的是活菌 每毫升原液含菌株数＝每小格平均菌株数×400×1 0000×稀释倍数 每克样品中的菌株数:(C÷V)×M 　C:某稀释度下平板上生长的平均菌落数;V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);M:稀释倍数 不能区分死菌与活菌 当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落 比实际值偏大 比实际值偏小 28 例.下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法的描述,不正确的是( ) A.利用血细胞计数板计数属于显微镜直接计数法,其缺点是不能区分死菌与活菌 B.两种计数方法,其统计值与实际值相比,均有差异,但差异原因不同 C.两种计数方法均能在计数的同时观察到所研究微生物的形态特征 D.当菌落数目稳定时,一般选取菌落数在30~300的平板进行计数 C 例、土壤是微生物的天然培养基，下面是有关土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题。 稀释倍数 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 平均菌落数 >500 367 248 26 18 （1）从1×103~107倍稀释的稀释液中分别吸取0.1mL加到固体培养基上， 用　　 将其分散，每个浓度稀释液至少接种　 个平板，以减少实验误差。 （2）将接种的培养皿　　　 　在30-37℃的　 　　 箱中培养1-2 d，观察并统计　 ，结果如上表所示。找出合适浓度，推测出每克土样中的菌落数为　 。 涂布器 3 倒置 恒温培养 菌落数 2.48×108 30 【土壤中分解尿素的细菌的分离与计数】 1.取样的土壤要符合哪些要求才能获得更多的细菌？取样的部位是？ 2.测定土壤中细菌的总量和能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？为什么？ 3.在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？ 4.为什么要选取菌落稳定时的记录作为结果？ 5.在以尿素作为唯一氮源的培养基中分离出的微生物都是能分解尿素的吗？ 阅读教材P18~P19内容，思考并解决以下问题： 【探究 实践】 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 （1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 1.实验目的： 2.实验原理： 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。 利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 ①提供无机盐； ②调节pH。 细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的取样袋中。 3.操作步骤: （1）土壤取样 取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。 注意 不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。 测细菌数：一般用104、105、106稀释液。 （2）样品的稀释与涂布平板 思考：在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？ 选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数。 每个浓度至少设置4个平板 选择培养基（平行重复） 牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）。 设置2个平板作为对照： 不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。 如何验证培养基中是否含有杂菌？ 每个倍数稀释液设置涂布几个平板? 如何验证选择培养基是否筛选出一些菌落？ ①培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。 ②观察：每隔 统计一次菌落数目，选取 时的记录作为结果。防止 。 ③结果： 因培养时间不足而导致菌落数目遗漏 24h 菌落数目稳定 注意事项： 本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等； （3）微生物的培养与观察 一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。 （4）结果分析与评价 内容 现象 结论 有无杂菌污染的判断 空白对照的培养基中无菌落生长 基本培养基中菌落数偏高 选择培养基菌落形态多样，菌落数偏高 选择培养基的筛选作用 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目多于选择培养基上的数目 样品的稀释操作 得到2个或2个以上菌落数目在30~300的平板 重复组的结果 未被杂菌污染 被杂菌污染 混入其他氮源 选择培养基具有筛选作用 操作成功 若选取同一种土样，统计结果应相近 （5）进一步探究： 思考：得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？ 不一定；因为有些微生物可以利用能分解尿素的细菌的代谢物进行生长繁殖。 需要进一步鉴定 鉴定分解尿素的细菌 ——酚红培养基 原理： 脲酶 CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3 脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。 拓展： 淀粉培养基 在培养基中加入某种指示剂或化学药品（不影响微生物正常生长），使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应。从而达到鉴定的作用。 伊红—亚甲蓝培养基鉴别大肠杆菌(P30) 刚果红培养基鉴别纤维素分解菌 （6）鉴别培养基 二、拓展应用 2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中 40%-60% 能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈（如下图所示）。请回答下列问题。 几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈 （1）现在要从土壤中分离纤堆素分解菌，请你给出详细的实验方案。 用“纤维素为唯一碳源”的选择培养基进行培养，并在培养基加入刚果红进行鉴别。 几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈 （2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？ 富含纤维素的环境 如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等 （3）有同学说，可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。 这是人工设置适合纤维素分解菌生存的适宜环境，纤维素分解菌会在滤纸上聚集，就可以从腐烂的滤纸上筛选出纤维素分解菌。 透明圈直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。 例．“下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验操作的叙述，不正确的是(　　 ) A．利用稀释涂布平板法估算菌落数目的关键是有恰当的稀释度 B．若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置未接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照 C．该实验应采用稀释涂布平板法 D．用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红 B 例、在牛、羊等反刍动物的瘤胃中生活着多种微生物，其中有能分解纤维素的微生物。某科研团队按照如图所示的流程分离瘤胃中的纤维素分解菌，实验中需要甲、乙两种培养基，并在刚果红培养基平板上，筛选到有透明降解圈的菌落。下列叙述错误的是 A．培养基表面均加入一层无菌的石蜡主要是为防止杂菌的污染 B．甲培养基中唯一的碳源是纤维素，则该培养基是选择培养基 C．过程②中用适宜浓度NaCl进行梯度稀释是为了保持细胞形态 D．图中降解圈的大小与纤维素酶活性有关，菌落①降解能力最强 A A、反多动物的瘤胃中不含氧气，其中存在的纤维素分解菌适宜在无氧条件下生存和繁殖，因此培养基表面覆盖无菌的石蜡主要是为了保证培养的无氧环境,A错误; B、为了筛选纤维素分解菌，需要以纤维素为唯一碳源，能够分解纤维素的微生物能够生存，不能分解纤维素的微生物因无法获得碳源而死亡，因此甲培养基中唯一的碳源是纤维素，该培养基是选择培养基,B正确; C、过程②是进行梯度稀释的过程，在梯度稀释的过程中使用适宜浓度的NaCI可以保持细胞形态,C正确 D、纤维素分解菌能分解纤维素是因为其可以产生纤维素酶，纤维素酶的活性越高,对纤维素的分解效果越好，以这些菌为中心的透明圈的直径与菌落直径的比值越大，据图比较菌落a的降解能力最强，D正确。故选A。 43 例、一定浓度的抗生素会杀死细菌，但变异的细菌可能产生耐药性。为探究某种抗生素对大肠杆菌的选择作用，将大肠杆菌培养液接种到培养基上后，继续放置含该抗生素的圆形滤纸片和不 含抗生素的圆形滤纸片，一段时间后测量滤纸片周围 抑菌圈的直径，第一代培养结果如图所示。然后再重 复上述步骤培养三代。与上述实验相关的描述不符的 是（ ） A．图中1处放入不含抗生素的滤纸片起到对照作用 B．可采用稀释涂布平板法将大肠杆菌接种到固体培养基上 C．应从抑菌圈边缘的菌落里挑取大肠杆菌继续培养 D．随培养代数增多，抑菌圈的直径变得越大，说明细菌的耐药性越强 D 1.此时的透明圈是降解圈，透明圈的有无筛选对应的菌种 2.降解能力的大小：透明圈大小——与对应酶的量及活性有关 3.更精准——透明圈直径与菌落直径的比值反映降解能力的差异 4.如果透明圈是抗生素的抑菌圈——大，说明对应抗生素的抑菌效果好 例.金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题。 碳源、氮源、水和无机盐 增加金黄色葡萄球菌的数量 （1）7.5%NaCl肉汤培养基为微生物提供的营养成分包括            ，用7.5%NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是                      。 （2）操作中在血平板上的接种方法是                      ，接种操作前后需要对接种工具进行            灭菌。 平板划线法　 灼烧 45 例.金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题。 （3）在制备血平板时，待培养基      后，再加入适量血液．按培养基功能分类，血平板属于      培养基． （4）经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现           的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是  。 设置不加鲜牛奶但其他操作均相同的对照组 冷却 鉴别 周围存在透明圈 46 如图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，请回答下列问题： （1）图中选择培养基应以______为唯一氮源，鉴别培养基还需添加______作指示剂。产脲酶细菌在该培养基上生活一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成____色，这是________________________使指示剂显色的结果。 （2）在5个培养基平板上，分别接种0.1mL稀释倍数为105的土壤样品液，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是__________________，每毫升土壤样品液中的细菌数量为____________个。用此计数方法测得的细菌数比实际细菌数要______，原因是_____________________________________________________________________。 尿素 酚红 红 尿素被分解生成的NH3 稀释涂布平板法 1.75×108 偏小 因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落 课堂小结 微生物的数量测定 选择培养基的作用 微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法 微 生 物 的 选 择 培 养 和 计 数 选择培养基 微生物的选择培养 科学实例 筛选原则 选择培养基的概念及举例 稀释涂布平板法的操作过程 间接计数法 — 稀释涂布平板法 直接计数 —计数板计数法 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 培养基的制备 实验设计 （1）土壤取样 （2）样品的稀释 （3）稀释涂布平板法接种 （4）微生物的培养与观察 结果分析 Lavf58.51.100 $$