选择性必修3 第3章 第2节 基因工程的基本操作程序-【新课程暑假作业】2024-2025学年高二生物暑假作业

积 累 · 整 合 应 用 · 拓 展 高二生物 第 3 章 基 因 工 程 第 1 节 重组 DNA 技术的基本工具 积累 · 整合 略 应用 · 拓展 1. D 2. C 3. B 4. D 5. （ 1 ） 能自我复制 ； 具有标记基因 （ 2 ） 二者均不含有氨苄青霉素抗性基因 ， 在该培养基上均不生长 含有质粒载体 含有插入了目的基因的重组 质粒 （ 或含有重组质粒 ） 二者均含有氨苄青霉素抗性基因 ， 在该培养基上均能生长 四环素 （ 3 ） 受体细胞 6. （ 1 ） 使细胞分散开 （ 2 ） XhoⅠ （ 3 ） ② （ 4 ） 抗体 传代 7. （ 1 ） Sau3AⅠ 限制酶 Sau3AⅠ 与 BamHⅠ 切割后形成的黏性末端相同 （ 2 ） 甲 、 丙 在基因表达载体中 ， 启动子应位于目的基因的首端 ， 终止子应位于目的基因的尾端 ， 这样目的基因 才能表达 。 图中甲 、 丙均不符合 ， 所以不能表达目的基因的产物 （ 3 ） E.coli DNA 连接酶 T4 DNA 连接酶 T4 DNA 连接酶 8. （ 1 ） 平末端 黏性末端 （ 2 ） 切割产生的 DNA 片段末端与 EcoRⅠ 切割产生的相同 （ 3 ） T4 大肠杆菌 （ 4 ） mRNA （ 或 RNA ） cDNA （ 或 DNA ） PCR （ 5 ） 动植物病毒 噬菌体 第 2 节 基因工程的基本操作程序 积累 · 整合 略 应用 · 拓展 1. A 2. C 3. C 4. BD 5. ABC 6. D 7. B 8. A 9. D 10. BD 11. （ 1 ） 基因组文库 cDNA 文库 （ 2 ） 解旋酶 加热至 90~95 ℃ 氢键 （ 3 ） Taq 酶热稳定性高 ， 而大肠杆菌 DNA 聚合酶在高温下会失活 12. （ 1 ） 逆转录 DNA 聚合酶 氨基酸 脱氧核苷酸 （ 2 ） 引物 （ 目的基因或 A 基因 ） 模板 （ 3 ） 基因表达载体 （ 4 ） 使其处于能吸收环境中 DNA 分子的生理状态 13. （ 1 ） 基因 A 有内含子 ， 在大肠杆菌中 ， 其初始转录产物中与内含子对应的 RNA 序列不能被切除 ， 无法表 达出蛋白 A （ 2 ） 噬菌体 噬菌体的宿主是细菌 ， 而不是家蚕 （ 3 ） 繁殖快 ； 容易培养 （ 4 ） 蛋白 A 的抗体 （ 5 ） DNA 可以从一种生物个体转移到另一种生物个体 14. （ 1 ） 平 （ 2 ） 胸腺嘧啶 （ T ） DNA 连接 （ 3 ） B A 类菌落含有 P0 C 类菌落未转入质粒 （ 4 ） 乙 、 丙 目的基因反向连接 15. （ 1 ） 体外重组的质粒可以进入体细胞 ； 真核生物基因可在原核细胞中表达 （ 2 ） 转化 外壳蛋白 （ 噬菌体蛋白 ） 细菌 （ 3 ） 蛋白酶缺陷型 蛋白酶 73 暑 假 作 业 新课程 16. （ 1 ） E1 和 E4 甲的完整 甲与载体正确连接 （ 2 ） 转录 翻译 （ 3 ） 细胞核 去核卵母细胞 （ 4 ） 核 DNA 17. （ 1 ） 受伤的 叶片伤口处的细胞释放出大量酚类物质 ， 可吸引农杆菌移向这些细胞 （ 2 ） 甜蛋白基因 核基因组 （ 3 ） 茎尖 （ 4 ） 按照人们的愿望进行设计 ， 并通过体外重组和转基因等技术 ， 赋予生物新的遗传特性 ， 创造出符合人们需要 的新生物类型 18. （ 1 ） 编码乙的 DNA 序列起始端无 ATG ， 转录出的 mRNA 无起始密码子 （ 2 ） 模板 dNTP （ 3 ） ① 进行细胞传代培养 维持培养液的 pH ②C 19. （ 1 ） BclⅠ 和 HindⅢ 连接 （ 2 ） 四环素 引物甲和引物丙 （ ３ ） T GATC C A CTAG G G GATC A C CTAG G " T 都不能 （ ４ ） 7 第 3 节 基因工程的应用 积累 · 整合 略 应用 · 拓展 1. B 2. AD 3. B 4. D 5. D 6. （ 1 ） 嫩叶组织细胞易破碎 防止 RNA 降解 （ 2 ） 在逆转录酶的作用下 ， 以 mRNA 为模板按照碱基互补配对的原则可以合成 cDNA （ 3 ） 目的基因无复制原点 ； 目的基因无表达所需启动子 （ 4 ） 磷酸二酯键 （ 5 ） 目的基因的转录或翻译异常 7. （ 1 ） 细胞核 （ 2 ） 囊胚 （ 3 ） 核苷酸序列 HindⅢ 和 PstⅠ （ 4 ） 蛋白质 8. （ 1 ） D （ 2 ） 精子 cDNA （ 3 ） ② ① （ 4 ） B 基因表达能使卵细胞不经受精直接发育成胚 9. （ 1 ） 促性腺激素 减数第二次分裂中期 （ 2 ） 胰蛋白酶 （ 或胶原蛋白酶 ） 维持培养液的 pH （ 3 ） 分割 2 （ 4 ） ①④ 10. （ 1 ） 同种限制性核酸内切酶 （ 或同种限制酶 ） （ 2 ） 超数排卵 获能 （ 处理 ） （ 3 ） 显微注射法 性别鉴定 全能性 （ 4 ） htPA （ 或人组织纤溶酶原激活物 ） 74 积 累 · 整 合 应 用 · 拓 展 高二生物 第 周 年 月 日 第 2 节 基因工程的基本操作程序 1. 基因工程的基本操作包括四个步骤 ： 、 、 、 。 2. PCR 反应需要在 中才能进行 ， 需提供 、 、 、 。 3. PCR 反应中每次循环可以分为 、 和 三步 。 4. 基因表达载体除目的基因 、 标记基因外 ， 还必须有 、 等 。 5. 将目的基因导入植物受体细胞的方法有 法 、 法 等 。 将目的基因导入动物受精卵最常用的方法是 。 如果需要以大肠杆菌作为受体细胞 ， 通常先用 处理 ， 然后再将重组的基因表达载体导入其中 。 6. 目的基因的检测和鉴定 ， 首先要进行 水平的检测 ， 包括通过 等 技术检测 DNA 或 mRNA ， 通过 杂交检测蛋白质 。 其次 ， 还需要进行 水平的鉴定 。 1. 在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中 ， 下列操作错误的是 （ ） A. 用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B. 用 DNA 连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C. 将重组 DNA 分子导入烟草原生质体 D. 用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 2. 下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述 ， 正确的是 （ ） A. 表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞 mRNA 反转录获得 B. 表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原 （ 起 ） 点 C. 借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来 D. 启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用 3. 为了增加菊花花色类型 ， 研究者从其他植物中克隆出花色基因 C （ 图 1 ）， 拟将其与质 粒 （ 图 2 ） 重组 ， 再借助农杆菌导入菊花中 。 积累 · 整合 应用 · 拓展 37 暑 假 作 业 新课程 第 周 年 月 日 下列操作与实验目的不符的是 （ ） A. 用限制性核酸内切酶 EcoRⅠ 和连接酶构建重组质粒 B. 用含 C 基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织 ， 将 C 基因导入细胞 C. 在培养基中添加卡那霉素 ， 筛选被转化的菊花细胞 D. 用分子杂交方法检测 C 基因是否整合到菊花染色体上 4. （ 多选 ） 小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应 ， 为了克 服这个缺陷 ， 可选择性扩增抗体的可变区基因 （ 目的基因 ） 后再重组表达 。 下列相关叙述正 确的有 （ ） A. 设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列 B. 用 PCR 方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 C. PCR 体系中一定要添加从受体细胞中提取的 DNA 聚合酶 D. 一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞 5. （ 多选 ） 下列关于基因工程技术的叙述 ， 错误的有 （ ） A. 切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别 6 个核苷酸序列 B. PCR 反应中温度的周期性改变是为了 DNA 聚合酶催化不同的反应 C. 载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D. 抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达 6. 下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图 。 以下相关叙述正确的是 （ ） A. ② 的构建需要限制性核酸内切酶和 DNA 聚合酶参与 B. ③ 侵染植物细胞后 ， 重组 Ti 质粒整合到 ④ 的染色体上 潮霉素抗性基因 启动子 终止子 质粒 EcoRⅠ BamHⅠ 启动子 终止子 EcoRⅠ EcoRⅠ C 基因 图 1 图 2 构建表达载体 转入农杆菌 导入 植物细胞 培养再生 成植株 Ｔi 质粒 含抗虫基因 的 ＤＮＡ 重组 Ｔi 质粒 含重组 Ｔi 质粒 的农杆菌 植物细胞 植株 ① ⑤ ④ ③ ② 38 积 累 · 整 合 应 用 · 拓 展 高二生物 第 周 年 月 日 C. ④ 的染色体上若含抗虫基因 ， 则 ⑤ 就表现出抗虫性状 D. ⑤ 只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异 7. 为达到相应目的 ， 必须通过分子检测的是 （ ） A. 携带链霉素抗性基因受体菌的筛选 B. 产生抗人白细胞介素 －8 抗体的杂交瘤细胞的筛选 C. 转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定 D. 21 三体综合征的诊断 8. 天然的玫瑰没有蓝色花 ， 这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因 B ， 而开蓝色花的矮 牵牛中存在序列已知的基因 B 。 现用基因工程技术培育蓝玫瑰 ， 下列操作正确的是 （ ） A. 提取矮牵牛蓝色花的 mRNA ， 经逆转录获得互补的 DNA ， 再扩增基因 B B. 利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因 B C. 利用 DNA 聚合酶将基因 B 与质粒连接后导入玫瑰细胞 D. 将基因 B 直接导入大肠杆菌 ， 然后感染并转入玫瑰细胞 9. 某致病基因 h 位于 X 染色体上 ， 该基因和正常基因 H 中的某一特定序列 BclⅠ 酶切 后 ， 可产生大小不同的片段 （ 如图 1 ， bp 表示碱基对 ）， 据此可进行基因诊断 。 图 2 为某家 庭病的遗传系谱 。 下列叙述错误的是 （ ） A. h 基因特定序列中 BclⅠ 酶切位点的消失是碱基序列改变的结果 B. Ⅱ-1 的基因诊断中只出现 142 bp 片段 ， 其致病基因来自母亲 C. Ⅱ-2 的基因诊断中出现 142 bp 、 99 bp 和 43 bp 三个片段 ， 其基因型为 X H X h D. Ⅱ-3 的丈夫表型正常 ， 其儿子的基因诊断中出现 142 bp 片段的概率为 1/2 10. （ 多选 ） 新技术的建立和应用对生物学发展至关重要 。 下列技术 （ 或仪器 ） 与应用匹 配正确的有 （ ） A. PCR 技术 —— 扩增蛋白质 B. 杂交瘤技术 —— 制备单克隆抗体 C. 光学显微镜 —— 观察叶绿体的基粒 D. 花粉离体培养 —— 培育单倍体植物 11. 基因工程中可以通过 PCR 技术扩增目的基因 。 回答下列问题 ： （ 1 ） 基因工程中所用的目的基因可以人工合成 ， 也可以从基因文库中获得 。 基因文库包 括 和 。 H 基因中特定序列 h 基因中特定序列 BclⅠ 酶切 BclⅠ 酶切 99 bp + 43 bp 142 bp 突变 图 1 图 2 Ⅰ Ⅱ 男性正常 女性正常 男性患者 1 2 3 39 暑 假 作 业 新课程 第 周 年 月 日 （ 2 ） 生物体细胞内的 DNA 复制开始时 ， 解开 DNA 双链的酶是 。 在体外 利用 PCR 技术扩增目的基因时 ， 使反应体系中的模板 DNA 解链为单链的条件是 。 上述两个解链过程的共同点是破坏了 DNA 双链分子中的 。 （ 3 ） 目前在 PCR 反应中使用 Taq 酶而不使用大肠杆菌 DNA 聚合酶的主要原因是 。 12. 下面是将某细菌的基因 A 导入大肠杆菌内 ， 制备 “ 工程菌 ” 的示意图 。 请据图回答 下列问题 ： （ 1 ） 获得 A 有两条途径 ： 一是以 A 的 mRNA 为模板 ， 在 酶的催化下 ， 合成互补的单链 DNA ， 然后在 作用下合成双链 DNA ， 从而获得所需基因 ； 二是根据目标蛋白质的 序列 ， 推测出相应的 mRNA 序列 ， 然后按照碱基互补 配对原则 ， 推测其 DNA 的 序列 ， 再通过化学方法合成所需基因 。 （ 2 ） 利用 PCR 技术扩增 DNA 时 ， 需要在反应体系中添加的有机物质有 、 、 4 种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的 DNA 聚合酶 ， 扩增过程可以在 PCR 扩 增仪中完成 。 （ 3 ） 由基因 A 和载体 B 拼接形成的 C 通常称为 。 （ 4 ） 在基因工程中 ， 常用 Ca 2＋ 处理 D ， 其目的是 。 13. 真核生物基因中通常有内含子 ， 而原核生物基因中没有 ， 原核生物没有真核生物所 具有的切除内含子对应的 RNA 序列的机制 。 已知在人体中基因 A （ 有内含子 ） 可以表达出 某种特定蛋白 （ 简称蛋白 A ）。 回答下列问题 ： （ 1 ） 某同学从人的基因组文库中获得了基因 A ， 以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白 A ， 其原因是 。 （ 2 ） 若用家蚕作为表达基因 A 的受体 ， 在噬菌体和昆虫病毒两种载体中 ， 不选用 作为载体 ， 其原因是 。 （ 3 ） 若要高效地获得蛋白 A ， 可选用大肠杆菌作为受体 。 因为与家蚕相比 ， 大肠杆菌具 有 （ 答出两点即可 ） 等优点 。 （ 4 ） 若要检测基因 A 是否翻译出蛋白 A ， 可用的检测物质是 （ 填 “ 蛋白 A 的基因 ” 或 “ 蛋白 A 的抗体 ”）。 转化细胞 工程菌 筛选 A B C D 40 积 累 · 整 合 应 用 · 拓 展 高二生物 第 周 年 月 日 （ 5 ） 艾弗里等人的肺炎链球菌转化实验为证明 DNA 是遗传物质作出了重要贡献 ， 也可 以说是基因工程的先导 。 如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示 ， 那么 ， 这一 启示是 。 14. 图 1 所示是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图 ， 载体质粒 P0 具有四环素抗性 基因 （ Tet R ） 和氨苄青霉素抗性基因 （ Amp R ）。 请回答下列问题 ： （ 1 ） EcoRⅤ 酶切位点为 … GAT↓ATC … … CTA↑TAG … ， EcoRⅤ 酶切出来的线性载体 P1 为 末端 。 （ 2 ） 用 Taq DNA 聚合酶进行 PCR 扩增获得的目的基因片段 ， 其两端各自带有一个腺嘌 呤脱氧核苷酸 。 载体 P1 用酶处理 ， 在两端各添加了一个碱基为 的脱氧核苷 酸 ， 形成 P2 ； P2 和目的基因片段在 酶作用下 ， 形成重组质粒 P3 。 （ 3 ） 为筛选出含有重组质粒 P3 的菌落 ， 采用含有不同抗生素的平板进行筛选 ， 得到 A 、 B 、 C 三类菌落 ， 其生长情况如下表 （“ + ” 代表生长 ， “ - ” 代表不生长 ）。 根据表中结果判 断 ， 应选择的菌落是 （ 填表中字母 ） 类 ， 另外两类菌落质粒导入情况分别是 、 。 （ 4 ） 为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组 质粒 ， 拟设计引物进行 PCR 鉴定 。 图 2 所示为甲 、 乙 、 丙三条引物 在正确重组质粒中的相应位置 ， PCR 鉴定时应选择的一对引物是 。 某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落 的质粒中扩增出了 400 bp 片段 ， 原因是 。 菌落类型 平板类型 A B C 无抗生素 + + + 氨苄青霉素 + + - 四环素 + - - 氨苄青霉素 + 四环素 + - - Amp R 50 bp 300 bp 100 bp 甲 乙 丙 图 2 图 1 目的基因片段 酶处理 EcoRⅤ Amp R Tet R EcoRⅤ Amp R Amp R Amp R P0 P1 P2 P3 41 暑 假 作 业 新课程 第 周 年 月 日 15. 回答下列问题 ： （ 1 ） 博耶 （ H. Boyer ） 和科恩 （ S. Coben ） 将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导 入大肠杆菌细胞中进行了表达 ， 该研究除证明了质粒可以作为载体外 ， 还证明了 （ 答出两点即可 ）。 （ 2 ） 体外重组的质粒可通过 Ca 2+ 参与的 方法导入大肠杆菌细胞 。 而体外重 组的噬菌体 DNA 通常需与 组装成完整噬菌体后 ， 才能通过侵染的方法 将重组的噬菌体 DNA 导入宿主细胞 。 在细菌 、 心肌细胞 、 叶肉细胞中 ， 可作为重组噬菌体 宿主细胞的是 。 （ 3 ） 真核生物基因 （ 目的基因 ） 在大肠杆菌细胞内表达时 ， 表达出的蛋白质可能会被降 解 。 为防止蛋白质被降解 ， 在实验中应选用 的大肠杆菌作为受体细胞 ， 在蛋白质纯化的过程中应添加 的抑制剂 。 16. 某种荧光蛋白 （ GFP ） 在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光 ， 这一特性可用于检 测细胞中目的基因的表达 。 某科研团队将某种病毒的外壳蛋白 （ L1 ） 基因连接在 GFP 基因 的 5′ 末端 ， 获得了 L1-GFP 融合基因 （ 简称为甲 ）， 并将其插入质粒 P0 ， 构建了真核表达载 体 P1 ， 其部分结构和酶切位点的示意图如下 ， 图中 E1~E4 四种限制酶产生的黏性末端各 不相同 。 回答下列问题 ： （ 1 ） 据图推断 ， 该团队在将甲插入质粒 P0 时 ， 使用了两种限制酶 ， 这两种酶是 。 使用这两种酶进行酶切是为了保证 ， 也是为了保证 。 （ 2 ） 将 P1 转入体外培养的牛皮肤细胞后 ， 若在该细胞中观察到了绿色荧光 ， 则说明 L1 基因在牛的皮肤细胞中完成了 和 过程 。 （ 3 ） 为了获得含有甲的牛 ， 该团队需要做的工作包括将能够产生绿色荧光细胞的 移入牛的 中 、 体外培养 、 胚胎移植等 。 （ 4 ） 为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中 ， 某同学用 PCR 方法进行鉴定 。 在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的 （ 填 “ mRNA ” “ 总 RNA ” 或 “ 核 DNA ”） 作为 PCR 模板 。 启动子 L1 基因 GFP 基因 终止子 E1 E2 E3 E4 42 积 累 · 整 合 应 用 · 拓 展 高二生物 第 周 年 月 日 17. 甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质 。 为了改善黄瓜的品质 ， 科学家采用农杆菌转化 法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞 ， 得到了转基因植株 。 回答下列问题 ： （ 1 ） 用农杆菌感染时 ， 应优先选用黄瓜 （ 填 “ 受伤的 ” 或 “ 完好 的 ”） 叶片与含重组质粒的农杆菌共培养 ， 选用这种叶片的理由是 。 （ 2 ） 若在转基因黄瓜中检测到这种甜蛋白 ， 则表明该重组质粒中 已转移到植物细胞中且能够表达 ； 用该转基因黄瓜的某一植株与一株非转基因植株杂交 ， 发 现子代中含甜蛋白个体数与不含甜蛋白个体数之比为 1 ∶ 1 ， 则说明甜蛋白基因已经整合到 （ 填 “ 核基因组 ” “ 线粒体基因组 ” 或 “ 叶绿体基因组 ”） 中 。 （ 3 ） 假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产 ， 若要以该转基因作物为材料获得脱 毒苗 ， 应选用 作为外植体进行组织培养 。 （ 4 ） 通常 ， 基因工程操作主要有四个步骤 ， 即目的基因获取 、 重组表达载体的构建 、 将 目的基因导入受体细胞 、 目的基因的检测与鉴定 。 因此 ， 基因工程的含义可概括为 。 18. 编码蛋白甲的 DNA 序列 （ 序列甲 ） 由 A 、 B 、 C 、 D 、 E 五个片段组成 ， 编码蛋白乙 和丙的序列由序列甲的部分片段组成 ， 如图 1 所示 。 回答下列问题 ： （ 1 ） 现要通过基因工程的方法获得蛋白乙 ， 若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的 DNA 序列 （ TTCGCTTCT …… CAGGAAGGA ）， 则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能 翻译出蛋白乙 ， 原因是 。 （ 2 ） 某同学在用 PCR 技术获取 DNA 片段 B 或 D 的过程中 ， 在 PCR 反应体系中加入了 DNA 聚合酶 、 引物等 ， 还加入了序列甲作为 ， 加入了 作为合成 DNA 的原料 。 （ 3 ） 现通过基因工程方法获得了甲 、 乙 、 丙三种蛋白 ， 要鉴定这三种蛋白是否具有刺激 T 淋巴细胞增殖的作用 ， 某同学做了如下实验 ： 将一定量的含 T 淋巴细胞的培养液平均分成 四组 ， 其中三组分别加入等量的蛋白甲 、 乙 、 丙 ， 另一组作为对照 ， 培养并定期检测 T 淋巴 甲 乙 丙 对照 培养时间 细胞浓度 a O 甲 乙 丙 E A B C D B C D B D 图 1 图 2 43 暑 假 作 业 新课程 第 周 年 月 日 细胞浓度 ， 结果如图 2 所示 。 ① 由图 2 可知 ， 当细胞浓度达到 a 时 ， 添加蛋白乙的培养液中 T 淋巴细胞浓度不再增 加 ， 此时若要使 T 淋巴细胞继续增殖 ， 可采用的方法是 。 细胞培养过程 中 ， 培养箱中通常要维持一定的 CO 2 浓度 ， CO 2 的作用是 。 ② 仅根据图 1 、 图 2 可知 ， 上述甲 、 乙 、 丙三种蛋白中 ， 若缺少 （ 填 “ A ” “ B ” “ C ” “ D ” 或 “ E ”） 片段所编码的肽段 ， 则会降低其刺激 T 淋巴细胞增殖的效果 。 19. 下表是几种限制酶识别序列及其切割位点 ， 图 1 、 图 2 中标注了相关限制酶的酶切 位点 ， 其中切割位点相同的酶不重复标注 。 请回答下列问题 ： （ 1 ） 用图中质粒和目的基因构建重组质粒 ， 应选用 两种限制酶切 割 ， 酶切后的载体和目的基因片段 ， 通过 酶作用后获得重组质粒 。 （ 2 ） 为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌 ， 应在筛选平板培养基中添加 ， 平板上长出的菌落 ， 常用 PCR 鉴定 ， 所用的引物组成为图 2 中 。 （ 3 ） 若 BamHⅠ 酶切的 DNA 末端与 BclⅠ 酶切的 DNA 末端连接 ， 连接部位的 6 个碱基 对序列为 ， 对于该部位 ， 这两种酶 （ 填 “ 都能 ” “ 都不能 ” 或 “ 只有一种能 ”） 切开 。 （ 4 ） 若用 Sau3AⅠ 切图 1 质粒最多可能获得 种大小不同的 DNA 片段 。 限制酶 BamHⅠ BclⅠ Sau3AⅠ Hind Ⅲ 识别序列及 切割位点 G GATC C C CTAG G T GATC A A CTAG T GATC CTAG A AGCT T T TCGA A 图 2 图 1 启动子 质粒 四环素抗性基因 氨苄青霉素 抗性基因 BamHⅠ BamHⅠ BclⅠ HindⅢ BamHⅠ BclⅠ HindⅢ Sau3AⅠ 引物丙 目的基因 引物甲 引物乙 44