精品解析：浙江省台州市六校联盟2024-2025学年高二下学期4月期中生物试题

六校联盟2024学年第二学期期中联考 高二生物试题卷 （2025.04） 考生须知： 1．本试题卷分选择题和非选择题两部分。全卷共8页，满分100分，考试时间90分钟。 2．考生答题前，务必将自己的姓名、准考证号用黑色字迹的签字笔或钢笔填写在答题纸上。 选择题部分 一、选择题（本大题共20小题，每小题2分，共40分。每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，不选、多选、错选均不得分） 1. 生物工程技术如同一把双刃剑，既给人类带来了便利，同时也引发了人们对其安全性的担忧。下列叙述错误的是（ ） A. 我国禁止发展试管婴儿等辅助性生殖技术 B. 生物武器会对人类安全造成极大威胁 C. 研究转基因农作物时应防止转基因花粉的传播 D. 胚胎移植前无需对受体进行免疫检查 【答案】A 【解析】 【分析】①我国政府不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验； ②生物武器是指有意识的利用致病微生物、毒素、昆虫侵袭敌人的军队、人口、农作物或牲畜等目标，以达到战争目的的一类武器。 【详解】A、我国支持发展试管婴儿等辅助性生殖技术，但反对任何生殖性克隆，A错误； B、生物武器是利用生物战剂杀伤人员、牲畜，毁坏植物的武器，会给人类的生存安全造成严重威胁，应严格禁止生产和使用，B正确； C、研究转基因农作物时应防止转基因花粉的传播，以防止基因污染的发生，C正确； D、进行胚胎移植时，受体一般不会对移入子宫的外来胚胎发生免疫排斥，所以不必进行免疫检查，D正确。 故选A。 2. 某种土壤细菌可将尿素（CH4N2O）分解为CO2和NH3，但分解产物CO2不能为该菌提供营养。若欲筛选出该种土壤细菌，仅考虑碳源和氮源，下列培养基设置合理的是（ ） A. 仅尿素就可以，既是碳源也是氮源 B. 仅葡萄糖就可以，可以从空气中固氮 C. 尿素为氮源，需要葡萄糖作为碳源 D. 牛肉膏蛋白胨含C和N，可以满足 【答案】C 【解析】 【分析】 各种培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐等营养物质。 【详解】A、尿素中虽然含有碳和氮，但是碳元素不能被该细菌利用，所以不能作为土壤细菌的碳源，只能作为氮源，A错误； B、分离纯化的土壤细菌只能利用土壤中的氮源，不能从空气中固氮，B错误； C、尿素为氮源，需要葡萄糖作为碳源，C正确； D、牛肉膏蛋白胨虽然含有碳和氮，但是不能用作筛选该种土壤细菌的培养基的碳源和氮源，D错误。 故选C。 3. 下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是（ ） A. 接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培育检测 B. 接种时连续划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释获得单个菌落 C. 利用稀释涂布平板法可对微生物进行纯化、分离和计数 D. 利用高浓度NaCl的培养基筛选抗盐突变菌株 【答案】A 【解析】 【分析】1、微生物的分离：①利用该分离对象对某一营养物质的“嗜好”，专门在培养基中加入该营养物质，使该微生物大量增殖。这些物质主要是一些特殊的碳源、氮源，如纤维素可用来富集纤维素分解微生物，尿素可用来富集尿素分解微生物；②利用该分离对象对某种抑制物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物质，经培养后，由于原来占优势的它种微生物的生长受到抑制，而分离对象却可趁机大量增殖，使之在数量上占优势。如筛选酵母菌和霉菌，在培养基中加入青霉素，因青霉素可抑制细菌和放线菌的细胞壁的合成，从而抑制两类微生物的生长，而酵母菌和霉菌正常生长增殖。2、接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。 【详解】A、检测培养基被污染的方法是将未接种的培养基或接种无菌水，在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生，A错误； B、接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落，B正确； C、稀释涂布平板法和平板划线法是常用的两种菌种分离的方法，稀释涂布平板法还能对微生物进行计数，C正确； D、在高浓度的NaCl培养基中，不具抗盐性状的菌株不能生存，所以可以利用高NaCl的培养基筛选抗盐突变菌株，D正确。 故选A 4. 枇杷果具有滋阴润肺、化痰止咳的功效，但由于枇杷果肉细胞中含有大量的多酚氧化酶，在贮存运输过程中，果实因受挤压后容易发生组织褐变。为克服枇杷不易贮存的难题，厂家将其加工成枇杷汁、枇杷酒和枇杷醋，以满足市场需求。下列关于工业生产枇杷酒和枇杷醋的叙述，错误的是（ ） A. 枇杷酒和枇杷醋的发酵菌种不同，但代谢类型相同 B. 工业生产枇杷酒时，需要人工接种酵母菌 C. 利用枇杷酒制作枇杷醋时，需通入无菌空气 D. 对醋杆菌扩大培养时，通常接种至液体培养基 【答案】A 【解析】 【分析】果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧 条件下进行无氧呼吸，在氧气充足的条件下进行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的细胞核， 属于真核生物，适宜酵母菌生长的温度范围是18~30℃；果醋制作的原理是在氧气充足的条件下，醋酸菌将葡萄糖或者乙醇转化成醋酸，醋酸菌无核膜包被的细胞核，是原核生物，属于好氧菌，醋酸菌适宜生长的温度范围是30-35°C。 【详解】A、枇杷酒和枇杷醋的发酵菌种不同，前者是酵母菌，后者是醋酸菌，代谢类型不同，前者为兼性厌氧型，后者为需氧型，A错误； B、工业生产枇杷酒时，需要人工接种酵母菌，同时选择优良的酵母菌种，可提枇杷酒的产量和品质，B正确； C、利用枇杷酒制作枇杷醋时，需通入无菌空气，因为醋酸发酵的菌种是醋酸杆菌，该菌为好氧菌，C正确； D、对醋杆菌扩大培养时，通常使用液体培养基，因为使用液体培养基能促进培养液和菌种的接触，提高营养物质的利用率，D正确。 故选A。 5. 藿香是一种重要的中草药，《本草纲目》记载“豆叶曰藿，其叶似之，故名”。科研人员利用藿香的叶片为外植体进行植物组织培养，培养过程如图所示。下列说法正确的是（ ） A. ①过程需将外植体剪碎并用胰酶分散为单细胞后接种 B. ②过程给予光照处理的目的是促进外植体的脱分化 C. ③过程转移至④过程需提高培养基中细胞分裂素的含量 D. 可用射线处理愈伤组织细胞并筛选后获得优良突变体 【答案】D 【解析】 【分析】在植物组织培养时，需要添加植物激素，其中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。植物激素的浓度、使用的先后顺序及用量的比例等，都会影响实验的结果。生长素与细胞分裂素的用量比值高时，有利于根的分化，抑制芽的形成；比值低时，有利于芽的分化、抑制根的形成，比值适中时，促进愈伤组织的形成。植物组织培养的流程为：制备MS培养基-外植体消毒-接种-培养-移栽-栽培。 【详解】A、胰酶用来处理动物细胞，①过程可直接接种，也可以用果胶酶处理分散得到单细胞，A错误； B、②过程为脱分化，不需要光照处理，B错误； C、植物组织培养中培养基生长素用量比细胞分裂素用量，比值高时，诱导生根，比值低时，诱导生芽，③过程转移至④过程需提高培养基中生长素的含量，C错误； D、愈伤组织细胞一直处于不断的分生状态，容易受射线或环境（某些试剂）影响而产生突变，故可用射线处理愈伤组织细胞以获得优良突变体，D正确。 故选D。 6. 以某种植物的绿色叶片和白色花瓣为材料，利用植物组织培养技术繁殖该植物。下列叙述正确的是（ ） A. 在培养基中加入聚乙二醇，可获得染色体数目加倍的细胞 B. 以绿色叶片和白色花瓣作为外植体，进行组织培养均能获得试管苗 C. 来自同一植株不同部位的细胞，它们的全能性表达难易程度一般相同 D. 若用某一植物细胞进行组织培养，则该细胞必须有完整的细胞核和叶绿体 【答案】B 【解析】 【分析】植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。植物细胞具有全能性，即已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。 【详解】 A 、在培养基中加入聚乙二醇，其作用通常是诱导细胞融合，而不是获得染色体数目加倍的细胞。秋水仙素可以抑制纺锤体的形成，从而获得染色体数目加倍的细胞，A 错误； B 、绿色叶片和白色花瓣的细胞都具有该植物的全套遗传物质，以它们作为外植体，在适宜的条件下进行组织培养均能获得试管苗，B 正确； C 、来自同一植株不同部位的细胞，其分化程度不同，全能性表达难易程度一般不同。例如，幼嫩的细胞全能性相对容易表达，而高度分化的细胞全能性表达较困难，C 错误； D 、若用某一植物细胞进行组织培养，该细胞必须有完整的细胞核，因为细胞核是遗传信息库，是细胞代谢和遗传的控制中心。但不一定需要叶绿体，例如植物的根细胞没有叶绿体，也能进行组织培养形成完整植株，D 错误。 故选B。 7. 树莓果实营养丰富，应用组织培养技术可以在短时间内获得大量优质种苗，实现树莓的工厂化生产。下列与树莓组织培养相关叙述错误的是（ ） 外植体→愈伤组织→丛生芽→试管苗 A. 培养基中加入抗生素可降低杂菌的污染 B. 试管苗形成后需经炼苗后将其移栽入土壤中生长 C. 将丛生芽切割后进行组织培养可实现快速繁殖 D. 将外植体茎尖的形态学上端朝上，并完全插入到培养基中 【答案】D 【解析】 【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。 【详解】A、抗生素用于抑制细菌污染，因此培养基中加入抗生素可降低杂菌的污染，A正确； B、欲将试管苗移栽前应将其在培养箱中打开封口膜几天进行炼苗，再用流水清洗掉根部的培养基（避免被污染）后进行，B正确； C、丛生芽分生能力强，适合扩繁，因此将丛生芽切割后进行组织培养可实现快速繁殖，C正确； D、以茎尖作为外植体进行接种时应将其形态学上端朝上，形态学下端插入培养基中，但不是完全插入到培养基中，D错误。 故选D。 8. 病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构扩散，导致果蔬产量和品质退化。通过植物组织培养技术，利用茎尖可以快速培育出脱毒苗。下列有关叙述正确的是（　　） A. 配制MS固体培养基时，经高压蒸汽灭菌后再调pH B. 植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达 C. 切取的植株茎尖用70%的酒精消毒后，需放在清水中反复清洗 D. 脱毒苗培育是否成功，最终还需要通过接种病毒进行个体水平的检测 【答案】B 【解析】 【分析】MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。 【详解】A、配制MS固体培养基时，先调pH再高压蒸汽灭菌，否则容易引起杂菌污染，A错误； B、病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构扩散，植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达，B正确； C、切取的植株茎尖用70%的酒精消毒后，需放在无菌水中反复清洗，C错误； D、通过植物组织培养技术培育脱毒苗，是用茎尖等没有被病毒感染的组织培养植株，可以提高产量，其基因并没有改变，所以不可能有抗病毒的性状，脱毒苗培育是否成功，不需要通过接种病毒进行个体水平的检测，D错误。 故选B。 9. 某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞（中）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。下列叙述正确的是（ ） A. 制备肝细胞悬液时能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶处理肝组织 B. 恒温培养箱中的CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸 C. 为了保证细胞培养所需的无毒环境，需大量添加各种抗生素 D. 本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙的毒性大小 【答案】D 【解析】 【分析】1.动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养.。 2.培养条件：（1）无菌、无毒的环境；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。 （2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。 （3）适宜的温度和pH。 （4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH值）。 【详解】A、动物细胞培养制备细胞悬液时，应用胰蛋白酶进行处理，不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶处理肝组织，因胃蛋白酶需要酸性环境，而在该环境中细胞会死亡，A错误； B、动物细胞培养的过程中，浓度为5%的CO2的作用是维持培养液的pH，B错误； C、抗生素是用来杀菌的，不是杀病毒的，C错误； D、为了检测药物对甲、乙的毒性大小，应设置培养液中不加该药物的对照实验，D正确。 故选D。 【点睛】 10. 培育“试管山羊”的基本过程如下图所示。若要培育成功，下列叙述正确的是（ ） A. 甲过程需注射促性腺激素来获取大量的卵母细胞 B. 乙过程的目的之一是促进卵母细胞和精子的成熟 C. 丁过程中早期胚胎需移植到与供体性状相同的代孕母羊子宫内 D. 为提高胚胎的利用率，可选择发育良好的原肠胚进行均等分割 【答案】A 【解析】 【分析】体外受精指的是将卵子和精子在体外人工控制的环境中完成受精过程，再将早期胚胎移植到母体子宫内发育的技术。受精卵→卵裂期（细胞数量增加，总体积基本不变）→桑椹胚（细胞数32个左右，全能性高）→囊胚（出现内细胞团、滋养层细胞和囊胚腔，开始分化）→原肠胚（形成内中外三胚层）。 【详解】A、在甲过程中，为了获取大量卵母细胞，通常会给良种母山羊注射促性腺激素，使其超数排卵，A正确； B、乙过程是体外受精过程，其目的是使精子和卵细胞结合形成受精卵，而不是促进卵母细胞和精子的成熟，B错误； C、丁过程中早期胚胎需移植到与供体生理状态相同的代孕母羊子宫内，而不是性状相同，生理状态相同才能保证胚胎的着床和发育，C错误； D、为提高胚胎的利用率，可选择发育良好的桑椹胚或囊胚进行均等分割，原肠胚细胞已经开始分化，不适合进行胚胎分割，D错误。 故选A。 11. 某生物实验小组同学利用洋葱进行“DNA粗提取与鉴定”实验。下列操作正确的是（ ） A. 为使洋葱细胞更快裂解，可在研磨过程中加入纤维素酶 B. 向粗提取的DNA中加入2mol·L-1的SDS溶液可溶解DNA C. 在沉淀中加入体积分数为95%的冷酒精可使DNA沉淀析出 D. 用二苯胺对DNA进行鉴定时需在常温下进行，以保持DNA结构的稳定 【答案】A 【解析】 【分析】1、DNA的粗提取与鉴定的实验原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，利用这一特点可以选择适当浓度的盐溶液可以将DNA溶解或析出，从而达到分离的目的；②DNA不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离；③在沸水浴的条件下DNA遇二苯胺会呈现蓝色。 2、DNA粗提取与鉴定的实验中，不同操作步骤中加水的作用不同，破碎细胞获取含DNA的滤液时，加蒸馏水的目的是使血细胞涨破；出去滤液中的杂质时，加蒸馏水的目的是降低NaCl溶液浓度使DNA析出。 【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，纤维素酶可以分解细胞壁中的纤维素，使细胞壁破坏，从而使洋葱细胞更快裂解，A正确； B、DNA 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在2mol·L-1的NaCl溶液中DNA的溶解度较大，所以向粗提取的DNA中加入2mol·L-1的NaCl溶液可溶解DNA，B错误； C、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，所以在上清液中加入体积分数为95%的冷却酒精可使DNA沉淀析出，C错误； D、用二苯胺对DNA进行鉴定时需要沸水浴加热，而不是在常温下进行。在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色，常温下该反应无法有效进行，D错误。 故选A。 12. 下列关于基因工程叙述，错误的是 ( ) A. 目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B. 限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C. 人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D. 载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 【答案】D 【解析】 【详解】A.目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因，可来自动、植物或微生物，受体细胞是指表达目的基因的细胞，可来自动、植物或微生物，A正确； B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶在获取目的基因和构建基因表达载体必要的工具酶，B正确； C.大肠杆菌属于原核生物，没有内质网和高尔基体，不能对核糖体上合成的人胰岛素原进行加工修饰，所以胰岛素原没有生物活性，C正确； D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞，但不能促进目的基因的表达，D错误； 因此，本题答案选D。 考点：本题考查基因工程的知识。 点评：本题难度中等，属于考纲理解层次。解答本题的关键是理解载体上的抗性基因的目的是用于检测目的基因是否导入受体细胞，即用于筛选含重组DNA的细胞。 13. 某校学习小组进行PCR实验，甲、乙、丙三名同学分别以酵母菌为材料，进行PCR扩增，各取20ul产物进行凝胶电泳，得到的结果如下图。下列叙述错误的是（　　） A. 凝胶a端靠近电泳槽的负极接线柱 B. 甲同学设置的PCR循环次数可能比乙同学多 C. 丙同学所用的引物可能与甲乙同学的不一样 D. 丙同学扩增得到的片段比甲乙同学的要大 【答案】D 【解析】 【分析】利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增。PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。DNA具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。 【详解】A、在a端点样孔，DNA分子带负电荷，在电场的作用下会向正极移动，故凝胶a端靠近电泳槽的负极接线柱，A正确； B、甲同学的电泳条带比乙同学条带宽，说明甲同学扩增的DNA产物多于乙同学，故甲同学设置的PCR循环次数可能比乙同学多，B正确； C、由图可知，丙同学扩增出来的产物与甲乙同学产物不同，其DNA不同，其碱基序列可能不同，故丙同学所用的引物可能与甲乙同学的不一样，C正确； D、丙同学扩增产物的电泳条带比甲乙条带位置距离点样孔更远，说明丙同学扩增的DNA分子小，速率快，D错误。 故选D。 14. 食品工业以红薯粉为原料经黑曲霉（一种丝状真菌）发酵获得柠檬酸，如图为生产柠檬酸的简要流程图。下列叙述错误的是（ ） A. 优良菌种可通过诱变育种或基因工程育种获得 B. 培养过程1需蘸取菌液3次，灼烧4次 C. 提供中性偏酸的培养环境更利于提高柠檬酸的产量 D. 可通过过滤、沉淀等方法分离发酵罐中的黑曲霉菌 【答案】B 【解析】 【分析】纯化菌种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。 【详解】A、诱变育种可通过物理、化学等因素诱导基因突变，从而获得优良性状的菌种；基因工程育种能定向地将目的基因导入受体细胞，培育出优良菌种。所以优良菌种可通过诱变育种或基因工程育种获得，A正确； B、在平板划线操作中，每次划线前后都要灼烧接种环。第一次划线前灼烧是为了杀死接种环上原有的微生物；每次划线结束后灼烧是为了杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。接种环蘸取菌液1次，进行第一次划线，之后每次划线都从上一次划线的末端开始，共进行3次划线，所以需灼烧4次，B错误； C、黑曲霉发酵产生柠檬酸，提供中性偏酸的培养环境更利于提高柠檬酸的产量，C正确； D、黑曲霉菌丝体较大，可通过过滤、沉淀等固液分离的方法将其从发酵罐中分离出来，D正确。 故选B。 15. 在“探究酵母菌种群数量动态变化”实验中，酵母菌用台盼蓝染色。实验所用血细胞计数板如图甲，一个计数室如图乙，显微镜下一个小方格中酵母菌菌体分布如图丙，丙中有2个（方格内）酵母菌被染成蓝色。下列有关叙述错误的是（ ） A. 用台盼蓝染色的依据是死细胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色 B. 对酵母菌计数应采用抽样检测的方法：先盖盖玻片，然后吸取培养液滴于计数室上 C. 如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，可寻找菌体数量适中的小方格计数 D. 若观察的小方格中酵母菌活菌平均数如丙，则估算活酵母菌的总数为2×107个/mL 【答案】BC 【解析】 【分析】探究酵母菌种群数量的变化实验中，实验流程为：（1）酵母菌培养（液体培养基，无菌条件）→（2）振荡培养基（酵母菌均匀分布于培养基中）→（3）观察并计数→重复（2）、（3）步骤（每天计数酵母菌数量的时间要固定）→绘图分析。 【详解】A、由于活细胞的细胞膜具有选择透过性，台盼蓝只能给死细胞染色，故实验中被台盼蓝溶液染成蓝色的酵母菌为死细胞，A正确； B、对酵母菌计数采用抽样检测法，操作时先盖盖玻片，再吸取培养液滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入计数室，B错误； C、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，可将其进行稀释后再计数，C错误； D、分析丙图可知，观察的小方格中酵母菌活菌平均数为7个，其中有2个酵母菌被染成蓝色，即该小方格的活菌数为5个，由此估算1mL培养液中活酵母菌的总数=（5×400）/（1×1×0.1×10-3）=2×107个/mL，D正确。 故选BC。 16. 高效生产酒精的优良酵母菌菌种需具备耐高糖和耐酸的特性，酿酒酵母产酒精能力强，但没有合成淀粉酶的能力；糖化酵母能合成淀粉酶，但酒精发酵能力弱。科研人员进行了下图所示的酵母菌种改良实验。 下列关于菌种改良过程的叙述，正确的是（ ） A. 可用纤维素酶和果胶酶处理去除细胞壁，获得两种酵母菌的原生质体 B. 可在反应体系中加入过量的无菌水稀释来终止聚乙二醇（PEG）的作用 C. 培养基X是以淀粉为唯一碳源的选择培养基，用来筛选出杂种酵母 D. 若对目标酵母进行耐酒精的筛选，可在含较高酒精浓度的培养基中多次继代培养 【答案】D 【解析】 【分析】选择培养基是指通过添加特定成分（如化学物质、营养物质）或调节培养条件（如pH、温度），仅允许目标微生物生长而抑制其他微生物的培养基。 【详解】A、酵母菌细胞壁的主要成分是几丁质，而不是纤维素和果胶，所以不能用纤维素酶和果胶酶处理去除细胞壁获得原生质体，A错误； B、加入过量无菌水会使酵母菌吸水涨破，不能用这种方式终止PEG的作用，B错误； C、糖化酵母能合成淀粉酶可利用淀粉生长，酿酒酵母不能合成淀粉酶无法利用淀粉生长，而杂种酵母具备糖化酵母合成淀粉酶的特性以及酿酒酵母的其他特性，所以可筛选出杂种酵母， 培养基X是以淀粉为唯一碳源的选择培养基，能筛选出杂种酵母和糖化酵母，但无法进一步区分，C错误； D、若对目标酵母进行耐酒精的筛选，在含较高酒精浓度的培养基中多次继代培养，能在此环境中生存的酵母即为耐酒精的目标酵母，D正确。 故选D。 17. 胎牛血清（FBS）是天然的培养基，能够在多种动物卵母细胞的成熟过程中提供足够的营养物质，起到非常好的促进效果。下表是后期胚胎培养液（CR2后液）中添加不同浓度FBS对牛核移植胚胎发育的影响情况，下列叙述正确的是（ ） 胎牛血清（FBS）的不同浓度对牛核移植胚胎发育的影响 组别 培养液 卵裂率/% 囊胚率/% 对照组 CR2后液 59.17±1.34 13.53±2.04 实验组1 10%FBS+CR2后液 62.14±1.78 13.78±2.77 实验组2 20%FBS+CR2后液 68.95±4.15 26.09±2.20 实验组3 30%FBS+CR2后液 62.02±8.64 8.78±3.20 A. 胚胎培养液成分包含无机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等 B. 若统计每组实验的桑葚胚率，其数值应小于囊胚率 C. 添加20%FBS是促进核移植胚胎发育的最适浓度 D. 添加不同浓度的FBS对卵裂率和囊胚率均有促进作用 【答案】A 【解析】 【分析】早期胚胎发育：受精卵→卵裂期（细胞数量增加，总体积基本不变）→桑椹胚（细胞数32个左右，全能性高）→囊胚（出现内细胞团、滋养层细胞和囊胚腔，开始分化）→原肠胚（形成内中外三胚层）。 【详解】A、胚胎培养液成分通常包含无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，还需要加入血清等天然成分，A正确。 B、胚胎发育过程中，桑葚胚发育在前，囊胚发育在后，一般情况下桑葚胚率应大于囊胚率，B错误。 C、仅根据表中给出的10%、20%、30%这三种FBS浓度对牛核移植胚胎发育的影响，不能确定20%FBS就是促进核移植胚胎发育的最适浓度，可能还有更合适的浓度未进行实验，C错误。 D、从表中数据看，实验组3（30%FBS+CR2后液）的囊胚率8.78±3.20低于对照组的13.53±2.04，说明添加30%FBS对囊胚率起抑制作用，并非添加不同浓度的FBS对卵裂率和囊胚率均有促进作用，D错误。 故选A。 18. 单克隆抗体在多种疾病的诊断和治疗中发挥重要作用，下图是利用小鼠制备单克隆抗体的过程，以下叙述错误的是（ ） A. 已免疫的小鼠脾脏中，每个B淋巴细胞只产生1种抗体 B. 在特定培养基中筛选出的细胞M为杂交瘤细胞 C. 将2种B淋巴细胞融合可得到持续产生双抗的浆细胞 D. 经过上图细胞筛选过程之后的细胞还需进行进一步筛选 【答案】C 【解析】 【分析】单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，在经过两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群。两次抗体检测：专一抗体检验阳性，获得能产生特异性抗体、又能大量增殖杂交瘤细胞。最后从培养液或小鼠腹水中提取单克隆抗体。 【详解】A、一般而言，一种B淋巴细胞只能产生一种抗体，A正确； B、利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，在特定培养基中筛选出的细胞M为杂交瘤细胞，B正确； C、浆细胞不能分裂，将2种B淋巴细胞融合不可得到持续产生双抗的浆细胞，C错误； D、经过上图细胞筛选过程之后的细胞还需进行进一步筛选，即进行专一抗体阳性检测：根据抗原—抗体特异性结合原理，检测时取培养液滴加相应抗原出现反应为目标细胞，D正确。 故选C。 19. 埃博拉病毒是一种引起人类产生埃博拉出血热的单链RNA病毒，腺病毒是一类侵染动物细胞的DNA病毒，某研究团队利用埃博拉病毒跨膜表面糖蛋白（GP），以人复制缺陷腺病毒为载体研发了埃博拉病毒疫苗。下图为部分研制流程示意图，下列叙述正确的是（ ） A. 埃博拉病毒中分离的GP基因经限制酶切割后，通过DNA连接酶与质粒相连接 B. 病毒的扩大培养过程中需要使用CO2培养箱调节pH C. 疫苗在人体内发挥作用的过程中，腺病毒不断增殖 D. 在重组腺病毒中，GP基因上游必须有启动子以驱动其复制和表达 【答案】B 【解析】 【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心。 【详解】A、埃博拉病毒是RNA病毒，GP基因的本质是RNA，而质粒的本质是DNA，故GP基因经限制酶切割后，不能通过DNA连接酶与质粒相连接，A错误； B、培养过程中CO2的作用是调节pH，B正确； C、腺病毒为复制缺陷腺病毒，故疫苗在人体内发挥作用的过程中，腺病毒不会增殖，C错误； D、启动子是转录的起点，故在重组腺病毒中，GP基因上游必须有启动子以驱动转录，D错误。 故选B。 20. CRISPR/Cas9是一种生物学工具，能够通过“剪切和粘贴”DNA序列的机制来编辑基因组。CRISPR-Cas9基因组编辑系统由向导RNA和Cas9蛋白组成，向导RNA识别并结合靶基因DNA，Cas9蛋白切断双链DNA形成两个末端。这两个末端通过“断裂修复”重新连接时通常会有个别碱基对的插入或缺失，从而实现基因敲除，如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. Cas9蛋白的功能与限制酶类似，能作用于脱氧核糖和碱基之间的化学键 B. 向导RNA具有能与目标DNA发生碱基互补配对的结构 C. 对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和相同的向导RNA进行基因编辑 D. 通过该基因编辑技术引起的变异属于基因重组 【答案】B 【解析】 【分析】由题意可知，CRISPR-Cas9体系是由靶基因的向导RNA和Cas9蛋白构成的复合体。向导RNA在基因组中负责寻找靶基因并与其结合；Cas9蛋白在向导RNA的引导下切割靶基因，使DNA双链断裂产生平末端。在随后DNA自我修复的过程中 容易随机引起 一些碱基对的插入或缺失，导致基因功能改变。 【详解】A、Cas9蛋白识别并切断双链DNA形成两个末端，相当于限制酶，能作用于磷酸二酯键，A错误； B、向导RNA具有能与目标DNA发生碱基互补配对的结构，向导RNA识别并结合靶基因DNA，B正确； C、在对不同目标DNA进行编辑时，应使用Cas9蛋白和不同向导RNA对不同基因的编辑，C错误； D、通过该基因编辑技术引起个别碱基对的插入或缺失，引起的变异属于基因突变，D错误。 故选B。 非选择题部分 二、非选择题（本大题共5小题；共60分） 21. 某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题： （1）培养基中物质S的作用是_____，甲、乙培养基均属于_____培养基（按功能分类）。乙培养基中的Y物质是______。 （2）在4个细菌培养基平板上，均接种同一稀释倍数的稀释液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为25、172、183、188。已知原样品中菌体浓度为1.81×108个/ml，则接种稀释液的稀释倍数为_____倍。此法测得结果与真实值出现偏差的原因是__________。 （3）经步骤⑤筛选得到的菌种可接种至_____培养基中保存。在筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是____________。 【答案】（1） ①. 提供碳源和氮源 ②. 选择 ③. 琼脂##凝固剂 （2） ①. 105 ②. 当两个或多个细胞连在一起时，平板上显示的只有一个菌落 （3） ①. 斜面 ②. S的浓度超过某一值时培养液渗透压过高，导致细菌细胞渗透失水过多，抑制菌株的生长 【解析】 【分析】由题图信息分析可知，该实验的目的是分离获得高效降解S的细菌菌株，S是含C、H、N的有机物，可在培养基中提供碳源和氮源，甲培养基是液体培养基，乙是固体培养基，二者的组分差别在于Y，这说明Y是凝固剂，是琼脂。 【小问1详解】 由题干信息可知，物质S含有C、H、N，则在两种培养基中的物质S可以提供氮源和碳源；甲、乙培养基均属于选择培养基，用以分离能降解S的微生物；甲、乙两种培养基配方中相差的是Y，其中甲是液体培养基，乙是固体培养，这说明乙培养基中的Y物质是琼脂（或凝固剂）。 【小问2详解】 结合题干实验过程可知，该过程采取了稀释涂布平板法，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数。在4个细菌培养基平板上，均接种同一稀释倍数的溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为25、172、183和188，其中172、183和188三个平板符合计数要求，菌落平均数=（172+183+188）÷3=181，设稀释倍数为x，所以每毫升土样品中的细菌数量=181÷0.1×x=1.81×108个/ml，计算得x为105，故接种稀释液的稀释倍数为105倍。当两个或多个细胞连在一起时，平板上显示的只有一个菌落，测得菌落数比真实值往往偏低，故此法测得结果与真实值会出现偏差。 【小问3详解】 经步骤⑤筛选得到的菌种可接种至斜面培养基中保存。在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，可能由于S的浓度超过某一值时培养液渗透压过高，会导致细菌细胞渗透失水过多，抑制菌株的生长，从而导致S浓度过高时菌株降解S的量下降。 22. 狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉，其生产的黄酮类化合物可入药。狼爪瓦松野生资源有限，难以满足市场化需求。因此，目前一般通过植物细胞工程手段进行培养，具体过程如图所示，其中的数字序号代表处理或生理过程。回答下列问题： （1）进行过程①时，先用流水充分冲洗植株甲幼叶，然后酒精消毒，再用____消毒10min，最后用_____冲洗。 （2）过程②表示____，产生过程③的原因是_________。狼爪瓦松植株乙、丙、丁的获得都需要利用__________技术，④过程选用愈伤组织的细胞进行诱变的原因是____________。 （3）从育种的角度看，植物组织培养与有性生殖相比，优势主要有________（答出2点即可）。 （4）培养某一种杂合体时，若要快速获得与原植株基因型和表型都相同的植株，不能采用花粉粒作为外植体的原因是____________。 【答案】（1） ①. 10%次氯酸钠（次氯酸钙） ②. 无菌水 （2） ①. 脱分化 ②. 植物细胞具有全能性 ③. 植物组织培养（离体培养） ④. 愈伤组织细胞分化程度低，分裂能力强 （3）繁殖速度快、能保持品种的优良性状 （4）对杂合体的植株来说，花粉粒细胞经减数分裂得到，其基因型与体细胞的基因型不同，用花粉粒进行组织培养得到的植株基因型不同于原植株 【解析】 【分析】植物组织培养是指将离体的物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。 【小问1详解】 接种前将外植体用酒精消毒后，还需要用10%次氯酸钠（次氯酸钙）消毒10min，最后用无菌水冲洗。 【小问2详解】 过程②诱导形成愈伤组织，即过程②为脱分化过程。愈伤组织诱导生芽生根体现了植物细胞的全能性。狼爪瓦松植株乙、丙、丁的获得都需要利用植物组织培养技术。选择愈伤组织进行诱变的原因是愈伤组织细胞分化程度低，分裂能力强。 【小问3详解】 从育种的角度看，植物组织培养与有性生殖相比，优势主要有繁殖速度快、能保持品种的优良性状。 【小问4详解】 培养某一种杂合体时，若要快速获得与原植株基因型和表型都相同的植株，不能采用花粉粒作为外植体的原因是对杂合体的植株来说，花粉粒细胞经减数分裂得到，其基因型与体细胞的基因型不同，用花粉粒进行组织培养得到的植株基因型不同于原植株。 23. 人的血清白蛋白通常从人血液中提取。现应用一定的生物工程技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白成为可能。大致过程如下： A．将人体血清白蛋白基因导入雌性奶牛胚胎细胞，形成细胞①； B．取出细胞①的细胞核，注入去核牛卵母细胞中，形成细胞②； C．电脉冲刺激细胞②促使其形成早期胚胎； D．将胚胎移植到代孕母牛的子宫内，最终发育成转基因小牛。 请回答下列问题： （1）细胞①、②中实现了基因重组的是_____。B过程中需选择培养至____时期的卵母细胞。 （2）胚胎干细胞来源于_______期的内细胞团。 （3）在培育转基因奶牛时，应将人的血清白蛋白基因与乳腺蛋白基因的______等调控组件重组在一起，通过______技术将其导入奶牛的胚胎细胞中。 （4）进行胚胎移植前需要进行性别鉴定，目前最有效的方法是SRY—PCR法，操作的基本程序是：从被检测的囊胚中取出几个______细胞，提取DNA进行扩增，用位于Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）制成的探针进行检测，若未出现杂交链，则该胚胎________（填“是”或“否”）用于移植。暂不移植的胚胎可使用________方法保存。 （5）若转基因奶牛表达的人血清白蛋白稳定性和生物活性较低，可通过_____在基因水平上实现对蛋白质中氨基酸序列的改造，来提高稳定性和生物活性。 【答案】（1） ①. ① ②. 减数第二次分裂中期（减数分裂MⅡ中期） （2）囊胚 （3） ①. 启动子 ②. 显微注射 （4） ①. 滋养层 ②. 是 ③. 低温（冷冻、液氮） （5）蛋白质工程 【解析】 【分析】分析材料：将人体血清白蛋白基因导入雌性奶牛胚胎细胞，形成细胞①，该过程采用了基因工程技术，其原理是基因重组；取出细胞①的细胞核，注入去核牛卵母细胞中，形成细胞②，该过程采用了核移植技术，其原理是动物细胞的细胞核具有全能性；要形成转基因克隆奶牛还需要采用早期胚胎培养技术和胚胎移植技术。 【小问1详解】 细胞①是将人体血清白蛋白基因导入雌性奶牛胚胎细胞形成的，此过程发生了基因重组；细胞②是核移植形成的，没有发生基因重组。 核移植过程中，B 步骤需选择培养至减数第二次分裂中期（MⅡ 中期）的卵母细胞，因为此时卵母细胞的细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质。 【小问2详解】 胚胎干细胞来源于囊胚期的内细胞团。 【小问3详解】 在培育转基因奶牛时，应将人的血清白蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，启动子可以启动基因的转录。 通过显微注射技术将重组基因导入奶牛的胚胎细胞中，显微注射技术是将目的基因导入动物细胞常用的方法。 【小问4详解】 进行胚胎移植前需要进行性别鉴定，从被检测的囊胚中取出几个滋养层细胞，滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘，取滋养层细胞进行鉴定不会影响胚胎的发育。 用位于 Y 染色体上的性别决定基因（即 SRY 基因）制成的探针进行检测，若未出现杂交链，说明胚胎细胞中不含 Y 染色体，则该胚胎是雌性，是用于移植（因为需要的是能产奶的雌性奶牛）。 暂不移植的胚胎可使用冷冻（或低温）方法保存。 【小问5详解】 若转基因奶牛表达的人血清白蛋白稳定性和生物活性较低，可通过蛋白质工程在基因水平上实现对蛋白质中氨基酸序列的改造，来提高稳定性和生物活性。蛋白质工程的基本途径是从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）。 24. 人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据下图分析并回答下列问题： （1）由于_____，“AB”法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。“BCA”法是利用人体_____细胞中的mRNA，再由mRNA经_____得到的胰岛素基因，_____（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。 （2）研究人员为获得胰岛素基因，设计了一些PCR引物，如下表所示，故应选用哪对组合的引物?_______________。 项目 DNA序列（省略了部分核苷酸序列） 已知胰岛素基因序列 5'-AACTATGCGCTCATGA…GCAATGCGTAGCCTCT-3' 3'-TTGATACGCGAGTACT…CGTTACGCATCGGAGA-5' PCR引物 ①5'-AACTATGCGCTCATGA-3' ②5'-GCAATGCGTAGCCTCT-3' ③5'-AGAGGCTACGCATTGC-3' ④5'-TCATGAGCGCATAGTT-3' （3）获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是____个。PCR反应体系成分除模板、2种引物外，还需加入缓冲液、_____、_____酶。 （4）PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有__________。 A. PCR反应前，在微量离心管中加入相关成分后离心，目的使反应液混合均匀 B. 待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率 C. 进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相同的电极移动 D. 琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测 （5）β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经_____（方法）处理大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆菌接种到添加了_______和X-gal的培养基上筛选出_____色的菌落即为工程菌种。 【答案】（1） ①. 一种氨基酸可能对应多种密码子 ②. 胰岛β ③. 逆转录 ④. AB和BCA （2）①③ （3） ①. 2m-2 ②. 四种脱氧核苷三磷酸##dNTP ③. 耐高温的DNA聚合##TaqDNA聚合 （4）BD （5） ①. 钙离子处理##CaCl2溶液 ②. 氨苄青霉素 ③. 白 【解析】 【分析】PCR是聚合酶链式反应的简称，指在引物指导下由酶催化的对特定模板（克隆或基因组DNA）的扩增反应，是模拟体内DNA复制过程，在体外特异性扩增DNA片段的一种技术。 【小问1详解】 由于密码子的简并性，一种氨基酸可能对应多种密码子，“AB”法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。胰岛素基因存在于所有细胞中，但只能在胰岛B细胞中表达，结合题意“BCA法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段”可知，BCA法是从人体胰岛B细胞中获取mRNA，再由mRNA经逆转录过程得到的胰岛素基因；在基因的结构中，启动子在非编码区，是不会被转录和翻译的，结合题干可在“AB法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素”，故由AB法中的“胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列”，和BCA法中的“胰岛B细胞中的mRNA”得到的目的基因中均不含人胰岛素基因启动子。 【小问2详解】 由于DNA复制时，子链的延伸是从引物的3′端开始的，因此引物需要在模板的3'端开始进行碱基互补配对，即PCR引物应该添加在识别序列的3′端。引物与模板链的部分碱基互补配对，因此选择①③。 【小问3详解】 通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，由于子链的延伸都需要从引物的3'端开始，即新合成的子链中均带有引物，只有原来的模板链上没有引物连接，故消耗的引物总量是2m-2。PCR反应体系成分除模板、2种引物外，还需加入缓冲液、四种脱氧核苷三磷酸（原料）、耐高温的DNA聚合酶。 【小问4详解】 A、PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在延伸过程起作用，A错误； B、待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率，进而影响DNA分子呈现的电泳效果，B正确； C、根据电荷同性相斥、异性相吸引可推测，进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动，C错误； D、凝胶中的DNA分子通过染色才可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，D正确。 故选BD。 【小问5详解】 将目的基因导入大肠杆菌细胞中，常用钙离子处理法。结合图示可知，将目的基因的插入的位置是在lacZ基因中，会破坏lacZ基因的结构，不能产生β-半乳糖苷酶，根据题干信息“β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质”，故目的基因的插入破坏了lacZ基因的结构，使其不能正常表达产生β-半乳糖苷酶，底物X-gal不会被分解，所以筛选导入重组质粒的大肠杆菌时，在添加了氨苄青霉素（氨苄青霉素抗性基因为标记基因）和X-gal的培养基上应选择白色的菌落。 25. 为使甘蓝具有抗除草能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。（如图1，注：BamHI识别的序列是G↓GATCC；Bg/Ⅱ识别的序列是A↓GATCT，EcoRI识别的序列是G↓AATTC） （1）利用PCR扩增草甘膦抗性基因时，需要在引物的________（填“3'端”或“5'端”）添加限制酶识别序列，若产物中除了目的基因外有其他DNA片段存在，原因可能是_________（答出2点即可）。 （2）构建表达载体时切割质粒应选择______酶切。酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式，可用________酶对两种重组质粒进行剪切，再通过________技术分析产物大小进行区分，其结果出现长度为_________的片段即为所需基因表达载体。 （3）步骤②将重组质粒与农杆菌混合，完成转化后先置于________培养基中培养，其目的是________。再将菌液涂布在含有抗生素的固体培养基中进行筛选。步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在培养基中添加________以便筛选出含目的基因的甘蓝愈伤组织。 （4）基因芯片技术是一种能有效地对转基因作物进行检测的新技术，通常被检测的特定DNA序列包括两类：一类是非目的基因序列，主要为载体上通常具有的各种组成元件；另一类则是目的基因序列本身。使用方法如下：第一步，针对待测的特定DNA片段设计引物，扩增出的特定DNA片段带上标记制成探针，经变性后通过芯片点样仪固定到杂交膜上，再经过一定的处理，便得到可用于检测的DNA芯片（如图2）；第二步，从待测植物中提取DNA作为模板，加入引物进行扩增；第三步，将扩增产物经过变性处理后铺于芯片表面，放入杂交盒中，在适宜条件下进行杂交；第四步，待反应结束后，对芯片进行清洗等处理，用仪器检测芯片上的杂交结果。 对抗草甘膦转基因甘蓝进行检测的基因芯片的阵列设计为：第1列为空白对照，第2列固定甘蓝植株的内源基因作为阳性对照，第3列固定与甘蓝DNA序列高度_____（填“同源”或“非同源”）的DNA片段作为阴性对照，第4~6列可分别固定______、______和潮霉素抗性基因进行检测，每列重复多次以保证结果的准确性。若该基因芯片检测有效，转基因甘蓝的样本在芯片的第______列上均应出现检测信号。 【答案】（1） ①. 5'端 ②. 引物较短，特异性较低，同时扩增出目的基因和其他DNA片段；复性温度过低，出现非特异性扩增条带；杂DNA污染 （2） ①. BamHI ②. BamHI和EcoRI ③. 琼脂糖凝胶电泳 ④. 45kb （3） ①. LB液体 ②. 使处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态，便于筛选 ③. 潮霉素 （4） ①. 非同源 ②. 草甘膦抗性基因 ③. 启动子（或终止子） ④. 2456 【解析】 【分析】PCR原理:在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3'端延伸DNA链。 【小问1详解】 在利用PCR扩增草甘膦抗性基因时，需要在引物的5′端添加限制酶识别序列，以确保扩增产物能与载体正确连接。如果产物中除了目的基因外还有其他DNA片段存在，可能的原因包括引物较短，特异性较低，同时扩增出目的基因和其他DNA片段；复性温度过低，出现非特异性扩增条带；杂DNA污染。 【小问2详解】 据图表可知，BamHI酶切割得到的黏性末端为-GATC，BgⅢ酶切割得到的黏性末端为-GATC，其黏性末端相同，故剪切后的目的基因能与质粒连接在一起，重组质粒形成后，在重组质粒上，不再有BgⅢ酶的识别位点，质粒上的切割位点会有EcoRI酶和BamHI酶，目的基因的编码顺序是从BamHⅠ酶到BgⅢ酶，用EcoRⅠ酶和BamHⅠ酶会将正向连接的目的基因片段剪切去除；正向连接的重组质粒会被切去20+25=45kb长度的片段，反向连接的重组质粒会被切去20kb长度的片段，根据电泳凝胶时，DNA分子量越大，在凝胶中收到的阻力越大，迁移距离越短的特点，故正向连接的重组质粒被切割后两个片段的大小介于反向连接的重组质粒被切割后两个片段的大小之间，所以电泳结果出现长度为45kb长度的片段即为所需基因表达载体。 【小问3详解】 据图分析可知，步骤②是将重组质粒导入农杆菌的过程，需要使用CaCl2处理微生物细胞使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态。当将重组质粒与经CaCl2处理农杆菌的混合，完成转化后先置于LB液培养基中培养，使处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态，便于筛选。由图可知，标记基因是潮霉素抗性基因，因此要筛选获得含有基因表达载体的农杆菌需要在培养基中添加潮霉素，才能筛选出含目的基因的甘蓝愈伤组织。 【小问4详解】 要设置不含草甘膦抗性基因的对照组，由于启动子可调控草甘膦抗性基因的表达，故启动子的序列也需要检测，因此基因芯片的阵列设计为：第1列为空白对照，第2列固定甘蓝植株的内源基因作为阳性对照，第3列固定与甘蓝DNA序列高度非同源的DNA片段作为阴性对照，第4~6列可分别固定草甘膦抗性基因、启动子（或终止子、标记基因）和潮霉素抗性基因进行检测，每列重复多次以保证结果的准确性。若该基因芯片检测有效，转基因甘蓝的样本在芯片的第2456列上均应出现检测信号。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $$ 六校联盟2024学年第二学期期中联考 高二生物试题卷 （2025.04） 考生须知： 1．本试题卷分选择题和非选择题两部分。全卷共8页，满分100分，考试时间90分钟。 2．考生答题前，务必将自己的姓名、准考证号用黑色字迹的签字笔或钢笔填写在答题纸上。 选择题部分 一、选择题（本大题共20小题，每小题2分，共40分。每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，不选、多选、错选均不得分） 1. 生物工程技术如同一把双刃剑，既给人类带来了便利，同时也引发了人们对其安全性的担忧。下列叙述错误的是（ ） A. 我国禁止发展试管婴儿等辅助性生殖技术 B. 生物武器会对人类安全造成极大威胁 C. 研究转基因农作物时应防止转基因花粉的传播 D 胚胎移植前无需对受体进行免疫检查 2. 某种土壤细菌可将尿素（CH4N2O）分解为CO2和NH3，但分解产物CO2不能为该菌提供营养。若欲筛选出该种土壤细菌，仅考虑碳源和氮源，下列培养基设置合理的是（ ） A. 仅尿素就可以，既是碳源也是氮源 B. 仅葡萄糖就可以，可以从空气中固氮 C. 尿素为氮源，需要葡萄糖作为碳源 D. 牛肉膏蛋白胨含C和N，可以满足 3. 下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是（ ） A. 接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培育检测 B. 接种时连续划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释获得单个菌落 C. 利用稀释涂布平板法可对微生物进行纯化、分离和计数 D. 利用高浓度NaCl的培养基筛选抗盐突变菌株 4. 枇杷果具有滋阴润肺、化痰止咳的功效，但由于枇杷果肉细胞中含有大量的多酚氧化酶，在贮存运输过程中，果实因受挤压后容易发生组织褐变。为克服枇杷不易贮存的难题，厂家将其加工成枇杷汁、枇杷酒和枇杷醋，以满足市场需求。下列关于工业生产枇杷酒和枇杷醋的叙述，错误的是（ ） A. 枇杷酒和枇杷醋的发酵菌种不同，但代谢类型相同 B. 工业生产枇杷酒时，需要人工接种酵母菌 C. 利用枇杷酒制作枇杷醋时，需通入无菌空气 D. 对醋杆菌扩大培养时，通常接种至液体培养基 5. 藿香是一种重要的中草药，《本草纲目》记载“豆叶曰藿，其叶似之，故名”。科研人员利用藿香的叶片为外植体进行植物组织培养，培养过程如图所示。下列说法正确的是（ ） A. ①过程需将外植体剪碎并用胰酶分散为单细胞后接种 B. ②过程给予光照处理的目的是促进外植体的脱分化 C. ③过程转移至④过程需提高培养基中细胞分裂素含量 D. 可用射线处理愈伤组织细胞并筛选后获得优良突变体 6. 以某种植物的绿色叶片和白色花瓣为材料，利用植物组织培养技术繁殖该植物。下列叙述正确的是（ ） A. 在培养基中加入聚乙二醇，可获得染色体数目加倍的细胞 B. 以绿色叶片和白色花瓣作为外植体，进行组织培养均能获得试管苗 C. 来自同一植株不同部位的细胞，它们的全能性表达难易程度一般相同 D. 若用某一植物细胞进行组织培养，则该细胞必须有完整的细胞核和叶绿体 7. 树莓果实营养丰富，应用组织培养技术可以在短时间内获得大量优质种苗，实现树莓的工厂化生产。下列与树莓组织培养相关叙述错误的是（ ） 外植体→愈伤组织→丛生芽→试管苗 A. 培养基中加入抗生素可降低杂菌的污染 B. 试管苗形成后需经炼苗后将其移栽入土壤中生长 C. 将丛生芽切割后进行组织培养可实现快速繁殖 D. 将外植体茎尖的形态学上端朝上，并完全插入到培养基中 8. 病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构扩散，导致果蔬产量和品质退化。通过植物组织培养技术，利用茎尖可以快速培育出脱毒苗。下列有关叙述正确的是（　　） A. 配制MS固体培养基时，经高压蒸汽灭菌后再调pH B. 植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达 C. 切取的植株茎尖用70%的酒精消毒后，需放在清水中反复清洗 D. 脱毒苗培育是否成功，最终还需要通过接种病毒进行个体水平的检测 9. 某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞（中）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。下列叙述正确的是（ ） A. 制备肝细胞悬液时能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶处理肝组织 B. 恒温培养箱中的CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸 C. 为了保证细胞培养所需的无毒环境，需大量添加各种抗生素 D. 本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙的毒性大小 10. 培育“试管山羊”的基本过程如下图所示。若要培育成功，下列叙述正确的是（ ） A. 甲过程需注射促性腺激素来获取大量的卵母细胞 B. 乙过程的目的之一是促进卵母细胞和精子的成熟 C. 丁过程中早期胚胎需移植到与供体性状相同的代孕母羊子宫内 D. 为提高胚胎的利用率，可选择发育良好的原肠胚进行均等分割 11. 某生物实验小组同学利用洋葱进行“DNA粗提取与鉴定”实验。下列操作正确的是（ ） A. 为使洋葱细胞更快裂解，可在研磨过程中加入纤维素酶 B. 向粗提取的DNA中加入2mol·L-1的SDS溶液可溶解DNA C. 在沉淀中加入体积分数为95%的冷酒精可使DNA沉淀析出 D. 用二苯胺对DNA进行鉴定时需在常温下进行，以保持DNA结构的稳定 12. 下列关于基因工程的叙述，错误的是 ( ) A. 目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B. 限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C. 人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D. 载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 13. 某校学习小组进行PCR实验，甲、乙、丙三名同学分别以酵母菌为材料，进行PCR扩增，各取20ul产物进行凝胶电泳，得到的结果如下图。下列叙述错误的是（　　） A. 凝胶a端靠近电泳槽的负极接线柱 B. 甲同学设置的PCR循环次数可能比乙同学多 C. 丙同学所用的引物可能与甲乙同学的不一样 D. 丙同学扩增得到的片段比甲乙同学的要大 14. 食品工业以红薯粉为原料经黑曲霉（一种丝状真菌）发酵获得柠檬酸，如图为生产柠檬酸的简要流程图。下列叙述错误的是（ ） A. 优良菌种可通过诱变育种或基因工程育种获得 B. 培养过程1需蘸取菌液3次，灼烧4次 C. 提供中性偏酸的培养环境更利于提高柠檬酸的产量 D. 可通过过滤、沉淀等方法分离发酵罐中的黑曲霉菌 15. 在“探究酵母菌种群数量动态变化”实验中，酵母菌用台盼蓝染色。实验所用血细胞计数板如图甲，一个计数室如图乙，显微镜下一个小方格中酵母菌菌体分布如图丙，丙中有2个（方格内）酵母菌被染成蓝色。下列有关叙述错误的是（ ） A. 用台盼蓝染色的依据是死细胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色 B. 对酵母菌计数应采用抽样检测的方法：先盖盖玻片，然后吸取培养液滴于计数室上 C. 如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，可寻找菌体数量适中的小方格计数 D. 若观察的小方格中酵母菌活菌平均数如丙，则估算活酵母菌的总数为2×107个/mL 16. 高效生产酒精的优良酵母菌菌种需具备耐高糖和耐酸的特性，酿酒酵母产酒精能力强，但没有合成淀粉酶的能力；糖化酵母能合成淀粉酶，但酒精发酵能力弱。科研人员进行了下图所示的酵母菌种改良实验。 下列关于菌种改良过程叙述，正确的是（ ） A. 可用纤维素酶和果胶酶处理去除细胞壁，获得两种酵母菌的原生质体 B. 可在反应体系中加入过量的无菌水稀释来终止聚乙二醇（PEG）的作用 C. 培养基X是以淀粉为唯一碳源的选择培养基，用来筛选出杂种酵母 D. 若对目标酵母进行耐酒精的筛选，可在含较高酒精浓度的培养基中多次继代培养 17. 胎牛血清（FBS）是天然的培养基，能够在多种动物卵母细胞的成熟过程中提供足够的营养物质，起到非常好的促进效果。下表是后期胚胎培养液（CR2后液）中添加不同浓度FBS对牛核移植胚胎发育的影响情况，下列叙述正确的是（ ） 胎牛血清（FBS）的不同浓度对牛核移植胚胎发育的影响 组别 培养液 卵裂率/% 囊胚率/% 对照组 CR2后液 59.17±1.34 13.53±2.04 实验组1 10%FBS+CR2后液 62.14±1.78 13.78±2.77 实验组2 20%FBS+CR2后液 68.95±4.15 26.09±2.20 实验组3 30%FBS+CR2后液 62.02±8.64 8.78±3.20 A. 胚胎培养液成分包含无机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等 B. 若统计每组实验的桑葚胚率，其数值应小于囊胚率 C. 添加20%FBS是促进核移植胚胎发育的最适浓度 D. 添加不同浓度的FBS对卵裂率和囊胚率均有促进作用 18. 单克隆抗体在多种疾病的诊断和治疗中发挥重要作用，下图是利用小鼠制备单克隆抗体的过程，以下叙述错误的是（ ） A. 已免疫的小鼠脾脏中，每个B淋巴细胞只产生1种抗体 B. 在特定培养基中筛选出的细胞M为杂交瘤细胞 C. 将2种B淋巴细胞融合可得到持续产生双抗的浆细胞 D. 经过上图细胞筛选过程之后的细胞还需进行进一步筛选 19. 埃博拉病毒是一种引起人类产生埃博拉出血热的单链RNA病毒，腺病毒是一类侵染动物细胞的DNA病毒，某研究团队利用埃博拉病毒跨膜表面糖蛋白（GP），以人复制缺陷腺病毒为载体研发了埃博拉病毒疫苗。下图为部分研制流程示意图，下列叙述正确的是（ ） A. 埃博拉病毒中分离的GP基因经限制酶切割后，通过DNA连接酶与质粒相连接 B. 病毒的扩大培养过程中需要使用CO2培养箱调节pH C. 疫苗在人体内发挥作用的过程中，腺病毒不断增殖 D. 在重组腺病毒中，GP基因上游必须有启动子以驱动其复制和表达 20. CRISPR/Cas9是一种生物学工具，能够通过“剪切和粘贴”DNA序列的机制来编辑基因组。CRISPR-Cas9基因组编辑系统由向导RNA和Cas9蛋白组成，向导RNA识别并结合靶基因DNA，Cas9蛋白切断双链DNA形成两个末端。这两个末端通过“断裂修复”重新连接时通常会有个别碱基对的插入或缺失，从而实现基因敲除，如图所示。下列叙述正确的是（ ） A. Cas9蛋白的功能与限制酶类似，能作用于脱氧核糖和碱基之间的化学键 B. 向导RNA具有能与目标DNA发生碱基互补配对的结构 C. 对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和相同的向导RNA进行基因编辑 D. 通过该基因编辑技术引起的变异属于基因重组 非选择题部分 二、非选择题（本大题共5小题；共60分） 21. 某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题： （1）培养基中物质S的作用是_____，甲、乙培养基均属于_____培养基（按功能分类）。乙培养基中的Y物质是______。 （2）在4个细菌培养基平板上，均接种同一稀释倍数的稀释液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为25、172、183、188。已知原样品中菌体浓度为1.81×108个/ml，则接种稀释液的稀释倍数为_____倍。此法测得结果与真实值出现偏差的原因是__________。 （3）经步骤⑤筛选得到的菌种可接种至_____培养基中保存。在筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是____________。 22. 狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉，其生产的黄酮类化合物可入药。狼爪瓦松野生资源有限，难以满足市场化需求。因此，目前一般通过植物细胞工程手段进行培养，具体过程如图所示，其中的数字序号代表处理或生理过程。回答下列问题： （1）进行过程①时，先用流水充分冲洗植株甲幼叶，然后酒精消毒，再用____消毒10min，最后用_____冲洗。 （2）过程②表示____，产生过程③的原因是_________。狼爪瓦松植株乙、丙、丁的获得都需要利用__________技术，④过程选用愈伤组织的细胞进行诱变的原因是____________。 （3）从育种的角度看，植物组织培养与有性生殖相比，优势主要有________（答出2点即可）。 （4）培养某一种杂合体时，若要快速获得与原植株基因型和表型都相同的植株，不能采用花粉粒作为外植体的原因是____________。 23. 人的血清白蛋白通常从人血液中提取。现应用一定的生物工程技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白成为可能。大致过程如下： A．将人体血清白蛋白基因导入雌性奶牛胚胎细胞，形成细胞①； B．取出细胞①的细胞核，注入去核牛卵母细胞中，形成细胞②； C．电脉冲刺激细胞②促使其形成早期胚胎； D．将胚胎移植到代孕母牛的子宫内，最终发育成转基因小牛。 请回答下列问题： （1）细胞①、②中实现了基因重组的是_____。B过程中需选择培养至____时期的卵母细胞。 （2）胚胎干细胞来源于_______期的内细胞团。 （3）在培育转基因奶牛时，应将人的血清白蛋白基因与乳腺蛋白基因的______等调控组件重组在一起，通过______技术将其导入奶牛的胚胎细胞中。 （4）进行胚胎移植前需要进行性别鉴定，目前最有效方法是SRY—PCR法，操作的基本程序是：从被检测的囊胚中取出几个______细胞，提取DNA进行扩增，用位于Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）制成的探针进行检测，若未出现杂交链，则该胚胎________（填“是”或“否”）用于移植。暂不移植的胚胎可使用________方法保存。 （5）若转基因奶牛表达的人血清白蛋白稳定性和生物活性较低，可通过_____在基因水平上实现对蛋白质中氨基酸序列的改造，来提高稳定性和生物活性。 24. 人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据下图分析并回答下列问题： （1）由于_____，“AB”法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。“BCA”法是利用人体_____细胞中的mRNA，再由mRNA经_____得到的胰岛素基因，_____（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。 （2）研究人员为获得胰岛素基因，设计了一些PCR引物，如下表所示，故应选用哪对组合的引物?_______________。 项目 DNA序列（省略了部分核苷酸序列） 已知胰岛素基因序列 5'-AACTATGCGCTCATGA…GCAATGCGTAGCCTCT-3' 3'-TTGATACGCGAGTACT…CGTTACGCATCGGAGA-5' PCR引物 ①5'-AACTATGCGCTCATGA-3' ②5'-GCAATGCGTAGCCTCT-3' ③5'-AGAGGCTACGCATTGC-3' ④5'-TCATGAGCGCATAGTT-3' （3）获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是____个。PCR反应体系成分除模板、2种引物外，还需加入缓冲液、_____、_____酶。 （4）PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有__________。 A. PCR反应前，在微量离心管中加入相关成分后离心，目的使反应液混合均匀 B. 待测样品中DNA分子大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率 C. 进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相同的电极移动 D. 琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测 （5）β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经_____（方法）处理大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆菌接种到添加了_______和X-gal的培养基上筛选出_____色的菌落即为工程菌种。 25. 为使甘蓝具有抗除草能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。（如图1，注：BamHI识别的序列是G↓GATCC；Bg/Ⅱ识别的序列是A↓GATCT，EcoRI识别的序列是G↓AATTC） （1）利用PCR扩增草甘膦抗性基因时，需要在引物的________（填“3'端”或“5'端”）添加限制酶识别序列，若产物中除了目的基因外有其他DNA片段存在，原因可能是_________（答出2点即可）。 （2）构建表达载体时切割质粒应选择______酶切。酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式，可用________酶对两种重组质粒进行剪切，再通过________技术分析产物大小进行区分，其结果出现长度为_________的片段即为所需基因表达载体。 （3）步骤②将重组质粒与农杆菌混合，完成转化后先置于________培养基中培养，其目的是________。再将菌液涂布在含有抗生素的固体培养基中进行筛选。步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在培养基中添加________以便筛选出含目的基因的甘蓝愈伤组织。 （4）基因芯片技术是一种能有效地对转基因作物进行检测的新技术，通常被检测的特定DNA序列包括两类：一类是非目的基因序列，主要为载体上通常具有的各种组成元件；另一类则是目的基因序列本身。使用方法如下：第一步，针对待测的特定DNA片段设计引物，扩增出的特定DNA片段带上标记制成探针，经变性后通过芯片点样仪固定到杂交膜上，再经过一定的处理，便得到可用于检测的DNA芯片（如图2）；第二步，从待测植物中提取DNA作为模板，加入引物进行扩增；第三步，将扩增产物经过变性处理后铺于芯片表面，放入杂交盒中，在适宜条件下进行杂交；第四步，待反应结束后，对芯片进行清洗等处理，用仪器检测芯片上的杂交结果。 对抗草甘膦转基因甘蓝进行检测的基因芯片的阵列设计为：第1列为空白对照，第2列固定甘蓝植株的内源基因作为阳性对照，第3列固定与甘蓝DNA序列高度_____（填“同源”或“非同源”）的DNA片段作为阴性对照，第4~6列可分别固定______、______和潮霉素抗性基因进行检测，每列重复多次以保证结果的准确性。若该基因芯片检测有效，转基因甘蓝的样本在芯片的第______列上均应出现检测信号。 第1页/共1页 学科网（北京）股份有限公司 $$